猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较分析
三种常见猪肺炎支原体疫苗的免疫效果对比试验
三种常见猪肺炎支原体疫苗的免疫效果对比试验胡晓;韦学凤【期刊名称】《四川畜牧兽医》【年(卷),期】2023(50)2【摘要】为筛选出适合内江猪保种场的最佳猪肺炎支原体疫苗,本试验选用市场上常见的三种商品化疫苗进行免疫效果对比。
将60头刚出生的健康哺乳仔猪随机分成三组,于7日龄接种疫苗,A组接种A疫苗,B组接种B疫苗,C组接种C疫苗,试验猪分别于7、30、60日龄采血并分离血清,进行ELISA抗体检测。
结果显示:7日龄时,A、B、C三组的抗体阳性率均为0;30日龄时,A、B、C三组的抗体阳性率分别为80%、20%、90%;60日龄时,A、B、C三组的抗体阳性率分别为90%、20%、100%。
从ELISA抗体检测结果来看,以C组免疫效果最好。
本试验同时对仔猪的体重、料肉比、呼吸道病发病率等指标进行了观察统计,结果得出:60日龄时,A、B、C三个试验组的平均体重为11.325、13.546、11.632kg;料肉比分别为2.28、1.95、2.03;呼吸道发病率分别为4.35%、2.21%、3.39%,从料肉比及呼吸道发病率来看,以B组效果最好。
【总页数】3页(P26-27)【作者】胡晓;韦学凤【作者单位】四川省内江市畜牧业发展中心;西南大学动物科学学院【正文语种】中文【中图分类】S852.52【相关文献】1.三种奶牛口蹄疫疫苗免疫效果对比试验2.猪O型口蹄疫合成肽疫苗及猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫效果对比试验3.猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗与猪瘟活疫苗混合免疫效果评价4.猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估5.猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪支原体肺炎的的药物和疫苗预防分析
猪支原体肺炎的的药物和疫苗预防分析猪支原体肺炎的的药物是初期的防治措施，那个时候，猪的疾病还不是特别复杂，生物环境也相对净化的比较好，而随着规模的不断扩大，科技和产业的不断交流融合，猪的疾病也随之复杂化，为了有效应对猪气喘病，猪支原体肺炎疫苗也被研发出来，目前市面上的猪地方性肺炎有灭活和弱毒疫苗两类，他们之间的免疫和防治猪支原体肺炎的效果如何呢?相对之间有哪些区别呢?猪支原体肺炎的药物防治：(1)尽管使用四环素类药物如金霉素、土霉素、多西环素等可以控制猪肺炎支原体在呼吸道黏膜的感染，以及使用大环内酯类药物如泰乐菌素、泰万菌素、替米考星可以控制猪肺炎支原体在肺部的感染，但是猪肺炎支原体在猪群感染具有持续性与群体性特征，因此长时间使用上述两类药物控制猪肺炎支原体感染是不可行的，同时是不现实的。
(2)药物预防可以降低猪肺炎支原体在猪群中感染水平，减少带毒和排毒，特别是在潜伏性感染和排毒机会更大的初产母猪以及在应激条件下的断奶仔猪与生长育肥猪群。
(3)药物治疗可以减轻感染肺炎支原体猪只的临床症状，但不能改善感染肺炎支原体导致的肺组织损伤。
猪支原体肺炎的疫苗免疫：目前用于猪支原体肺炎免疫的疫苗有灭活疫苗和弱毒疫苗两大类，灭活疫苗以进口为主，国产灭活疫苗这两年陆续上市，弱毒疫苗以国产为主。
灭活疫苗在疫苗佐剂方面有独到之处，采用肌肉接种，接受程度较高，主要产生体液免疫，黏膜免疫弱。
弱毒疫苗采用肺内注射，可产生较强的局部黏膜免疫、细胞免疫、体液免疫、占位效应作用，在猪场形成优势菌群利于猪肺炎支原体自然净化。
弱毒苗除了比灭活苗在减轻肺部病变、提高日增重和饲料转化率方面显现更加明显的优势外，因可以有效建立起黏膜免疫，以及起到占位效应作用，因此在阻止猪肺炎支原体感染方面与灭活苗相比同样显示出不可比拟的优势。
猪支原体肺炎活疫苗和灭活疫苗性能对比：1、市场角度：(1)中国有近1亿多土猪或带有土猪血缘的内三元猪，对猪肺炎支原体感染敏感并会造成临床发病以及较大经济损失。
211088004_猪肺炎支原体疫苗的免疫策略及效果评价
312023年40卷第3期 SWINE INDUSTRY SCIENCE 猪业科学主题策划F E A T U R E猪肺炎支原体是危害养猪业的重要病原，由于感染后临床症状不明显，多以慢性消耗性感染为主，猪场在进行疾病防控时往往关注度不够。
但是由于该病原能够长期破坏猪只呼吸道纤毛上皮细胞，导致其他呼吸道病原体频繁入侵，是最终形成感染情况复杂、经济损失巨大的猪呼吸道疾病综合征（PRDC ）的重要诱因。
因此，猪肺炎支原体的防控应该得到充分重视。
1 猪肺炎支原体的感染率猪肺炎支原体只感染猪只，该病原随着养猪业的发展分布于全球各地。
如果没有特意净化，几乎全世界所有的国家和猪场都有发现，并且有超过70%以上的猪群感染。
从美国国家猪病报告系统（SDRS ）2020—2022年的统计数据来看，猪场猪肺炎支原体整体阳性率在10%～30%左右，母猪场和育肥场阳性率差异不大。
阳性率随季节变化而波动，每年的9—12月是肺炎支原体阳性率较高的季节，如图1所示。
对于母猪来说，感染率随着胎次的增加而下降，头胎次占73%，2～4产次为42%，6～7产次为50%，而8～11产次为6% 。
因此，猪场的保育猪、育肥猪和后备种猪是防控猪支原体肺炎的关键群体。
2 猪肺炎支原体疫苗是否需要免疫关于猪肺炎支原体疫苗是否需猪肺炎支原体疫苗的免疫策略及效果评价张择扬 1，张 军 2（法国诗华动物保健公司，北京 100102）图1 不同日龄阶段猪群肺炎支原体阳性率变化曲线（SDRS 2020—2022）图2 不同感染压力的猪场免疫建议（D. Maes ）要免疫，一直是个有争议的话题。
赞同的观点认为猪肺炎支原体危害巨大，是其他呼吸道病原的“共犯”，要坚决堵死防疫漏洞，必须免疫。
而反对的观点则认为自己的猪场支原体的感染压力看上去不大，也不知道如何评估；另一方面认为就算投资进行猪肺炎支原体免疫，也不知道怎么去看免疫效果。
对于猪场支原体是否免疫，全球著名支原体专家Dominiek Maes 给出了他的答案，他认为这取决于猪群的感染压力。
猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较
目录猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录2猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表11附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表13附录6 抗体检测记录表14附录7 淋巴细胞增殖试验结果16附录8 血象分析17附录9 T淋巴细胞分类计数18附录10 黏膜抗体检测记录表19附录11攻毒记录单20附录12特殊情况记录表21附录13 攻毒后临床症状观察记录表22附录14日增重记录24附录15 攻毒后肺部剖检记录26附录16攻毒后剖检记录28附录17 攻毒后肺部病理损伤记录30附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测32猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺内注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、吉林正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由江苏省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
B.猪支原体肺炎活疫苗（168株），由南京天邦生物科技有限公司提供，规格为50头份/瓶，批号为139078-1。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
C.猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株），由吉林正业生物科技有限公司提供，规格为4头份/瓶，批号为2014002。
211088012_猪圆环支原体二联疫苗临床免疫效果的评估
50猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2023年40卷第3期主题策划F E A T U R E猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2，PCV2）感染可导致种猪繁殖障碍以及生长育肥猪生长缓慢、日增重降低、料重比升高，并发其他疾病，导致死亡率增加等。
猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae ，M.hyo ）遍布世界上绝大部分养猪国家，是猪呼吸道综合征（PRDC ）的原发性病原之一，可造成养猪生产严重的经济损失。
疫苗免疫是控制这两种疾病的最重要手段，PCV2与M.hyo 两种疫苗免疫时间接近，免疫持续期要求类似（越长久越好）。
圆支二联疫苗可以减少注射次数，节省劳力，降低猪的应激，有利于生物安全管理。
本试验对猪圆环支原体二联疫苗免疫的猪群进行跟踪，综合生产数据、实验室检测以及屠宰场评分等评估其安全性和有效性。
1 材料与方法1.1 试验动物及材料选择猪蓝耳病和猪伪狂犬病均为阴性的规模猪场中3周龄健康、体重相近的断奶仔猪240头为试验动物开展试验。
试验用疫苗：A 厂家圆环灭活疫苗，法国诗华猪圆环支原体二联疫苗（诗圆静®，2 mL/ 头份）。
猪圆环支原体二联疫苗临床免疫效果的评估吴丽艳 1，全雪容 1，张冰洁 1，申世川 2，赵永旭 3，戴江河 2，齐小东 2，秦 云 2，张 军 2（1.佳和农牧股份有限公司，湖南 长沙 410016；2.法国诗华动物保健公司，北京 100102；3.诗华SSIU ，浙江 杭州 310018）作者简介：吴丽艳（1981—），女，佳和农牧股份有限公司，中级兽医师，硕士，主要从事养猪生产模式优化和生产操作以及丹系母猪饲养管理研究，E-mail ：***************1.2 试验设计与分组将240头断奶仔猪，随机分为2个组，每组120头。
对照组在3周龄肌注A 疫苗1头份；试验组在3周龄肌注2 mL 诗圆静®（圆支二联疫苗）。
4种猪支原体肺炎疫苗免疫效果的对比研究
保育出栏重分析。各试验组保育均重差异性不显著， 最大为疫苗B组，其大小为疫苗B组>疫苗A组>疫苗C组>疫 苗D组>空白对照E组。空白对照组，免疫生理盐水，其均 重最低，同最高的疫苗B组相差了1.12 kg，且其95%置信区 间最宽、变异系数最大，说明其均匀度相对其他疫苗组较 差[3]。
Copyright©博看网 . All Rights 20R18e.s19e·rved.
11
Experimental research | 试验研究
表1 不同支原体疫苗对保育出栏重的影响
组别
疫苗A
疫苗B
疫苗C
疫苗D 空白组E
头数
85
91
89
83
40
12.74a± 均重/kg
1 试验方法
1.1 试验动物及分组 选一栋产房（50头母猪）同期分娩仔猪，每窝选出9头
仔猪（共450头），初生重不低于1 kg，随机分成A、B、 C、D、E5个组，A、B、C、D为疫苗组，每个组100头仔 猪，每窝分别2头；E为对照组，共50头仔猪，每窝1头。免 疫前按要求打好耳缺并加打双耳牌，标识分别为A1-100、 B1-100、C1-100、D1-100、E1-50，以区别不同的组别。 1.2 疫苗
每组随机抽取10头试验动物于出栏前（180日龄）屠 宰，根据MADEC评判标准进行盲评并记录。根据肺部损伤 面积百分比率，将0～10%记为1分；11%～20%记为2分； 21%～30%记为3分；31%～40%记为4分，41%～50%记为5 分，统计每个试验猪肺部病变指数，用统计学方法进行分 析。
猪支原体肺炎活疫苗与灭活苗比较分析
大提 高 了疫 苗 的免 疫 原性 。瑞 富 特应 用 Ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｐ ｏ ｌ 水 质佐
剂 ，它是 一种 交 联的 丙烯 酸 聚合 物 ，具 有 ５项 主要 功 能 ： ①有 效浓 缩 抗 原 ；② 使 不溶 的成 分 持 久 悬 浮 ；③使 水 包
毒 活疫苗和灭活苗的优缺 点进行比较分析 ，以期为猪肺 体产 生较 强 的体液 和 细胞 免疫 应答 。 瑞 富特 灭活 苗 由美 国辉 瑞 公 司生 产 ，选 用二 乙 烯 亚 胺 （ Ｂ Ｅ Ｉ ）作 为 灭活 剂 ，使 Ｐ ９ ７ 蛋 白暴 露 出来 （ Ｐ ９ ７ 蛋白 被普 遍 认 为是 保护 性 抗原 ） ，可 诱 导机 体 产生 更 好 的局部
和 双 重 佐 剂 的 疫 苗在 田 间显 示 出对 猪支 原 体 肺 炎 较为 理
产的 “ 茵格发” ， 西班牙海博莱公司生产的 “ 喜可舒”等，
这 些疫 苗 都 是 利 用新 型佐 剂 研 制 成 功 的 猪肺 炎 支 原 体 灭
想 的控制效果。现仅从以下几个方面对猪肺炎支原体 弱 活疫苗 ， 并进行 了商 品化生产 ， 其共 同点是可以刺激机
猪 支原体肺 炎活疫 苗 与灭活 苗比较分析
王 留 ／河南 商丘 职业 技 术学 院动 物工 程系
猪支 原 体肺 炎是 由猪肺 炎支 原 体 引起 的 一 种慢 性 呼 而 对 照组全 部发 病 。 吸道传染病 ， 又 称 猪 气 喘病 和 猪地 方 流 行 性 肺 炎 ， 广 泛 猪肺 炎支 原 体 １ ６ ８ 株 无细 胞 弱毒 苗于 ２ ０ ０ ６ 年 由江苏 流 行 于 世 界 各 养 猪 国家 和 地 区 ， 是 一 种 顽 固性 慢 性 传 染 省 农 科 院 兽 医研 究所 和 南 京 天 邦生 物 科 技 有 限 公 司研 制
评价猪支原体肺炎疫苗使用效果的4个方法，您知道吗？
评价猪支原体肺炎疫苗使用效果的4个方法，您知道吗？一、临床观察通过试验猪的临床症状记录，对对照组猪群和试验组猪群的发病情况和副反应情况进行比较，主要记录咳嗽指数和过敏反应两个指标。
（1）咳嗽指数统计方法：以典型的连续性干咳为统计目标，测定咳嗽指数，方法如下：对每栋猪舍的猪进行随机选择（以栏为单位），通过喊叫、拍手和惊吓三分钟后的一段时间观察，咳嗽十秒后不再咳嗽，计下咳嗽数。
对同一批猪，重复一次，并以同样的方式对另一批猪进行测试；或对每栋猪舍的猪进行随机选择（以栏为单位），通过喊叫、拍手和惊吓三分钟后的一段时间观察，计下连续性干咳猪头数，对同一批猪间隔一周后重复计数，计算平均值。
平均咳嗽指数=咳嗽猪的数量/总检测的猪数×监测总时间。
（2）过敏反应数：免疫后一天内出现呕吐、呼吸困难、抽搐、精神委顿、食欲减退的猪只数，不同症状出现在同一猪只时，不重复计数。
免疫过敏反应率=过敏头数/免疫头数×100%；二、生产性能记录免疫组和对照组各阶段均重和饲料消耗量等指标或从对照组猪群和试验组猪群中抽样进行检查测定其出栏体重和饲料消耗量等指标，比较对照组猪群和试验组猪群生产性能，关键参数如下：（1）断奶均重=断奶总重/断奶头数；（2）免疫到断奶死亡率=[（免疫头数－断奶头数）/免疫头数]×100%（3）保育转育肥均重=转育肥总重/转育肥头数；（4）保育期平均日增重=（保育转育肥均重－断奶均重）/保育期天数。
（5）保育期料肉比=保育期料耗/转育肥总重（6）保育期死淘率=[（断奶头数－转育肥头数）/断奶头数]×100%（7）出栏均重=出栏总重/出栏头数（8）育肥期料肉比=育肥期料耗/出栏总重（9）育肥期平均日增重=(出栏总重－转育肥总重）/育肥天数（10）育肥期死淘率=[（转育肥头数－出栏头数）/转育肥头数]×100%（11）全程料肉比=全程料耗/出栏头数（12）全程死淘率=[（免疫头数－出栏头数）/免疫头数]×100%（13）全程药费三、观察肺部病变每个猪场在猪出栏后跟踪到屠宰场按屠宰顺序进行抽样，从对照组和试验组中各抽样10头，观察屠宰后肺部病变，根据Madec F和Kobisch M评判方法记录左尖叶、左心叶、左膈叶、右尖叶、右心叶、右膈叶、副叶病变百分比率，将0～25%记为1；26～50%记为2；51～75%记为3；76～100%记为4，统计每个试验猪肺部病变指数（最高为28）。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4 疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5 疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6 疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7 疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表10附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表12附录6 抗体检测记录表13附录7 淋巴细胞增殖试验结果15附录8 血象分析15附录9 T淋巴细胞分类计数15附录10 黏膜抗体检测记录表15附录11攻毒记录单15附录12特殊情况记录表16附录13 攻毒后临床症状观察记录表17附录14日增重记录18附录15 攻毒后肺部剖检记录20附录16攻毒后剖检记录22附录17 攻毒后肺部病理损伤记录24附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测26猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
B.猪支原体肺炎活疫苗（168株），由天邦生物科技提供，规格为50头份/瓶，批号为139078-1。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
C.猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株），由正业生物科技提供，规格为4头份/瓶，批号为2014002。
有效期：_20150110__D.猪支原体肺炎灭活疫苗（P-5722-3株，Suvaxyn RespiFend MH），由硕腾（辉瑞）提供，规格为50头份/瓶，批号为1302777A。
有效期：15/11/16_2.1.1.2 试剂A．猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株）稀释液,批号：2014002；有效期：20170115 B．猪支原体肺炎雾化活疫苗稀释液C．猪支原体肺炎肌注活疫苗佐剂G-1-12.1.2动物选择猪肺炎支原体抗体、抗原均阴性的5-10日龄仔猪，54头.饲养地点：省农科院兽医所饲养员：_徐飞扬，才__仔猪免疫状况：未打气喘病疫苗。
2.1.3 动物饲料仔猪料:2.1.4 设备气雾免疫设备、滴鼻头、20（10、5、2）ml注射器、耳标、耳号钳、冰盒、相机、解剖器械、离心管。
2.1.5攻毒用强毒猪肺炎支原体强毒JS株组织强毒，来自本所，批号20130625，-20℃保存，有效期至：2014/06/25。
2.2方法2.2.1动物分组说明G1:-猪支原体肺炎活疫苗168株肺免疫组。
每头猪肺注射免疫1头份（1ml）即1×107 CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。
免疫一次，一免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G2: -猪支原体肺炎活疫苗AN306株肺免疫组。
每头猪肺注射免疫1ml，即1×107CCU的猪支原体肺炎活疫苗AN306株。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G3: -猪支原体肺炎活疫苗168株气雾免疫组。
每头猪气雾免疫5×107CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G4:-猪支原体肺炎活疫苗168株肌注免疫组。
每头猪肌肉注射免疫5×107 CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。
首免后两周二免，一免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G5: -猪支原体肺炎灭活疫苗肌注免疫组。
每头猪肌肉注射免疫1头份(2ml)猪支原体肺炎灭活疫苗。
首后2周，加强免疫一次，首免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G6:-猪支原体肺炎乳兔活疫苗胸腔免疫组。
每头猪胸腔注射免疫1头份（5ml）猪支原体肺炎乳兔活疫苗。
免疫一次，一免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G7: -猪支原体肺炎乳兔活疫苗滴鼻免疫组。
每头猪滴鼻免疫？头份猪支原体肺炎乳兔活疫苗。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G8: -健康对照组（不免疫，不攻毒）。
不接种疫苗。
不攻毒，其它组攻毒后28天剖杀。
G9: 攻毒对照组（不免疫，只攻毒）。
不免疫疫苗，只攻毒，攻毒后28天剖杀。
2.2.2动物分组与试验操作概表2.2.3免疫G1—猪支原体肺炎活疫苗168株肺免疫组用灭菌生理盐水50ml溶解168活疫苗冻干粉1瓶，使活疫苗终浓度为1×107 CCU/ml，1头份/ml。
每头猪肺免疫1ml，即1×107 CCU/头。
G2—猪支原体肺炎活疫苗AN306株肺免疫组用灭菌生理盐水溶解AN306活疫苗冻干粉，使活疫苗终浓度为1×107CCU/ml。
每头猪肺免疫1ml，即1×107 CCU/头。
G3: -猪支原体肺炎活疫苗168株气雾免疫组。
将1瓶168株活疫苗用5ml无菌猪支原体肺炎雾化活疫苗稀释液溶解稀释成1×108CCU/ml浓度，取5ml疫苗溶液倒入喷雾器，对保温箱中的6头仔猪进行气雾免疫（0.2MPa，约10min）。
G4:-猪支原体肺炎活疫苗168株肌注免疫组。
将1瓶168株活疫苗用25ml佐剂G-1-1溶液稀释成2×107CCU/ml浓度，每头仔猪颈部肌肉注射免疫2.5ml，注射时分左右侧肌肉共2个注射点。
首免后14天二免，方法同上。
G5: -猪支原体肺炎灭活疫苗肌注免疫组。
按猪支原体肺炎灭活疫苗说明书，每头猪肌肉注射免疫1头份猪支原体肺炎灭活疫苗。
G6:-猪支原体肺炎乳兔活疫苗胸腔免疫组。
按猪支原体肺炎乳兔活疫苗说明书，每头猪胸腔免疫1头份猪支原体肺炎活疫苗。
G7: -猪支原体肺炎乳兔活疫苗滴鼻免疫组。
每头猪滴鼻免疫？头份猪支原体肺炎乳兔活疫苗。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G8—健康对照不免疫G9—攻毒对照不免疫2.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录免疫后观察并记录可能出现的临床症状，填写附录3。
尤其要记录如下重要的症状：咳嗽、呼吸困难、俯卧、呕吐、食欲不振、震颤、死亡等2.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测除攻毒对照组外，其余各组于免疫前、免疫后2、4、6周取3头猪各采血1ml（两次免疫组于首免前、首免后3、4、6周采血），分离血清，用自制P46-ELISA试剂盒检测IgG抗体。
对于阳性者继续用分型试剂盒检测IgG亚类。
2.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测除攻毒对照组外，其余各组于首免后2、4、6周取3头猪各采集抗凝血5ml（两次免疫组于免疫后3、4、6周采血），其中1ml用于血液生化检测；1ml用流式细胞仪检测CD4+T细胞、CD8+T 细胞含量、CD4+CD8+双阳性细胞、CD4+/CD8+比率；另外3ml用于淋巴细胞增殖试验和IFN-γ检测2.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测除攻毒对照组外，其余各组于免疫前、首免后7、14、21、28、35、42天采集鼻拭子样品，检测吸呼道特异性sIgA抗体。
2.2.8攻毒将每瓶猪肺炎支原体组织强毒用50ml生理盐水稀释，气管途径接种试验组试验猪，每头5ml。
2.2.9攻毒后临床症状观察所有猪在攻毒后按附录2要求观察临床症状2.2.10日增重计算各组分别选定3头猪，不采集血样，分别于首免当天、攻毒当天和剖杀当天称重，计算日增重。
2.2.11攻毒后肉眼病变剖检所有仔猪在攻毒后的第28天进行宰杀，记录肺病变，用28分法统计确定肺病变程度，并记算攻毒保护率（见附录1）。
2.2.12攻毒后病理损伤观察剖杀后，采集所有猪左尖叶，福尔马列林溶液固定后，切片观察病理损伤。
2.2.13攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测剖杀后，每头猪用50ml生理盐水采集肺泡灌洗液，用定量PCR方法检测猪肺炎支原体抗原。
附录1 攻毒保护率计算攻毒保护率的统计与评判：试验猪扑杀后，分别记录左尖叶、左心叶、左膈叶、右尖叶、右心叶、右膈叶、副叶病变百分比率，将0～25%记为1；26～50%记为2；51～75%记为3；76～100%记为4，统计每个试验猪病肺病变指数（最高为28）。
试验猪病变指数大于10判为发病，小于4为健康（排除猪肺炎支原体感染），根据肺病变指数，按以下公式计算试验猪攻毒保护指数。
试验猪攻毒保护指数＝（攻毒不免疫对照组肺病变指数平均值－试验猪肺病变指数）/（攻毒不免疫对照组肺病变指数平均值－不攻毒不免疫对照组肺病变指数平均值）％试验猪攻毒保护指数小于60％为无保护，大于或等于60％为有保护，再按以下公式计算试验猪攻毒保护率。
试验猪攻毒保护率＝有保护试验猪数/试验猪数试验在阳性对照组全部发病、阴性对照组至少全部健康时有效。
附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准评判参数0 1 2 10 最高分咳嗽无有严重 2呼吸困难无有严重 2呕吐无有严重 2俯卧无有严重(躺卧) 2食欲不振无有 1震颤无有 1死亡无有10 注射后第1日(D1)直肠温1.0℃以下 1.0℃～1.5℃ 1.5℃以上 2度高出围注射后第2日(D2)直肠温1.0℃以下 1.0℃～1.5℃ 1.5℃以上 2度高出围注射后第3日直肠温度较0.5℃以下0.5～1.0℃ 1.0℃以上 2对照组高出围累计总分28猪安检试验中，每头试验猪症状全部累计，总分不大于2判为安全，累计总分大于5判为不安全，累计总分2～5，可重检1次，重检累计总分不大于2安全。
附录3动物分组记录表附录4动物免疫记录表操作人: 复核人：附录5免疫后异常临床症状观察记录表组：猪数：附录6 抗体检测记录表附录7 淋巴细胞增殖试验结果附录8 血象分析附录9 T淋巴细胞分类计数附录10 黏膜抗体检测记录表附录11攻毒记录单攻毒株: 批号：来源：稀释液：批号：来源：操作人：复核人：附录12特殊情况记录表－如有特殊情况，比如转群，疾病，用药，换料等影响动物的事件。
填写“附录12: 特殊情况记录”注：试验负责人员（SGQ, LMJ）应定期现场核查饲养情况，以及攻毒后的临床症状等，并在临床观察以及饲养记录上签字及日期。
及时将原始数据传递至JAAS，便于沟通。
附录13 攻毒后临床症状观察记录表附录14日增重记录附录15攻毒后肺部剖检记录附录16攻毒后剖检记录日期：操作人：复核人：附录17攻毒后肺部病理损伤记录附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测。