STK15的表达对NIH3T3细胞的影响
干扰素-γ对乳腺癌细胞HLA-Ⅰ分子表达的影响
干扰素-γ对乳腺癌细胞HLA-Ⅰ分子表达的影响Abstract：Objective To investigate the effect of interferon-γ （IFN-γ）on the expression of HLA class Ⅰ molecules on breast cancer cells and to explore its immune mechanism in the treatment of breast cancer. Methods Breast cancer SKBR3 cell line was cultured and divided into 25U/ml，50 U/ml and 100 U/ml groups according to IFN-γ concentration. The untreated group was a blank control group. Real-time quantitative PCR and flow cytometry were used to detect the content of HLA-Ⅰ mRNA and the expression of HLA-Ⅰ antigen on the surface of breast cancer SKBR3 cells treated with different concentrations of IFN-γ. Results Thereal-time PCR results showed that the expression levels of HLA-Ⅰ mRNA in the blank control group，25 U/ml，50 U/ml and 100 U/ml were （1.00±0.00），（2.26±0.54），（3.89±0.81），（5.94±0.97），the three concentration groups were higher than the blank control group（P0.05）; the flow cytometry results showed that the blank control group，25 U/ml，50 U/ml The expression of HLA-Ⅰ protein in the cell surface of the 100 U/ml group was （14.87±2.80），（44.33±3.36），（48.80±2.63），（56.77±1.93），and the three concentration groups were higher than the control group （P0.05）. Conclusion IFN-γ up-regulates the expression of HLA-Ⅰ antigen in breast cancer cells，whichis beneficial to the anti-breast cancer.Key words：Interferon-γ;Breast cancer;HLA;Immunotherapy乳腺癌（Breast cancer）是目前世界上第2大常見的恶性肿瘤，位居女性恶性肿瘤第1位。
睾酮通过抑制Rab13表达影响支持细胞屏障通透性
睾酮通过抑制Rab13表达影响支持细胞屏障通透性摘要：探讨Rah13 GTPase对血睾屏障（blood testis barrier，BTB）通透性的调节机制。
体外分离培养20d龄大鼠睾丸支持细胞，睾酮处理后测定跨上皮电阻（transepiihelial electrical resistance，TER），FITC-鬼笔环肽染色分析F-actin 分布，并采用Western印迹检测Rad13在睾酮处理前后的表达变化；siRNA干扰培养支持细胞中Rab13的表达。
Western印迹检测沉默效果并检测连接蛋白表达变化；TER测定Rab13沉默前后上皮屏障功能改变，F-actin染色分析Rah13沉默对肌动蛋白丝分布的影响。
结果显示，睾酮处理可使体外支持细胞屏障TER 值升高.F-actin在膜下聚集增强，且Rab13在睾酮处理后表达量明显降低；Rab13 siRNA处理不影响连接蛋白质的表达，但可引起F-actin在细胞连接处的分布增强，导致体外BTB屏障功能增强。
表明Rab13可通过调节F-actin的排布影响体外BTB通透性。
关键词：血睾屏障：支持细胞：Rabl3：肌动蛋白丝血睾屏障（blood-testis barrier，BTB）是睾丸中血管和曲细精管之间的物理屏障，是由曲细精管支持细胞（Sertoli cell）、血管内皮基膜、结缔组织和曲细精管基膜组成的屏障结构。
其中，支持细胞间的各种细胞连接，如紧密连接、缝隙连接和特化的黏着连接等，是构成BTB的主要结构基础，创造了相对稳定的生精内环境，既为精原细胞的发育提供营养，又阻止细胞毒性物质进入管腔，防止精子与免疫系统接触。
构成BTB的各种细胞连接具有特征性的微丝束分布，这些肌动蛋白丝（F-actin）垂直于生精上皮内两相邻的支持细胞膜，使BTB的细胞连接较其他各种生理屏障具有更强的粘附力。
在生精细胞穿越生精上皮的过程及精子释放入生精小管腔过程中，紧密连接复合体必须不断地解聚和重新绀装，这就需要相关的连接蛋白快速地在细胞膜进行内吞和再循环。
血清胸苷激酶1在乳腺肿瘤中的表达及其临床意义
《中国癌症杂志》2014年第24卷第1期CHINA ONCOLOGY 2014 Vol.24 No.141血清胸苷激酶1在乳腺肿瘤中的表达及其临床意义任若冰 许頳 李亚芬 金冶宁 何建蓉上海交通大学医学院附属瑞金医院乳腺疾病诊治中心，上海 200025 ［摘要］ 背景与目的：胸苷激酶1(thymidine kinase 1，TK1)在细胞分裂期的细胞质中表达，是将脱氧胸苷转换为胸苷酸的催化酶，是嘧啶补救途径的关键酶。
本研究探讨TK1在乳腺肿瘤患者血清中的表达及其临床意义。
方法：收集上海交通大学医学院附属瑞金医院乳腺疾病诊治中心145例乳腺癌患者(乳腺癌组)，55例乳腺纤维腺瘤患者(乳腺纤维腺瘤组)，采用化学发光斑点杂交法检测两组患者的血清TK1水平，并分析血清TK1水平与各个临床病理特征的关系。
结果：乳腺癌组血清TK1水平为(2.749±0.122)pmol/L，乳腺纤维腺瘤组为(1.319±0.126)pmol/L，差异有统计学意义(P<0.000 1)。
在乳腺癌患者中，淋巴结晚期(P=0.049)、有远处转移(P=0.003 1)、TNM分期晚期(P=0.01)的血清TK1水平明显升高。
乳腺超声(P<0.001)，乳腺磁共振(P=0.005)，乳腺钼靶(P=0.032)BI-RADS分类为恶性(4C-6)的患者的TK1水平高于良性(0-4B)患者。
雌激素受体高表达的乳腺癌患者的TK1水平高于低表达的患者(P=0.034)。
在不同的年龄、分化程度、肿块大小及其他激素受体情况差异无统计学意义(P>0.05)。
随访2年后未发现TK1水平与无进展生存期的相关性，差异无统计学意义(P=0.7061)。
结论：血清TK1在乳腺癌的早期诊断，预测预后有重要价值，并可能成为新的分子靶向治疗的基础。
［关键词］ 血清TK1；乳腺肿瘤；发光印迹法；肿瘤标志物；诊断 DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2014.01.007 中图分类号：R737.9 文献标志码：A 文章编号：1007-3639(2014)01-0041-05Expression of serum TK1 in human breast tumor and its clinical significance REN Ruo-bing, XU Cheng, LI Ya-fen, JIN Ye-ning, HE Jian-rong (Comprehensive Breast Health Center, Rui Jin Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 200025, China)Correspondence to: HE Jian-rong E-mail: hejrong@ ［Abstract］ Background and purpose: The position of thymidine kinase 1 (TK1) expression during cell division is in the cytoplasm. It is a catalytic enzyme to convert deoxythymidine into thymidylate. It is the key enzyme of pyrimidine salvage pathway. The aim of this study was to analyze the serum expression level of TK1 in patients with breast cancer, and explore the application of serum TK1 test in clinical assessments of diagnosis, treatment and prognosis for breast cancer.Methods: Patient data were collected from the patients admitted in Comprehensive Breast Health Center at Rui Jin Hospital. Chemiluminesence dot blot assay was used to detect serum TK1 levels in 145 breast cancer patients and 55 patients with breast fibroadenoma. The correlations of serum TK1 levels with breast tumor biological behavior was further studied. Results: Serum TK1 expression levels was significantly increased in breast cancer patients [(2.749±0.122)pmol/L] when compared to breast fibroadenoma patients[(1.319±0.126)pmol/ L, P<0.000 1]. Serum TK1 levels were statistically increased in patients with lymph node metastasis (P=0.049), distal metastasis (P=0.003 1), and late TNM stages (P=0.01). No serum TK1 level differences were found in patients with different ages (P>0.05), different tumor grades (P=0.453) and different tumor size (P=0.908). Preoperative imaging results including breast ultrasound, breast mammography and breast magnetic resonance were analyzed by assessments of BI-RADS category, and serum TK1 levels in patients with different BI-RADS categories were studied. Serum TK1 levels in patients with breast ultrasound BI-RADS categories 4C-6 were significantly higher than those with category 0-4B (P<0.001). Consistently, the serum TK1 levels in patients with MR BI-RADS categories 4C-6 were higher than通信作者：何建蓉 E-mail:hejrong@42任若冰，等. 血清胸苷激酶1在乳腺肿瘤中的表达及其临床意义 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一［1］。
血清胸腺嘧啶脱氧核苷激酶1在结直肠癌中的表达及其临床意义
血清胸腺嘧啶脱氧核苷激酶1在结直肠癌中的表达及其临床意义血清胸腺嘧啶脱氧核苷激酶1（sTK1）是一种催化DNA合成的酶，其在白血病、淋巴瘤和乳腺癌等多种肿瘤中都有表达。
近年来，越来越多的研究发现，sTK1在结直肠癌中也具有高表达，且其表达水平与肿瘤的进展和预后密切相关。
sTK1的高表达与结直肠癌的发展有密切关系。
早期研究发现，肿瘤细胞增殖的速率越快，其sTK1的表达也越高。
此外，sTK1的表达量也与结直肠癌的临床病理特征有关。
一项研究发现，sTK1在结直肠癌患者的肿瘤组织中表达较高，且与肿瘤的分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关。
另外，sTK1在结直肠癌的转移和复发中也起到了重要的作用。
一项最近的研究发现，sTK1表达量高的结直肠癌患者，其复发和转移的风险也更高。
sTK1的高表达与结直肠癌的预后有关。
一项针对结直肠癌患者的研究发现，sTK1的表达量越高，患者的生存期也越短。
这与其他癌症中sTK1的作用类似，其作为细胞增殖的重要调节因子，不仅能促进肿瘤细胞的增殖和侵袭，同时也能减弱肿瘤细胞的免疫识别能力。
因此，sTK1在结直肠癌中的高表达不仅可以作为一种肿瘤标志物来进行诊断和监测，同时也可以作为一种预后因子来评估患者的预后情况。
此外，针对sTK1的抑制剂可能成为一种新的治疗手段，具有较高的临床应用价值。
综上所述，sTK1在结直肠癌中的表达与肿瘤的发展、转移和预后密切相关，其作为肿瘤标志物和预后因子具有重要的临床意义。
但是，目前有关sTK1在结直肠癌中的研究还较少，有待进一步深入研究其生物学机制及其在结直肠癌的治疗中的应用。
血清胸苷激酶1在中老年人肿瘤免疫监测中的作用
血清胸苷激酶1在中老年人肿瘤免疫监测中的作用血清胸苷激酶1（serum thymidine kinase 1, STK1）是一种脱氧胸腺嘧啶核苷酸酶，它在细胞增殖时起着重要作用。
STK1的水平与肿瘤细胞增殖活性、预后和治疗反应密切相关，因此其在肿瘤诊断和治疗监测中有广泛的应用。
本文主要探讨STK1在中老年人肿瘤免疫监测中的作用。
随着人口老龄化的加剧，中老年人肿瘤发病率逐渐增加，成为一个全球性问题。
肿瘤免疫治疗研究表明，检测免疫治疗前、后的STK1水平与治疗反应密切相关。
免疫治疗通常采用免疫检查点抑制剂（PD1、PD-L1、CTLA-4等）及其联合治疗（如CDK4/6抑制剂、HER2受体拮抗剂等）。
STK1在中老年人肿瘤免疫监测中的作用主要有以下几个方面：1.预测免疫治疗反应：免疫治疗后，STK1水平的变化可以较好地反映患者的治疗反应。
一些研究表明，在PD1抑制剂治疗中，治疗前STK1水平高的患者乐于PD1治疗的反应也更好。
因此，检测STK1水平有助于预测免疫治疗的反应。
2.反映肿瘤进展情况： STK1高水平与肿瘤进展有很大关系，因此对于治疗后STK水平仍高的患者，应及时调整治疗方案。
一些研究也发现，STK1差异较大的患者，其之后的预后也有所不同。
如果STK1水平在治疗后持续上升，将预示肿瘤恶化和患者预后不佳。
因此，定期检测STK1水平有助于监测肿瘤的进展情况。
3.诱导免疫耐受性： STK1还被认为是一种辅助性因子，可能有助于诱导免疫耐受性。
一些研究表明，STK1对T细胞的调节具有重要作用，其低水平可能导致T细胞异常，增加肿瘤的免疫逃逸。
因此，研究STK1的免疫调节作用，可能有助于开发更有效的免疫治疗策略。
综上所述，STK1作为一个新型的肿瘤标志物，已经在中老年人肿瘤免疫监测中展现了重要的作用，可以作为预测免疫治疗反应、反映肿瘤进展情况和诱导免疫耐受性等方面的一个有效指标。
未来，随着STK1的研究持续深入，其在肿瘤诊断和治疗中的应用将会更加广泛。
IL-15对人γδT细胞杀伤结核杆菌感染THP-1细胞的影响
Ｃｈｉ ｓ ｏｕ ｎａ ｆ Ｚｏ ｎ ｅ ｎｅ ｅ Ｊ ｒ ｌｏ ｏ ｏｓ ｓ
中 国 人 兽 共 患 病 学 报
２ Ｏ， ２６ （ ０） ０１ １
文 章 编 号 ：０２ ６ ４ ２ １ ）０ ９ ６ ５ １ ０ —２ ９ （ ０ ０ １ —０ ２ —０
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目（ ＢＹ０ １ ） ９ ８ ）
通讯 作 者 ： 李柏 青 ， ｍａｌｂ ｉ ｎ ｌ ｂ ｍｃ ｅｕ ｃ Ｅ ｉ ａｑ ｇｉ ｂ ．ｄ ．ｎ ： ｉ ＠ 作 者 单 位 ：． 埠 医 学 院免 疫 学 教 研 室 ， １蚌 蚌埠 ２ ３ ３ ； ３ ０ ０ ２ 安徽 省感 染 与免 疫 重 点 实 验 室 ， 埠 ２３ ３ ； ． 蚌 ３ ０ ０ ３ 蚌 埠 医学 院 病 原 生 物 学教 研 室 ， 埠 ２３ ３ ； ． 蚌 ３０ ０ ４ 蚌埠 医 学 院病 理 生 理 学 教 研 室 ， ． 蚌埠 ２ ３ ３ ３ ００
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大鼠星形胶质细胞组织因子活性的表达及其调控
生理学报,1999年6月,51(3),291～296 291 Acta Physiologica Sinica大鼠星形胶质细胞组织因子活性的表达及其调控3朱发明33 文志斌 何晓凡 李俊成 贺石林(湖南医科大学生理教研室,长沙410078)摘 要 本实验观察了基础培养条件和凝血酶刺激条件下,大鼠星形胶质细胞组织因子活性的表达及其信号传递途径。
结果显示,基础条件下,A23187(42brom o calcium ionophore)和佛波醇脂(phorbol122myristate132acetate,P M A)能明显提高星形胶质细胞组织因子活性的表达,而三氟吡啦嗪(trifluoperazine,TFP)和12(52异喹啉磺胺)232甲基哌嗪[12(52is oquinolinyl sulfonyl)232methyl2piperazine,H7]则降低星形胶质细胞组织因子活性的表达。
凝血酶能明显增加星形胶质细胞表达组织因子活性;当凝血酶与TFP或H7联合应用时,凝血酶的刺激作用受到明显抑制。
实验表明,星形胶质细胞在基础培养条件下能表达组织因子,凝血酶能刺激它表达组织因子活性。
Ca2+/钙调素和PK C途径参与了在基础条件以及凝血酶刺激条件下星形胶质细胞组织因子活性的表达。
关键词:星形胶质细胞;组织因子;蛋白激酶C;钙调素;凝血酶学科分类号:Q461;R33111 近几年的研究表明,组织因子途径是生理性止血中凝血过程与病理条件下血栓形成的启动环节[1,2]。
组织因子(tissue factor,TF)作为因子Ⅶa的受体在组织因子途径中起关键性作用。
它广泛分布于脑、肺等组织。
血管内皮下的成纤维细胞、平滑肌细胞以及血管外的各种组织细胞都程度不同地表达组织因子,尤其在血管周围组织因子分布比较丰富,这对血液循环系统的完整性起着保护套的作用。
早已知道,脑组织富含组织因子,但长期来对它的来源并未确定。
新近发现星形胶质细胞(astrocyte,AS)是脑组织中TF的主要来源,并已达成广泛的共识[3,4]。
阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白刺激下脂肪细胞分泌功能的影响
阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白刺激下脂肪细胞分泌功能的影响谢湘竹;赵水平;于碧莲;钟巧青【摘要】目的观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)刺激下3T3-L1脂肪细胞分泌功能的影响,并探讨其作用机制.方法 3T3-L1脂肪细胞促分化成熟后,oxLDL刺激脂肪细胞,给予不同浓度的阿托伐他汀干预,收集细胞,测定脂肪细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度、TNF-α和PPAR-γ mRNA表达水平及核因子-κB(NF-κB)活性.结果 oxLDL刺激使3T3-L1脂肪细胞分泌TNF-α、TNF-α mRNA表达水平明显增高.阿托伐他汀呈浓度依赖性抑制oxLDL刺激下TNF-α分泌、TNF-α mRNA表达和NF-κB活化,并增强PPAR-γ mRNA表达.1.0及10.0μM阿托伐他汀干预组TNF-α水平、TNF-α mRNA表达低于oxLDL刺激组(P＜0 05),10.0 μM阿托伐他汀干预组PPAR-γ mRNA表达高于oxLDL组,NF-κB活性低于oxLDL刺激组(P＜0 05);TNF-α水平、TNF-α mRNA表达、NF-κB活性和PPAR-γ mRNA表达10.0和0.1 μM阿托伐他汀干预组比较差异均有统计学意义(P＜0 05).结论阿托伐他汀能抑制oxLDL刺激下3T3-L1脂肪细胞TNF-α分泌、TNF-α mRNA表达和NF-κB活性,增强PPAR-γ mRNA表达,PPAR-γ与NF-κB可能介导了他汀类药物对脂肪细胞炎性过程的调节.【期刊名称】《解放军医药杂志》【年(卷),期】2012(024)005【总页数】4页(P4-7)【关键词】脂细胞;脂蛋白类;LDL;阿托伐他汀;肿瘤坏死因子α;核因子-κB;过氧化物酶体增殖物激活受体【作者】谢湘竹;赵水平;于碧莲;钟巧青【作者单位】100853,北京,解放军总医院南楼心血管一科;410011,长沙,中南大学湘雅二医院心内科;410011,长沙,中南大学湘雅二医院心内科;410011,长沙,中南大学湘雅二医院心内科【正文语种】中文【中图分类】R972.6;R977.6目前认为，炎性反应参与了动脉粥样硬化的发生发展过程［1］。
乙酰化stat3位点
乙酰化stat3位点乙酰化是指加入乙酰基（-COCH3）到分子中的化学反应。
在细胞内，乙酰化作用在调控基因表达、细胞分化和发育、代谢调节等方面起着重要作用。
本文将重点探讨乙酰化在stat3位点上的作用。
Stat3（Signal Transducer and Activator of Transcription 3）是一种转录因子，能够调控多种细胞进程，包括细胞增殖、分化和存活。
在正常情况下，Stat3的活性是通过磷酸化修饰而得到调节的。
然而，乙酰化修饰也被发现在Stat3上起到重要的调控作用。
乙酰化修饰通常发生在Stat3的C端区域，特别是在其转录激活结构域中的一个保守的位点，即Lys685。
这种修饰可以通过乙酰转移酶（Histone Acetyltransferase，HAT）进行催化。
乙酰化修饰可以改变Stat3的活性和稳定性，从而影响其下游基因的表达。
乙酰化修饰使Stat3转录因子能够更紧密地结合到DNA序列上，从而增加其转录活性。
此外，乙酰化还可以增强Stat3与其他转录因子或共激活因子的相互作用，进一步增强其转录活性。
因此，乙酰化修饰在Stat3介导的信号转导途径中起着重要的调控作用。
除了影响Stat3的转录活性，乙酰化修饰还可以影响其下游基因的表达模式。
一些研究表明，乙酰化修饰可以改变Stat3靶基因的选择性表达。
具体来说，乙酰化修饰可以促进Stat3与某些共激活因子的相互作用，从而选择性地调控特定基因的表达。
乙酰化修饰对Stat3的稳定性也有影响。
研究发现，乙酰化修饰可以降解Stat3蛋白，从而减少其在细胞内的稳定性。
这可能是通过乙酰化修饰增加Stat3的泛素化和降解来实现的。
因此，乙酰化修饰不仅可以通过增加Stat3的转录活性来调控其功能，还可以通过影响其稳定性来进一步调控。
除了上述作用外，乙酰化修饰还可以影响Stat3与其他信号通路的相互作用。
乙酰化修饰可以增强Stat3与其他转录因子、激酶或受体的相互作用，从而进一步调节Stat3介导的信号转导途径。
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２０１０年２月 第２０卷第２期 中国比较医学杂志
ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１０
Ｖｏｌ＿２Ｏ ＮＯ．２
ＳＴＫ１５的表达对ＮＩＨ３Ｔ３细胞的影响 威 ，于 洋 ，王 维 ，董婉维 ， 秦 英 ，郑志红
（１．中国医科大学实验动物部，沈阳 １１０００ｌ；２．沈阳市公安医院，沈阳 １１０００１） 【摘要】 目的构建ｐｃＤＮＡ３．１一ＳＴＫ１５表达质粒，探讨ＳＴＫ１５基因对小鼠成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３）的影响。方 法 构建ｐｃＤＮＡ３．１．ＳＴＫ１５质粒，将其转染ＮＩＨ３Ｔ３，应用ＲＴ．ＰＣＲ、免疫细胞化学和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法检测ＳＴＫ１５ 的表达；ＭＴＴ法检测细胞增殖能力；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ检测细胞侵袭能力。结果 转染ｐｃＤＮＡ３．１－ＳＴＫ１５质粒的ＮＩＨ３Ｔ３ 细胞在４８ ｈ有ＳＴＫ１５的表达，而且该细胞的增殖速度和穿透Ｍａｔｒｉｇｅｌ胶的细胞数均明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。 结论ＳＴＫ１５基因具有增加细胞增殖和细胞侵袭力的功能，进而形成肿瘤。 【关键词】ＳＴＫ１５；细胞转染ＮＩＨ３Ｔ３ 【中图分类号】Ｒ一３３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７１—７８５６（２０１０）０２－００１７．０４
Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＳＴＫ １ ５ Ｇｅｎｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＩＨ３ Ｔ３ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ
ＺＨＵ Ｙａｎ 一，ＷＡＮＧ Ｌｕ—ｚｅｎｇ ，ＹＡＮＧ Ｗｅｉ。，ＹＵ Ｙａｎｇ ，ＷＡＮＧ Ｗｅｉ’，
ＤＯＮＧ Ｗａｎ．Ｗｅｉ ，ＷＡＮＧ Ｙｉｎｇ ，ＱＩＮ Ｙｉｎｇ ，ＺＨＥＮＧ Ｚｈｉ—ｈｏｎｇ
（１．Ｃｈｉｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，２．Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｐｏｌｉｃｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０００１，Ｃｈｉｎａ）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＳＴＫ１５ ｇｅｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ＮＩＨ３Ｔ３ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｐｃＤＮＡ３．１一ＳＴＫ１５ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄ ｉｎｔｏ ＮＩＨ３Ｔ３ ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＳＴＫ１５ ｇｅｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ＮＩＨ３Ｔ３ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ，ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ＭＴＴ．Ｔｈｅ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ Ｔｒａｎｓｗｅｌ１．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＳＴＫ１５ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｐｃＤＮＡ３．１一ＳＴＫ１５ ｐｌａｓｍｉｄ—ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ＮＩＨ３Ｔ３ ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ ＭＴＴ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｃＤＮＡ３．１一ＳＴＫ１５ ｐｌａｓｍｉｄ—ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ＮＩＨ３Ｔ３ ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎｖａｄｉｎｇ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｍａｔｒｉｇｅｌ ｆｉｌｔｅｒ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ｐｃＤＮＡ３．１ ｖｅｃｔｏｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＳＴＫ１５ ｇｅｎｅ ｃａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆ ＮＩＨ３Ｔ３ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｉｔ ｍａｙ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ＳＴＫ１５ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍａｙ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 ＳＴＫ１５；Ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｆｅｅｔｉｏｎ；ＮＩＨ３Ｔ３ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ
ＳＴＫ１５基因是丝／苏氨酸激酶家族成员之一…。 ＳＴＫ１５基因是一种与中心体结构及功能紧密相关的 基因，并具有高水平的酪蛋白激酶活性 。ＳＴＫ１５ ［基金项目】辽宁省科技计划项目（编号：２００６４０８００２．３）。 ［作者简介］朱焱（１９７９一），女，硕士，主要研究方向：遗传检测。 ［通讯作者］郑志红，教授，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｉｈｏｎｇｚｈｅｎｇ＠１６３．ｃｏｍ。 基因的扩增和过表达使中心体异常扩增，从而导致 染色体的异常分配及不稳定，最终癌基因激活，导 致肿瘤产生 ，所以ＳＴＫ１５的过表达与肿瘤的发生
杨瑛 增汪 禄 壬 ２ 焱 朱 １８ 中国比较医学杂志２０１０年２月第２０卷第２期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ，Ｆｅｈｍａｒｙ ２０１０，Ｖｏ１．２０．Ｎｏ．２
存在一定的联系。本实验构建了ｐｃＤＮＡ３．１．ＳＴＫ１５ 质粒，并将其瞬时转染ＮＩＨ３￣，观察ＳＴＫ１５高表达 对ＮＩＨ３￣细胞的影响，以进一步阐明ＳＴＫ１５基因 在肿瘤发生发展中的作用。
１材料和方法 １．１实验材料 脂质体转染试剂、ＤＭＥＭ培养基、ＴＲＩＺＯＬ均购 自Ｉｎｖｉｔｒｏ￣ｎ。反转录试剂盒、回收试剂盒均购自 Ｑｉａｇｅｎ。限制性内切酶、ＴａｑＥ、ｄＮＴＰ、连接试剂盒、 小量质粒提取试剂盒均购自ＴａＫａＲａ。小牛血清购 自天津灏洋。兔抗人ＳＴＫ１５多克隆抗体购自ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｅ。ＨＲＰ标记的山羊抗兔的二抗购白中山公 司。Ｓ－Ｐ试剂盒购自福州迈新生物技术公司。ＭＴＴ 购自华美公司。重组人基底膜购自ＢＤ公司。 １．２实验方法 １．２．１构建质粒ｐｃＤＮＡ３．１一ＳＴＫ１５：提取人胚肺细 胞总ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增ＳＴＫ１５ｃＤＮＡ全长，克 隆到ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔ载体，测序。ＢａｍＨ１和 口，双酶切 ｐｃＤＮＡ３．１和Ｔ－ＳＴＫ１５连接产物，回收、连接、转化、 鉴定，构建ｐｃＤＮＡ３．１－ＳＴＫ１５质粒。 １．２．２细胞转染：将对数生长期细胞（ＰｅＤＮＡ３．１、 ＰｅＤＮＡ３．１一ＳＴＫ１５转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞）接种于６孔 板，转染后培养４８ ｈ。 １．２．３ ＲＴ—ＰＣＲ：提取细胞ＲＮＡ，ＲＴ—ＰＣＲ试剂 盒检测ＳＴＫ１５的表达，扩增片段的长度 为４９８ ｂｐ。 １．２．４ Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析：ＰＢＳ洗２次，裂解液冰上 孵育３０ ｒａｉｎ，１２ ０００ ｒ／ｒａｉｎ，４℃离心３０ ｒａｉｎ，上清液 即细胞蛋白。然后加样、电泳、转膜、封闭，加入 １：５００的兔抗人的ＳＴＫ１５多克隆抗体，室温震荡２ ｈ，洗膜３次，加入１：２ ０００的山羊抗兔的二抗，室温 震荡１ ｈ，洗膜３次，显色。 １．２．５免疫细胞化学：将转染后的细胞传代于有载 玻片的六孔板中，次日取出玻片，固定３０ ｒａｉｎ。加过 氧化物酶阻断液，室温下孵育１０ ｒａｉｎ，ＰＢＳ洗３次。 封闭，室温下孵育１０ ｒａｉｎ，甩去血清。加一抗（兔抗 人ＳＴＫ１５抗体１：５００稀释）４℃、过夜，ＰＢＳ洗３次。 加生物素标记的第二抗体，室温下孵育１０ ｒａｉｎ，ＰＢＳ 洗３次。加链霉素一过氧化物酶溶液（Ｄ），室温下 孵育１０ ｒａｉｎ，ＰＢＳ洗３次。加ＤＡＢ显色，自来水冲 洗，苏木素复染３０ ｓ，返蓝，５０％甘油封片。 １．２．６ ＭＴＴ方法：每孔３ ０００个细胞（ＮＩＨ３Ｔ３细 胞、ｐｅＤＮＡ３．１转染的ＮＩＨ３￣细胞、ｐｅＤＮＡ３．１一 ＳＴＫ１５转染的ＮＩＨ３￣细胞）接种于９６孔板，在２４、 ４８、７２ ｈ加入ＭＴＴ（终浓度５ ｍｇ／ｍＥ），３７℃、孵育４ ｈ，弃上清，加入ＤＭＳＯ １５０ Ｌ，低速震荡１０ ｒａｉｎ，分 光光度计４９０ ｎｍ读取Ａ值。每组设８个复孔，共重 复３次。 １．２．７ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室法：人工基底膜胶冰浴过夜融 化，用预冷的无血清的ＤＭＥＭ培养液ｌ：５稀释，吸 取１００ Ｌ包被于Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室滤膜上，置５％ ＣＯ：、３７％、培养２４ ｈ。上室接种转染的ＮＩＨ３￣细 胞（约２．５×１０ 个细胞）１００ Ｌ，下室加入１０％ ＦＢＳ的ＤＭＥＭ ６００ Ｌ作为趋化因子，置５％ＣＯ 、 ３７℃、培养２４ ｈ。取出Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室，滤膜用多聚 甲醛固定１５ ｒａｉｎ，苏木素染核，２００倍显微镜下计数 上下左右中５个视野的侵袭细胞数，计算平均值。 上述实验重复３次。 １．２．８统计学方法：计量资料采用（面±ｓ）表示，结 果用ＳＰＳＳ１１．５统计软件处理。组间数据比较采用 配对样本ｔ－ｔｅｓｔ和单因素方差分析。
２结果 Ｚ．１ Ｒ’ｒ－ＰＣＲ 转染后４８ ｈ，ｐｅＤＮＡ３．１一ＳＴＫ１５转染组扩增出 ４９８ ｂｐ目的基因片段，而ｐｃＤＮＡ３．１转染组未能扩 增出片段（图１）。 ２．２ ＳＴＫ１５的蛋白表达 与转染空载体组相比，ＳＴＫ１５转染组在４８ ｈ后 可检测到ＳＴＫ１５蛋白表达的上调。（图２） ２．３免疫细胞化学 蓝色为苏木素染色的细胞核，棕红色为ＤＡＢ标 记的ＳＴＫ１５蛋白表达阳性区，表明ＳＴＫＩ５质粒转染 组（图３．３）大部分ＳＴＫ１５蛋白表达阳性，ｐｅＤＮＡ３．１ 转染组（图３．２）和普通ＮＩＨ３￣细胞（３．１）中，没有 ＳＴＫ１５蛋白表达（图３见彩插２）。 ２．４ ＭＴＴ检测 转染ＳＴＫ１５质粒的ＮＩＨ３Ｔ３细胞的生长增殖在 ４８、７２ ｈ显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。（图４） ２．５ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ结果 用平均穿膜细胞数标化成相对数后进行统计作图 （图５）。ｓＴＫ１５转染组的细胞穿膜细胞数为２５８．４５± ４．９５，而ＮＩＨ３￣细胞和ｐｅＤＮＡ３．１转染组的细胞分别 为２０．５０士４．６５和２１．００±５．５６，，差异均有统计学意 义（ｔ分别＝２７６．０ｏ、３８．４７，Ｐ＜ｏ．ｏ５）。