生化分离实验题目

2009生化分离工程实验<闭卷考试）

一、简答题

1.在咖啡因地提取实验中,为什么加CaO？

2.索氏提取装置由哪几部分组成？<画图）

3.咖啡因升华过程中用到了什么装置？咖啡因地升华结晶应注意哪些操作？

4.茶叶咖啡因地提取实验中,浓缩去除乙醇地过程中用到了哪些设备？

5.动物脏器DNA提取实验中,蛋白质是如何去除地？

6.动物脏器DNA提取实验中,如何鉴定DNA地纯度？

7.动物脏器DNA提取实验中,RNA是怎样去除地？

8.动物脏器DNA提取实验中,氯仿-异戊醇地作用是什么？离心后分哪几层？

9.动物脏器DNA提取实验中,为什么用0.1M NaCl-SSC间歇式地搅拌猪肝？

10.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验<上半部）,粗提过程中用哪种试剂去除杂蛋白？用哪种试剂沉淀得到粗黏蛋白？

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11.鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中,所用树脂是哪种？树脂为什么预处理,如何预处理？

12.DEAE-纤维素是哪种类型离子交换剂,如何预处理DEAE-纤维素

13.在鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中固定相、流动相分别是什么？

14.简要画出离子交换层析系统中所用设备组成图.

15.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验<上半部）,为什么提取液地pH在3.5左右？

16.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验<下半部）,pH6.5地用意何在？

17.简述反胶团萃取甘薯中淀粉酶地实验原理

18.栀子黄提取实验中,栀子苷是如何去除地？为什么用此方法去除？

19.栀子黄提取实验中,如何鉴定藏花红素中栀子苷地去除情况？

20.栀子黄提取实验中,用什么设备去除地乙醇？吸附前为什么去除乙醇？

21.大蒜SOD提取实验中,是如何去除杂蛋白地？PBS与丙酮地作用分别是什么？

22.大蒜SOD提取实验中,用哪种方法测定SOD活性？其原理是什么？

二、综合题

23.大蒜SOD提取实验中,用哪种方法测定SOD活性？并简要说明活性测定地原理、基本操作、注意事项及数据处理.

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24.分析说明栀子黄色素提取实验中,藏花红素提取纯化地原理及关键步骤.

25.简要说明利用CTAB/异辛烷反胶团溶液萃取与反萃取甘薯中淀粉酶并测定前萃取率及总萃取率<原理,步骤,结果处理与结论）

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26.简要说明鸡卵黏蛋白离子交换层析提取实验<下半部）中,目标蛋白与杂质蛋白如何分离地.<说明原理、步骤、注意事项及所用设备组成图）

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1.在咖啡因地提取实验中,为什么加CaO?

答:吸取水分,防止咖啡因蒸汽溶于水；

中和鞣酸；

2.索氏提取装置有哪几部分组成？<画图）

3.咖啡因升华过程中用到了什么？咖啡因地升华结晶应注意哪些操作？

答：用升华装置包括：蒸发皿、电热套、漏斗<滤纸、牙签、棉花）

注意：1.要控制好温度,始终都需用小火间接加热,如温度太高,会使产物发黄.

2.漏斗颈部棉花松紧适宜.

3.滤纸地孔数适宜,也不能将滤纸放反了.

4.若漏斗上有水蒸气应用滤纸擦干

4.茶叶咖啡因地提取实验中,浓缩去除乙醇地过程中用到了哪些设备？

答：旋转蒸发器、水浴锅、循环水式真空泵等

5.动物脏器DNA提取实验中,蛋白质是如何去除地？

答：用含辛醇或异戊醇地氯仿振荡核蛋白溶液,使其乳化,然后离心除去变性蛋白质,

6.动物脏器DNA提取实验中,如何鉴定DNA地纯度？

答：DNA在紫外区有强吸收,最大吸收波长为260nm,而Pro在280nm处有强吸收,若其中含有Pro,则A260/A280小于1.6,若含有RNA,则大于2.0,纯地DNA 溶

液为1.8左右,据此可判断DNA纯度.

7.动物脏器DNA提取实验中,RNA是怎样去除地？

答：在浓NaCl溶液<1～2mol/L）中,DNA核蛋白地溶解度很大,RNA核蛋白地溶解度很小；而在稀NaCl溶液<0.14mol/L）中,DNA核蛋白地溶解度很小,RNA 核

蛋白地溶解度很大.将提取地细胞核物质先溶解与浓NaCl溶液中充分搅拌一定时间后,加水稀释,降低DNA溶解度使DNA沉淀出来,倒去上清即除去RNA.

8.动物脏器DNA提取实验中,氯仿—异戊醇地作用是什么？离心后分哪几层？

答：氯仿—异戊醇地作用使核蛋白乳化变性

分三层：上层为DNA和DNA核蛋白地水层

中间层为变性蛋白凝胶

下层为氯仿-异戊醇地有机溶剂层

9.动物脏器DNA提取实验中,为什么用0.1MNacl—柠檬酸间歇式地搅拌猪肝？

答：与细胞等渗溶液,在搅碎时,保持细胞内外渗透压,防止细胞核破碎；间歇性搅拌是为了避免搅碎细胞核<剪切力）

10.离子交换层析分离鸡卵粘蛋白实验<上半部）,粗提过程中用哪种试剂去除杂蛋白？用哪种试剂沉淀得到粗黏蛋白？

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答：10%TCA去除杂蛋白预冷丙酮沉淀黏蛋白以得粗提取物

鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中,所用地树脂是哪种？树脂为什么预处理？如何预处理？答：1.DEAE—纤维素树脂

2.①去除交换剂中存在地杂离子

②使其充分溶胀

3. DEAE—纤维素→碱性溶液中浸泡一定时间→洗至中性→酸性溶液中浸泡一定时间→水洗至中性→保存在缓冲溶液中备用

补充：对于OH型：先碱洗,再洗至中性,再酸洗,再洗至中性.

对于H型：先酸洗,再洗至中性,再碱洗,再洗至中性