结核分枝杆菌及其试验室诊断新技术
结核分枝杆菌实验室检测产品和技术应用进展
目前，结核分枝杆菌检测方法主要包括菌种培养、显微镜检查、分子生物学 技术和免疫学技术等。菌种培养是诊断结核病的金标准，但培养周期长、操作繁 琐，不适用于早期快速诊断。显微镜检查可观察到痰液中结核分枝杆菌的形态， 但灵敏度较低。分子生物学技术如聚合酶链反应（PCR）等具有高灵敏度、快速 等优点，但设备昂贵、操作复杂。免疫学技术如酶联免疫吸附试验（ELISA）等 具有良好的特异性，但易受交叉反应影响。
3、代谢热谱技术代谢热谱技术是一种通过测定样品代谢过程中产生的热量， 实现对目标分子检测的方法。近期，有研究团队利用代谢热谱技术成功检测出结 核分枝杆菌，并初步探讨了不同菌种对热谱的影响。该方法具有无损、快速等优 点，有望为结核病的早期诊断和耐药性分析提供新途径。
三、结论
结核分枝杆菌快速检测方法在近年来取得了显著进展，但仍存在不足之处。 现有的方法在灵敏度、特异性、操作简便性和成本等方面仍需进一步优化。为了 有效控制结核病传播，未来的研究应着重以下几个方面：
3.市场应用前景和政策因素对技 术发展的影响
随着全球结核病疫情的加剧和对结核病诊断与治疗的需求增加，预计未来将 有更多的创新技术在结核分枝杆菌实验室检测领域得到应用和推广。此外，政策 因素也将对技术的发展和应用产生重要影响，如政府对相关研究和开发的支持、 对新技术的引进和推广的政策倾斜等。
总之，结核分枝杆菌实验室检测产品和技术应用进展在提高诊断效率和准确 性、降低检测下限和提升阳性结果的准确率等方面取得了显著成果。未来，随着 传统技术的不断改进和现代技术的不断创新，预计将在结核病的早期诊断、治疗 和预防控制等方面发挥更加重要的作用。
2、生物传感器技术生物传感器是一种将生物分子识别元件与转换元件结合， 用于检测目标分子的分析装置。在结核分枝杆菌检测方面，生物传感器技术显示 出巨大潜力。一种新型的生物传感器可通过电化学信号转换，实现对结核分枝杆 菌的高效检测。该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好等优点，有望实现结 核病的床旁快速诊断。
结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术ppt课件
郑州大学第一附属医院 结核病防控的三大手段
结核病
临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征
世界防治结核病日 3月24日
郑州大学第一附属医院 结核病是由结核分枝杆菌引起的。 。
结核分枝杆菌
Robert Koch（1843-1910） 1882年发现结核分枝杆菌， 1905年获得诺贝尔生理或 医学奖。 Ziehl-Neelsen 染色法 （分枝杆菌抗酸染色的基础）
3. 生化反应
不发酵糖类 ，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性
郑州大学第一附属医院 4. 抵抗力
结核分枝杆菌
四不怕 四怕 乙醇 干燥 湿热 碱性染料 紫外线 青霉素等抗生素 抗痨药物 对酸或碱有抵抗力 （异烟肼、利福平等） （3% HCl或6% H2SO4、4% NaOH）
5. 变异性
形态结构变异： 结核杆菌的L型：颗粒状、丝状 毒力变异： 卡介苗BCG：Calmette和Gué rin 牛分枝杆菌 13年230次 耐药性变异： 耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多
郑州大学第一附属医院
检测过程与结果判断
实验室诊断新技术
空白对照
抗原 A 抗原 B
阳性对照 （PHA）
阴性 结果
阳性 结果
郑州大学第一附属医院
实验室诊断新技术
T.SPOT.TB特点： 特异性好，不受卡介苗（BCG）接种和环境分枝杆菌影响 敏感度高，在免疫力பைடு நூலகம்下/受抑制人群中有很高的检出率 快速，24小时报告结果 T.SPOT.TB 检测的敏感度和特异性 美国FDA认证临床实验数据
郑州大学第一附属医院
实验室诊断新技术
（四）蛋白分子诊断技术-γ-干扰素释放实验
（IGRA，interferon- gamma release assay）
ELIspot技术检测结核分枝杆菌感染检测原理
ELIspot技术检测结核分枝杆菌感染检测原理检测原理是：机体感染结核分枝杆菌后，存在于血液中的特异性效应T淋巴细胞会在再次接触结核分枝杆菌特异抗原时，产生和分泌IFN-γ，通过检测能够释放IFN-γ的T淋巴细胞数量，用于结核分枝杆菌感染及结核病的辅助诊断。
该检测方法相对于结核菌素试验，具有更高的特异性。
由于结核菌素试验中用的结核菌素是从结核分枝杆菌中提取的非种属特异的性分子，因此存在与卡介苗（BCG）的交叉，接种过BCG的人群即使没有感染结核也可能会出现结核菌素试验阳性。
而ELIspot检测所用的结核分枝杆菌特异抗原与BCG抗原无交叉，不受BCG接种的影响，未接种BCG和接种BCG的人群均可用该法进行结核病感染的筛查和结核病的辅助诊断。
目前应用的ELIspot检测试剂盒是由英国Oxford Immunotec公司生产的T-SPOT®TB试剂盒。
其检测方法如下：1.抗体包被将适量人IFN-γ抗体预先包被于96孔ELIspot板上。
2.标本采集及准备采集8小时内的肝素抗凝血，用Ficol离心分离外周血单核细胞（PBMC），用细胞培养液洗涤2次后，重悬于细胞培养液中。
3.细胞计数及稀释用台盼蓝染色计数法对PBMC细胞悬液计数，将细胞悬液浓度调整至2.5×105个细胞/100μl。
4.抗原刺激及孵育每个待检样本均需设阳性对照孔、阴性对照孔和检测孔。
阳性对照孔加入植物血凝素（PHA）作为阳性刺激抗原，阴性对照孔不加任何抗原刺激，检测孔加入结核特异性抗原。
若有几个特异性抗原进行分别刺激，检测孔可根据需要设置多个孔。
向阳性、阴性对照孔及检测孔内各加入100μl的PBMC细胞悬液，将ELIspot板置于37℃5%CO2培养箱内静置孵育16～20小时。
孵育期间不能移动ELIspot板，必须保证板静置不动。
5.斑点显色及计数弃除板内的细胞培养液，每孔加入200μl的PBS缓冲液洗涤3～5次，弃净板内的液体，向每孔加入100μl稀释好的生物素标记抗体，37℃孵育1小时。
肺结核实验室诊断方法创新研究
肺结核实验室诊断方法创新研究肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，它主要侵害肺部，但也可能侵害其他器官。
目前，肺结核的实验室诊断主要依靠病原学检测方法，如结核杆菌培养和PCR技术。
这些方法存在一些局限性，如长时间的培养周期、低检出率和高成本。
需要开展肺结核实验室诊断方法的创新研究，以提高诊断效率和准确性。
一种创新的肺结核实验室诊断方法是免疫学检测。
该方法基于结核杆菌感染后机体产生的免疫反应，通过检测病人的血清中特定抗体或细胞因子来诊断肺结核。
免疫学检测具有操作简便、快速、敏感性高和特异性强的优点。
目前已有一些免疫学检测方法在临床上得到应用，如结核抗原结合试验（T-SPOT）和干扰素-γ释放试验（IGRA）。
这些方法仍存在一些问题，如复杂的操作步骤和高成本。
需要进一步开展研究，改进已有的免疫学检测方法，提高其诊断效果。
除了免疫学检测，分子生物学方法也是肺结核实验室诊断的一个重要研究方向。
分子生物学方法包括PCR、DNA杂交和基因序列分析等技术。
这些方法基于结核分枝杆菌的基因组特征，可以直接检测结核杆菌的存在和种属。
与传统的培养方法相比，分子生物学方法具有快速、敏感性高和特异性强的优势。
部分分子生物学方法仍存在一些问题，如对样本处理要求较高、操作复杂和分析时间较长。
需要进一步改进已有的分子生物学方法，提高其诊断效率和准确性。
人工智能技术也可以应用于肺结核实验室诊断的创新研究。
人工智能技术可以通过对大量病例数据的学习和分析，建立肺结核的诊断模型。
这些模型可以根据病人的临床信息和实验室检测结果，预测肺结核的发病风险和诊断结果。
人工智能技术具有较高的自动化水平和准确性，可以减少人工判断的主观性和误差。
人工智能技术在肺结核实验室诊断中具有广阔的应用前景。
肺结核实验室诊断方法的创新研究是提高肺结核诊断效率和准确性的关键。
免疫学检测、分子生物学方法和人工智能技术都是该领域的热点研究方向。
未来，我们可以通过进一步开展研究，改进已有的实验室诊断方法，并结合多种技术手段，以提高肺结核的早期诊断率和治疗效果。
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
实验室新技术用于耐药结核病诊断流程的建议
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肺结核实验室诊断方法创新研究
肺结核实验室诊断方法创新研究肺结核是一种常见的传染病，严重影响了人们的健康和生活质量。
早期诊断和治疗对于疾病的控制和防治具有重要意义。
为了提高肺结核的诊断水平，不断创新和发展实验室诊断方法是非常必要的。
本文主要介绍肺结核实验室诊断方法创新研究的相关内容。
一、传统实验室诊断方法1.痰涂片法：痰涂片法是一种传统的肺结核诊断方法，其原理是通过显微镜观察痰样本中的结核分枝杆菌，从而诊断肺结核。
但是，该方法的缺点是需要高度技术人员，且存在较高的漏诊率和误诊率。
2.结核菌抗原检测：结核菌抗原检测是通过检测患者血清或痰液中的结核菌抗原来诊断肺结核，其优点是快速、简单、易于操作，但其准确性有待提高。
3.结核菌DNA检测：结核菌DNA检测是通过PCR技术检测痰中的结核菌DNA，因其快速、敏感、特异性高等优点，已经成为肺结核的重要检测手段之一，但该方法的局限性是对操作人员有较高的技术要求。
以上三种方法都有一定的缺陷，如漏诊、误诊等，所以需要不断创新和发展实验室诊断方法。
1.核酸纳米探针技术：该技术是基于纳米技术和核酸技术的结合，能够检测低浓度的结核分枝杆菌，具有快速、灵敏度高、特异性强等优点，是肺结核的新型检测手段。
2.蛋白质组学分析：蛋白质组学分析是一种全面研究生物体内蛋白质表达和调控的方法，可以发现新的生物标志物，从而提高肺结核的诊断准确性和鉴别诊断能力。
3.微流控技术：微流控技术是最近几年发展起来的一种新型技术，通过微小化、可控制的流体流动来实现生物分析的高通量和高灵敏度，可用于快速、准确地检测肺结核病原体。
4.支持向量机算法：支持向量机算法是一种人工智能算法，能够分类和预测数据，已被应用于医学领域，可以通过数据挖掘发现新的生物标志物，为肺结核的诊断和治疗提供更准确的数据支持。
三、结语随着生物技术的发展和人工智能算法的应用，肺结核的实验室诊断方法正不断创新和发展，其准确性和效率不断提高，为病人提供更好的医疗服务。
结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析
结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析快速准确地诊断出结核分枝杆菌感染是控制和治疗结核病的前提和关键。
多年来，结核杆菌的诊断技术在不断地发展和创新，近年来，一些针对结核杆菌检测的新方法陆续被报道，一些新型的诊断技术产品也陆续上市。
本资料综述了结核杆菌的主要诊断方法，并对目前国际市场上广泛应用的商业化诊断技术产品进行了简要分析。
标签：结核分枝杆菌；诊断技术；分析Advance in diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis and analysis of new diagnostic technologies and products in clinical applicationFENG?Meimei1??SU?Wenqin21.Haikou VTI Biological Institute,Haikou 570311,China;2.Department of Pharmacy,Hainan Medical College,Haikou 571199,China[Abstract] Fast and accurate diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection is the key and prerequisite to control and treatment tuberculosis.For many years,the diagnostic techniques of Mycobacterium tuberculosis have been developing and innovating.In recent years,some new techniques for Mycobacterium tuberculosis detection were reported and some new diagnostic products have been listed.This paper reviewed the main diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis,and analysed briefly the commercialized diagnostic products which are used widely in the international market now.[Key words] Mycobacterium tuberculosis;Diagnosis;Analysis结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）是引起结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，以肺结核最多见。
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结核病
影响流行的因素 自然因素 季节、环境、居室通风 社会因素 社会、经济、医疗服务 其他因素 ，
郑州大学第一附属医院 结核病防控的三大手段
结核病
临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征 世界防治结核病日
月日
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阳性 结果
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实验室诊断新技术
特点： 特异性好，不受卡介苗（）接种和环境分枝杆菌影响 敏感度高，在免疫力低下受抑制人群中有很高的检出率 快速，小时报告结果
检测的敏感度和特异性 美国认证临床实验数据
经培养确诊的结核病患者样本例 敏感度 ()
例入伍新兵 国内临床实验数据
特异性 ()
确诊病例
痰液预处理
提取
稀释液
°
恒温扩增
°
°
实时检测
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检测的敏感度和特异性
检测结果 阳性 阴性
合计 ? 敏感度× ? 特异性× ? 准确度() ×
实验室诊断新技术
培养鉴定结果结果
阳性
阴性
合计
恒温扩增技术
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实验室诊断新技术
（四）蛋白分子诊断技术 γ干扰素释放实验
（， ）
结核感染者体内存在特异的效应淋巴细 胞，效应淋巴细胞再次受到结核抗 原刺激时会分泌多种细胞因子（ γ）
由于效应细胞存活时间很短，而且具有 特异性，因此可以作为机体是否正 处于被感染的指标，无论是否有临 床症状。
基于原理的产品目前已被美国、加拿大、 英国、德国、法国、日本等二十余 个国家写入本国的结核诊疗指南中
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检测过程与结果判断
实验室诊断新技术
空白对照
抗原 A
抗原 B
阴性 结果
阳性对照 （PHA ）
后来，西方的一些科学家发现这类病人的肺内有一个个坚实的团块， 摸上去像土豆或花生这类植物的根上块茎，就将该病称之为，即结节的意 思，这就是结核病命名的由来。
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《黄帝内经素问》： “大骨枯稿，大肉陷 下。胸中气满，喘息 不便，内痛引肩项， 身热，脱肉破腘。”
结核病
《红楼梦》：香魂一缕随风散，愁绪?三更入梦遥。 虽然说《红楼梦》 与医学无关，但其作者笔下的“痨病”代表林黛玉却惊动全世界。
耐药性变异：
耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多
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结核分枝杆菌
（二）致病性 与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）
致
荚膜
含多种酶（分解利用营养物质） 保护（阻止有害物质的进入菌体）
病
索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿） 磷脂（形成结核结节）
物
脂质 硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）
结核分枝杆菌
结核病是由结核分枝杆菌引起的。 。
（） 年发现结核分枝杆菌，年 获得诺贝尔生理或医学奖。
染色法 （分枝杆菌抗酸染色的基础）
() （）
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结核分枝杆菌
（一）生物学性状 .形态与染色
细长略带弯曲，分枝状，有荚膜，抗酸染
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结核分枝杆菌
. 培养与生长特性 特点 专性需氧 生长缓慢 营养要求高，常用罗氏培养基 生长现象 液体：表面生长（菌膜） 固体：颗粒、结节、花菜状菌
落. 生乳化不白反发或应酵米糖黄类，不，透触明酶试验阳性，而热触酶试验阴性
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结核分枝杆菌
. 抵抗力
四怕
四不怕
乙醇
干燥
湿热
碱性染料
紫外线
青霉素等抗生素
抗痨药物
对酸或碱有抵抗力
（异烟肼、利福平等）
（或、）
. 变异性
形态结构变异：
结核杆菌的型：颗粒状、丝状
毒力变异：
卡介苗：和é 牛分枝杆菌 年次
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结核分枝杆菌 及其实验室诊断新技术
赵俊伟（, 主管技师） 联系方式：
郑州大学第一附属医院 检验科 河南省检验医学重点实验室 年月 中国 郑州
郑州大学第一附属医院 结核病又称为痨病和白色瘟疫。
结核病
公元三世纪以前，我国古代医学还只是认识到该病可能是一种极为严 重的慢性传染病，“累年积月，渐就顿滞，以至于死，死后复转旁人，乃 至灭门”。以后逐渐认识到这是一种“肺痨”，其病因为“痨虫”所致。
上世纪年代，美国细菌学家杜博斯所写的《 》(白色瘟疫)，就曾提 到了林黛玉的肺结核，可见在当时《红楼梦》中林黛玉的病症已是结核病 的典型症状。
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结核病
结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。
年全球结核病发病率 （世界卫生组织年结核病报告）
第二节 流行病特征
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试验组
对照组
阳性
阴性
合计
灵敏度；特异性；准确性
合计
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敬请各位专家批评指正！
题目 结核分枝杆菌 及其实验室诊断新技术
郑州大学第一附属医院检验科 / 河南省检验医学重点实验室 赵俊伟 2015年12月
质
蜡质（引起迟发性过敏反应）
蛋白质 引起迟发性过敏反应
感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体 所致疾病 结核病，以肺结核常见
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结核分枝杆菌
（三）免疫性
. 机体抗结核免疫特点：传染、免疫、超敏反 应共存
. 属于感染免疫 ( )，又称有菌免疫
. 细胞免疫为主，迟发型超敏反应同时存在
. 郭霍现象: 注射结核杆菌于豚鼠皮下
初次注射 局部反应小 全身扩散 无免疫 无超敏反应
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实验室诊断新技术
（一）传统微生物学检查
痰液等
标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理） 直接镜检：抗酸染色 分离培养：培养基、时间（周后见结果）
直接涂片
分离培养
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（二）技术
,,,.
实验室诊断新技术
. 技术 （仁度）
作为临床分子诊断靶标的优点 拷贝数≥ 拷贝数 更具临床意义 生命力旺盛的病原体转录活跃 远不如稳定 病原体死亡，很快降解 .交叉污染少 .较好的愈后指标
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技术原理
实验室诊断新技术
恒温扩增技术
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ห้องสมุดไป่ตู้操作步骤
实验室诊断新技术
超声仪（）
. , , (): .
实验室诊断新技术
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实验室诊断新技术
（三）核酸分子诊断技术 和
菌种鉴定
异烟肼 利福平 乙胺丁醇 吡嗪酰胺 链霉素 喹诺酮类药物
、、、、、
、 、
, . , , (): . , . , , (): .
靶基因
郑州大学第一附属医院 .
实验室诊断新技术
.
基因水平技术
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