急性大鼠心肌梗死实验模型的制备(课堂PPT)

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1.7 术后抗感染及护理 大鼠本身具有比较强的抗感染能力，但是 预防感染有利于促进术后恢复，并且良好 的术后护理可以提高动物模型的生存率。 因此，术前所用手术器械均要用75％酒精 浸泡消毒。术后腹腔注射青霉素80万U。待 大鼠麻醉清醒后即可与其糖水和饲料，无 须禁食。术后可适量补充能量。冬天应注 意保嗳。
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2 检测指标
2.1 术前和术中做的心电图 2.2 组织病理学检查
开胸结扎冠状动脉后1d、2d及3 d分批处死 实验鼠。取其心脏，沿心脏纵轴剖开左右 心室，用10％福尔马林溶液固定24 h，然 后垂直于心脏纵轴从心尖部至心底部分别 横切4个切面，石蜡包埋，连续5 um厚度切 片，HE染色，观察左室壁心肌组织的病理 变化，确定心肌梗死的存在。
⑶. 开睑器撑开术口压迫肺脏时间过长，可能 存在气胸肺不张造成实验鼠缺氧；
⑷. 压迫心脏时造成大血管移位扭转，重要脏 器供血不足；
⑸.术中失血过多，造成血压下降，失血性休 克；
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⑹. 结扎冠状动脉时部位未掌握好，结扎部位 过高（结扎到左主干），大鼠出现严重心 律失常乃至心跳骤停，尽管已施以胸外按 压等抢救措施，但是最终没有成功使实验 鼠复苏；
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3 结果讨论
两只实验鼠死亡原因讨论： ①号实验鼠在结扎冠状动脉时心脏停止跳动死亡 ②号实验鼠在关闭胸腔时呼吸停止死亡
考虑以下可能原因： ⑴. 鼠龄过大，适应手术能力较适龄鼠差，多篇文
献提出实验鼠体重以250 ±25 g 为宜，本次实验 鼠体重分别为① 290g及②360g;
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⑵. 实验鼠体重较实验前预期的要重，麻醉剂 有使用过量的可能，实验鼠术中出现呼吸 抑制；
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1 实验步骤和观察项目
1. 1 实验动物 健康雄性Wistar大鼠30只, 体质量250 ±25 g制作心肌梗死动物模型的 大鼠体重以200～ 250 g为宜（动物太小， 不利于操作，耐受创伤能力低；而体重及 鼠龄太大，则不利术后观察生存期，而且 麻醉剂量不好掌握，凝血功能较差，不易 止血。实验动物由广西医科大学实验中心 提供。）
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1. 4气管插管
大鼠仰卧固定于手术台上。沿颈部中线切 开皮肤，分离组织暴露气管，用7号注射针 头做为插管以45度斜进针从甲状软骨下缘 轻轻水平插入约0.7~1.5cm 斜面朝上。固 定好,气管插管，呼吸比为1：2，呼吸频率 90次／rain，潮气量14 ml／kg。关闭呼吸 机，四肢接心电图机记录术前心电图。完 毕打开呼吸机， (此时作心电图与开胸后结 扎前心电图对照,验证是否为先天变异或实 验前异常－心电图机未借到，所以心电图 未能做)
大鼠心肌梗死实验模型的制备
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背景
有关心肌梗死模型的制作，国内外采用结扎、 药物、冷冻、栓塞、电凝等方法制作兔、大鼠、 狗等不同动物的心肌梗死模型，但大多数学者认 为结扎法复制的心肌梗死模型与心肌梗死实际发 病过程更符合。
由于临床大多心肌缺血或心肌梗死都是一渐 进性过程，会不断发生缺血或梗死后再灌现象。 而冠状动脉结扎法能人为地仿造临床心肌梗死过 程的冠状动脉梗死，其梗死部位、分布范围相对 一致，病理生理、生化改变与临床心肌梗死更相 似。
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1. 2 试验材料和药品 : 10%水合氯醛溶液、青霉素注射液、碘伏、 小动物呼吸机、心电图机、大白鼠手术板、 5ml注射器2个、7号或4号针头、眼科剪、 手术灯、眼科开睑器、小镊子、小弯钳、 缝针、缝合线(6 - 0线)、小无菌棉签
1.3 麻醉 SD大鼠称重(两只Wistar大鼠体重各为① 290g及②360g), ① 号鼠腹腔注射乌拉坦 1.45ml②号鼠腹腔注射 10%水合氯醛1ml。

左心耳
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在左心耳下距主动脉根部2～3 mm处可见一粉红色细小血管
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1.6 关胸及术后处理 逐层关胸, 断开呼吸机,清理呼吸道（拔出气 管插管后应注意将大鼠舌头外提，防止舌根 后坠出现缺氧窒息）并观察大鼠呼吸，以浅 快呼吸，频率30~40次/min为宜。术后单笼 饲养。
注:手术过程中大鼠冠状动脉结扎后可能马上出 现心律失常，室性停搏或心室纤维颤动，立 即解除对心脏的挤压或同时进行心内按压可 以使心脏恢复搏动。
综上所述,结合实际操作条件,选用结扎大鼠冠 状动脉结扎的方法,以建立稳定的、适于细胞移植 治疗心肌梗死的大鼠动物模型。
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建模原理
生物体各组织器官要维持其正常的生命活动，需要心 脏不停地搏动以保证血运。而心脏作为一个泵血的肌性动 力器官，本身也需要足够的营养和能源，供给心脏营养的 血管系统，就是冠状动脉和静脉，也称冠脉循环。冠状动 脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部,行于心脏表 面。冠状静脉伴随 冠状动脉收集代谢后的静脉血，归流 于冠状静脉窦，回到右心房。正常情况下，冠状动脉 之 间，尚有丰富的吻合支或侧支。冠状动脉虽小，但血流量 很大。占心排血量的5%，这就保证了心脏有足够的营养， 维持它有力地昼夜不停地跳动。如果冠状动脉突然阻塞， 不能很快建立侧支循环，常常导致心肌梗塞。但若冠状动 脉阻塞是缓慢形 成的，则侧支可逐渐扩张，并可建立新 的侧支循环，起代偿的作用。左冠状动脉为最大冠状动脉 分支.主要供应左心室前壁和侧壁，其主要分支是左前降 支和左回旋支.选用结扎鼠左冠状动脉前降支中上1／3处 结扎的方法,冠状动脉突然阻塞，侧支循环不及起代偿的 作用.以建立稳定的、适于细胞移植治疗心肌梗死.
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甲状软骨下缘
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1.5开胸及冠状动脉结扎
心前区域剃毛, 在心脏搏动最明显处,第三肋间隙 水平开胸,皮肤切口约1. 5～2. 0 cm,逐层钝性分离 肌肉至胸膜。剪开胸膜,用眼科开睑器撑开肋间肌 切口,以无菌棉球向下压迫左肺以保护肺脏剪开心 包,用无菌棉签推开左心耳。在左心耳下距主动脉 根部2～3 mm处,用6 - 0线穿过一小束心肌,并结 扎。(1)结扎后左室壁变苍白,并出现室壁运动减弱。 (2)术中结扎成功标识:心电监护见II导联大鼠于结 扎冠状动脉后QRS波峰降低，J点上移，ST段明 显抬高.证明心肌缺血存在心肌梗死（证明结扎成 功，心电图于结扎前与结扎后的心电图改变,排除 手术操作造成人为性大鼠心肌缺血） 。然后加大 通气量,充分使肺复涨,并清理胸腔。