海岛棉黄烷酮3-羟化酶(F3 H)基因序列分析和表达
海岛棉DELLA蛋白编码基因GbGAI的克隆与功能初步分析
海岛棉DELLA蛋⽩编码基因GbGAI的克隆与功能初步分析0引⾔海岛棉（长绒棉）（Gossiypium barbadense L.）的纤维具有长、细、强等突出特点，在棉花栽培种中品质最优。
长绒棉⽣产对于提⾼中国纺织产品档次、增强⾏业竞争⼒发挥了重要作⽤[1]。
20世纪90年代以后，中国选育出了纤维品质性状相对优异的海岛棉新品种，如新海l3号、新海l5号、新海l7号等。
这些品种的主要纤维物理指标，已经能够与世界上品质最优的超级长绒棉品种相媲美，只是麦克隆值偏⼤，对纺优质⾼档纱来说纤维较粗。
因此，中国选育的长绒棉品种的综合品质性状尚需进⼀步改良[2]。
⾚霉素（gibberellin ，GAs ）是⼀类重要的植物激基⾦项⽬：国家⾃然科学基⾦（307600991）；兵团博⼠资⾦（2007JC08）；⽯河⼦⼤学博⼠基⾦（RCZ200620）。
第⼀作者简介：曲廷云，男，1984年出⽣，⼭东德州⼈，在读硕⼠⽣，主要从事植物基因⼯程研究。
E-mail ：qty1385@/doc/b62940039.html。
通讯作者：郑银英，⼥，1975年出⽣，硕⼠⽣导师，博⼠，从事植物⽣理⽣化与分⼦⽣物学研究。
通信地址：832003新疆⽯河⼦市北四路⽯河⼦⼤学农业⽣物技术重点实验室，E-mail ：zhengyinying@/doc/b62940039.html。
收稿⽇期：2010-02-04，修回⽇期：2010-03-08。
海岛棉DELLA 蛋⽩编码基因GbGAI 的克隆与功能初步分析曲廷云1，王拴锁2，彭明1,3，崔百明1，郑银英1（1⽯河⼦⼤学农业⽣物技术重点实验室⁄⽯河⼦⼤学⽣命科学院，新疆⽯河⼦832003；2中国科学院遗传与发育⽣物学研究所植物细胞与染⾊体⼯程国家重点实验室，北京100101；3中国热带农业科学院热带⽣物技术研究所，海⼝571101）摘要：⾚霉素在棉花纤维发育过程中起着重要作⽤。
DELLA 蛋⽩是⾚霉素信号传导通路中的⼀类重要负调节因⼦。
海岛棉GbMFT1基因的克隆及表达分析
海岛棉GbMFT1基因的克隆及表达分析顾超;李超;李晓波;肖向文;崔百明;黄先忠【期刊名称】《作物学报》【年(卷),期】2013(039)008【摘要】通过RT-PCR和RACE技术,从新疆海岛棉品种新海14中克隆得到了一个MFT (MOTHER OF FT AND TFL1)类似基因,命名为GbMFT1基因(GenBank 登录号为KC513744).GbMFT1基因的开放阅读框(ORF)为528 bp,编码175个氨基酸的蛋白,含一个磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)结构域.GbMFT1蛋白的羧基端含有MFT蛋白都含有的脯氨酸.系统进化树分析表明GbMFT1编码产物与葡萄、番茄亲缘关系较近,属于同一进化分支.实时荧光定量PCR分析表明,GbMFT1基因在棉花的不同组织中均有表达,在花瓣中的表达量较高;在纤维发育的不同时期中均有表达,在开花后2d的胚珠、9d的纤维中表达量最高.半定量RT-PCR结果表明,GbMFT1基因在刚萌发的种子中表达量高,用不同浓度的ABA处理种子后其表达变化不明显,表明GbMFT1基因的表达不受ABA的调节.【总页数】9页(P1391-1399)【作者】顾超;李超;李晓波;肖向文;崔百明;黄先忠【作者单位】石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,新疆石河子832003;石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,新疆石河子 832003;中国科学院新疆理化技术研究所/干旱区植物资源化学重点实验室,新疆乌鲁木齐830011;中国科学院新疆理化技术研究所/干旱区植物资源化学重点实验室,新疆乌鲁木齐 830011;石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,新疆石河子832003;石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,新疆石河子 832003【正文语种】中文【相关文献】1.海岛棉GbTCP14基因的克隆与表达分析 [J], 蔡永生;郑凯;王怡;贺宏伟;曲延英;倪志勇;陈全家2.海岛棉GbGPAT2基因的克隆与表达分析 [J], 甄军波; 刘琳琳; 杜海英; 刘迪; 蔡肖; 张建宏; 迟吉娜3.海岛棉GbHCT10基因的克隆与表达分析 [J], 闵凯丽;晁祥保;滕露;蔡永生;雷慧辰;严中建;郑凯;陈全家4.海岛棉GbTCP10基因的克隆与表达分析 [J], 王怡;郑凯;于月华;梁承娟;蔡永生;陈全家;曲延英;倪志勇5.海岛棉GbPR10基因的克隆及其抗枯萎病表达分析 [J], 艾海提.艾合买提;姚正培;曲延英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
F3′5′H基因的克隆、表达载体构建与矮牵牛遗传转化
F3′5′H基因的克隆、表达载体构建与矮牵牛遗传转化司爱君;祝建波;李吉莲;邓福军【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2008(017)005【摘要】类黄酮3′5′羟基化酶(Flavonoid-3',5-'hydroxylase; F3′5′H)是花色素苷代谢途径中的一个关键性酶,能使花色素的合成趋向于形成蓝色的飞燕草色素.从蓝紫色矮牵牛的花瓣中提取总RNA , 利用RT-PCR技术克隆得到了约1.7kb的F3′5′H片段.F3′5′H的 cDNA序列分析结果表明,克隆得到的序列与原序列同源性达到99.34 %,开放读码框为1 521 bp,编码507个氨基酸.将推算的氨基酸序列与NCBI登录的氨基酸序列进行分析比较,发现与文献报道的存在2个氨基酸差异,氨基酸同源率为99.6 %.将此基因构建到含有35S启动子的植物表达载体PBI-F3′5′H上, 并通过农杆菌介导法对粉红色矮牵牛进行了遗传转化,初步鉴定获得了转基因植株.【总页数】5页(P306-309,329)【作者】司爱君;祝建波;李吉莲;邓福军【作者单位】石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,新疆石河子,832003;石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,新疆石河子,832003;石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室,新疆石河子,832003;新疆农垦科学院,新疆石河子,832000;新疆农垦科学院,新疆石河子,832000【正文语种】中文【中图分类】Q943.2【相关文献】1.根癌农杆菌介导反义F3'H基因对矮牵牛的遗传转化 [J], 刘南南;王宝琴;管宇2.矮牵牛F3＇5＇H基因的克隆及其在不同着色花药中的表达 [J], 花庆;王蕾;韦灵林;刘迎团;徐虹3.矮牵牛编码 F3'5'H的蓝色基因表达载体构建及转化 [J], 李莉;祁银燕;解燕;刘雅莉;娄倩4.国槐苯丙氨酸解氨酶基因的克隆、反义表达载体构建及遗传转化 [J], 许锋;朱俊;张风霞;王燕;程水源;程述汉5.中间锦鸡儿fad2基因片段克隆、反义表达载体构建及遗传转化初步研究 [J], 汪阳东;李春秀;齐力旺;张守攻因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龙州凤仙花ImLHY和ImC4H基因克隆及表达分析
南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2023，54（12）：3464-3474ISSN 2095-1191； CODEN NNXAABDOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.12.002龙州凤仙花ImLHY和ImC4H基因克隆及表达分析赵潞秋，张晓丽，李凡，谭弋，石万磊，黄美娟*，黄海泉*（西南林业大学园林园艺学院/国家林业和草原局西南风景园林工程技术研究中心/云南省功能性花卉资源及产业化技术工程研究中心/西南林业大学园林园艺花卉研发中心，云南昆明650224）摘要：【目的】对龙州凤仙花晚期下胚轴蛋白基因（ImLHY）和肉桂酸-4-羟基化酶基因（ImC4H）进行克隆及表达分析，探讨龙州凤仙花旗瓣和翼瓣的彩斑区和非斑区颜色差异，克隆LHY和C4H基因，为凤仙花彩斑分子调控机制及花色改良和新品种培育提供理论依据。
【方法】以龙州凤仙花为材料，测定其旗瓣和翼瓣的彩斑区和非斑区色度值以及总花色苷和总黄酮含量，对ImLHY和ImC4H基因进行克隆，利用生物信息学软件对其进行序列特征、蛋白结构和系统发育分析，利用实时荧光定量PCR检测ImLHY和ImC4H基因在不同关键发育时期（花苞期、盛花期和衰败期）旗瓣和翼瓣不同着色区的表达模式。
【结果】旗瓣和翼瓣的彩斑区a*（红度值）和C*（彩度值）均高于非斑区，非斑区的L*（亮度值）大于彩斑区；旗瓣彩斑区b*（黄度值）高于旗瓣非斑区，而翼瓣彩斑区与非斑区的b*（黄度值）差异较小，且旗瓣和翼瓣的彩斑区总花色苷和总黄酮含量均高于非斑区。
克隆获得ImLHY和ImC4H基因的cDNA全长分别为1698和1518 bp，分别编码565和505个氨基酸残基，GenBank登录号分别为OR096417和OR096418。
ImLHY和ImC4H蛋白均为亲水性不稳定蛋白，均不具有跨膜结构域。
ImLHY蛋白有1个Myb DNA-binding保守结构域，且具有MYB转录因子家族的SANT结构域，定位于细胞核中；ImC4H蛋白含有1个P450超家族结构域（PLN02394），定位于内质网上。
18_种观赏植物F3′5′H_基因生物信息学分析
保守区域、二级结构、三级结构和同源性进行分析,旨在为蓝
成使花变蓝的飞燕草色素,被称为“ 蓝色基因” [4] ,所以它对
目前,已从鹤望兰( Strelitzia reginae)、矮牵牛 ( Petunia
mRNA 和氨基酸序列进行理化性质、亚细胞定位、跨膜结构、
色花卉的分子育种提供理论参考依据。
hybrida)、非洲堇 ( Saintpaulia spp. )、细茎石斛 ( Dendrobium
[3]
。
当前植物中 F3′5′H 基因功能和表达情况的研究不少,但目
分析鲜有报道。
该研究利用生物信息学原理和软件,对 NCBI GenBank
F3′5′H 催化花色素母体 B 环 3′、5′位形成羟基集团,最终形
数据库中已正式发表的 18 种观赏植物的 F3′5′H 基因全长
蓝色花的育种具有非常重要的作用[5] 。
摘要 采用生物信息学方法对 18 种观赏植物类黄酮-3′5′-羟化酶基因( flavonoid-3′5′-hydroxylase,F3′5′H) 的 mRNA 和氨基酸序列的
理化性质、跨膜结构域、保守结构域、亚细胞定位、二级结构、三级结构和同源性进行预测与分析。 结果表明,绝大多数观赏植物的
F3′5′H 为亲水性稳定蛋白质,以 α 螺旋为主、无信号肽的跨膜蛋白质;大多数定位于内质网膜上;其三级结构模型为 5ylw. 1. A 铁锈醇合
5. 0[17] ( https: / / services. healthtech. dtu. dk / service. php? Sig-
nalP- 5. 0) 对 各 序 列 的 信 号 肽 进 行 预 测; 利 用 TMHMM
2. 0[18] ( https: / / services. healthtech. dtu. dk / service. php? TM-
适于海岛棉指纹图谱构建的SNP核心位点筛选与评价
作物学报ACTA AGRONOMICA SINICA 2019, 45(5): 647 655/ ISSN 0496-3490; CN 11-1809/S; CODEN TSHPA9E-mail: zwxb301@DOI: 10.3724/SP.J.1006.2019.84123适于海岛棉指纹图谱构建的SNP核心位点筛选与评价李乐晨1朱国忠1苏秀娟1,2郭旺珍1,*1南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室 / 杂交棉创制教育部工程研究中心, 江苏南京 210095; 2新疆农业大学农学院,新疆乌鲁木齐 830052摘要: 海岛棉具有纤维品质好、抗病性强等优异性状, 不仅为纺织工业提供优质棉纤维原料, 也是陆地棉相关性状改良的重要供体材料。
然而, 与陆地棉相比, 开展海岛棉的遗传多样性和基因分型研究相对较少。
本研究基于CottonSNP80K芯片对282份不同来源的海岛棉品种/材料进行基因组SNP分型研究, 以选择高效鉴别海岛棉材料的核心位点组合。
按照检出率大于95%、具多态性、最小等位频率(MAF)大于0.01、杂合率小于0.05、无冗余位点等条件筛选, 获得2594个高质量SNP位点。
对上述位点设置不同数目梯度筛选, 确定最优核心位点数。
随着位点个数的增多, 位点组合对海岛棉材料的识别率逐渐增加。
当位点数为200时, 识别率为89%; 位点数提高到1500时, 识别率可达99%。
进一步增加位点数, 识别率无显著变化。
利用中选的1500个SNP位点检测供试材料, 其平均MAF值0.14, 平均杂合率0.007, 平均多态信息含量0.21。
SNP位点的聚丙烯凝胶电泳验证表明, SNP-PCR与芯片分型结果一致性达98.3%。
本研究提供了适于海岛棉指纹图谱构建、含1500位点的一套核心SNP位点组合, 可用于海岛棉遗传多样性分析和品种身份鉴定。
关键词:基因芯片; DNA指纹图谱; SNP; 海岛棉Genome-wide screening and evaluation of SNP core loci for fingerprinting con-struction of cotton accessions (G. barbadense)LI Le-Chen1, ZHU Guo-Zhong1, SU Xiu-Juan1,2, and GUO Wang-Zhen1,*1 State Key Laboratory of Crop Genetics & Germplasm Enhancement, Hybrid Cotton R&D Engineering Research Center (the Ministry of Education), Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, Jiangsu, China;2 College of Agronomy, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, Xinjiang, ChinaAbstract: Sea-island cotton (G. barbadense), characterized by its extra-long staple (ELS), strong and fine fibers, and disease re-sistance, provides important natural fiber for textile industry, also key donor for improving agronomic traits of upland cotton. However, compared to G. hirsutum, there are few studies on genetic diversity and genotyping in G. barbadense. To obtain the SNP core loci for fingerprinting construction of sea-island cotton accessions, we performed SNP genotyping within 282 accessions using the CottonSNP80K array. A total of 2594 high-quality SNP loci were obtained based on the selective criteria of call fre-quency for each locus > 0.95, loci with polymorphism, minor allele frequency (MAF) > 0.01, heterozygosity rate < 0.05, and the removal of same genotype. Further, the number of optimized core loci was screened by gradients analysis. With the number of loci increasing, the discrimination ability of the sea-island cotton accessions increased gradually. When the loci were 200, the recogni-tion rate was 89%, and when the number of the loci increased to 1500, the recognition rate was 99%. When the loci were further increased, no significantly improved recognition rate was detected. Based on the detection using the 1500 core loci combination, the average MAF value was 0.14, the average heterozygosity rate was 0.007, and the average polymorphism information content was 0.21. The polyacrylamide gel electrophoresis for the core SNP loci verified the consistency as high as 98.3% between SNP-PCR and chip genotyping. This study provides a set of core SNP loci suitable for constructing fingerprinting of sea-island本研究由国家重点研发计划项目(2017YFD0102000)和江苏现代作物生产协同创新中心(No. 10)项目资助。
茶树类黄酮3’,5’-羟化酶在大肠杆菌的表达和优化
茶树类黄酮3’,5’-羟化酶在大肠杆菌的表达和优化
陈啸天;高丽萍;赵磊;刘亚军;王云生;夏涛
【期刊名称】《安徽农业大学学报》
【年(卷),期】2012(39)5
【摘要】儿茶素是茶叶主要特征和功能成分之一,其中B环三羟基儿茶素约占儿茶素总量的65%以上。
类黄酮3’,5’-羟化酶是类黄酮合成中B环5’羟基化的唯一酶系,与B环三羟基儿茶素合成积累密切相关。
采用RACE技术,克隆了茶树类黄酮3’,5’-羟化酶基因的1 944 bp的全长序列,开放阅读框区域为55～1 587 bp,编码510个氨基酸,推测其分子量为57.1 kDa,等电点为9.06。
该基因重组至pET-32a(+)表达载体上,在大肠杆菌Rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中温度诱导条件;利用钴离子吸附柱纯化了目的蛋白。
该研究为开展F3’5’H酶的反应动力学、酶的器官组织定位等研究奠定了基础。
【总页数】7页(P707-713)
【作者】陈啸天;高丽萍;赵磊;刘亚军;王云生;夏涛
【作者单位】安徽农业大学生命科学学院;安徽农业大学教育部茶叶生物化学与生物技术重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】S571.1
【相关文献】
1.高丛蓝莓类黄酮3'-羟化酶基因F3'H的克隆及表达特性分析
2.脯氨酸4羟化酶在大肠杆菌中的密码子优化表达及对反式4羟脯氨酸生物合成的作用
3.茶树类黄酮3′-羟化酶基因的克隆与表达特性分析
4.海南龙血树类黄酮3'-羟化酶基因(DcF3'H)的克隆与表达分析
5.飞机草类黄酮3’-羟化酶基因(CoF3’H)的克隆及其在烟草中的表达
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石榴花类黄酮3’羟化酶基因的克隆及序列分析
（ 山东省果树研究所 ， 山东 泰安 ２ ７ １ ０ ０ ０ ）
摘 要 ：为研 究花 色苷 生物合 成途径 中类黄 酮 ３ 羟 化酶 基 因（ Ｆ ３ Ｈ） 的序 列信 息 ， 以泰 山红石 榴 花 瓣 为试 材 ， 提取总 Ｒ ＮＡ 后反 转 录为 ｃ ＤＮＡ， 根据 Ｇ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ中登 录的相 关物 种 Ｆ ３ Ｈ 基 因的保 守序 列
文章 编号 ： １ ０ ０ ４ —３ ２ ６ ８ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ４— ０ １ ２ １— ０ ４
Ｃｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ Ｓｅ ｑ ｕ ｅ ｎｃ ｅ Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｆｌ ａ ｖ ｏ ｎｏ ｉ ｄ ３ ＇ － Ｈｙ ｄｒ ｏ ｘ ｙ ｌ ａ ｓ ｅ Ｇｅ ｎ ｅ ｉ ｎ Ｐｏ ｍｅ ｇ ｒ ａ ｎａ ｔ ｅ Ｆｌ ｏ ｗｅ ｒ
ｉ ｎ Ｇｅ ｎＢａ ｎｋ ｄ ａ ｔ ａ ｂ ａ ｓ ｅ ． ＰＣＲ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｃ ａｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｃ ｏ ｎｄ ｕｃ ｔ ｅ ｄ ａ ｎｄ ｔ ｈｅ ｎ ｔ ｈｅ ＰＣＲ ｐ ｒ ｏ ｄｕ ｃ ｔ ｗａ ｓ ｓ ｅ ｑ ｕｅ ｎｃ ｅ ｄ ．
Ｃ ＹＰ ７ ５ Ｂ 亚 家族 。 该 序 列 在 Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ 中的 登 录 号 为 ＫＣ ４ ３ ０ ３ ２ ８ 。 关键词 ： 石 榴 ；类 黄 酮 ３ 羟化 酶基 因 ； 基 因克 隆 ； 序 列 分 析
中 图分类 号 ： ￥ ６ ６ ５ ． ４
文 献标 志码 ： Ａ
河 南农 业科 学 ， ２ ０ １ ３， ４ ２ （ ４ ） ： １ ２ １ — １ ２ ４
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｈｅ ｎ ａ ｎ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
海岛棉几丁质酶基因GbCHI的克隆与功能分析
研究报告
海岛棉几丁质酶基 因 Ｇ Ｃ ｂ ＨＩ的克隆与功பைடு நூலகம்分析
马银平 一 ， ，王付欣 ， 淳淋 ２ 杨 ，沈法 富 ，夏桂 先
１ 东农 业 大 学农 学 院，作 物 生 物 学 国家 重 点 实验 室 ，泰 安 ２ １ １ ； ．山 ７０８ ２ ．中 国科 学 院 微 生 物研 究 所 ，植 物基 因组 学 国家重 点 实 验 室 ， 京 １０ ０ 北 ０１１
ｓａｉ ａ ｄｃ ｔｏ Ｇ ｓｙ ｉｍ ａｂ ｄ ｎ ｅ ｅ － ｌｎ ｏｔｎ（ ｏｓｐ ｕ ｂ ｒ ａ ｅ ｓ） ｓ
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丝 的生长 这些研 究结果 为 了解 Ｇ Ｃ 的功 能及其在 抗黄 萎病棉 花分子 育种 中的应用提 供 了实验依 据和 思路 。 ｂ ＨＩ
柠条锦鸡儿
柠条锦鸡儿基因克隆及功能分析作者：郑晟毛玉珊张腾国聂亭亭来源：《广西植物》2017年第06期摘要：柠条锦鸡儿为豆科灌木，对各种环境胁迫具有较强的适应能力，类黄酮是天然的抗氧化剂，花青素属类黄酮化合物，逆境胁迫会影响植物体内花青素的合成，而黄烷酮3羟化酶（F3H）是花青素生物合成所必需的一种关键酶。
该研究成功分离克隆了柠条锦鸡儿的F3H基因，命名为CkF3H。
CkF3H基因的开放阅读框（ORF）为1 095 bp，编码364个氨基酸，推测的蛋白质分子量为41.3 kDa，理论等电点为5.9。
生物信息学分析发现，CkF3H基因序列与其它植物F3H有较高的一致性，推测CkF3H蛋白与其它植物F3H蛋白具有相似的功能。
利用染色体步移法克隆得到CkF3H起始密码子ATG上游468 bp的启动子序列，PlantCARE软件分析表明，该序列具有启动子的基本元件CAATbox和TATAbox以及多种与逆境胁迫相关的顺式调控元件。
实时荧光定量PCR分析表明，CkF3H在柠条的根、茎和叶中均有表达，没有组织特异性；CkF3H的表达受低温、高盐、干旱和高温胁迫的诱导，并且在低温胁迫下，CkF3H的表达还受到光周期的影响。
综上所述，研究结果表明CkF3H基因在柠条锦鸡儿适应低温、高盐、干旱和高温胁迫的过程中发挥作用。
关键词：柠条锦鸡儿， CkF3H基因，基因克隆，表达分析，非生物胁迫中图分类号： Q943.2文献标识码： A文章编号： 10003142（2017）06072311Abstract： Caragana korshinskii is a kind of shrub belonging to the leguminosae category and it has characteristic of tolerance to stressful conditions. Flavonoids are natural antioxidants that include the groups of notable pigments such as anthocyanins. The adversity stress can influence the biosynthesis of anthocyanins in plants. Flavanone 3Hydroxylase （F3H） is a key enzyme needed for the biosynthesis of anthocyanins. In this study， we successfully isolated， cloned F3H gene from C. korshinskii. The full length cDNA of C. korshinskii F3H gene （designated as CkF3H） had an open reading frame （ORF） of 1 095 bp encoding 364 amino acids with a calculated molecular mass of 41.3 kDa as well as an isoelectric point of 5.9. Comparative and bioinformatical analyses revealed that the cloned CkF3H from C. korshinskii has high identity with F3H from other plant species. The deduced CkF3H protein showed similarities with other available plant F3H proteins. The promoter of CkF3H gene was isolated by chromosomal walking and 468 bp sequence was obtained by sequencing. PlantCARE analysis of this sequence showed that the peomoter contained some typical elements CAATbox and TATAbox and kinds of Cisacting elements involved in defence and stress responsiveness. RTPCR analysis revealed that CkF3H was expressed in roots， stems， and leaves with almost no tissue specificity. The transcript level of CkF3H was increased in response to cold，high salt， drought and high temperature stress. The gene expression of CkF3H was influenced by photoperiod in response to cold stresses. The results suggested that CkF3H played an important role during cold， high salt， drought and high temperature stress in C. korshinskii.Key words： Caragana korshinskii， CkF3H gene， gene cloning， expression analysis，abiotic stress类黄酮（又称黄酮类物质）是一类广泛分布于高等植物中的多酚类次生代谢产物，是存在于植物中的天然色素（Shirley， 1996）。
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个 与棉 纤维发 育相 关的黄 烷 酮 ３ 一羟化 酶基 因 （ Ｇ ｂ Ｆ ３ Ｈ ） 。生物 信 息学分 析表 明 ，该基 因编码 区长 １ １ ｏ ７ ｂ ｐ ，编码 ３ ６ ８个氨基 酸 ，多序 列比对 发现 Ｇ ｂ Ｆ ３ Ｈ序 歹 １ 】 保 守性较 高 ，具 有 典 型的 ２一酮 戊二 酸
第３ ７卷 第 ３期
Ｖ０ １ ． ３７． Ｎｏ． ３
棉
花
科
学
２ ０ １ ５年 ６月
Ｓ ｕ ｎ ｅ， ２ ０１ ５
Ｃｏ ｔ ｔ ｏ ｎ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
引用 ：刘超 ． 张俊 ，姚 正 培 ，等 ． 海 岛棉 黄 烷 酮 ３一羟 化 酶 （ Ｆ ３ Ｈ ） 基 因序 列 分 析 和 表 达 ［ Ｊ ］． 棉 花 科 学 ，２ ０ １ ５ ，３ ７（ ３ ） ：７ —１ ２ ．
其中酮戊二酸羟化酶flavanonehydroxylasef3h作为类黄酮合成途径中的核心酶最早在矮牵牛中被证实成二氢黄酮醇参与花青素的形成最终可决定花色该基因的缺陷性突变体是从金鱼草中获得突变后可使花色变淡棉花是中国重要的经济作物其体内富含的大量次生代谢物在棉纤维发育及抗逆抗病的过程中发挥期和次生壁合成期有显著上调表达10并且在棕色棉中类黄酮代谢的相关基因也有显著上调11通过抑制类黄酮合成途径的其中一个f3h基因在花瓣色素生物合成和纤维的发育过程中发现f3h不仅决定着纤维的质量如纤维长度和马克隆值也影响着纤维颜色棕色纤维的发育12羟化酶基因在类黄酮合成途径中对棉纤维发育的影响本研究根据海岛棉纤维具有长强的特点与陆地棉形成明显对比并针对陆地棉和海岛棉的转录组高通量测序s珠棉纤维发育表达明显的基因gbf3h利用生物信息学方法对gbf3h基因进行分析并通过实时荧光定量pcr进一步分析其开花后在陆地棉与海岛棉中的表达情况为进一步阐明黄烷酮3材料海岛棉新海21和陆地棉新陆中36播种于试验田棉花盛花期分别取开花当天胚珠和开花后51015和25不同天数dpa的纤维组织液氮速冻本研究所用引物引物名称primername序列sequence用途purposegbf3hatggctccttcaactctgacg基因克隆gbf3httaggcaaggatttcctccaatggeneclonegbf3hqfgttggattgaagttacaaaggag基因表达gbf3hqrgaggtcaggttgagggcatttageneexpressionubq7gacctacaccaagcccaagaag内参基因ubq7tgagcccacacttaccacaatagtreferencegenerna的提取与cdna第一链的合成trizol试剂tiangen说明提取棉纤维发育不同时期的组织总rna
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ａｃ ｃ ｏ ｒ ｄ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｆ ｉ ｌ ｉ ｎ ｇ ｎｄ ａ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ ｏ ｍｅ ｄ ｕ ｉｎ ｒ ｇ ｃ ｏ ｔ ｔ ｏ ｎ ｉｂ ｆ ｅ ｒ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ，Ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ａ
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海 岛棉 黄 烷 酮 ３一羟 化 酶 （ Ｆ ３ Ｈ）基 因序 列 分 析 和表 达
刘 超 ，张俊 ，姚 正培 ，倪 志 勇 ， 陈全 家
（ 新疆 农业 大 学农 学 院／ 新 疆农 业 大学 农业 生物 技术重 点 实验 室 ，新疆 乌 鲁木 齐 ，８ ３ ００ ５ ２ ）
摘要 ：根 据棉 纤 维发 育相 关基 因转 录 组 学 、表 达谱 分 析 结 果 ，从 海 岛棉 （ 新海 ２ １ ） 中 筛选 到 一
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双加 氧 酶 结构域 。实 时定量 Ｐ Ｃ Ｒ分析 表 明 ，Ｇ ｂ Ｆ ３ Ｈ 基 因在 纤 维发 育 的 不 同 时期 中均 有 表 达 ，在
开花后 ５ ｄ的胚 珠 中表 达量 最 高 ，推 测 Ｇ ｂ Ｆ ３ Ｈ基 因可能 对棉 纤 维发 育具有 重要作 用 。
关 键词 ：海 岛棉 ；黄烷 酮 ３一羟化 酶基 因；序 列 分析 ；基 因表 达
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