细菌转化实验原理和操作步骤

细菌转化实验原理和操作步骤

转化（transformation ）是指一段同源或异源的DNA 转入受体细胞并得到表达的水平基因的转移过程，是现代分子生物学研究和基因工程不可缺少的重要技术。

关键词：细菌转化细菌转化

一．实验目的

1 ．以pGLO 质粒转化大肠杆菌为例，学习转化的基本原理及方法。

2 ．验证DNA 是遗传物质，加深对中心法则的理解。

二．实验原理

转化（transformation ）是指一段同源或异源的DNA 转入受体细胞并得到表达的水平基因的转移过程，是现代分子生物学研究和基因工程不可缺少的重要技术。目前常用的转化方法有CaCl 2 法( 化学转化法) 和电转化法。本实验是用pGLO 细菌转化试剂盒中提供的pGLO 质粒来转化大肠杆菌，所用方法为CaCl 2 转化法。

pGLO 质粒：

pGLO 质粒上主要含有两个基因，一个为编码绿色荧光蛋白(GFP) 的基因，一个为抗生素氨苄青霉素抗性基因。此外，该质粒还整合有一个特殊的参与受体细胞中绿色荧光蛋白表达的基因调控体系，转化细胞中的绿色荧光蛋白基因只有在培养基中存在阿拉伯糖时才能启动表达。转化子细胞将在不含阿拉伯糖的培养基上呈白色而在含阿拉伯糖的培养基上显绿色荧光，这种荧光在长波紫外灯下即可观察到。

三．实验材料

受体菌：E.coli K12 HB101

质粒：pGLO plasmid

转化液（CaCl2 ）

氨苄青霉素（amp ）

阿拉伯糖（ara ）

培养基：固体LB 、液体LB

接种环、移液器等

四．实验步骤

1. 准备平板：每组：1 块LB 平板，2 块LB/amp 平板，1 块LB/amp/ara 平板

2. 准备感受态细胞：用250 μ l 无菌水或转化液悬浮试剂盒中提供的大肠杆菌菌粉，此即感受态细胞。

3. 活化受体细胞：挑取1 环E.coli K12 HB101 菌液，于LB 培养基上37 ℃活化16-24h 。

1

别标

记

2

250 μ l

3)

4

的一

个单菌落，悬浮于两管转化

液中。

5

入一

环质粒

的管中不加。

6

10min

7

如左图。

8

水浴中处理

放于冰上

9

250 μ l LB-

10

吸取

有

DNA

μ

的平板上。

11

的液体均匀涂布在平板上。

12

并于

2

13

结果，记录各平板上的菌落数