CAR-T联合移植治疗医学PPT
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CART细胞治疗ppt课件
2
1. 概述
2011年，美国宾夕法尼亚大学June教授研究组报道了采用抗 CD19单抗、4-1BB和TCR/CD3的ζ链构建嵌合型抗原受体（ chimeric antigen receptor，CAR）修饰T细胞治疗3例晚期慢 性淋巴细胞白血病(CLL)病例的临床研究，3例CLL治疗后2例达 到完全缓解(已随访10和11个月)，1例为部分缓解[1]。研究结果 表明抗CD19 CAR在治疗B系恶性肿瘤中的良好前景。
，不能提供长时间的T细胞扩增信号和精持选续课件的pp体t 内抗肿瘤效应。
9
2. 分子结构——嵌合抗原受体的演化
第二代CAR的胞内信号转导区引入了共刺激分子CM1, 主要为CD28分子。依照
T细胞活化的“双信号学说”，T细胞的激活和增殖需要共刺激信号。
在第1代CAR的基础上引入1 个共刺激分子，不仅增加T 细胞的扩增倍数而且
在此之后，针对复发和难治B细胞淋巴瘤/白血病的CAR-T细 胞免疫治疗便迅速受到全球淋巴瘤相关专家和制药公司的关注 和跟进。
[1]徐晓军，赵海招，汤永民.嵌合抗原精受选体课技件术p免pt疫治疗血液系统恶性肿瘤的研究进展.
3
1. 概述
1.1 CAR-T细胞概念 T细胞是人体内发挥特异性抗肿瘤作用的效应细胞，其作用 的发挥具有主要组织相容性复合物(main histocompatibility complex, MHC) 限制。 然而, 肿瘤免疫编辑的过程会使MHC在肿瘤细胞表面表达下 降，破坏抗原加工过程, 降低肽段免疫原性。这样长期形成的 免疫逃逸机制, 能使肿瘤细胞成功躲避T细胞攻击, 肿瘤快速增 殖。 而人体内另一种特异性淋巴细胞B细胞的抗原受体及其分泌 的抗体可以直接与相应的抗原结合。
精选课件ppt
CART细胞治疗ppt课件
在此之后，针对复发和难治B细胞淋巴瘤/白血病的CAR-T细 胞免疫治疗便迅速受到全球淋巴瘤相关专家和制药公司的关注 和跟进。
[1]徐晓军，赵海招，汤永民.嵌合抗原受体技术免疫治疗血液系统恶性肿瘤的研究进展.
Байду номын сангаас. 概述
1.1 CAR-T细胞概念 T细胞是人体内发挥特异性抗肿瘤作用的效应细胞，其作用 的发挥具有主要组织相容性复合物(main histocompatibility complex, MHC) 限制。 然而, 肿瘤免疫编辑的过程会使MHC在肿瘤细胞表面表达下 降，破坏抗原加工过程, 降低肽段免疫原性。这样长期形成的 免疫逃逸机制, 能使肿瘤细胞成功躲避T细胞攻击, 肿瘤快速增 殖。 而人体内另一种特异性淋巴细胞B细胞的抗原受体及其分泌 的抗体可以直接与相应的抗原结合。
图1 嵌合抗原受体结构示意图[2]
[2]陈杰 ,王宇环 ,罗成林 ,王慧琴 ,罗晓玲.嵌合抗原受体T细胞介绍及抗肿瘤临床应用.
2. 分子结构——嵌合抗原受体的演化
第一代CAR由单链抗体通过跨膜区域与胞内信号传导区(ITAM)相连, ITAM通 常为CD3ζ或FcεRIγ。但第一代CAR设计的信号域是单一的信号分子，而肿瘤细 胞表面共刺激分子表达减弱或缺失，所以CAR修饰的T细胞( CAR-T细胞) 虽然能 识别肿瘤细胞，但由于缺乏有力的“第二信号”，CAR-T细胞难以充分活化，在体内 存在时间短，临床效果有限 。只能引起短暂的T细胞增值和较低的细胞因子分泌 ，不能提供长时间的T细胞扩增信号和持续的体内抗肿瘤效应。
2. 分子结构——嵌合抗原受体的演化
第二代CAR的胞内信号转导区引入了共刺激分子CM1, 主要为CD28分子。依照 T细胞活化的“双信号学说”，T细胞的激活和增殖需要共刺激信号。
[1]徐晓军，赵海招，汤永民.嵌合抗原受体技术免疫治疗血液系统恶性肿瘤的研究进展.
Байду номын сангаас. 概述
1.1 CAR-T细胞概念 T细胞是人体内发挥特异性抗肿瘤作用的效应细胞，其作用 的发挥具有主要组织相容性复合物(main histocompatibility complex, MHC) 限制。 然而, 肿瘤免疫编辑的过程会使MHC在肿瘤细胞表面表达下 降，破坏抗原加工过程, 降低肽段免疫原性。这样长期形成的 免疫逃逸机制, 能使肿瘤细胞成功躲避T细胞攻击, 肿瘤快速增 殖。 而人体内另一种特异性淋巴细胞B细胞的抗原受体及其分泌 的抗体可以直接与相应的抗原结合。
图1 嵌合抗原受体结构示意图[2]
[2]陈杰 ,王宇环 ,罗成林 ,王慧琴 ,罗晓玲.嵌合抗原受体T细胞介绍及抗肿瘤临床应用.
2. 分子结构——嵌合抗原受体的演化
第一代CAR由单链抗体通过跨膜区域与胞内信号传导区(ITAM)相连, ITAM通 常为CD3ζ或FcεRIγ。但第一代CAR设计的信号域是单一的信号分子，而肿瘤细 胞表面共刺激分子表达减弱或缺失，所以CAR修饰的T细胞( CAR-T细胞) 虽然能 识别肿瘤细胞，但由于缺乏有力的“第二信号”，CAR-T细胞难以充分活化，在体内 存在时间短，临床效果有限 。只能引起短暂的T细胞增值和较低的细胞因子分泌 ，不能提供长时间的T细胞扩增信号和持续的体内抗肿瘤效应。
2. 分子结构——嵌合抗原受体的演化
第二代CAR的胞内信号转导区引入了共刺激分子CM1, 主要为CD28分子。依照 T细胞活化的“双信号学说”，T细胞的激活和增殖需要共刺激信号。
CART培训PPT参考幻灯片
复发或难治性 ALL患者(30名患者)
(0.76×10^6-20.6×10^6 CTL019 cells/kg )
检测 CTL019 T cells
免疫应答
毒性效应
扩增数
持久性
2020/2/5
11
CTL019细胞生存率
Figure 1.图A注入CTL019细胞后在6个月期间的
无事件生存率为67%，完全生存率为78%
结构域(第二、三代), 临床应用广泛。
2020/2/5
5
嵌合抗原受体的演化
第一代CAR：由识别肿瘤表面抗原的单链抗体（scFv）抗原结合部和免疫受体酪氨酸活化基序（通称为CD3） 组成。缺点：T细胞增值时间短，细胞因子分泌率低。
第二代、第三代CAR：引入了共刺激的双信号序列。目的：提高T细胞的细胞毒活性、增值性与存活时间、 促进细胞因子的释放。
2020/2/5
18
未来展望
诱人的应用前景
CAR修饰的T细胞肿瘤免疫治疗理 论上的优势和临床前期实验结果
寻找其他分子 靶点
提高CAR有效性ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ和安全性
寻找肿瘤特异性抗原作为分子靶点 和开发适合CAR的单链抗体
优化CAR的结构，筛选出良 好治疗潜质的T细胞亚群
展望
随着研究的不断深入，相信 不久的将来CAR修饰T细胞 会给肿瘤治疗带来新的希望
2020/2/5
3
2. T细胞活化
2020/2/5
MHC
共刺 激 因 子
第
一
CD
信
3
号
T
TCR
细
胞
承担T细胞识别抗
原的重任，结构
细胞因 子刺 激
CA R
CART细胞 治疗 的思 路
(0.76×10^6-20.6×10^6 CTL019 cells/kg )
检测 CTL019 T cells
免疫应答
毒性效应
扩增数
持久性
2020/2/5
11
CTL019细胞生存率
Figure 1.图A注入CTL019细胞后在6个月期间的
无事件生存率为67%，完全生存率为78%
结构域(第二、三代), 临床应用广泛。
2020/2/5
5
嵌合抗原受体的演化
第一代CAR：由识别肿瘤表面抗原的单链抗体（scFv）抗原结合部和免疫受体酪氨酸活化基序（通称为CD3） 组成。缺点：T细胞增值时间短，细胞因子分泌率低。
第二代、第三代CAR：引入了共刺激的双信号序列。目的：提高T细胞的细胞毒活性、增值性与存活时间、 促进细胞因子的释放。
2020/2/5
18
未来展望
诱人的应用前景
CAR修饰的T细胞肿瘤免疫治疗理 论上的优势和临床前期实验结果
寻找其他分子 靶点
提高CAR有效性ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ和安全性
寻找肿瘤特异性抗原作为分子靶点 和开发适合CAR的单链抗体
优化CAR的结构，筛选出良 好治疗潜质的T细胞亚群
展望
随着研究的不断深入，相信 不久的将来CAR修饰T细胞 会给肿瘤治疗带来新的希望
2020/2/5
3
2. T细胞活化
2020/2/5
MHC
共刺 激 因 子
第
一
CD
信
3
号
T
TCR
细
胞
承担T细胞识别抗
原的重任，结构
细胞因 子刺 激
CA R
CART细胞 治疗 的思 路
CAR-T基础知识ppt课件
瘤相关抗原。这些抗原只是重要组织不表达或是损耗组织表达。
CAR-T细胞的细胞因子风暴（CYTOKINE STORM）
体液中多种细胞因子如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-12、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MCP-1和IL-8等迅速大量产生的现象，是引起 急性呼吸窘迫综合症和多器官衰竭的重要原因。 原因：CAR-T细胞更强的亲和力和信号传导功能使其结合相关抗原后，能大量释放细胞因子，引起炎症反应。
瘤维持其肿瘤特性来说是必需的。
18
CAR-T细胞治疗技术的五大优势（1）
安全性高
CAR-T细胞治疗采用的是患者 自体来源的细胞回输技术，避免了 移植物抗宿主病等疾病。近年来， 美国多项临床试验数据证实，恶性 肿瘤的CAR-T细胞治疗是一项安全 有效的生物治疗技术。针对CAR-T 细胞所用载体长达192人·年的安全 性观测结果显示，载体是非常安全 的。
大多数试验在细胞扩增、体内存活时间、细胞因子分泌等方面存在不足，治疗效果不明显。
10
11
CAR-T细胞的发展过程
第二代CAR-T细胞
发表时间：2010年； 嵌合受体的形成方法：T细胞的完全活化有赖于双信号*和细胞因子的作用。因此，依
照T细胞活化的双信号学说, 第二和第三代CARs 在嵌合受体上加上如CD28、CD134(OX40) 和CD137(4-1BB)等共刺激分子(costimulatory molecule, CM)，以提高T细胞的细胞毒性、 增殖活性, 维持T细胞应答, 延长T细胞存活时间等（图2）； CD28、CD134对提高初始T细胞获得持久的体外增殖和较强的细胞因子分泌非常重要 ； 在治疗慢淋中观察到：体内扩增1000倍以上,而且在血液和骨髓中存活的时间也超过6 个月, 分泌的细胞因子如干扰素-γ、CXCL9等较治疗前显著增高。
CAR-T细胞的细胞因子风暴（CYTOKINE STORM）
体液中多种细胞因子如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-12、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MCP-1和IL-8等迅速大量产生的现象，是引起 急性呼吸窘迫综合症和多器官衰竭的重要原因。 原因：CAR-T细胞更强的亲和力和信号传导功能使其结合相关抗原后，能大量释放细胞因子，引起炎症反应。
瘤维持其肿瘤特性来说是必需的。
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CAR-T细胞治疗技术的五大优势（1）
安全性高
CAR-T细胞治疗采用的是患者 自体来源的细胞回输技术，避免了 移植物抗宿主病等疾病。近年来， 美国多项临床试验数据证实，恶性 肿瘤的CAR-T细胞治疗是一项安全 有效的生物治疗技术。针对CAR-T 细胞所用载体长达192人·年的安全 性观测结果显示，载体是非常安全 的。
大多数试验在细胞扩增、体内存活时间、细胞因子分泌等方面存在不足，治疗效果不明显。
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CAR-T细胞的发展过程
第二代CAR-T细胞
发表时间：2010年； 嵌合受体的形成方法：T细胞的完全活化有赖于双信号*和细胞因子的作用。因此，依
照T细胞活化的双信号学说, 第二和第三代CARs 在嵌合受体上加上如CD28、CD134(OX40) 和CD137(4-1BB)等共刺激分子(costimulatory molecule, CM)，以提高T细胞的细胞毒性、 增殖活性, 维持T细胞应答, 延长T细胞存活时间等（图2）； CD28、CD134对提高初始T细胞获得持久的体外增殖和较强的细胞因子分泌非常重要 ； 在治疗慢淋中观察到：体内扩增1000倍以上,而且在血液和骨髓中存活的时间也超过6 个月, 分泌的细胞因子如干扰素-γ、CXCL9等较治疗前显著增高。
CART治疗PPT教案
肿瘤溶解综合征
当大量肿瘤细胞被CART细胞杀死时，可能导致肿 瘤溶解综合征，表现为高尿酸血症、高钾血症等。 通过水化、利尿、降尿酸等措施可有效预防和治 疗肿瘤溶解综合征。
神经毒性
CART细胞治疗可能导致神经毒性反应，如头痛、 意识障碍等。使用类固醇药物、控制细胞剂量等 措施可降低神经毒性的发生率和严重程度。
由于免疫抑制，患者易发生各种感染，如肺 炎、败血症等。
肿瘤细胞大量死亡释放细胞内成分，导致高 尿酸血症、高钾血症等代谢紊乱。
风险评估方法
02
01
03
患者评估
年龄、基础疾病、免疫功能状态等。
CART细胞产品评估
细胞来源、制备工艺、质量控制等。
治疗方案评估
剂量、给药方式、治疗周期等。
预防措施和应急预案制定
患者身体状况评估
包括年龄、基础疾病、免疫功能状态等，确保患者能 够耐受CART治疗。
疗效预测因素
分析影响CART治疗效果的因素，如肿瘤负荷、疾病分 期等，为患者制定个性化治疗方案提供依据。
T细胞采集、分离和激活方法
80%
T细胞采集
采用单采术或淋巴细胞分离液等方 法，从患者外周血中采集T细胞。
100%
禁忌症
CART治疗不适用于T细胞缺乏或功能严 重受损的患者，以及存在严重感染、自 身免疫性疾病等禁忌症的患者。
疗效及安全性评估
疗效评估
CART治疗的疗效评估主要依据肿瘤缩小程度、完全缓解率、无进展生存期等 指标进行评估。多项临床研究表明，CART治疗对于部分血液系统恶性肿瘤具 有显著的治疗效果。
安全性评估
现状
全球范围内已有多个CART治疗产品获批上市，用于治疗多种类 型的血液肿瘤和实体瘤。同时，还有大量的CART治疗临床试验 正在进行中，以探索其更广泛的应用和疗效。
当大量肿瘤细胞被CART细胞杀死时，可能导致肿 瘤溶解综合征，表现为高尿酸血症、高钾血症等。 通过水化、利尿、降尿酸等措施可有效预防和治 疗肿瘤溶解综合征。
神经毒性
CART细胞治疗可能导致神经毒性反应，如头痛、 意识障碍等。使用类固醇药物、控制细胞剂量等 措施可降低神经毒性的发生率和严重程度。
由于免疫抑制，患者易发生各种感染，如肺 炎、败血症等。
肿瘤细胞大量死亡释放细胞内成分，导致高 尿酸血症、高钾血症等代谢紊乱。
风险评估方法
02
01
03
患者评估
年龄、基础疾病、免疫功能状态等。
CART细胞产品评估
细胞来源、制备工艺、质量控制等。
治疗方案评估
剂量、给药方式、治疗周期等。
预防措施和应急预案制定
患者身体状况评估
包括年龄、基础疾病、免疫功能状态等，确保患者能 够耐受CART治疗。
疗效预测因素
分析影响CART治疗效果的因素，如肿瘤负荷、疾病分 期等，为患者制定个性化治疗方案提供依据。
T细胞采集、分离和激活方法
80%
T细胞采集
采用单采术或淋巴细胞分离液等方 法，从患者外周血中采集T细胞。
100%
禁忌症
CART治疗不适用于T细胞缺乏或功能严 重受损的患者，以及存在严重感染、自 身免疫性疾病等禁忌症的患者。
疗效及安全性评估
疗效评估
CART治疗的疗效评估主要依据肿瘤缩小程度、完全缓解率、无进展生存期等 指标进行评估。多项临床研究表明，CART治疗对于部分血液系统恶性肿瘤具 有显著的治疗效果。
安全性评估
现状
全球范围内已有多个CART治疗产品获批上市，用于治疗多种类 型的血液肿瘤和实体瘤。同时，还有大量的CART治疗临床试验 正在进行中，以探索其更广泛的应用和疗效。
CAR-T细胞免疫疗法ppt课件
3
临床上发现肿瘤时，一般已是中晚期，此时病人 体内肿瘤细胞占优势，严重损害了机体的免疫功 能，在这样的免疫系统微环境下，DC细胞功能受 损，激活T细胞效率较低，攻击癌细胞能力不够， 也不够精准；另外，肿瘤细胞通过低表达或不表 达MHC分子的逃逸机制，逃脱免疫细胞的攻击。 这就需要制造精密制导、精准打击的免疫细胞武 器，克服MHC介导的杀瘤机制。于是，靶向性抗 肿瘤细胞CAR-T技术应运而生。
CAR-T 免疫疗法
1
什么是CAR-T
2
CAR-T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞。这是一个 出现了很多年，但是近几年才被改良使用到临床 上的新型细胞疗法。和其它免疫疗法类似， 它的 基本原理就是利用病自身的免疫细胞来清除癌细 胞。
CAR-T细胞疗法临床适应症
9
CAR-T技术应用范围广泛，针对某种或数种肿瘤相关
抗原阳性的肺癌、乳腺癌、大肠癌、前列腺癌、宫颈
癌、卵巢癌、鼻咽癌、食道癌、肾癌、膀胱癌、胃癌、 黑色素瘤、淋巴瘤等恶性肿瘤均可治疗。
CAR-T细胞疗法适用条件：
10
1.肿瘤标志物或免疫组化检测的某种或数种肿瘤 相关抗原为阳性； 2.肿瘤组织的HLA-Ⅰ类抗原阳性； 3.停止化疗或放疗，外周血细胞恢复至正常值或 接近正常值（使用升白细胞药物达到的正常值除 外）； 4.无重度贫血，全身器官衰竭和恶病质状态； 5.肝肾功能正常，生命体征基本正常； 6.无严重过敏体质。 患者符合以上条件即可接受CAR-T技术治疗。
13
CRS产生的原因是T细胞在杀死其它细胞，比如细 菌病毒的时候会释放很多蛋白，叫细胞因子，它 们的作用是激活更多的免疫细胞来一起对抗这些 病原体，这种 正反馈机制保证了对病原体的快速 清除。这在临床上就是炎症反应，由于CAR-T杀 癌细胞太快太有效了，于是在瞬 间在局部产生超 大量的细胞因子，引起惊人的免疫反应，这就是 细胞因子风暴。
CART细胞免疫疗法PPT课件
CART细胞免疫疗法在肿瘤治疗中的应用
常见肿瘤类型及其特点
实体瘤
01
具有明确的肿块，可通过影像学手段检测，如肺癌、乳腺癌等
。
血液系统肿瘤
02
起源于血液、淋巴系统或骨髓的恶性肿瘤，如白血病、淋巴瘤
等。
转移性肿瘤
03
由原发部位扩散至其他器官的肿瘤，具有高度的侵袭性和转移
性。
CART细胞免疫疗法在肿瘤治疗中的优势
胞的再生和修复。
03
探索CART细胞与干细胞疗法的结合，共同发挥治疗
作用，提高神经退行性疾病的治疗效果。
未来发展趋势预测与挑战分析
随着基因编辑技术的不断发 展，CART细胞免疫疗法的精
准度和安全性将得到进一步 提升。
未来CART细胞免疫疗法有望 与其他治疗手段相结合，形 成综合治疗方案，提高治疗 效果。
A
B
C
D
成本高昂
CART细胞免疫疗法涉及个性化定制，生 产成本高昂，限制了其在临床的广泛应用 。
技术瓶颈
CART细胞制备、扩增和质量控制等环节 仍存在技术瓶颈，影响治疗效果和安全性 。
未来发展趋势预测及建议
疗效提升
通过改进CART细胞设计、优化基因编 辑技术等方式，提高CART细胞的疗效 和持久性。
肿瘤特异性抗原（TSA）
仅在肿瘤细胞表面表达的抗原，具有高度特异性。
个体化抗原选择
根据患者肿瘤细胞的基因测序结果，选择特 异性抗原作为CART细胞的靶点。
T细胞活化与扩增
T细胞来源
从患者外周血中分离出T细胞，或使用异体T细 胞。
T细胞活化
通过抗原刺激或基因工程手段使T细胞活化，表 达特异性受体。
疗成本、提高CART细 胞的持久性和安全性、以及 如何应对可能出现的免疫排 斥反应等。
常见肿瘤类型及其特点
实体瘤
01
具有明确的肿块，可通过影像学手段检测，如肺癌、乳腺癌等
。
血液系统肿瘤
02
起源于血液、淋巴系统或骨髓的恶性肿瘤，如白血病、淋巴瘤
等。
转移性肿瘤
03
由原发部位扩散至其他器官的肿瘤，具有高度的侵袭性和转移
性。
CART细胞免疫疗法在肿瘤治疗中的优势
胞的再生和修复。
03
探索CART细胞与干细胞疗法的结合，共同发挥治疗
作用，提高神经退行性疾病的治疗效果。
未来发展趋势预测与挑战分析
随着基因编辑技术的不断发 展，CART细胞免疫疗法的精
准度和安全性将得到进一步 提升。
未来CART细胞免疫疗法有望 与其他治疗手段相结合，形 成综合治疗方案，提高治疗 效果。
A
B
C
D
成本高昂
CART细胞免疫疗法涉及个性化定制，生 产成本高昂，限制了其在临床的广泛应用 。
技术瓶颈
CART细胞制备、扩增和质量控制等环节 仍存在技术瓶颈，影响治疗效果和安全性 。
未来发展趋势预测及建议
疗效提升
通过改进CART细胞设计、优化基因编 辑技术等方式，提高CART细胞的疗效 和持久性。
肿瘤特异性抗原（TSA）
仅在肿瘤细胞表面表达的抗原，具有高度特异性。
个体化抗原选择
根据患者肿瘤细胞的基因测序结果，选择特 异性抗原作为CART细胞的靶点。
T细胞活化与扩增
T细胞来源
从患者外周血中分离出T细胞，或使用异体T细 胞。
T细胞活化
通过抗原刺激或基因工程手段使T细胞活化，表 达特异性受体。
疗成本、提高CART细 胞的持久性和安全性、以及 如何应对可能出现的免疫排 斥反应等。
CART免疫治疗PPT课件
第1页/共10页
目前制药公司、生物科技公司、大学以及合作 组织都在进行CAR-T细胞的研究，已有公司制 备好可应用于白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、 胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌等多种适 应症的CAR-T技术体系
第2页/共10页
原理：通过基因转导使患者的T细胞能够表达嵌合抗原受体CAR，将改造后
第7页/共10页
➢ 慢病毒：表达持久，效率较高；
安全问题，费用较贵。
➢ 电穿孔：适用性广，更加安全；
效率较低，不够持久。
第8页/共10页
1、早期杀伤力与特异性不强 2、转录方式的选择问题 3、副作用仍不能忽视（细胞因子风暴）
第9页/共10页
感谢您的观看！
第10页/共10页
2014年12月6号-9号在旧金山举 行的美国血液学会年会（ASH） 上，会议现场的巨型"T细胞"
小女孩Emily Whitehead
第一批吃CAR-T这个螃蟹的人，治愈两 年多了，复查体内仍然没有任何癌细胞
CAR-T疗法在会议中大放异彩，会中多 项报告发布了CAR-T疗法最新的喜人进 展
目前，国外从事CAR-T疗法研发的公司主要包括诺华、Juno、 Bellicum、Kite Pharma等。2014年7月FDA授予诺华公司开发的个 性化CAR-T癌症疗法CTL019突破性药物认证，并希望借此推动这种 疗法的研究
的T细胞回输至患者体内，生成大量特异性识别肿瘤的CAR-T细胞从而杀死 肿瘤细胞（通过加强自身免疫力和特异性识别来达到杀伤肿瘤的效果）。
第3页/共10页
CAR T细胞表面的嵌合抗来自受体单链抗体ScFv 目前能获得的最小的具有 特异性识别功能的分子， 大小为28KD
CAR-T通过外源基因转染技术，把识别肿瘤相关抗原的单链抗体（scFv）和T细胞活化序列 的融合蛋白表达到T细胞表面，这样scFv通过跨膜区与T细胞胞内的活化增殖信号域偶联，经 回输患者体内后大规模扩增，表现强效的第抗4页癌/共作1用0页
目前制药公司、生物科技公司、大学以及合作 组织都在进行CAR-T细胞的研究，已有公司制 备好可应用于白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、 胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌等多种适 应症的CAR-T技术体系
第2页/共10页
原理：通过基因转导使患者的T细胞能够表达嵌合抗原受体CAR，将改造后
第7页/共10页
➢ 慢病毒：表达持久，效率较高；
安全问题，费用较贵。
➢ 电穿孔：适用性广，更加安全；
效率较低，不够持久。
第8页/共10页
1、早期杀伤力与特异性不强 2、转录方式的选择问题 3、副作用仍不能忽视（细胞因子风暴）
第9页/共10页
感谢您的观看！
第10页/共10页
2014年12月6号-9号在旧金山举 行的美国血液学会年会（ASH） 上，会议现场的巨型"T细胞"
小女孩Emily Whitehead
第一批吃CAR-T这个螃蟹的人，治愈两 年多了，复查体内仍然没有任何癌细胞
CAR-T疗法在会议中大放异彩，会中多 项报告发布了CAR-T疗法最新的喜人进 展
目前，国外从事CAR-T疗法研发的公司主要包括诺华、Juno、 Bellicum、Kite Pharma等。2014年7月FDA授予诺华公司开发的个 性化CAR-T癌症疗法CTL019突破性药物认证，并希望借此推动这种 疗法的研究
的T细胞回输至患者体内，生成大量特异性识别肿瘤的CAR-T细胞从而杀死 肿瘤细胞（通过加强自身免疫力和特异性识别来达到杀伤肿瘤的效果）。
第3页/共10页
CAR T细胞表面的嵌合抗来自受体单链抗体ScFv 目前能获得的最小的具有 特异性识别功能的分子， 大小为28KD
CAR-T通过外源基因转染技术，把识别肿瘤相关抗原的单链抗体（scFv）和T细胞活化序列 的融合蛋白表达到T细胞表面，这样scFv通过跨膜区与T细胞胞内的活化增殖信号域偶联，经 回输患者体内后大规模扩增，表现强效的第抗4页癌/共作1用0页
CAR-T联合移植治疗ppt课件
学习交流PPT
10
1.2 患者自愿入组参加，依从性好，能全程配合试验 观察，一般情况尚好，心、肝、肾功能基本正常， 无重症感染，采血时外周血CD3+T淋巴细胞计数必 须≥0.8x109/L。
白血病细胞表面抗原CD19的 检测和鉴定
T淋巴细胞数量和亚型的 评估
学习交流PPT
11
2. 治疗方法： 用逆转录病毒载体导入CD19 CAR的自体T细胞
• 正常造血干细胞功能衰竭
学习交流PPT
4
难治性白血病的治疗原则
• 常用的方法
使用无交叉耐药的新药组成联合化疗方案 中、大剂量化疗
• 临床试验
异基因造血干细胞移植 使用耐药逆转剂 新的靶向治疗药物或生物治疗
学习交流PPT
5
复发、难治性AML患者的治疗选择
• 大剂量Ara-C再诱导治疗 • 中剂量Ara-C为基础的方案（FLAG或联合蒽环、
学习交流PPT
34
第4例：CAR-T回输后第30天，骨髓和外周血细 胞学CR。bcr/abl（T315I突变）融合基因 P210 19.3%阳性 PB-RT-PCR 可检出微量CAR-T特异性核 苷酸片段。
微弱 阳性
学习交流PPT
35
讨论
学习交流PPT
36
一、CAR-T治疗的安全性：CAR有多安全？
CAR-T联合移植治疗复发难治 ALL
学习交流PPT
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难治性白血病诊断标准
• 经标准方案治疗2个疗程无效的初治病例 • CR后经过巩固强化治疗，6个月内首次复发 • 在6个月后复发但经常规治疗无效者 • 再次或多次复发者 • 髓外白血病持续存在
——全国第四届难治性白血病学术研讨会，
医学肿瘤免疫和CART细胞治疗专题课件
利妥西单抗－治疗恶性淋巴瘤；曲 妥珠单抗－治疗乳癌，联合化疗增强疗 效。
过继性细胞治疗
过继性细胞治疗是通过分离自体或异体免疫效应细胞，经体外激活并回输， 直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫反应。
过继性细胞治疗的关键在于产生数量足够、能够识别并杀伤肿瘤的免疫细胞， 以及效应细胞能够到达肿瘤所在部位，并在肿瘤周围被激活且发挥抗瘤作用。
什么是CAR-T细胞
➢ 嵌 合 抗 原 受 体 （ chimeric antigen receptor, CAR）T细胞技术；
➢ 是 过 继 细 胞 免 疫 治 疗 （ adoptive cellular immunotherapy，ACI)的一种；
➢ 通过基因改造技术，让患者T细胞表达嵌合抗原受 体，使效应T细胞的靶向性、杀伤性和持久性均较 常规应用的免疫细胞高，并可克服肿瘤局部免疫抑 制微环境和打破宿主免疫耐受状态；
第二代CARs相比第一代CARs增加了一个胞内共刺 激信号域（signal 2）。在过去的5年里，对于 第二代含有CD28或者4-1BB(CD137) 共刺激信号 域的抗CD19 CAR-T，在治疗B淋巴细胞白血病的 临床试验中都表现出优异的疗效，但是仍然需要
α干扰素
具有免疫调节、抗增殖、诱导 分化、促凋亡、抗血管生成等 多种作用，是第一个被证实具 有抗肿瘤活性的细胞因子
效应细胞刺激剂
IL-2
是调控T细胞和NK 细胞等淋巴细胞生长 的重要因子
咪喹莫特
是Toll样受体7（toll-like receptor 7，TLR7）的激动剂 ，能增强固有免疫应答和适应性 免疫应答
肿瘤免疫和CART细胞治疗
主要内容
•肿瘤免疫逃逸 •肿瘤免疫治疗 •CAR-T细胞治疗
肿瘤抗原
过继性细胞治疗
过继性细胞治疗是通过分离自体或异体免疫效应细胞，经体外激活并回输， 直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫反应。
过继性细胞治疗的关键在于产生数量足够、能够识别并杀伤肿瘤的免疫细胞， 以及效应细胞能够到达肿瘤所在部位，并在肿瘤周围被激活且发挥抗瘤作用。
什么是CAR-T细胞
➢ 嵌 合 抗 原 受 体 （ chimeric antigen receptor, CAR）T细胞技术；
➢ 是 过 继 细 胞 免 疫 治 疗 （ adoptive cellular immunotherapy，ACI)的一种；
➢ 通过基因改造技术，让患者T细胞表达嵌合抗原受 体，使效应T细胞的靶向性、杀伤性和持久性均较 常规应用的免疫细胞高，并可克服肿瘤局部免疫抑 制微环境和打破宿主免疫耐受状态；
第二代CARs相比第一代CARs增加了一个胞内共刺 激信号域（signal 2）。在过去的5年里，对于 第二代含有CD28或者4-1BB(CD137) 共刺激信号 域的抗CD19 CAR-T，在治疗B淋巴细胞白血病的 临床试验中都表现出优异的疗效，但是仍然需要
α干扰素
具有免疫调节、抗增殖、诱导 分化、促凋亡、抗血管生成等 多种作用，是第一个被证实具 有抗肿瘤活性的细胞因子
效应细胞刺激剂
IL-2
是调控T细胞和NK 细胞等淋巴细胞生长 的重要因子
咪喹莫特
是Toll样受体7（toll-like receptor 7，TLR7）的激动剂 ，能增强固有免疫应答和适应性 免疫应答
肿瘤免疫和CART细胞治疗
主要内容
•肿瘤免疫逃逸 •肿瘤免疫治疗 •CAR-T细胞治疗
肿瘤抗原
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1. 病例选择：
1.1 复发难治性急性B淋巴细胞白血病（B-ALL） 患者经其他传统治疗手段无效，治疗前确认白 血病细胞CD19+。
复发难治性急性B淋巴细胞白血病定义： ①初治病人对标准诱导化疗无效（ALL 1个疗程，AML 两个疗程）；
②在首次缓解6个月内、即早期复发的白血病； ③虽然在首次缓解6个月后复发，但以原方案再诱导 治疗失败者； ④ 2次或2次以上复发的患者。
CD19
GAPDH
Cp值
ห้องสมุดไป่ตู้
相对定量----Cp值与内参
Cp值平均数
样品名 CD19 GAP DH
L2（患者） 19.89 12.6 1 X1（阳参） 21.75 12.6 8 NC（阴参）36.27 14.1 9 注： L2为患者细胞，X1为另一组感染效率的对照细胞，NC为经过相同时间周期培养 的未感染的T细胞（NC-CD19的Cp值超过35，说明样品中没有模板）。 左侧CD19的引物位于CAR的scFv上，，正常的T细胞不表达；右侧为GAPDH， 作为上样内参；
CAR-T联合移植治疗复发难治ALL
难治性白血病诊断标准
• 经标准方案治疗2个疗程无效的初治病例
• CR后经过巩固强化治疗，6个月内首次复发
• 在6个月后复发但经常规治疗无效者 • 再次或多次复发者 • 髓外白血病持续存在
——全国第四届难治性白血病学术研讨会，
复发性白血病诊断标准
（符合下列条件之一）
FCM检测转染结果
未转染细胞
转染后细胞
回输前T细胞亚群检测
CAR-T细胞回输前1周内，除予以小剂量环磷酰胺 (0.3g/M2 iv. -6d,-5d,-4d) 进行预处理帮助删除抑制性淋巴 细胞之外（也有患者采用FC），禁用其他一切细胞毒药 物和免疫抑制剂。回输时至少由三人（医生、护士和细 胞制备技术人员）对患者的姓名、性别、年龄、住院号、 细胞培养序列号和质控报告单等资料进行严格核对，确 认无误后再行回输，回输过程中密切观察患者情况。
3. 观察指标：
1）安全性，患者接受CAR-T-CD19治疗，可能出现的 各种相关不良反应及患者耐受性。 2）CAR-T-CD19体内清除白血病细胞效能。
3） CAR-T-CD19在体内持续存留的时间。
4. 结果
1）6例成人接受CAR-T-CD19治疗患者的一般情况
性别 年龄 临床诊断和既往治疗
• 近期CD19嵌合抗原受体技术在治疗儿童和成人复 发B-ALL方面初步显示出很好疗效，近两年的
ASH会议上均有所报道。为了强调这个领域的重
要性，CAR-T疗法成为2014、2015年ASH年会中的
一个重点。
• 这种新型疗法为复发难治性B-ALL患者带来了一
线生机，尤其给那些此前各种实验疗法均失败、
• 诱导化疗获得CR的AL患者骨髓原始细胞大 于5％但少于20％，经过一疗程标准化疗未 获得完全缓解。 • 诱导化疗获得CR的AL患者骨髓原始细胞大 于20％。 • 髓外出现白血病细胞浸润。
难治性白血病的主要原因
• 白血病细胞对化疗药物产生耐受
原发耐药：化疗之前即存在 继发耐药：反复化疗诱导白血病细胞产生 耐药
4. 结果
2）安全性：所有患者在回输细胞后均出现不同 程度的发热，一般均在37 ℃~ 38 ℃，偶然最高 可达39℃以上，但均为一过性，无畏寒、寒战、 心慌、胸闷等不适，无需特殊处理或仅用物理降 温即可退热。第1例患者在回输CAR-T 2周后复查 骨髓发现有嗜血现象，无其他严重毒副反应。
• 正常造血干细胞功能衰竭
难治性白血病的治疗原则
• 常用的方法
使用无交叉耐药的新药组成联合化疗方案 中、大剂量化疗
• 临床试验
异基因造血干细胞移植 使用耐药逆转剂 新的靶向治疗药物或生物治疗
复发、难治性AML患者的治疗选择
• 大剂量Ara-C再诱导治疗
• 中剂量Ara-C为基础的方案（FLAG或联合蒽环、 蒽醌类药物）再诱导治疗 • 二线药物再诱导治疗 • 临床试验 • 异基因造血干细胞移植（二线方案获得CR后再 移植或直接移植）
• 虽然化疗治疗儿童急性淋巴细胞白血病取得很好 的疗效，70% 以上患者可获得5年以上长期生存， 但在成人ALL疗效仍然很差，尤其是复发难治性急 性淋巴细胞白血病的患者预后极差，甚至即使接 受挽救性造血干细胞移植治疗，大多患者仅能获 得短期病情控制，如果是在异基因造血干细胞移 植之后复发或无条件接受移植治疗，该类患者基 本上处于无药可救境地。
1.2 患者自愿入组参加，依从性好，能全程配合试 验观察，一般情况尚好，心、肝、肾功能基本正 常，无重症感染，采血时外周血CD3+T淋巴细胞 计数必须≥0.8x109/L。
白血病细胞表面抗原CD19的 检测和鉴定
T淋巴细胞数量和亚型的 评估
2. 治疗方法： 用逆转录病毒载体导入CD19 CAR的自体T细
均为难治性或反复复发（含髓外浸润3/6 ）的
男 ： 16岁 4例 女 ： 2例
~52岁 B-ALL，其中3例bcr/abl阳性（含1例B 髓双系 列混合型 AL ）， 1 例 t(4;11) 、 MLL-AF4 阳性 , 1例Pro-B-ALL伴 CD33、CD13表达，1例Pre-
Pre-B-ALL伴骨髓纤维化
无药可治的患者带来了希望。
CAR-T细胞治疗恶性肿瘤有多重优势：短时 间内扩增肿瘤特异的T细胞群，靶抗原的非HLA依 赖，可反复多疗程使用等。但作为是一种刚刚应 用于临床的新型治疗方法，还存在很多问题和未 确定因素需要进一步研究和探索，包括“CAR-T 细胞最基本的质量标准参数的制定和监控，回输 的最佳时机和方式，治疗相关不良反应及其控制， 以及近期、远期确切的治疗效果等等”。尤其对 中国的患者临床疗效如何？
胞（CAR-T-CD19）输注给患者，输注剂量为
5×108~无上限，分3-5次回输。
• 回输前对体外制备的CAR-T细胞进行质量检 测和鉴定：
1）基本指标：数量、活性度、有无病原体等污染。 2）靶抗原转染率和细胞杀伤功能。
转染组
对照组
RT-PCR检测转染结果
CA R质 粒 患 者 阳 性 对 照 阴 性 对 照 CA R质 粒 患 者 阳 性 对 照 阳 性 对 照