酸性染料比色法阿托品片剂的含量测定
药分实验（吉林大学）硫酸阿托品注射液的含量测定
硫酸阿托品注射液的含量测定一、实验目的1.掌握酸性染料比色法的基本原理和操作。
2.熟悉注射剂分析的基本操作技术。
3.掌握比色法的基本方法，要求和计算。
二、基本原理在适当pH (5.6)溶液中，有机碱（B）可以与氢离子结合生成阳离子（BH+），酸性染料（HIn）在此pH值下可解离成阴离子（In-），阴离子可与上述阳离子（BH+）定量地结合成有色离子对。
定量的用有机溶剂提取，在420 nm处测定该溶液中有色离子对的吸收度，并与对照品比较，即可计算出有机碱药物的含量。
实验内容1.对照品溶液的制备取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25 mg，精密称定，置25ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5 ml，置100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，作为对照品溶液。
每1 ml溶液中含无水硫酸阿托品50 μg。
2. 供试品溶液的制备精密量取硫酸阿托品适量（约相当于硫酸阿托品2.5 mg），至50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3. 硫酸阿托品的含量测定精密量取对照品溶液与供试品溶液各2 ml，分别置预先精密加入氯仿10 ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液2 ml，振摇提取2 min后，静置使分层，分取澄清的氯仿液（以水2 ml同法平行操作所得的氯仿液为空白）于420 nm的波长处分别测定吸收度，并将结果与1.027相乘，即得。
本品含硫酸阿托品应为标示量的90.0%~110.0%。
四、说明1. 溴甲酚绿溶液的制备：取溴甲酚绿50 mg与邻苯二甲酸氢钾1.021 g，加氢氧化钠液（0.2mol/L）5 ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过。
2.本实验采用酸性染料比色法测定硫酸阿托品含量，实验中应严格控制水相pH并保证离子对化合物能定量提取进入氯仿层。
3.振摇提取时既要能定量地将离子对化合物提入氯仿层，又要防止乳化和少量水份不混入氯仿层，因此，需小心充分振摇。
硫酸阿托品及其制剂的分析
80°C水浴 强烈振摇20min
放冷 冰浴 定容 5min
取续滤液
供试品溶液
对照品
对照品溶液 20μl
供试品溶液 20μl
精密称定
对照品溶液
0.2mg/ml
外标法，峰面积计算
色谱条件
色谱柱：
C18柱
检测波长： 225 nm
药L/O物/G/分O 析
硫酸阿托品及其制剂的分析
阿托品（Atropine）
• 亦称消旋莨菪碱 • 从莨菪、颠茄和曼陀罗等植物中提取 • 天然生物碱
天仙子
洋金花
阿托品（Atropine）
• 莨菪烷类药物典型代表
• 最常用的M胆碱受体阻断剂
• 临床用途广泛
缓解内脏绞痛，解除痉挛
流动相：
0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（pH 5.0） （含0.0025mol/L庚烷磺酸钠 -乙腈(84:16))
离子对试剂，改该方法属于反相离子对色谱法。阿托品 因五元脂环上的叔胺氮原子具有碱性，在酸性的流动相 中带正电荷，反相液相色谱条件下保留较弱。庚烷磺酸 钠可离解为庚烷磺酸基而带负电荷，两者结合为电中性 的离子对化合物，可以增大待测组分在非极性固定相上 的分配与溶解度，改善其色谱保留与分离行为
Vitali鉴别反应
ü 发烟硝酸 醇制KOH
ü 无色/白色—黄色—深紫色
加醇制KOH少许，即生成 深紫色产物
酯键水解生成莨菪酸，与发烟硝酸 共热，得到黄色产物，放冷
莨菪酸
Vitali鉴别反应的原理
COOH
CHCH2OH O2N
3HNO3
COOH
CHCH2OH NO2 O2N KOH C2H5OH
南华大学制药工程专业2019-2020学年药物分析——期末
南华大学制药工程专业2019-2020学年药物分析——期末1. 苯甲酸的钠盐水溶液与三氧化铁试液作用产生（） [单选题] *A. 紫红色B.米黄色沉淀C. 赭色沉淀(正确答案)D.猩红色沉淀2. 丙磺舒的钠盐水溶液与三氧化铁试液作用，生成（） [单选题] *A.紫堇色B. 紫红色C.米黄色(正确答案)D.赭色沉淀3. 鉴别水杨酸及其盐类.最常用的试液（） [单选题] *A.碘化钾B,碘化汞钾C.三氯化铁(正确答案)D.硫酸亚铁4. 取某药物适量,加Na2CO3试液加热煮沸2分钟,加过量的稀硝酸H2SO4，即析出白色沉淀，并发出COOHCH3（醋酸）的臭气，该药物是（） [单选题] *A. 水杨酸B.苯甲酸钠C. 对氨基水杨酸钠D.阿司匹林(正确答案)5. 阿司匹林片的含量测定, [单选题] *A. 两步酸碱滴定法B.水解酸碱滴定法C.高效液相色谱法(正确答案)D.直接酸碱滴定法6. 可以再用重氮化偶合反应鉴别的药物是（） [单选题] *A.丙磺舒B.苯甲酸C.阿司匹林D.对氨基水杨酸钠(正确答案)7. 阿司匹林中杂质检查包括溶液的澄清度和水杨酸的检查,其中溶液澄清度检查是利用（） [单选题] *A.药物与杂质溶解行为的差异(正确答案)B.药物与杂质旋光性的差异C.药物与杂质颜色的差异D.药物与杂质臭味及挥发性的差异8. 《中国药典》(2015年级)规定盐酸普鲁卡因注射液检查的特殊杂质是（） [单选题] *A.苯甲酸B.对氨基苯甲酸(正确答案)C.普鲁卡因D.对氨基酚9. 盐酸普鲁卡因注射液的含量测定方法是（） [单选题] *A.高效液相色谱法(正确答案)B. 酸碱满定法C紫外分光光度法D.亚硝酸钠滴定法10. 盐酸普鲁卡因能发生重氨化偶合反应，是因为结构中含有（） [单选题] *A. 酯键B.盐酸C.叔胺D.芳香第一胺(正确答案)11. 不与三氧化铁发生显色反应的药物是（） [单选题] *A.肾上腺素B.对乙酰氨基酚C.盐酸普鲁卡因(正确答案)D.盐酸多巴安12. 水解后才能发生重氮化偶合反应的药物是（） [单选题] *A.盐酸利多卡因B.肾上腺素C.对乙酰氨基酚(正确答案)D.盐酸丁卡因13. 采用紫外一可见分光光度法测定含量的药物有（） [单选题] *A.盐酸利多卡因B.肾上腺素C.对乙酰氨基酚(正确答案)D. 盐酸丁卡因14. 采用紫外-可见分光光度法检查的特殊杂质是（） [单选题] *A.对氨基苯甲酸B.对氯苯乙酰胺C.有关物质D.酮体(正确答案)15. 丙二酰脲类鉴别反应是下列哪类药物的一般鉴别实验（） [单选题] *A.芳酸及酯类药物B.巴比妥类药物(正确答案)C.磺胺类药物D.杂环类药物16. 与吡啶硫酸铜试液反应生成绿色配合物的是（） [单选题] *A.苯巴比妥B.硫喷妥钠(正确答案)C.异戊巴比妥钠D 司可巴比妥钠17. 取某药物供试品约0.2克，加氢氧化钠试液5ml与醋酸铅试液2ml生成白色沉淀。
06-硫酸阿托品注射液的鉴别+07-阿司匹林片剂的鉴别和含量测定
三、实验内容：
（一）、定性鉴别
本品细粉适量 + 10ml H2O → 煮沸 → 放冷 → +FeCl3试液1d →紫色
（二） 、含量测定：（两步滴定法）
1、取本品30片，精密称定，求平均片重，研细，精称适量（约相当阿司 匹林0.3g）。 2、
0.1000mol/L NaOH 滴定至 精称本品适量 20ml乙醇 3d 酚酞 继续加NaOH 水浴加热15min， 并时时振摇 40.00ml 迅速 粉红 放冷 0.05000mol/L H2SO4 滴定至
醌型产物(呈深紫色)。
B H BH In BH In
三、实验内容：
（一）鉴别：
本品针剂1支（硫酸阿托品5mg ） → 水浴蒸干 → +发烟HNO3 5d → 水浴蒸干 → 黄色残渣 → 冷却 → +乙醇3~4d → + KOH（s）1粒 → 紫色
（二）含量测定：
1、供试液制备：本品针剂1支（0.5mg :1ml）+水→ 10.00ml
4 Fe 3+
Fe(
O
)2
3
Fe + 12H
紫堇色
由于阿司匹林片剂中除了加入少量酒石酸或枸橼酸稳定 剂外，在制剂工艺过程中还有可能有水解产物如水杨酸、醋 酸等产生，这些酸均会消耗氢氧化钠滴定液，导致测定结果 偏高，因此不能采用直接滴定法测定阿司匹林片剂含量。应 采用先中和与供试液共存的酸，再将阿司匹林在碱性条件下 水解后测定含量的两步滴定法。
实验七
阿司匹林片剂的鉴别和含量测定
一、实验目的
掌握水杨酸类药物鉴别反应的实验原理 掌握两步滴定法测定阿司匹林片剂的基本 原理 掌握片剂含量测定的步骤和计算方法 了解制剂中辅料对测定的影响和排除方法
实验6 酸性染料比色法测定硫酸阿托品的含量(学生)
实验6 酸性染料比色法测定硫酸阿托品注射液的含量一、目的要求：通过硫酸阿托品注射液含量测定，掌握酸性染料比色法的操作条件。
二、原理：N OOHH3COH2 •H2SO4•H2O(C17H23NO3)2•H2SO4•H2O 694.84B + H+BH++ (BH+• In-)水相(BH+• In-) 有机相H++ In-在适当的介质中，如适宜的pH，生物碱类药物（B）可与氢离子结合成阳离子（BH+），一些酸性染料如溴甲酚绿等可解离成阴离子（In-），上述阳离子与阴离子定量结合成的有机络合物（BH+•In-)，即为离子对，并能全部溶于有机相中，过量的染料（In-）完全保留在水中。
用有机溶剂提取该离子对，在一定波长处测定其吸收度，即可计算出生物碱药物的含量。
或者，将显色的有机溶剂碱化（如加入醇制氢氧化钾），使与有机碱结合的酸性染料释放出来，再测定其吸收度从而确定生物碱的含量。
三、操作步骤1、对照液的制备已事先制备好，浓度见试剂瓶。
2、供试液的制备精密移取硫酸阿托品注射液1.0mL，置10mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
（2个人打开5支安瓿瓶，放于干净的10mL小烧杯中。
每人测定时配制10mL样液2份。
）3、测定法（空白）精密吸取阿托品对照液 2.0mL→置60mL分液漏斗中（4个）→精密加入溴甲酚绿染料2份2.0mL，混匀后→精密加入氯仿10.0mL→振摇提取3-4次后（注意放气），静置1-2分钟分层→将氯仿层收集于10mL试管中→加入无水硫酸钠脱水（脱水后，固体呈块状，溶液特别澄清）→移入吸收池中→420nm处测定吸收度。
四、数据记录与计算注射液按标示量计算的百分含量为：标示量% = %100⨯标示量每支注射液含量 硫酸阿托品注射液标示量% = %100027.1⨯⨯⨯⨯⨯标示量稀释倍数标对试A C A本法中换算系数1.027（694.85/676.83）系无水硫酸阿托品相当于硫酸阿托品。
实验六 硫酸阿托品注射液的鉴别与含量测定 实验七 阿司匹林片剂的鉴别和含量测定
二、实验内容
（一）鉴别 1．原理：
COOH OCOCH3
+
COOH H2O OH
+
CH3COOH
COOH
COO OH +
6
4 Fe 3+
Fe(
O
)2
3
Fe + 12H
紫堇色 2、方法： 数mL 煮沸 （绿豆般大小， 水 △ 本品少许
片粉)
放冷
1d 紫堇色 FeCl3
二、实验内容
（二）含量测定
COOH OCOCH3
实验六 硫酸阿托品注射液的鉴别 与含量测定 一、实验目的
掌握托烷生物碱类的一般鉴别反应的实验 原理。 掌握酸性染料比色法的基本原理和操作方 法。 了解管制药品的实验注意事项。
二、实验内容
（一）鉴别 1、原理: 阿托品为托烷类生物碱，结构中含有酯键 水解→莨菪酸→ 在加热条件下与发烟硝酸 反应→三硝基衍生物（黄色）→ 再与氢氧 化钾醇溶液和固体氢氧化钾作用→ 醌型产 物（深紫色）。 2、方法： 一支针剂5mg/mL 本品
两步滴定法 Ka= 3.27×10-4 阿司匹林
阿司匹林片组成
稳定剂——酒石酸、枸橼酸 水解产物——水杨酸、醋酸
二、实验内容
（二）含量测定 1．原理（两步滴定）： （1）中和共存酸 （2）水解和滴定
COOH OCOCH3 COONa OCOCH3
COONa OCOCH3 + NaOH
COONa OH + CH3COONa
2NaOH (剩余） H2 SO4 Na2 SO4 2H2O
n阿 =nNaOH n总 nCO n剩余
2
空白试验
4
180.2
托烷类生物碱——硫酸阿托品及其制剂的鉴别、检查、含量测定
3.测定法
精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置于预先 精密加入氯仿10ml的60ml分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液【取 溴甲酚绿50mg与邻苯二甲酸氢钾1.021g，加氢氧化钠液 （0.2mol/L）6.0ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要 时滤过】2.0ml，振摇提取2分钟后，静置使分层；分取澄清的 氯仿液，采用1cm吸收池，以氯仿为空白，在420nm的波长处 分别测定吸收度，计算，并将结果与1.027相乘，即得供试量中 含有（C17H23NO2）2 .H2SO4 .H2O的重量。
的参数（如旋光度），与规定限度比较，判断供试品中
杂质的限量）
灵敏度法
(一)、莨菪碱 （掌握）
硫酸阿托品中莨菪碱的检查 方法：旋光度测定法 供试品：50mg/ml 结果判定：不得过－0.4°（限量为24.6%）
（ 二、有关物质 了解
硫酸阿托品中有关物质的检查 方法：HPLC 有关物质：莨菪碱、颠茄碱等生物碱杂质 固定相：C18 流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈 =84:16 检测波长：225nm 结果判断：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，除相对主峰保留 时间0.17前的溶剂峰外，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液 主峰面积（1.0%）
• A.利血平 • B.奎尼丁 • C.吗啡 • D.可待因 • E.阿托品
测试
2、阿托品由___莨_菪__醇____ 和 ___莨_菪__酸____两部分组成。 3 、 硫 酸 阿 托 品 是 否 具 有 旋 光 性 ？ （B）
A有 B 没有 4 、 关 于 硫 酸 阿 托 品 ， 下 列 哪 些 说 法 是 错 误 的 ？ （A） A.在碱性溶液中较稳定 B.遇碱性药物引起分解 C.可发生维他立反应 D.两分子阿托品与一分子硫酸成盐 E.水溶液呈中性
兽用硫酸阿托品注射液含量测定方法的优化
陈向丹，徐军，丁阳，等.兽用硫酸阿托品注射液含量测定方法的优化［J ］.中南农业科技，2024，45（1）：40-42．硫酸阿托品（Atropine sulfate ）是抗胆碱药，主要用于有机磷酸酯类药物中毒、麻醉前给药和拮抗胆碱神经兴奋症状。
其注射液含量常用测定方法是溴甲酚绿酸性染料比色法［1］，该方法萃取过程中三氯甲烷易发生乳化，分层效果较差，三氯甲烷层易出现浑浊现象，且水层易黏附在分液漏斗底部，随三氯甲烷一同放出造成比色皿污染，影响吸收度测定结果。
溴甲酚绿酸性染料比色法专属性不强，操作繁琐，重现性和精密度对于经验不丰富的新检测人员来说均不易达标；原标准采用的提取后的紫外分光光度法，提取过程中使用的三氯甲烷为易致毒试剂，采购与使用管理严格，且毒性较大，对人员及环境存在一定的安全隐患［2］。
为了更好地控制产品质量的同时最大限度保护检验人员及环境，本研究建立了以反相高效液相色谱法测定硫酸阿托品溶液中硫酸阿托品含量的方法［3-10］，为该药的质量控制提供新方法。
1材料与方法1.1仪器与试剂安捷伦1260Ⅱ型高效液相色谱仪；Agilent Po⁃roshell 120Ec-C18色谱柱，4.6mm×150mm （i.d.），粒径4μm ；资生堂MG Ⅱ型C18色谱柱，4.6mm×150mm （i.d.），粒径3μm ；Waters SymmetryShieldRP18色谱柱，4.6mm×250mm （i.d.），粒径5μm ；Met⁃tler AE240型电子天平；PHS-3C 型酸度计（上海精密科学仪器有限公司）；MILIPORE 超纯水处理器等。
硫酸阿托品对照品［①含量98.3%（坛墨质检科技股份有限公司，批号2471910）；②含量98.3%（广州佳途科技股份有限公司，批号0702-RB-0001）］；甲醇、乙腈，均为色谱纯（美国TEDIA 公司）；水为二次纯化水。
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合适的pH
实验方法
1.对照品溶液的制备：
精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品 50mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀， 精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀， 即得（每1ml含无水硫酸阿托品50ug）。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
2.供试品溶液的制备：
取本品20片，精密称定，研细，精密称出适量（约相当 于硫酸阿托品2.5mg），置50ml量瓶中，加水振摇使硫酸阿 托品溶解并稀释至刻度，用干燥滤纸滤过，弃去初滤液，收 集续滤液，即得
3.测定法
精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置于预先 精密加入氯仿10ml的60ml分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液 【取溴甲酚绿50mg与邻苯二甲酸氢钾1.021g，加氢氧化钠液 （0.2mol/L）6.0ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要 时滤过】2.00ml，振摇提取2分钟后，静置使分层；分取澄清 的氯仿液，采用1cm吸收池，以氯仿为空白，在420nm的波长 处分别测定吸收度，计算，并将结果与1.027相乘，即得供试 量中含有（C17H23NO2）2 .H2SO4 .H2O的重量。
4.计算
(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O标示量%= A供/A对 × C对 × V× 1.027 ×平均片重 W×标示量
×100%
式中C对 单位（mg/ml）,V=50ml,平均片重单位为g, W单位g，标示量单位mg
1.027：质量换算因数，指1g无水硫酸阿托品相当于硫酸阿 托品的量。由下式求得：
(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O的分子量 (C17H23NO3)2·H2SO4的分子量
694.83
=
=1.027
676.82
Ch.P(2015)规定，本品含硫酸阿托品应为标示量 的 90. 0% 〜110. 0% 。
实验注意事项：
1、实验所用分液漏斗需要事先检漏 2、实验中，应严格控制水相pH并保证离子对化合物能定量提
取进入氯仿层。
3、振摇提取时既要能定量地将离子对化合物提入氯仿层，又
要防止乳化和少量水混入氯仿层，因此，需小心充分振
摇 ，并使静置分层后再分取氯仿，同时可在分液漏斗颈部
放置少许脱脂棉以吸附氯仿中少量水分。
4、对照液、供试液二者必须平行操作，提取振摇时间和幅度 应一致，以保证测定结果的准确性。
5、测定用的氯仿层必须澄清且不含有水珠，可加无水硫酸钠 除去水分，注意不要把无水硫酸钠带进比色皿中。
实训项目：硫酸阿托品片的含量 测定
——酸性染料比色法
实验目的：
1.掌握酸性染料比色法测定硫酸阿托品片的基本原理和操 作。 2.熟练掌握称量、溶解、过滤等基本操作 3.会对硫酸阿托品片的含量进行计算。
实验原理：
硫酸阿托品属托烷生物碱类药物，含有碱性N原子， 在合适pH条件下，可生成阳离子，而酸性染料则解离成阴 离子，生物碱阳离子与酸性染料阴离子生成有色离子对， 用氯仿将离子对提取出来进行比色测定。