5个现代月季品种愈伤组织再生体系的建立与体细胞培养的研究

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多年生黑麦草品种夜影再生体系的建立

多年生黑麦草品种夜影再生体系的建立黄锐【摘要】分别以多年生黑麦草品种夜影的成熟胚和生长点为外植体，在6种培养基上进行愈伤组织诱导，比较接种60 d时的诱导率及愈伤组织形态，并将继代培养后的胚性愈伤组织转接到4种不同的分化培养基上进行再生苗分化。

结果表明，生长点愈伤组织诱导率和分化率明显高于成熟胚，5.0 mg/L的2，4-D是诱导黑麦草品种夜影愈伤组织的最佳浓度，胚性愈伤组织在添加1.0 mg/L 6-BA的培养基上分化率最高。

【期刊名称】《甘肃农业科技》【年(卷),期】2016(000)006【总页数】4页(P28-30,31)【关键词】黑麦草;品种;夜影;愈伤组织;再生体系【作者】黄锐【作者单位】甘肃省农业科学院产业开发管理处，甘肃兰州 730070【正文语种】中文【中图分类】S543;Q813.1黑麦草是具有世界栽培意义的牧草和草坪草［1-2］。

在草坪产业中，品种的改良一直是一个重要的问题。

传统的草坪草品种改良一直依靠常规育种方法，由于草坪草种类繁多，多为多倍体、多年生以及异交等原因，传统育种方法受到一定的限制。

近年来随着植物基因工程技术的迅速发展，转基因技术在草坪草的品种改良中受到越来越广泛的重视，而植物组织培养是进行遗传转化的基础，黑麦草组织培养体系的建立对草坪业的发展有重要意义。

笔者以常用多年生黑麦草品种夜影为供试材料，用不同外植体在含不同浓度植物激素的培养基上进行培养，旨在筛选出培养多年生黑麦草品种夜影的最佳培养基，并建立其高效再生体系。

1.1 供试材料供试材料为多年生黑麦草品种夜影，购于兰州种子供销公司。

1.2 方法1.2.1 愈伤组织的诱导采用2种不同外植体进行愈伤组织诱导。

①用解剖刀将黑麦草成熟种子消毒后沿延长轴线一分为二切开，接种于添加不同浓度外源激素的愈伤组织诱导培养基（表1）上，25 ℃暗培养。

②将黑麦草成熟种子消毒后种于MS培养基上，待发芽7 d后剪下幼苗，于解剖镜下取生长点位置上下约0.5 cm的小段，用解剖刀纵切生长点后接于不同外源激素浓度的愈伤组织诱导培养基（表1）上，25 ℃暗培养。

月季“月月红”(Rosa+chinensis‘Slater's+crimson+China’)愈伤组织诱导及植株再生初报

ｋ，１４
ｎａ’）是大花香水月季（Ｒ．ｏ面ｍ把ｖａｒ．醣弘ｍ∞）与月
季花（露．如ｉ聪ｗ蠡驴，２１８，黝）天然杂交种，周年连续
开花，具香味，在现代月季的演化史上扮演着重要的角色¨２Ｉ。本研究以“月月红”为试材，通过胚性愈伤诱导途径，建立了“月月红”再生体系，为“月月红” 利用外源基因进行遗传改良奠定了基础。
ｗａｓ
ｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｅｍｅｄｉａＭＳ＋２，４－ＤＯ．１
５ｍ∥Ｌ＋
ｆｏｒ１２
ｍ∥Ｌ．Ｔｈｅ
ｂｅｓｔｍｅｄｉ８ｆｏｒｅⅡｌｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｔｉ蜩ｕｅｓ
ＭＳ＋ＴＤｚ１．Ｏ
ｍ舀／Ｌ＋ＧＡ３
ｔＤｏｔｗｅｒｅ
ｍ吕／Ｌ＋ＮＡＡ
Ｏ．０ｌ
ｍｇ／Ｌ
ＴＤｚ、ＧＡ３和ＮＡＡ上，结合不同时间的暗培养，研究“月月红”胚性愈伤组织的诱导及植株再生。结果表明，２，４一Ｄ
２０５
ｍｇ／Ｌ暗培养
ｄ诱导出的愈伤组织，在Ｍｓ＋ＴＤｚ
１．Ｏ
ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．１ｍ∥Ｌ＋ＮＡＡＯ．０１ｍｇ／Ｌ培养基上暗培养１２ｄ，可以获得较好的胚性愈伤
组织；胚性愈伤组织转入光照培养１５ｄ后可形成肉眼可辨的子叶期体胚及具有不定芽和胚根的结构，２０ｄ后可长成绿色的小植株。关键词：月季“月月红”；组织培养；胚性愈伤组织；再生中图分类号：ＳＩ；８５．１２文献标识码：Ａ
ｗｏｒｄｓ：胍口出ｉ，踟厶‘Ｓ１８ｔｅｒ’ｓ耐粥Ｄｎ
月季（Ｒｏｓ口研６讹）是世界范围内最具经济价
值的观赏植物之一，经过长期反复的杂交和选育，现
长，需要进行大量的工作才能够获得育种者所希望的集中多种优良性状的杂交后代。而蔷薇属植物再生体系困难是限制通过基因工程技术改良现代月季

影响月季愈伤组织诱导和分化的因素

摘要以“ 萨蔓莎”（Ｓａｍａｎｔｈａ“）、金斯莱克”（Ｊｉｍｔｈｅｌａｎｋｙ“）、休姆主教”（ＨｕｍｅＢａｓｉｌ）等９个月季品种为材料，研究了影响月季愈伤组织诱导和分化的因素。试验结果表明，不同品种之间愈伤组织诱导率和诱导数量差异显著。细胞分裂素ＢＡ、ＫＴ、ＺＴ和生长素ＮＡＡ、２，４－Ｄ６种激素中，ＫＴ或ＺＴ与ＮＡＡ组合能够较好地诱导月季愈伤组织。试验选择了含有不同浓度ＫＴ和ＮＡＡ以及ＺＴ和ＮＡＡ两组培养基试验不同激素浓度对月季愈伤组织诱导的影响，结果表明激素浓度主要影响愈伤组织的颜色和质地；一般生长素浓度越高，愈伤组织颜色偏向于黄色，质地也越松散；但是有些品种当生长素达到一定浓度时，会发生不定根；并且不同品种适宜的激素浓度不同。愈伤组织形成后在原培养基中继续培养或转接于含有不同浓度ＺＴ和ＮＡＡ以及含有ＴＤＺ、ＮＡＡ和ＧＡ的两组愈伤组织分化培养基中，结果表明，在愈伤组织分化过程中，生长素仍然是必要的；ＧＡ对愈伤组织增殖具有负作用。暗培养和固液两相培养基有利于愈伤组织的分化。试验得到了月季品种 “ 金斯莱克”的再生植株以及“ 萨蔓莎”愈伤组织分化的芽状体和叶状体。关键词月季，愈伤组织，诱导，分化
的愈伤组织诱导培养基，进行暗培养，观察暗培养对都开始长根。个别品种适宜的激素浓度范围大，如
月季愈伤组织诱导和分化的影响。另外对“ 萨曼莎”“ 卓越”“、绿野”“、埃菲尔铁塔”３个品种在各个试验
进行固液两相培养，先在固体培养基上诱导新鲜愈浓度培养基上诱导的愈伤组织都为黄白色至黄绿
伤组织，２２ｄ后加入含有ＴＤＺ０．０５ｍｇ／Ｌ的液体培养色，质地松散。各个品种最适宜的愈伤组织诱导培养
分子植物育种，２００６年，第４卷，第２期，第２２３－２２７页ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，２００６，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．２，２２３－２２７

月季花的组织培养知识讲解

月季的分类---地被月季
匍匐生长，枝条触地生根，覆盖率极强（单株年覆盖面1平方米左右，厚度30厘米左右）；多花（单枝花朵50—— 100朵，单株次开花可达千朵以上）；耐寒、抗旱、抗病，是抵御风沙、水土保持最理想花卉品种。其中以恋情火焰、巴西诺、哈德福俊、梅郎珍珠为佳。
月季的分类---食用月季
（4）壮苗培养
①对增殖倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行一次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特别强调繁殖速度，也可以一直使用这种培养基，以壮苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。
（4）消毒与接种在超净工作台上，用饱和
漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求接种，从芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。
•（5）培养培养温度21℃最
好，最高不超过25℃，有昼夜温差，光照10～12小时/天，光强800～
1200LX。
（二）继代增殖
（1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到MS+BA12mg/l+IAA0.1-0.3mg/l或MS+BA1-2mg/l+NAA0.010.1mg/l的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克
（2）5周后，所培育的月季成倍的增加。
（3）每5～6周做一次继代增殖，继代前先制备好培养基，然后在无菌操作条件下，将月季嫩茎切成1～2节一段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。
1 ：初代培养 2 ：继代培养

月季研究进展

月季组织培养研究进展摘要:本文概括了月季在国内外育种的研究进展,从月季腋芽萌发、器官发生、体细胞胚胎发生三个方面综述了品种、外植体、基本培养基成分、激素浓度及配比、培养条件及不同的外植体处理方法等影响因素对月季组培体系的影响,并对今后月季组织培养的研究进展做出了展望。

关键词:月季;组织培养;腋芽萌发;器官发生;体细胞胚发生Advance in Research of Rose Tissue CultureLiu Mei student id()College of Agronomy and Biotechnology, Southwest University, Chongqing 400715,ChinaAbstract:This paper summarized the rose research and development trends in China and abroad , and the influence of thevarieties,explants,medium compositions,hormone concentration,cultivating conditions and different treating with explants on germination , organogenesis and somatic embryogenesis of rose tissue culture are reviewed , and the trend of the research was also put forward in this paper.Key words:rose; tissue culture; germination ; organogenesis; somatic embryogenesis前言:月季,被称为“花中皇后”,又称“月月红”,蔷薇科,是中国十大名花之一。

月季、玫瑰遗传转化系统的研究进展

月季、玫瑰遗传转化系统的研究进展邢瀚文;季静;王罡;杜长城;杨少辉;宋英今【摘要】对近年来月季和玫瑰遗传转化体系的建立和遗传转化研究进展进行了简要综述,为它们建立高效遗传转化体系奠定了理论基础.【期刊名称】《天津农业科学》【年(卷),期】2009(015)005【总页数】3页(P10-12)【关键词】月季;玫瑰;植株再生;遗传转化【作者】邢瀚文;季静;王罡;杜长城;杨少辉;宋英今【作者单位】天津大学,农业与生物工程学院,天津,300072;天津大学,农业与生物工程学院,天津,300072;天津大学,农业与生物工程学院,天津,300072;天津市林业局,天津,300061;天津大学,农业与生物工程学院,天津,300072;天津大学,农业与生物工程学院,天津,300072【正文语种】中文【中图分类】S685.12月季(Rosa hybrida L.)和玫瑰（Rosa rugosa）都是蔷薇科蔷薇属植物，是世界上最重要的观赏植物之一，世界四大切花之一，也是各类高级食品、化妆品的重要香料原料，因而具有极高的商业价值。

目前，月季和玫瑰育种是花卉育种较活跃的领域，主要集中在对花色、花形、开花习性、鲜切花寿命、株型、抗病性等的改良上[1]。

但是传统的育种方法存在着诸如：为多年生灌木，育种所需时间较长；基因资源有限，染色体数目及倍性差异使远缘杂交难以成功；生长一致性、开花同时性等多基因控制性状难以改良等问题。

20世纪90年代发展起来的以组织培养为基础的转基因技术为月季和玫瑰育种提供了一条新途径。

这种方法不但使品种在外源基因所控制的性状上发生改变，其性状保持相对稳定，还可利用来自其他生物类型的基因，创造更优良的品种[2]。

笔者着重介绍了月季遗传转化体系的建立及遗传转化方面的研究进展，为进行月季基因工程改良，培育月季优秀新品种提供借鉴。

同时，玫瑰与月季在遗传转化方面非常相似，在此不再赘述。

月季遗传转化体系的建立是转基因技术的重要前提条件，转基因成功与否在很大程度上依赖于再生体系是否高效。

月季组培实验报告

月季快速繁殖实验报告月季简介月季花(学名: Rosa chinensis Jacq.)被称为花中皇后，又称“月月红”,是常绿、半常绿低矮灌木，四季开花. -般为红色. 或粉色、偶有白色和黄色.可作为观赏植物，也可作为药用植物，亦称月季。

有三个自然变种,现代月季花型多样,有单瓣和重瓣，还有高心卷边等优美花型;其色彩艳丽、丰富,不仅有红、粉黄、白等单色，还有混色、银边等品种;多数品种有芳香。

月季的品种繁多，世界上已有近万种，中国也有千种以上。

一、实验目的1.掌握月季快繁体系: ①母株的选择②外植体消毒与接种③诱导培养④生根培养⑤.驯化移栽的操作流程2.掌握无菌操作的植物组织培养方法;3.通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法;4. 了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。

二、实验原理(一) 植物组织培养植物组织培养是把植物的器官，组织以至，单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成- -完整植株的过程。

植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团,即愈伤组织。

这-过程称为"脱分化作用”,已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下,又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。

(二)植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因,在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一-样的植株。

(三)组织的分化外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。

有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。

(四)培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近,似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。

黄和平月季植株再生体系建立研究

黄和平月季，０６年８月６日分别采自郑州市月季园苗２０木的大田叶片和室内无菌培养试管苗叶片。
１２．方法
光下培养约２０ｄ后，统计愈伤组织的诱导率并观察其愈伤质量。每个处理３次重复，每次重复１５个外植体。
１２２２４一．．，Ｄ对黄和平月季叶片愈伤组织诱导的影响取
前人研究基础上，重点研究２４一Ｄ（，，２４一滴）ＴＺ噻苯隆）、Ｄ（等植物生长调节剂及暗培养时间对愈伤组织形成、定芽诱不导的影响，探索建立稳定、高效的月季再生体系的可能。
１２４暗培养时间及ＴＺ对不定芽诱导的影响将．．Ｄ “ ．． ” 得的愈伤转入不定芽诱导培养基ＭＳ＋１２ｍ／１２２获．ｇＬ
ＴＺ＋．ｍ／Ａ＋．ｇＬＧ上，别黑暗培养０Ｄ０叭ｇＬＮＡ０１ｍ／Ａ分、
江苏农业科学
２１第３期００年
・９－・ — —４－ — —
郭丽娟，刘会超，贾文庆，等．黄和平月季植株再生体系建立研究［］Ｊ．江苏农业科学，００３：９— ２２１（）４５
黄和平月季植株再生体系建立研究
郭丽娟，刘会超，贾文庆。，刘孟刚。
１２１大田叶片灭菌处理及室内无菌培养试管苗叶片的培．．
养将采回的大田叶片经流水冲洗３ｎ后，０６５Ｌ０ｍｉ用．２

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5个现代月季品种愈伤组织再生体系的建立与体细胞培养的研
究
现代月季是世界上最重要的观赏植物之一,其四季常开、香味浓郁、花色丰富,一直为众人所青睐,具有广泛的应用价值,是现代城市绿化中不可替代的材料。

我国北方由于气候原因,缺乏可以广泛栽培并能露地越冬的现代月季品种。

当前在月季育种中存在的突出问题是现代月季遗传背景狭窄,传统育种方法周期过长,而且染色体数目及倍性差异造成远缘杂交不亲和与杂种的高度不育。

生物工程则为生物品种的改造开辟了新途径。

愈伤组织和体细胞是无性系变异和遗传转化的良好的受体材料,通过愈伤组织再生和体细胞培养可以获得无性系变异植株,而且体细胞融合为解决远缘杂交不育提供了一个很有潜力的新途径。

但是现代月季再生途径的建立还存在很大的困难,而且体细胞培养难度很大,体细胞培养获得再生植株的报道还很有限,因此本研究对促进月季的抗寒育种及其他性状的改良都具有重要的意义。

本研究通过探究影响现代月季快速繁殖和愈伤组织诱导再生的因素,并利用获得的愈伤组织建立细胞悬浮系,探讨了影响现代月季体细胞培养的各种因子,
旨在建立起现代月季高效的快速繁殖体系、愈伤组织再生和体细胞培养技术体系,为以后导入抗寒等目的基因、体细胞无性系变异的筛选及原生质体培养和融合等遗传操作打下良好的基础。

本研究的主要结果如下:1.建立了5个现代月季品种快速繁殖体系:1号月季品种不定芽萌发和增殖的最佳培养基
为:MS+6-BA2.5mg·L-1 +NAA0.05mg·L-1,增殖率能达到4.2;2号、6号和8号月季品种最佳培养基为:MS+6-BA2.0mg·L-1 +NAA0.05mg·L-1,增殖率分别能达到3.68、4.07和4.2;9号月季品
种最佳培养基为:MS+6-BA2.0mg·L-1 +NAA0.1mg·L-1 ,增殖率可达到3.99;5个月季品种无菌苗的最适生根培养基为:1/2MS+ NAA0.05 mg·L-1和1/2MS+ NAA 0.1mg·L-1,生根率都可达80%以上;各品种无菌苗通过驯化炼苗,露地栽植成活率都可达88%以上。

2.筛选出5个现代月季品种愈伤组织诱导最佳培养基。

1号、8号月季品种叶片诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D
3.0 mg·L-1,诱导率均可达到100.00%;2号、6号、9号月季品种叶片诱导愈伤组织的最佳培养基为
MS+2,4-D2.0 mg·L-1 +6-BA0.5 mg·L-1,诱导率分别可达到97.67%、98.67%、100.00%。

1号、6号月季品种幼茎诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D3.0
mg·L-1,诱导率分别可达到78.67%,84.33%;2号月季品种幼茎诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D2.0 mg·L-1,诱导率可达到
73.67%;8号、9号月季品种幼茎诱导愈伤组织的最佳培养基为
MS+2,4-D2.0mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1,诱导率分别为82.33%、80.33%。

3.筛选出4个现代月季品种愈伤组织分化最佳培养基。

1号品种叶片愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2,4-D0.2 mg·L-1 +TDZ9.0 mg·L-1 +GA30.1 mg·L-1,分化途径为不定芽发生途径,分化率可达18.00%;6号品种叶片愈伤组织分化的培养基为
MS+6-BA0.1 mg·L-1 +2,4-D1.0 mg·L-1 +TDZ8.0 mg·L-1 +GA30.1 mg·L-1,分化途径为不定芽发生途径,分化率可达22.00%;适合8号品种叶片愈伤组织分化的培养基为1/2MS+6-BA0.5 mg·L-1+TDZ10.0mg·L-1+GA30.1 mg·L-1、
MS+2,4-D0.2 mg·L-1 +TDZ9.0 mg·L-1 +GA30.1 mg·L-1,前者愈伤组织分化途径为胚状体途径,胚状体通过继代培养可形成再生植株,后者分化途径为不定芽途径,分化率分别为18.67%、21.33%,幼茎愈伤组织分化的最佳培养基为MS+TDZ8.0 mg·L-1,分化途径为不定芽发生途径,分化率可达46.67%;9号品种叶片愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA0.1 mg·L-1 +TDZ9.0 mg·L-1 +GA30.5 mg·L-1,分化途径为不定芽途径,分化率达到16.67%,幼茎愈伤组织分化的培养基为MS+2,4-D0.2 mg·L-1 +TDZ9.0 mg·L-1 +GA30.1 mg·L-1,分化途径为胚状体途径,分化率可达35.33%。

4.以5个月季品种的愈伤组织诱导培养基成分相同的液体培养基可建立起稳定的悬浮细胞系,悬浮系最佳的继代时间间隔为8-10d,悬浮系培养后
4-8天内的细胞生长旺盛,活性强,适宜用来进行细胞系的再生培养;不同基因型间月季悬浮系生长特性差异不显著。

5.以1号、8号和9号三个品种的悬浮细胞可诱导出愈伤组织。

1号品种悬浮细胞在固体培养基MS+6-BA0.1 mg·L-1 +2,4-D1.0
mg·L-1 +KT0.1 mg·L-1,愈伤组织诱导率为22.00%;8号品种悬浮细胞在固体培养基MS+2,4-D1.0 mg·L-1 +NAA1.0 mg·L-1 +KT0.5 mg·L-1愈伤组织诱导率为27.33%;9号品种悬浮细胞在固体培养基MS+2,4-D1.0 mg·L-1 +NAA1.0 mg·L-1 +KT0.5 mg·L-1愈伤组织诱导率为26.67%,悬浮细胞在液体培养基MS+6-BA0.5 mg·L-1 +2,4-D1.0
mg·L-1 +NAA0.2 mg·L-1愈伤组织诱导率仅为2.67%。

6. 1号品种悬浮细胞愈伤组织在培养基MS+2,4-D0.2 mg·L-1 +TDZ9.0 mg·L-1 +GA30.1 mg·L-1上可直接分化出不定芽,分化率可达32.33%;8号品种悬浮细胞愈伤组织在培养基MS+2,4-D0.2 mg·L-1 +TDZ9.0 mg·L-1 +GA30.1 mg·L-1上可分化出胚状体,分化率可达26.67%;9号品种悬浮细胞愈伤组织在培养基MS + 6-BA0.1mg·L-1 + TDZ 9.0mg·L-1 + GA3
0.5mg·L-1上可分化出胚状体,分化率为38.67%。