苜蓿夜蛾中肠丝氨酸蛋白酶cDNA的克隆_序列分析及原核表达_周晓群
免疫筛选旋毛虫cDNA克隆及原核表达
免疫筛选旋毛虫cDNA克隆及原核表达杨静;诸欣平;杨雅平;周蕾;Pascal Boireau;詹斌;冯建军;Hotez Peter【期刊名称】《中国寄生虫病防治杂志》【年(卷),期】2003(16)1【摘要】目的获取旋毛虫抗原的 c DNA克隆并进行蛋白的原核表达。
方法应用兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清对旋毛虫成虫 c DNA文库进行筛选 ,并用兔人工感染旋毛虫血清对强阳性克隆进行再筛选。
将编号为 Ts87阳性克隆的基因片段亚克隆入 PET- 2 8a( +)表达载体 ,IPTG诱导表达后用 SDS- PAGE电泳分析表达产物。
结果免疫筛选获得阳性克隆 Ts87;成功构建重组表达质粒 PET- 2 8a( +) / Ts87。
诱导表达该融合蛋白 ,SDS- PAGE电泳表明 ,其能表达一分子质量约为 40 ku的融合蛋白 ,与预测分子质量相符。
结论筛选到 c DNA克隆Ts87,与兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清和兔人工感染旋毛虫血清均产生特异性免疫反应 ;PET原核表达系统所获重组蛋白为蛋白功能研究奠定了基础。
【总页数】3页(P7-9)【关键词】旋毛虫;免疫筛选;cDNA克隆;原核表达【作者】杨静;诸欣平;杨雅平;周蕾;Pascal Boireau;詹斌;冯建军;Hotez Peter 【作者单位】首都医科大学基础医学院寄生虫学教研室;UMR BIPAR INRA AFSSA ENVA UPVM;Department of Microbiology and Tropical medicine,George Washington University【正文语种】中文【中图分类】R383.15【相关文献】1.棉铃虫中肠cDNA表达文库的免疫筛选及其克隆分析 [J], 李杰;张霞;郭巍;刘小民;李新娜;赵丹2.大鼠RVLG cDNA的克隆、原核表达和小鼠抗RVLG蛋白多克隆抗体的制备 [J], 张平;邢万金;包晓红;刘志达;王连庆;李舜尧;乌日嘎3.旋毛虫新生幼虫期特异性T_(314)全长cDNA的克隆及表达 [J], 吴秀萍;刘明远;陈启军;卢强;付宝权;姚春雨;P.Boireau4.桑树1,5-二磷酸核酮糖羧化酶活化酶基因cDNA片段的克隆及原核表达与植物反义表达载体的构建 [J], 冀宪领;盖英萍;王洪利;牟志美5.日本血吸虫成虫cDNA表达文库免疫筛选及抗原表达克隆的鉴定 [J], 冯笑川;吴宜琴;陈淑贞;张兆松;管晓虹;吴观陵;赵慰先因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
棉铃虫小分子热激蛋白sHSP22.0基因的克隆及表达谱分析
扌直逖碌妇 2021, 47(3):61 -69P antProtection棉铃虫小分子热激蛋白sS 22・0基因的克隆及表达谱分析杨朔，刘少凯，赵少轩，朱宇辰，徐磊，李童云，刘晓光，安世恒，魏纪珍**收稿日期：2020 - 01 -04 修订日期：2020-02- 24基金项目：国家自然科学基金(31802016)；河南省重点研发与推广专项(212102110137)；河南农业大学自然科学类青年创新基金(KJCX2018A14)；河南省现代农业产业技术体系(S2014-11-G06)* 通信作者 E-mail : *********************(河南农业大学植物保护学院，省部共建小麦玉米作物学国家重点实验室，郑州450002)摘要棉铃虫Helico-verpa armigera 是一种重要的农业害虫，本文旨在研究小分子热激蛋白在其生长发育过程、抵御高温及CrylAc 杀虫蛋白中的功能。
利用PCR 结合RACE 技术克隆了棉铃虫sHSP22. 0( small heat shock pro tein 22. 0)基因，通过生物信息学软件分析了棉铃虫s H S P 22. 0基因序列，利用实时荧光定量qRT-PCR 分析了该基因在棉铃虫不同生长发育阶段和组织中的表达模式；并分析了该基因受高温及Cry1Ac 全长蛋白的诱导效应。
获得了棉铃虫.HSP22. 0(GenBank 登录号：XP _021196802. 1) 761 bp cDNA 片段,其开放阅读框576 bp,编码191个氨基酸，具有小分子热激蛋白典型的a -晶体结构域(a -crystallin domain, ACD )。
sHSP22. 0在棉铃虫4龄和5龄期特异性表达,尤其在5龄幼虫的表皮、中肠和后肠內特异性表达。
该小分子热激蛋白受温度和Cry1Ac 全长蛋白的诱导后显著高表达。
sHSP22. 0不仅在暴食期及肠道內特异性表达，而且响应Cry 1 Ac 全长蛋白的诱导，表明它在棉铃虫消化吸收及抵御外源物的活动中可能起到重要的作用。
野桑蚕铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆分析与原核表达
野桑蚕铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆分析与原核表达丛海峰;徐世清;司马杨虎;张升祥;王更先;董航;刘莹;柳学广【期刊名称】《蚕业科学》【年(卷),期】2007(33)2【摘要】超氧化物歧化酶是野桑蚕保护酶体系的重要酶类。
利用RT-PCR方法克隆出野桑蚕铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)cDNA(EMB I登陆号:AM410997),其开放阅读框ORF长465 bp,编码154个氨基酸。
同源性及系统进化分析表明,推导出的氨基酸序列与3种果蝇的同源性平均为69.3%,与线虫为57%,各物种中与Cu/Zn结合的残基高度保守。
利用ExPASy的ScanProsite以及PSort和TMpred对此编码的蛋白质结构和功能域分析,预测出其具有2段Cu/Zn-SOD特异序列,且该蛋白不存在信号肽以及跨膜区。
将Cu/Zn-SOD cDNA克隆到pET-28 a(+)表达载体,测序鉴定后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定其表达的融合蛋白质分子量为19.4 kD。
【总页数】7页(P234-240)【关键词】野桑蚕;铜锌超氧化物歧化酶;序列分析;原核表达【作者】丛海峰;徐世清;司马杨虎;张升祥;王更先;董航;刘莹;柳学广【作者单位】苏州大学生命科学学院;山东农业大学林学院;溧阳市蚕桑技术指导站【正文语种】中文【中图分类】S885.9;Q78【相关文献】1.翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶基因的分子克隆与原核表达 [J], 程周玉;许亮清;胡向萍;胡宝庆;简少卿;阳刚;张明;文春根;宁瑞红2.蜡样芽胞杆菌905铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆及原核表达 [J], 莫小丹;王勇军;王琦;梅汝鸿3.野桑蚕Bmand-Sxl基因的克隆及原核表达 [J], 宋艳;柳学广;司马杨虎;朱晓苏;徐丽;徐世清4.小胸鳖甲胞外铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 [J], 孜拉吉古丽·西克然木;马纪;库尔班·吐松;刘小宁5.野桑蚕泛素基因的克隆及原核表达 [J], 陈正凯;周君;包立军;徐剑;沈卫德;陆小平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小菜蛾表皮蛋白基因克隆及表达分析
小菜蛾表皮蛋白基因克隆及表达分析申建梅，陈炳翰，郭晓洁，胡黎明*（仲恺农业工程学院农业与生物学院，广州510225）摘要：【目的】克隆小菜蛾表皮蛋白基因（Plutella xylostella cuticular protein ，PxyICP ），分析其序列特征和发育表达模式，为深入研究PxyICP 在小菜蛾表皮形成中的生理功能提供科学参考。
【方法】以小菜蛾为试验材料，采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR ）和快速扩增cDNA 末端（RACE ）技术克隆PxyICP ，以生物信息学方法对其序列特征进行分析，并采用实时荧光定量PCR 研究PxyICP mRNA 在小菜蛾不同发育时期中的相对表达量。
【结果】克隆获得的PxyICP 基因开放阅读框长531bp ，编码177个氨基酸，相对分子质量约18.90kD ，等电点为5.32。
氨基酸序列分析结果表明，小菜蛾表皮蛋白第1~16位氨基酸是参与跨膜蛋白转移的信号肽，且该序列具有昆虫表皮蛋白CPR 家族中RR-1型保守基序的典型特征。
不同发育时期的实时荧光定量PCR 分析结果表明，PxyICP 在小菜蛾各发育时期的表达量不同，其中PxyICP 在2、3和4龄幼虫、蛹和成虫中的表达量分别是1龄幼虫的2.43、0.51、0.63、3.19和12.32倍，以在成虫的表达量最高。
【结论】成功克隆获得PxyICP 基因，根据其发育表达模式推测Pxy ICP 蛋白参与小菜蛾成虫表皮的硬化和黑化等生理过程。
关键词：小菜蛾；表皮蛋白；基因克隆；实时荧光定量PCR 中图分类号：S436.341.24文献标志码：A文章编号：2095-1191（2017）12-2176-06收稿日期：2017-10-20基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（31401805）；广东省高等学校优秀青年教师培养项目（KA1548850）作者简介：*为通讯作者，胡黎明（1978-），博士，副教授，主要从事昆虫分子生物学研究工作，E-mail ：huliming98@ 。
野桑蚕丝氨酸蛋白酶样蛋白基因克隆及特征（英文）
野桑蚕丝氨酸蛋白酶样蛋白基因克隆及特征（英文）张永亮;武安泉;赵锦慧【期刊名称】《浙江大学学报（农业与生命科学版）》【年(卷),期】2014(000)002【摘要】利用反转录-聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）克隆野桑蚕（Bombyx mandarina）丝氨酸蛋白酶样蛋白基因，获得的 cDNA 序列长为938 bp，含有一个912 bp 的完整开放阅读框，编码的蛋白质含有303个氨基酸残基.该基因编码的氨基酸序列与其他昆虫丝氨酸蛋白酶基因相应的氨基酸序列有较高的同源性，该序列具有它们丝氨酸蛋白酶基因家族的典型特征.RT-PCR 和 Northern blot 检测分析表明该基因仅在野桑蚕5龄3 d 幼虫的血液中表达.这为进一步研究该基因的功能奠定了基础.【总页数】6页(P119-124)【作者】张永亮;武安泉;赵锦慧【作者单位】周口师范学院生命科学与农学学院，河南周口 466001;周口师范学院生命科学与农学学院，河南周口 466001;周口师范学院生命科学与农学学院，河南周口 466001【正文语种】中文【中图分类】Q78;Q966【相关文献】1.野桑蚕中肠组织cDNA文库的构建及丝氨酸蛋白酶基因片段的克隆与序列分析[J], 王燕红;李兵;王东;朱莎;赵华强;卫正国;沈卫德2.野桑蚕中肠组织cDNA文库的构建及丝氨酸蛋白酶基因片段的克隆与序列分析[J], 王燕红;李兵;王东;朱莎;赵华强;卫正国;沈卫德3.埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂23的基因克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 翟慧;王政艳;吕清巧;程金芝;李世琪;杨茜;商正玲;吴家红4.中黑盲蝽丝氨酸蛋白酶基因克隆与序列分析 [J], 刘巧英;李梦歌;刘雪飞;余昊;王运兵5.脊尾白虾丝氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆及表达分析 [J], 李洋;刘萍;李健;李吉涛;马朋;高保全因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
保幼激素和胰岛素激活Met-及ERK-信号通路调控飞蝗卵黄蛋白原表达的分子机制
单位代码10475学号************分类号Q96保幼激素和胰岛素激活Met-及ERK-信号通路调控飞蝗卵黄蛋白原表达的分子机制学科、专业：动物学研究方向：昆虫生殖调控机制申请学位类别：理学硕士***：**指导教师：周树堂教授二〇一八年六月Juvenile Hormone and Insulin Activate Met-and ERK- Signaling Pathways to Regulate Vg Expression in Locusta migratoriaA Dissertation Submitted tothe Graduate School of Henan Universityin Partial Fulfillment of the Requirementsfor the Degree of Master of ScienceByDong LiAdvisor: Prof. Shutang ZhouJune, 2018摘要飞蝗（Locusta migrataria，Lm）是一种重要的农业害虫，主要以禾本科植物为食，具有繁殖力强、型变、迁飞等特点，能给农业带来重大灾害。
飞蝗属于不完全变态昆虫，其卵巢属于无滋式，飞蝗卵细胞成熟所需要的卵黄原蛋白（vitellogenin，Vg）由脂肪体合成后分泌到血淋巴，最后由卵母细胞通过胞吞摄入。
在许多昆虫中，卵黄蛋白原的表达主要是受到体内保幼激素（juvenile hormone，JH）调控。
目前主流观点认为，JH一方面能够通过其受体Methoprene-tolerant（Met）介导的直接转录调控途径调控昆虫卵黄蛋白原表达；另一方面，JH通过其受体Met触发其它转录因子表达，继而间接调控Vg表达。
除此之外，越来越多的证据表明，在昆虫卵黄发生阶段，体内胰岛素样多肽（insulin-like peptide, ILP）信号通路能够参与到Vg表达调控过程中。
植物基因启动子的克隆及其功能研究进展
植物遗传资源学报2008,9(3):3852391Journal of Plant Genetic Res ources植物基因启动子的克隆及其功能研究进展聂丽娜1,2,夏兰琴1,徐兆师1,高东尧1,李 琳1,2,于 卓2,陈 明1,李连城1,马有志1(1中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程/农业部作物遗传育种重点开放实验室,北京 100081;2内蒙古农业大学农学院,呼和浩特 010019) 摘要:启动子在植物基因表达调控过程中起着重要作用。
对于植物基因启动子的克隆及其功能研究有助于了解信号传递途径和基因表达调控模式,为植物转基因工程研究提供理论依据。
本文综述了植物基因启动子的基本结构、类型、克隆方法及功能研究进展,着重介绍了广泛应用于转基因工程的诱导型启动子及启动子功能分析,展望了今后植物启动子的研究方向。
关键词:植物基因启动子;诱导型启动子;克隆;功能分析Progress on Clon i n g and Functi onal Study of Pl ant Gene Pro motersN I E L i 2na 1,2,X IA Lan 2qin 1,XU Zhao 2shi 1,G AO Dong 2yao 1,L IL in1,2,Y U Zhuo 2,CHE N M ing 1,L IL ian 2cheng 1,MA You 2zhi1(1N ational Key Facility for C rop Gene Resources and Genetic I m prove m ent/Key L aboratory of C rop Genetics and B reeding,M inistry of A griculture /Institute of C rop Sciences,Chinese A cade m y of A gricultural Sciences,B eijing 100081;2College of A grono m y,InnerM ongolia A gricultural U niversity,Huhhot 010019) Abstract:Pr omoters p lay an i m portant r ole in the p r ocess of p lant gene exp ressi on and regulati on .The studyon the p r o moter cl oning and its functi onal investigati on contributes t o understand the signal transducti on pathways and gene exp ressi on regulati on model,and offers theoretical basis f or transgenic engineering .This paper revie ws the basic structure,types,cl oning methods and the functi on of p lant gene p r omoters,es pecially inducible p r omoters and their functi on analysis app lied widely t o transgenic engineering .I n the end,this paper deals with the future re 2search and devel opment p r os pects of p lant p r omoters .Key words:Plant gene p r o moter;I nducible p r omoter;Cl oning;Functi on analysis收稿日期:2008204220 修回日期:2008206216基金项目:国家高技术研究发展计划(“863”计划)项目(2006AA10Z115,2007AA10Z130);国家自然科学基金项目(30700504)作者简介:聂丽娜,硕士,研究方向为分子生物学通讯作者:徐兆师,助理研究员,博士,研究方向为分子生物学。
斜纹夜蛾两个天蚕素D基因的克隆及序列分析
斜纹夜蛾两个天蚕素D基因的克隆及序列分析陈维春;宋杰;庞义【期刊名称】《昆虫学报》【年(卷),期】2007(50)7【摘要】天蚕素是昆虫抵御病菌入侵的一类抗菌肽家族.根据斜纹夜蛾Spodoptera litura天蚕素B基因设计特异引物,通过PCR扩增得到2个新的天蚕素基因部分序列,分别命名为cecD1和cecD2(GenBank登录号分别为EF555567和EF555568).2个基因编码同一个天蚕素D蛋白,该蛋白的成熟肽与天蚕素B存在2个氨基酸残基差异.序列分析发现cecD1和cecD2中分别包含568 bp和377 bp的内含子序列,它们有相同的5'和3'拼接位点,A+T含量分别为59.7%和69.8%,符合大多数真核生物内含子高A+T含量的特征.【总页数】5页(P745-749)【作者】陈维春;宋杰;庞义【作者单位】中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,昆虫学研究所,广州,510275;广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东湛江,524023;广东医学院寄生虫学教研室,广东湛江,524023;中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,昆虫学研究所,广州,510275【正文语种】中文【中图分类】Q966【相关文献】1.斜纹夜蛾普通气味结合蛋白基因SlitGOBP1的克隆及序列分析 [J], 钟国华;李苗孟;胡美英;罗倩;马金亮2.荔枝果实两个膨大素基因的克隆与序列分析 [J], 陆旺金;蒋跃明3.家蝇幼虫天蚕素基因的克隆与序列分析 [J], 王宪文;刘国辉;王丽荣;梁美兰4.两个菜花烙铁头蛇毒金属蛋白酶去整合素基因的克隆与序列分析(英文) [J], 陈润强;金扬;周兴丁;吕秋敏;王婉瑜;熊郁良5.斜纹夜蛾乙酰胆碱酯酶基因cDNA片段的克隆和序列分析 [J], 陈亮;李兵;浦冠勤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
草地螟触角普通气味结合蛋白基因的克隆及序列分析
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乌苏里蝮蛇丝氨酸蛋白酶基因克隆和序列分析
乌苏里蝮蛇丝氨酸蛋白酶基因克隆和序列分析孙德军;刘珊珊;杨春伟;赵轶卓;常淑芳;颜炜群【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2005(031)003【摘要】目的:构建乌苏里蝮蛇(Gloydius ussuriensis)毒腺cDNA文库,克隆、分析丝氨酸蛋白酶基因,为进一步基因研究和操作奠定基础.方法:采用链转化法和长距离PCR技术,构建乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库.用TRIzol试剂盒从乌苏里蝮蛇毒腺提取总RNA,再用Oligo(dT)-生物素-链菌素-磁珠法从总RNA中分离mRNA,反转录合成cDNA第一链,长距离PCR合成第二链cDNA.回收cDNA,用限制性内切酶消化产生粘性末端,层析去除小于500 bp片段,纯化的cDNA插入载体pBluescript-sk,电转化E.coli DH5α,得到乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库,测定丝氨酸蛋白酶上游氨基酸序列,并推导其基因序列,合成引物.从该cDNA文库克隆丝氨酸蛋白酶基因,并进行序列测定和分析.结果:该文库库容为2.3×106,该cDNA文库为筛选新的目的基因和进一步基因操作提供了有效平台.序列测定和分析显示丝氨酸蛋白酶基因开框读码序列全长702个核苷酸,编码234个氨基酸,活性中心His41、Asp86、Ser180和6对二硫键进化上高度保守.结论:该文库库容大于通用的105标准,符合规定可作为进一步基因操作平台,克隆的丝氨酸蛋白酶基因与GeneBank 中其他蛇毒丝氨酸蛋白酶氨基酸序列同源性在85%以上.【总页数】5页(P325-329)【作者】孙德军;刘珊珊;杨春伟;赵轶卓;常淑芳;颜炜群【作者单位】吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室,吉林,长春,130021;吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室,吉林,长春,130021;吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室,吉林,长春,130021;吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室,吉林,长春,130021;吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室,吉林,长春,130021;吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室,吉林,长春,130021【正文语种】中文【中图分类】Q785【相关文献】1.中黑盲蝽丝氨酸蛋白酶基因克隆与序列分析 [J], 刘巧英;李梦歌;刘雪飞;余昊;王运兵2.长白山白眉蝮蛇乌苏里亚种类凝血酶(TLE)基因克隆及分析 [J], 薛雁;孙东;于翀;宁静;崔亮亮;石皎3.中国长白山乌苏里蝮蛇降纤酶基因克隆和结构分析 [J], 孙德军;闫琪;杨春伟;杨同书;颜伟群;侯立中4.中国长白山乌苏里蝮蛇金属蛋白酶/解整合蛋白Ussurin基因克隆和序列分析 [J], 孙德军;谷红东;杨春伟;胡春光;杨同书;颜炜群5.嗜水气单胞菌J-1株丝氨酸蛋白酶基因克隆与序列分析 [J], 储卫华;陆承平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。