塞来昔布对大鼠局灶性脑缺血再灌注的保护作用及机制研究
冰七片对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究
冰七片对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究目的：研究冰七片对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，并初步探讨其作用机制。
方法：Wistar雄性大鼠随机分为4组，即假手术组、脑缺血再灌注模型组（模型组）、尼莫地平对照组、冰七片治疗组。
冰七片连续灌胃7 d，末次给药1 h后，采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，缺血2 h再灌注24 h后对大鼠神经功能进行评分，测定脑梗死体积，检测脑组织SOD和MDA 含量。
结果：与模型组比较，冰七片能够改善大鼠的神经功能障碍，缩小脑梗死体积，提高脑组织细胞SOD活性水平，降低脑组织细胞MDA含量。
结论：冰七片对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用，其初步机制可能与提高脑组织SOD活性水平、降低脑组织MDA含量有关。
标签：冰七片；局灶性脑缺血再灌注；SOD；MDA缺血性脑血管疾病作为临床常见疾病，具有发病率高、致残率高、致死率高的特点，严重危害中老年人群的健康。
在欧美发达国家，它与恶性肿瘤、心脏病并称为人类健康的“三大杀手”。
随着我国人口老龄化程度的不断加深，缺血性脑血管疾病发病率呈逐年升高的趋势。
据世界卫生组织（WHO）调查，中国每年新增缺血性脑血管疾病患者约200万，其中能存活下来者仅50万，约75%的存活患者遗留运动、失语、认知等功能障碍，其中重度残疾者约占40%，给家庭及社会带来沉重负担[1-2]。
冰七片是我国中药保护品种，采用天山名贵药材天山龙盘七（三七）、天山龙脑香（冰片）配伍制成，临床用于治疗气滞血瘀的胸痹、胸痛、胸闷、憋气等冠心病多年。
本实验观察冰七片对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并初步探讨其作用机制，现报告如下。
1 材料与方法1.1 实验动物清洁级Wistar大鼠64只，雄性，体重（220±30）g，由广西医科大学实验动物中心提供（合格证号：2006005）。
1.2 药品与试剂冰七片（国药集团新疆制药公司，批号：20131112），尼莫地平片（广东华南药业，批号：20140311），氯化三苯四氮唑（TTC，上海励瑞生物公司），SOD 检测试剂盒、MDA检测试剂盒（南京建成工程研究所）。
丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用的开题报告
丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护
作用的开题报告
一、研究背景及意义
脑缺血再灌注损伤是一种常见的神经系统疾病，通常发生在脑血液供应不足的情况下，引起脑细胞缺氧缺血和氧化应激，导致神经细胞功能和结构的紊乱和损伤。
目前，丁苯酞作为一种植物提取物，已被证明具有一定的神经保护作用，可以通过抑制自由基的生成和调节炎症反应等多种途径发挥其保护作用。
因此，本研究旨在探讨丁苯酞预处理在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用及其机制。
二、研究内容及方法
本研究选取健康的SD大鼠为实验对象，通过氧气和氮混合体的局部灌注模式模拟脑缺血再灌注损伤模型，丁苯酞处理组的大鼠将在灌注前接受丁苯酞预处理，药物剂量为100mg/kg。
然后，通过行为学实验、免疫组化、Western blot等方法检测大鼠脑缺血再灌注损伤后，丁苯酞预处理对大鼠神经保护作用的影响。
三、研究的预期结果
通过本研究，可以探讨丁苯酞在大鼠脑缺血再灌注损伤中对神经保护的作用及其机制，为丁苯酞作为一种神经保护剂的应用提供科学依据和理论支持，为脑缺血再灌注损伤的治疗提供新的思路，具有较好的临床应用价值。
丁香酚对大鼠局灶性脑缺血／再灌注神经保护作用的研究
酶（ Ｓ Ｏ Ｄ ） 和过氧化氢酶 （ Ｃ Ａ Ｔ ） 的变化 ， 应用 蛋 白质印迹 检测
大 鼠脑组织 中 Ｎ Ｆ — Ｋ Ｂ的表达 。结果 丁香 酚能 明显改善 大
鼠的 神 经行 为 ， 缩 小 梗 死 面积 ， 使 脑 组织 病理 改 变 减 轻 ，
・
１ １ ４ ６・
中国药理学通报
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｂ ｕ ｌ ｌ ｅ ｔ ｉ ｎ ２ ０ １ ３ Ａ ｕ ｇ ； ２ ９ （ ８ ） ： １ １ ４ ６～ ５ ０
网络 出版 时 间 ： ２ ０ １ ３— ７—１ ６ １ ３ ： ４ ６ 网络 出版 地 址 ： ｈ ｔ ｔ ｐ ： ／ ／ ｗ ｗ ｗ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｎ ｅ ｔ ／ ｋ ｃ ｍ ｓ ／ ｄ ｅ ｔ ａ ｉ ｌ ／ ３ ４ ． １ ０ ８ ６ ． Ｒ． ２ ０ １ ３ ０ ７ １ ６ ． １ ３ ４ ６ ． ０ ２ ４ ． ｈ ｔ ｍ ｌ
经有 上千 年 的历 史 。丁 香 酚 是 从 丁 香 油 或 其 它
盐水 ； ②模型组 ： 腹腔注射生理盐水 ； ③ 丁香酚组 ： 预
处理 １ ５ ｄ ， 腹 腔 注射 丁 香 酚 （ ２ ０ ０ ｍ ｇ・ ｋ ｇ ） 。饲 养 于 实验 室 内 ， 自由进食 及饮 水 ， 让 其适 应 环境 。手 术 前 １ 天禁 食禁 水 。
摘要 ： 目的
研究丁香酚 对大 鼠局 灶性脑 缺血／ 再灌 注损 伤
的神经 保护作 用机制 。方法 参 照 Ｌ ｏ ｎ ｇ ａ报道 的方 法… 制 备大 鼠局灶 性脑缺血／ 再灌 注模 型。４ ８只 Ｓ Ｄ ６大 鼠随机 分 为假手术组 、 模 型组 （ ＭＣ Ａ Ｏ） 、 丁 香酚组 （ ＭＣ Ａ Ｏ＋丁香 酚 ） 。 缺血／ 再灌注后 １ ２ ｈ进行行 为学评 分 ， ２ ２ ｈ Ｔ Ｙ Ｃ染色测定 梗 死 面积 ， ７ ２ ｈ Ｈ Ｅ染 色检测 脑组 织 病理变 化 ， 并 检测 大 鼠脑 组织匀浆 中谷胱甘肽 （ Ｇ Ｓ Ｈ） 、 丙 二醛 （ ＭＤ Ａ） 、 超 氧化物歧 化
COX-2抑制剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究
COX-2抑制剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究郑刚;张进【期刊名称】《福建医药杂志》【年(卷),期】2006(28)2【摘要】目的观察选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂尼美舒利(nimesulide)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后神经功能缺陷、脑梗死体积及前列腺素E2(PGE2)含量的影响.方法用线栓法制作大鼠脑缺血/再灌注损伤模型,动物分别于缺血前30 min、再灌注后6 h、12 h给予3个不同剂量尼美舒利(3、6和12 mg/kg,ip)或等体积的溶媒.于再灌注后6、12、24 h进行神经功能评分;采用TTC染色法测定脑梗死体积;应用ELISA法检测PGE2含量.结果尼美舒利呈剂量依赖性减少脑梗死体积并改善功能预后,与溶媒组比较有显著性差异;各尼美舒利治疗组脑梗死后PGE2含量和溶媒组相比显著降低.结论尼美舒利对缺血性脑损伤具有明显的保护作用,其保护作用可能与通过减少花生四烯酸环氧酶途径的代谢产物,从而抑制脑缺血后的炎症反应有关.【总页数】3页(P103-105)【作者】郑刚;张进【作者单位】浙江省宁波市鄞州人民医院神经科,315040;浙江大学附属第二医院神经科,310006【正文语种】中文【中图分类】R743【相关文献】1.水飞蓟宾对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠保护作用的研究 [J], 张秀侠2.复元醒脑汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究 [J], 李莉;冯晶晶;李铁军;章越凡3.COX-2抑制剂塞来昔布对大鼠脊髓损伤的保护作用 [J], 张帆;郭风劲;蒋伟;张树威;熊文4.肢体缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的研究 [J], 武萌;吴秋慧;姜慈静;宋梦微;田晶;卢慧玲5.钙蛋白酶抑制剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 匡重伸;许航;黄征;朱桂云;王胜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用研究
活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用研究尹佳琦,卢军,刘佰林,马小强摘要目的:探讨活血通络方对脑缺血再灌注大鼠损伤的神经保护作用及其机制㊂方法:将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组㊁模型组㊁阳性对照组㊁活血通络方低剂量组㊁活血通络方高剂量组,每组10只㊂假手术组和模型组给予生理盐水10mg/(kg㊃d)灌胃;阳性对照组给予尼莫地平混悬液9.375mg/(kg㊃d)灌胃;活血通络方低剂量组㊁高剂量组分别给予活血通络方水体液6.25g/(kg㊃d)㊁25g/(kg㊃d)灌胃㊂连续灌胃2周后,评估大鼠神经功能,蛋白免疫印迹法测定紧密连接蛋白-1(ZO-1)和闭合蛋白表达水平,免疫组化法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和水通道蛋白4(AQP4)含量㊂结果:与假手术组比较,模型组及各用药组神经功能评分均明显升高(P<0.05);与模型组比较,各用药组神经功能评分均明显降低(P<0.05);与活血通络方低剂量组比较,阳性对照组和活血通络方高剂量组神经功能评分均明显降低(P<0.05)㊂与假手术组相比,模型组及各用药组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显降低, MMP-2和AQP4水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,各用药组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显升高,MMP-2和AQP4水平均明显减少(P<0.05);与活血通络方低剂量组相比,阳性对照组和活血通络方高剂量组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显升高, MMP-2和AQP4水平均明显减少(P<0.05)㊂结论:活血通络方可以改善大鼠脑缺血再灌注损伤,其机制可能为通过上调ZO-1和闭合蛋白表达水平,下调MMP-2和AQP4表达水平,从而调节血脑屏障结构和功能,保护神经功能㊂关键词脑缺血再灌注;活血通络方;血脑屏障;紧密连接蛋白-1;闭合蛋白;基质金属蛋白酶-2;水通道蛋白4;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.04.014缺血性脑血管病(ischemia cerebral vasculardisease,ICVD)指由于相应脑组织的缺血㊁缺氧而引起的短暂或持续㊁局部或弥漫性的脑组织损伤,导致一系列神经功能障碍症状或体征的脑血管病的总称[1-6]㊂而脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusioninjury,CIRI)是缺血性脑血管病的重要病理过程㊂血脑屏障(blood brain barrier,BBB)是脑组织和脑循环之间的生理屏障,滋养脑组织,过滤从大脑到血液的各种物质,保护中枢神经系统的稳定,而CIRI早期可损伤血脑屏障,降低CIRI导致的血脑屏障损伤,对于CIRI的治疗有着重大意义[7-8]㊂本研究观察活血通络方对大鼠脑缺血再灌注后脑组织紧密连接蛋白1(ZO-1)㊁闭合蛋白(occludin)㊁基质金属蛋白酶-2(MMP-2)㊁水通道蛋白4(AQP4)含量的影响,从调节血脑屏障结构和功能方向探讨活血通络方改善CIRI的可能调节机制及潜在作用靶点㊂1材料与方法1.1实验仪器与试剂DR-200Bs酶标仪(Diatek公司);DYY-6C电泳仪㊁DYCZ-400D转移电泳仪槽(北基金项目新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(No.2019D01C184)作者单位新疆维吾尔自治区中医药研究院(乌鲁木齐830099)通讯作者马小强,E-mail:***************引用信息尹佳琦,卢军,刘佰林,等.活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21 (4):666-669.京市六一仪器厂);TGL-16c台式离心机(上海安亭科学仪器厂);Eclipse Ci-L正置荧光拍照显微镜(Nikon);UPK-1-10T超纯水机(UPK-1-10T);RM2016病理切片机(上海徕卡仪器有限公司);WD-9405脱色摇床(北京市六一仪器厂);移液枪(Dragon);二喹啉甲酸法(BCA)蛋白质浓度测定试剂盒(货号: AS1086);增强型化学发光试剂(ECL)化学发光检测试剂盒(货号:AS1059);聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(货号:IPVH00010);MicroPublisher成像系统(Q-IMAGING);ZO-1(货号:sc-33725);闭合蛋白(货号: ab167161);MMP-2(货号:ab86607);AQP4(货号: 16473-1-AP);辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗兔甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)(货号:AS-1107);HRP 标记山羊抗小鼠GAPDH(货号:AS-1106)㊂1.2实验药物活血通络方由怀牛膝㊁石决明㊁天麻㊁钩藤㊁龙齿㊁白芍㊁黄芪㊁太子参㊁丹参㊁玄参等药物组成㊂1.3实验动物清洁SD雄性大鼠50只,体质量180~ 220g,许可证号:SCXK(新)2003-0001,由新疆实验动物中心提供㊂1.4实验方法1.4.1实验分组将50只大鼠随机分为假手术组㊁模型组㊁阳性对照组㊁活血通络方低剂量组㊁活血通络方高剂量组,每组10只㊂假手术组和模型组连续2周给予生理盐水10mg/(kg㊃d)灌胃;阳性对照组给予尼莫地平混悬液9.375mg/(kg㊃d)灌胃,连续2周;活血通络方低剂量组给予活血通络方水体液6.25g/(kg㊃d)灌胃,连续2周;活血通络方高剂量组给予活血通络方水体液25g/(kg㊃d)灌胃,连续2周㊂1.4.2动物模型制备用水合氯醛400mg/kg腹膜内注射麻醉大鼠,颈部正中切开表皮,暴露右侧颈总动脉,小心地暴露颈外动脉和颈内动脉,并将其与邻近的神经分开㊂将尼龙丝引入动脉切开孔,向远端送入颈内动脉,并从颈动脉分叉处推进18~20mm㊂缺血2h 后,轻轻取出尼龙丝㊂假手术组进行相同的麻醉和创口缝合,但不闭塞脑中动脉㊂所有动物均由同一操作员在相同条件下操作㊂1.4.3神经功能评分采用Zea-Longa评分法进行评分,具体评分标准详见表1㊂表1Zea-Longa神经功能损伤评分表评分临床表现0分正常行走或无神经功能缺损1分未能完全伸展对侧前爪或轻度局灶性神经功能缺损2分向左侧转圈或中度局灶性神经功能缺损3分向左侧倾倒或重度局灶性神经功能缺损4分不能行走或昏迷5分死亡1.4.4蛋白免疫印迹法配制10%分离胶,加水封30min,注意胶中不能有气泡,胶已凝固,吸弃水封,加入4%的浓缩胶,立即插入样品梳㊂电泳80V30min 后转为120V40min㊂将切好的PVDF膜置于甲醇溶液中浸泡,然后与胶置于夹子中后放入转移槽中㊂外敷冰降温㊂120V转膜2h㊂移至4%脱脂奶粉封闭液,室温封闭1h㊂分别加入上述指标一抗(1ʒ1000)孵育过夜,同时以GAPDH作为内参照㊂TBST洗涤液洗膜,室温10min,重复3次㊂孵育二抗,室温1h, TBST洗涤液洗膜,室温10min,重复3次;ECL发光液进行化学发光反应㊂1.4.5免疫组化抗原修复,磷酸缓冲盐溶液(PBS)浸泡5min,3%过氧化氢孵育15~20min;添加试剂血清封闭20min后去血清,用一抗孵育,37ħ㊁4ħ过夜;PBS洗涤3min,重复3次;室温下用二抗孵育20 min;PBS洗涤3次,每次3min;室温下试剂C孵育20min;PBS洗涤3min,重复3次;用显色剂显色;自来水冲洗后用中性树胶封片㊂1.5统计学处理采用SPSS17.0软件进行统计学分析㊂符合正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,采用t检验或单因素方差分析(One-Way ANOVA)㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1各组大鼠神经功能评分比较与假手术组比较,模型组㊁活血通络方低剂量组㊁活血通络方高剂量组㊁阳性对照组神经功能评分均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,活血通络方低剂量组㊁活血通络方高剂量组㊁阳性对照组神经功能评分均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与活血通络方低剂量组比较,活血通络方高剂量组和阳性对照组神经功能评分均明显降低,差异均有统计学意义(P< 0.05);活血通络方高剂量组与阳性对照组神经功能评分比较差异无统计学意义(P>0.05)㊂详见表2㊂表2各组大鼠神经功能评分比较(xʃs)单位:分组别只数神经功能评分假手术组100.00ʃ0.00模型组10 2.89ʃ0.43①阳性对照组10 1.27ʃ0.32①②③活血通络方低剂量组10 2.02ʃ0.54①②活血通络方高剂量组10 1.39ʃ0.41①②③与假手术组比较,①P<0.05;与模型组比较,②P<0.05;与活血通络方低剂量组比较,③P<0.05㊂2.2各组大鼠脑组织ZO-1蛋白和闭合蛋白表达比较与假手术组相比,模型组㊁活血通络方低剂量组㊁活血通络方高剂量组㊁阳性对照组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,活血通络方高剂量组㊁活血通络方低剂量组及阳性对照组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与活血通络方低剂量组相比,活血通络方高剂量组与阳性对照组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);活血通络方高剂量组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达与阳性对照组比较差异无统计学意义(P> 0.05)㊂详见图1及表3㊂图1各组大鼠脑组织ZO-1蛋白和闭合蛋白表达条带图表3各组大鼠脑组织ZO-1蛋白和闭合蛋白表达比较(xʃs)组别只数ZO-1蛋白闭合蛋白假手术组10 1.23ʃ0.070.84ʃ0.04模型组100.14ʃ0.02①0.11ʃ0.03①阳性对照组100.77ʃ0.11①②③0.58ʃ0.05①②③活血通络方低剂量组100.31ʃ0.08①②0.28ʃ0.03①②活血通络方高剂量组100.63ʃ0.08①②③0.49ʃ0.03①②③与假手术组比较,①P<0.05;与模型组比较,②P<0.05;与活血通络方低剂量组比较,③P<0.05㊂2.3各组大鼠脑组织MMP-2㊁AQP4表达比较与假手术组相比,模型组㊁活血通络方低剂量组㊁活血通络方高剂量组㊁阳性对照组MMP-2㊁AQP4表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,活血通络方高剂量组㊁活血通络方低剂量组及阳性对照组MMP-2㊁AQP4表达水平均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与活血通络方低剂量组相比,活血通络方高剂量组与阳性对照组MMP-2㊁AQP4表达水平均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);活血通络方高剂量组MMP-2㊁AQP4表达水平与阳性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)㊂详见表4㊂表4各组大鼠脑组织MMP-2㊁AQP4表达比较(xʃs)组别只数AQP4MMP-2假手术组10950.86ʃ116.48304.32ʃ54.97模型组104826.80ʃ410.22①2349.26ʃ313.57①阳性对照组101705.91ʃ191.07①②③646.50ʃ120.86①②③活血通络方低剂量组103959.10ʃ361.59①②1684.29ʃ233.17①②活血通络方高剂量组102103.24ʃ256.27①②③898.68ʃ164.70①②③与假手术组比较,①P<0.05;与模型组比较,②P<0.05;与活血通络方低剂量组比较,③P<0.05㊂3讨论脑缺血再灌注会引起脑损伤,导致脑水肿㊁脑出血和神经元死亡,包括兴奋性氨基酸毒性㊁能量代谢障碍㊁细胞内钙超载㊁炎症反应㊁细胞凋亡等多种机制,是一个复杂的病理过程[9]㊂血脑屏障破坏可导致离子失调㊁水肿和神经炎症,从而导致神经元功能障碍㊁颅内压升高和神经元变性,是CIRI的重要病理阶段[10]㊂血脑屏障功能障碍通常与脑水肿有关,严重时甚至导致脑出血,这是CIRI后脑水肿重要的病理改变[11]㊂因此,改善CIRI导致的血脑屏障损伤,对缺血性脑血管疾病的治疗有着重大意义㊂本研究探讨活血通络方对CIRI大鼠保护作用的影响,从对血脑屏障结构和功能的调节作用研究活血通络方对CIRI影响的可能机制㊂紧密连接由多个蛋白组成的细胞黏附,这些蛋白通过其细胞外成分直接相互作用,将两个细胞膜连接在一起,包括跨膜蛋白(闭合蛋白㊁紧密连接蛋白㊁连接黏附分子)㊁胞质附着蛋白[ZO-1㊁紧密连接蛋白2(ZO-2)和紧密连接蛋白3(ZO-3)]和细胞骨架蛋白等组成部分㊂CIRI中紧密连接位置的异常㊁表达数量对血脑屏障通透性及神经功能影响重大[12]㊂有研究通过观察脑CIRI大鼠模型血脑屏障通透性及ZO-1㊁闭合蛋白与紧密连接蛋白5的异常表达和分布发现,CIRI可能导致紧密连接蛋白的结构和功能的变化,从而导致血脑屏障通透性异常[13]㊂本研究结果显示,与假手术组相比,模型组㊁活血通络方低剂量组㊁活血通络方高剂量组㊁阳性对照组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,活血通络方低剂量组㊁活血通络方高剂量组㊁阳性对照组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显升高(P<0.05);与活血通络方低剂量组相比,活血通络方高剂量组与阳性对照组ZO-1蛋白和闭合蛋白表达均明显减少(P<0.05),表明活血通络方可能通过上调ZO-1和闭合蛋白的表达,加强细胞间的连接,从而保持血脑屏障的稳定性,避免CIRI后导致的脑组织的二次损伤㊂CIRI可以激活基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs),MMPs是一组可以降解多种细胞外基质成分的锌依赖的蛋白水解酶,在组织形态发生㊁细胞迁移和血管生成等过程中发挥作用,参与大脑和血脑屏障的许多生理和病理过程[14-16]㊂有研究发现,MMP-2的活性受到抑制后可阻碍细胞外基质(ECM)的降解,从而导致细胞外胶原纤维的聚集[17]㊂CIRI中发现血脑屏障和紧密连接蛋白的破坏,而抑制MMPs可以防止紧密连接蛋白的丢失,表明MMPs通过降解紧密连接蛋白来破坏屏障的完整性[18]㊂本研究结果显示,与假手术组相比,模型组及各用药组MMP-2水平均明显升高;而与模型组相比,各用药组MMP-2水平均明显降低;与活血通络方低剂量组相比,活血通络方高剂量组与阳性对照组MMP-2水平均明显降低,表明活血通络方可能通过下调MMP-2表达水平,降低对紧密连接蛋白等基质蛋白的降解,保护血脑屏障的功能㊂AQP4广泛存在于中枢神经系统内,具有不同于其他水通道蛋白的特征,是药物发现的有吸引力的靶标,与脑水肿的发生密切相关,AQP4在神经胶质细胞中表达,在主要血管和脑组织之间的边界高表达,参与维持脑稳态,并可能是调节渗透压的关键因素[19-20],当AQP4异常表达时,血脑屏障通透性会发生明显改变,导致脑水肿的发生[21-24]㊂本研究结果显示,与假手术组相比,模型组及各用药组AQP4水平均明显升高;与模型组相比,各用药组AQP4水平均明显降低;与活血通络方低剂量组相比,活血通络方高剂量组与阳性对照组AQP4水平均明显降低㊂表明活血通络方可能通过下调AQP4表达水平,抑制脑水肿的发展,保护血脑屏障的功能㊂综上所述,活血通络方可改善大鼠CIRI,其机制可能是通过上调ZO-1㊁闭合蛋白和下调MMP-2㊁AQP4,从而调节血脑屏障结构和功能,发挥神经保护作用㊂参考文献:[1]刘扬.川芎嗪片联合西医常规疗法治疗缺血性脑血管病的疗效观察[J].中西医结合心脑血管病杂志,2020,18(7):1145-1148. [2]SEGURA T,CALLEJA S,JORDAN J.Recommendations andtreatment strategies for the management of acute ischemicstroke[J].Expert Opinion on Pharmacotherapy,2008,9(7):1071-1085.[3]MITIC L L,ANDERSON J M.Molecular architecture of tightjunctions[J].Annual Review of Physiology,1998,60:121-142. [4]LONGA E Z,WEINSTEIN P R,CARLSON S,et al.Reversiblemiddle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91.[5]STEVENSON B R,SILICIANO J D,MOOSEKER M S,et al.Identification of ZO-1:a high molecular weight polypeptideassociated with the tight junction(zonula occludens)in a varietyof epithelia[J].The Journal of Cell Biology,1986,103(3):755-766.[6]石向群,杨金升,石莉,等.伊文思蓝㊁ZO-1评估血脑屏障损伤的应用研究[J].西北国防医学杂志,2004,25(5):329-332;401. 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红景天苷对脑缺血再灌注大鼠的作用及机制
【摘要】目的研究红景天苷对脑缺血再灌注大鼠的作用及机制。
方法SD 大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、红景天苷组（50mg ·kg -1）与红景天苷+PD98059组（50mg ·kg -1+1mg ·kg -1），每组15只。
采用中动脉栓塞法造模，利用TTC 染色检测大鼠脑梗死区域，TUNEL 染色检测大鼠脑中神经元凋亡，Westernblot 检测各蛋白表达。
结果与假手术组相比，脑缺血组大鼠神经功能评分减少，出现局部梗死区域，TUNEL 染色阳性细胞数增加，SOD 、GSH -PX 等抗氧化酶含量降低，MDA 含量升高（P ＜0.05）。
与脑缺血组相比，红景天苷介导p -ERK1/2、p -Nrf2与HO -1表达增加（P ＜0.05），逆转Bax 与cleaved -caspasd -3表达（P ＜0.05），升高SOD 与GSH -PX 含量，降低MDA 含量，同时减少脑缺血大鼠局部梗死区域，提高大鼠的神经功能评分。
红景天苷+PD98059组中PD98059通过抑制ERK1/2磷酸化逆转红景天苷对脑缺血大鼠的治疗效果，降低SOD 与GSH -PX 含量，升高MDA 含量，增加大鼠的脑梗死体积，最终减少大鼠的神经功能评分。
结论红景天苷基于ERK1/2激活的Nrf2/HO -1信号通路改善脑缺血大鼠神经元凋亡，减少氧化应激反应，缓解大鼠神经功能损伤。
【关键词】脑缺血；红景天苷；ERK1/2；神经元凋亡；氧化应激【中图分类号】R-332【文献标识码】A【文章编号】1673-5110（2022）01-0092-06基金项目：河南省科技攻关项目（编号：172102310369）巴庆华1）崔传举2）1）河南中医药大学附属郑州人民医院，河南郑州4500002）郑州市第一人医院，河南郑州450000通信作者：巴庆华，Email ：红景天苷对脑缺血再灌注大鼠的作用及机制·论著科研之窗·The effect and mechanism of salidroside on cerebral ischemia -reperfusion in ratsBA Qinghua 1），CUI Chuanju 2）1）Zhengzhou People ’s Hospital Affiliated to Henan University of Traditional Chinese Medicine ，Zhengzhou 450000，China ；2）Zhengzhou First People ’s Hospital ，Zhengzhou 450000，China Corresponding author ：BA Qinghua ，Email ：【Abstract 】Objective Objective To explore the effect and mechanism of salidroside on middle cerebral ar⁃tery occlusion （MCAO ）/reperfusion rats.Methods SD rats were randomly divided into sham group ，MCAOgroup ，salidroside group （50mg ·kg -1）and salidroside +PD98059group （50mg ·kg -1+1mg ·kg -1），15animals per group.The middle artery occlusion operations were applied for the model ，TTC staining experiments were ap⁃plied for the cerebral infarction area detection ，TUNEL staining experiments were used to detect the neuronal apop⁃tosis in brain ，and Western blot experiments were used for the protein expression detection.Results Compared with the sham group ，the neurological scores of the rats in MCAO group decreased ，local infarcts appeared in the brain and the number of TUNEL staining positive cells increased.In addition ，the contents of antioxidant enzymes like SOD ，GSH -PX decreased ，and the contents of MDA increased （P <0.05）.Compared with MCAO group ，admini -stration of salidroside mediated the increase of p -ERK1/2，p -Nrf2and HO -1expression （P <0.05），and reversed the expression of Bax and cleaved -caspasd -3（P <0.05），increased the contents of SOD and GSH -PX ，decreased the content of MDA.At the same time salidroside reduced the local infarct area in rats with cerebral ischemia ，DOI ：10.12083/SYSJ.220075收稿日期2021-10-01本文编辑关慧本文引用信息：巴庆华，崔传举.红景天苷对脑缺血再灌注大鼠的作用及机制［J ］.中国实用神经疾病杂志，2022，25（1）：92-97.DOI ：10.12083/SYSJ.220075Reference information ：BA Qinghua ，CUI Chuanju.The effect and mechanism of salidroside on cerebral ischemia -reperfusion in rats ［J ］.Chinese Journal of Practical Nervous Diseases ，2022，25（1）：92-97.DOI ：10.12083/SYSJ.220075and improved the neurological scores of the rats.However，the results in salidroside+PD98059group showed PD98059reversed the therapeutic effect of salidroside on cerebral ischemia in rats through inhibited ERK1/2phos⁃phorylation，which reduced the contents of SOD，GSH-PX and increased the content of MDA，increased the volume of cerebral infarction，and finally decreased the neurological function score of rats.Conclusion Salidroside can improve neuronal apoptosis in cerebral ischemic rats，reduce oxidative stress response，and relieve neurological damage through the Nrf2/HO-1signaling pathway activated by ERK1/2.【Key words】Cerebral ischemia；Salidroside；ERK1/2；Neuronal apoptosis；Oxidative stress脑卒中具有较高的发病率、致残率和病死率，严重威胁中老年人健康，特别是肥胖且伴高血压人群［1］。
贯叶金丝桃对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究
贯叶金丝桃对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究Δ王宏＊，康利，江茜，刘伟伟，张岩，傅予 #（天津市医药科学研究所，天津 300020）中图分类号 R 965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）16-1961-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.16.08摘要 目的 探讨贯叶金丝桃对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及潜在机制。
方法 将雄性SD 大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组（尼莫地平0.012 g/kg ）和贯叶金丝桃高、低剂量组（5.212、1.303 g/kg ），每组10只。
除假手术组外其余各组大鼠均采用改良线栓法构建大鼠大脑左侧中动脉闭塞再灌注模型。
各药物组大鼠于术后第2天开始灌胃相应药液，每天1次，连续7 d 。
分别于药物干预前（造模后第1天）和末次给药后进行大鼠神经功能评分，以TTC 染色法观察其末次给药后的脑梗死情况，以苏木精-伊红染色法和TUNEL 染色法分别观察其脑皮层、海马组织的病理改变和神经细胞的凋亡情况，以Western blot 法和反转录聚合酶链式反应法分别检测其促红细胞生成素（EPO ）、促红细胞生成素受体（EPOR ）、Janus 激酶2（JAK 2）、信号转导及转录激活因子3（STAT 3）、磷酸化STAT 3（p-STAT 3）蛋白和EPO 、EPOR 、JAK 2、STAT 3 mRNA 的表达情况。
结果 与假手术组比较，模型组大鼠药物干预前、末次给药后的神经功能评分和脑梗死比例均显著升高（P ＜0.01）；脑皮层和海马组织神经细胞受损明显，凋亡的神经细胞明显增多，凋亡率显著升高（P ＜0.01）；脑组织中EPO 、EPOR 蛋白及mRNA 的表达水平均显著降低（P ＜0.01），JAK 2、p-STAT 3、STAT 3蛋白和JAK 2、STAT 3 mRNA 的表达水平均显著升高（P ＜0.01）。
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文章编号:100322754(2007)0220160204
塞来昔布对大鼠局灶性脑缺血再灌注的
保护作用及机制研究
罗传铭1, 毕桂南1, 曹立梅2, 李 浩3, 邱燕东1, 黎彬如1, 石胜良1
收稿日期:2006210209;修订日期:2007203201
基金项目:广西自然科学基金资助(桂科自0542091
)
作者单位:(1.广西医科大学第一附属医院神经内科,广西南宁530021;现东莞市虎门医院内科,广东东莞532900;2.上海市第八人民医院神经内科,上海200235;3.桂林医学院附属医院神经内科,
广西桂林541004;毕桂南,通讯作者)
摘 要: 目的 探讨塞来昔布对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及可能机制。方法 采用线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)90min再灌注模型,分为假手术组、等渗盐水组塞来昔布12.5mgkg治
疗组及塞来昔布25mgkg治疗组。缺血后30min灌胃给予等渗盐水或两种剂量(12.5mgkg或25mgkg)
的塞来昔
布,检测各分组大鼠缺血侧额顶部皮质在再灌注不同时点前列腺素代谢物、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、
超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性的动态变化。结果 (1)塞来昔布12.5mgkg治疗及塞来昔布
25mgkg治疗均可明显缩小脑IR时脑损伤范围,减轻脑水肿程度;(2)塞来昔布12.5mgkg
治疗和塞来昔布
25mgkg治疗均能不同程度的降低前列腺素E2(ProstaglandinE2,PGE2)、血栓素B2(ThromboxaneB2,TXB
2
)、62酮
2前列腺素F
1Α(62ketto2prostaglandinF1Α,62K2PGF1Α)在缺血侧额顶部皮质中聚集,同时使TXB262K2PGF1Α比值下
降。也能不同程度的降低MDA含量,提高SOD活性。结论 COX22抑制剂可能通过减少PGE2的集聚,改善TXB262K2PGF1Α比值,减少氧自由基的产生,提高SOD活性而发挥脑保护作用。关键词: 环氧化酶22; 环氧化酶22抑制剂; 脑缺血2再灌注损伤; PGE2含量; TXB262K2PGF1Α比值中图分类号:R743.3 文献标识码:A
ThestudyontheactionmechemismofCelecoxibonfocalcerebralischemicreperfusioninrats LUOChuan2ming,
BIGui2nan,CAOLi2mei,etal.(DepartmentofNeurology,FirstHospital,GuangximedicalCollege,Guilin530021,China
)
Abstract: Objective ToexploretheprotectivemechamismofCelecoxibinratssubjectedtofocalischmiareperfusion.Methods MCAOfor1.5hreperfusionWistarratsmodelswereperformedwiththephotothromboticocclusionmethodwhichwererandomlydividedintosham2operationgroup,Vehiclegroup,Celecoxib12.5mgkggroupandCelecoxib25mgkggroup.SalineordifferentdosesofCelecoxibwereadministratedtoratsrespectivelyafter30minischemia.ObservedtheeffectofCelecoxibbydetectingthedynamicchangesofmetaboliticproductionofprostaglandin,MDAandSODinfrontalandparietalcortexsinratsamongdifferenttimepointanddifferentgroups.Results (1)ThecerebralpathologicinjuryandcerebraledemaweredistinctlyalleviatedafterratsweretreatedwithCelecoxib.(2)Both12.5mgkgand25mgkgCelecoxibcouldreducetheaccumulationofPGE2,TXB2
and62K2PGF1Αinfrontalandparietalcortexstosomeextent,butatthesametimetheratioofTXB2and62K2PGF1Α
dropped.ThecontentofMDAwasdecreasedbutthatofSODincreased.Conclusions Celecoxibprovidedprotec2
tionagainstCIRIpossiblybyreducingtheaccumulationofPGE2,theproductionofoxygenradicals,alteringthera2tionbetweenTXB2and62K2PGF1ΑandincreasingtheactivityofSOD.Keywords: Cyclooxygenase22; Cyclooxygenase22inhibitor; Cerebralischemicreperfusioninjury; ThecontentofPGE2; TherationofTXB2and62K2PGF1Α
临床上脑梗死患者中,大脑中动脉闭塞占脑梗死的60%以上。对急性期脑梗死的治疗以溶栓为主,
目的是恢复脑血流、减轻脑组织损伤。但因此而带来的脑缺血2再灌注(IschmicReperfusion,IR)损伤,是目前最受关注的问题,其发病机制尚不清楚。环氧化酶是催化花生四烯酸合成前列腺素和血栓素的限速酶,前列腺素E2是环氧化酶22重要的催化产物,被认为是环氧化酶22活性的标记之一[1]。有研究表明COX参与了脑缺血后脑损伤的发生发展,与脑缺血的预后关系密切相关[2]。塞来昔布(Celecoxib,西乐葆)是选择性COX22抑制剂,能最大限度抑制COX22,而对COX21抑制并不明显[3]。本研究通过在大鼠脑IR模型中应用COX22抑制剂塞来昔布抑制COX22的活性,通过检测各分组大鼠缺血侧额顶部皮质在再灌注不同时点前列腺素代谢物含量、MDA含量、SOD活性的动态变化,进一步探讨COX22在CIRI中的作用及其可能机制。1 材料和方法1.1 主要实验试剂及实验仪器 721A型分光光度计(四川仪表九厂);显微镜(OLYPUSCX21FS
TOKYOJAPANMDDEINCHINA);病理图像分
析仪DMR+Q550型(德国莱卡公司);DFM96型多管放射免疫计数器(合肥众成机电技术公司);硫代巴比妥酸(ThiobarbituuricacidTBA)测试盒、MDA
测试盒、SOD测试盒、蛋白质标准品(总蛋白含量
061JApoplexyandNervousDiseases,April2007,Vol24,No.256gL)、考马斯亮兰蛋白测试盒(均购自南京建成生物工程研究所);PGE2、TXB2、62K2PGF1Α放免药盒(北京华英生物技术研究所,批号为0402);塞来昔布(辉瑞制药有限公司)。1.2 实验方法1.2.1 实验动物模型制备及分组 取体重250±30g雄性纯种远交Wistar大鼠132只(广西医科大学动物试验中心提供)。采用Longa等[4]的方法加以改良制备大鼠大脑中动脉阻塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)模型,取神经功能缺损评分为1～3分的大鼠作为研究对象。MCAO90min再灌注6、12、24、48及72h。各组大鼠均于相应时间点断头处死。具体分组如下:(1)假手术组:共15只,对6只行脑组织匀浆,6只行TTC染色,另3只行脑水肿测定;(2)等渗盐水组:39只大鼠,缺血后30min予1ml等渗盐水灌胃,2次d;(3)塞来昔布12.5mgkg治疗组:39只大鼠,缺血后30min予用等渗盐水新鲜配置塞来昔布悬液12.5mgkg灌胃,2次d;(4)塞来昔布25mgkg治疗组:39只大鼠,缺血后30min予等渗盐水新鲜配置塞来昔布悬液25mgkg灌胃,2次d。后3组再灌注24h时间点15只,对其中6只行脑组织匀浆,6只行TTC染色,3只行脑水肿测定。余时间点各6只,行脑组织匀浆。1.2.2 脑梗死体积比测定 各实验组各取6只符合要求的成模大鼠再灌注24h后断头取脑。将鼠脑置于-4℃冰箱10min使之发硬,再将其切成8等份冠状位切片,置于2%TTC溶液中,37℃水溶。4%多聚甲醛液固定。梗死灶呈苍白色,正常组织呈红色。用计算机病理图像分析仪测量脑片两个面的梗死面积,根据梯形法则计算出梗死灶体积和脑的总体积,并计算体积比。1.2.3 脑水肿测定 各取3只符合要求的成模大鼠进行含水量测定。采用干湿重法,再灌注24h断头取脑后,缺血侧及对侧脑组织取出后分别迅速称重,置110℃～115℃烤箱内烤至恒重,再分别称其干重,用(湿重-干重)湿重的百分比,作为衡量脑水肿指标。1.2.4 PGE2、TXB2、62K2PGF1Α含量测定 各实验组不同时间点各取6只符合要求的成模大鼠麻醉后,用肝素化的生理盐水快速灌洗,断头后用冰盘速取患侧脑组织,分离额顶部皮质,置微型匀浆器中加0.1ml无水乙醇研磨,再加生理盐水0.9ml充分研磨成匀浆,离心(3500rpm,15min)取匀浆上清液,按放免试剂盒说明,以标记的非平衡法测定,自动Χ计数器预先编程,直接测出样品浓度。1.2.5 MDA含量、SOD活性的测定 各实验组不同时间点各取6只符合要求的成模大鼠麻醉后,用肝素化的生理盐水快速灌洗,断头后用冰盘速取患侧脑组织,分离额顶部皮质,分别按比例1∶9(组织湿重g∶生理盐水ml)匀浆,制成10%匀浆。离心取上清。严格参照说明书进行,测量各管吸光度(A)根据说明书提供公式,计算MDA含量和SOD活性。1.2.6 统计学分析 全部数据资料采用SPSS11.0统计软件进行运算,结果以均数±标准差(ς±s)表示,数据之间的比较采用单因素方差分析
(One2WayANOVA)。
2 结 果2.1 塞来昔布治疗前后脑梗死体积变化 塞来昔布12.5mgkg和塞来昔布25mgkg与等渗盐水组相比均有统计学意义差异(P<0.05),塞来昔