结核病实验室要求
结核病实验室要求
结核病实验室要求结核病实验室是一种特殊的实验室，其主要任务是检测和诊断结核病。
为了确保安全和高效的运行，结核病实验室有一些特殊的要求，本文将介绍这些要求。
以下是本文的内容：1. 实验室环境要求结核病实验室应具备良好的环境条件，包括适宜的温度（20℃-26℃）和湿度（45%-60%）。
实验室内应保持干净整洁，防止尘埃和污垢对实验结果产生干扰。
同时，实验室要有足够的空间容纳实验设备和样本。
2. 实验设备要求结核病实验室必须具备一系列专业的实验设备，如显微镜、培养箱、离心机等。
这些设备应保持良好的工作状态，定期进行检测和维护，以确保其准确性和稳定性。
3. 材料和试剂要求在结核病实验室中，使用的材料和试剂应具备优良的质量，以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验室应定期检查材料和试剂的过期日期，并且在使用前进行充分的准备和储存。
4. 实验操作要求结核病实验室的工作人员应严格遵守操作规程，确保实验过程的安全和准确性。
他们应接受专业培训，熟悉各种实验方法和操作技巧。
在进行实验时，他们应佩戴防护手套和口罩，避免与样本直接接触，以防止交叉感染。
5. 样本收集和处理要求结核病实验室在样本的收集和处理过程中必须遵循相应的规定和标准。
样本应进行正确的标识和保存，并及时送往实验室进行检测。
在处理样本时，要采取适当的防护措施，避免污染和传播。
6. 数据管理要求结核病实验室必须建立完善的数据管理系统，确保实验结果的可追溯性和准确性。
实验数据应及时记录和备份，并妥善管理。
此外，实验室还应加强数据的安全性，防止数据泄露和丢失。
7. 实验质量控制要求结核病实验室要建立有效的实验质量控制体系，确保实验结果的准确性和可靠性。
这包括定期进行质量控制和校准，参加外部质量评估等。
实验室应建立质量控制记录和文件，并及时纠正和改进不合格的实验结果。
8. 废弃物处理要求结核病实验室产生的废弃物必须按照相关规定进行妥善处理，以防止对环境和健康造成污染和危害。
结核病筛查实验室安全防护制度
为了保证实验结果的准确性,防止在传播,避免引起工作人员的感染, 在检验科工作必须做到以下几个方面：
1.进入实验室,工作人员应注意着装整齐,操作时须穿戴口罩、帽子和手套，蓄长发者须将头发装束在帽子内。
2.实验室内禁止吸烟、及用嘴湿润铅笔或标签等。
3.实验室内应保持肃静，试验过程中严禁一切与试验无关的活动，以利于集中精力完成实验操作。
4.严格遵守实验安全操作规程, 在实验过程中警惕分枝杆菌气溶胶的产生，特别在涂片、染色时避免强气流变化而产生气溶胶污染。
5.试验前开启紫外线灯对实验室各操作区域进行照射消毒1小时以上；试验结束后,开启紫外线灯对操作区和实验室进行照射消毒2小时以上。
6.每次实验操作终止后,必须清理好实验台,所有物品归位并用70%酒精或3~5%石碳酸等有效消毒剂擦洗实验台和地面。
7.实验室内任何的样品、废物都必须经高温高压灭菌后，方可按一般垃圾处理。
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测的金标准是基于培养和鉴定结核分枝杆菌。
以下是具体步骤：
1.痰液样本收集：患者需要提供早晨醒来时的深咳痰液样本，
以获得有效的细菌数量。
2.痰液预处理：痰液样本经过预处理，包括离心和去除杂质。
这一步通常包括液体化和浓缩痰液。
3.痰液培养：将预处理后的痰液接种到培养基上，通常是液体
培养基。
培养基中的结核分枝杆菌将逐渐增殖形成菌落。
4.鉴定：通过常规培养、染色和生化试验等方法，鉴定已培养
的菌落是否为结核分枝杆菌。
5.药敏试验：对已鉴定的结核分枝杆菌进行药敏试验，以确定
哪些药物对其具有抗菌作用，从而为治疗方案的选择提供依据。
此方法被认为是金标准，因为它能够准确检测到结核分枝杆菌，并且可以确定其对药物的敏感性，为结核病的诊断和治疗提供可靠的结果。
但是，该方法需要相对较长的时间（通常需要几周）来进行培养和鉴定，因此在临床实践中可能需要其他更快速的检测方法来尽早确诊结核病。
结核病细菌学实验室分级标准
五人员
6名以上专业技术人员，其中高级 和（或）副高技术职称1名以上，中级 技术人员2名以上。经专业技术培训2周 合格后上岗。
国家级、省级、地市级、 县级结核病细菌学实验室均统 一使用本标准，得分90分以上 为达标。
返回实验室分级
1 实验室内按功能划分为毒菌操作区（进 行痰涂片、染色等试验操作）和相对洁净 区（进行镜检、登记记录等）。 （5分）
2 有室内消毒灭菌措施（包括物理灭菌和 化学灭菌）和简单的通气排风装置。
（5分）
3 有严格的消毒隔离制度。
（2分）
二、工作能力
1. 具备I级实验室的全部功能。 （18分）
2. 按国家标准规范常规开展分离培养工作，月工
作量20例以上。
（10分）
3. 具备开展结核菌药物敏感性试验的实验室条件
和能力。
（5分）
4. 具有一定的科研实施能力。 （5分）
三、仪器设备（一）
①生物安全操作台
1台
②双目光学显微镜（油镜清晰、功能完好）
2台
③培养基蒸汽凝固灭菌器
1台
④蒸汽高压灭菌锅
1台
⑤离心机
1台
三、仪器设备（二）
⑥恒温培养箱
恒温培养箱： 3台
(2分)
普通冰箱：
2台
(2分)
涂片染色、分离培养药敏试验、菌种鉴定所需的
其他材料
（3分）
独立使用的计算机1台
（2分）
四、业绩考核
应用统一的实验室登记本，记 录准确，保存完整。应用统一的实 验室登记本，记录准确，保存完整。
四、业绩考核
应用统一的实验室登记本，记 录准确，保存完整。应用统一的实 验室登记本，记录准确，保存完整。
结核病细菌学实验室分级标准
结核病实验室检测流程标准
结核病实验室检测流程标准结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其传染性强，严重威胁人类健康。
为了及时发现和诊断结核病，实验室检测是必不可少的一环。
本文将从标本采集、实验室检测和结果判读三个方面，介绍结核病实验室检测流程标准。
一、标本采集结核病的标本采集是实验室检测的第一步，其质量直接影响后续检测结果的准确性。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，采集的标本应包括痰液、胸腔积液、尿液、脑脊液等。
在采集痰液时，应让患者深呼吸数次，然后咳出痰液，避免口腔分泌物的污染。
采集胸腔积液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
采集尿液时，应让患者在清晨第一次排尿时采集，避免尿液的稀释。
采集脑脊液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
二、实验室检测结核病的实验室检测主要包括涂片法、培养法、PCR法等。
涂片法是最常用的检测方法，其操作简单、快速，但灵敏度较低。
培养法是检测结核分枝杆菌的“金标准”，其灵敏度高，但需要较长的培养时间。
PCR法是一种新兴的检测方法，其灵敏度高、特异性强，但需要较高的技术水平和设备支持。
实验室检测应在严格的无菌条件下进行，避免标本污染和交叉感染。
检测结果应及时记录和报告，确保患者能够及时接受治疗。
三、结果判读结核病的实验室检测结果应根据临床表现和其他检查结果进行综合判读。
涂片法和PCR法的阳性结果可以初步诊断结核病，但需要进一步的确认。
培养法的阳性结果可以确诊结核病，但需要排除其他细菌感染。
实验室检测结果应及时通知临床医生，以便制定合理的治疗方案。
综上所述，结核病实验室检测流程标准包括标本采集、实验室检测和结果判读三个方面。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，实验室检测应遵循相应的操作规范，结果判读应综合考虑临床表现和其他检查结果。
只有严格按照标准操作，才能确保结核病的及时发现和诊断，保障人民群众的健康。
生物安全实验室结核病诊断实验室的建设要求
生物安全实验室结核病诊断实验室的建设要求结核病诊断实验室是用于结核病痰涂检测和结核杆菌培养、药敏试验等实验诊断的专用场所。
因结核杆菌主要通过呼吸道传播感染，所以，规范结核病诊断实验室建设和实行严格的个人防护及推行科学的实验室规范化管理显得十分重要。
结核病诊断实验室的建设应根据不同的实验内容和实验性质来考虑。
在实验室建设、设备配置和个人安全防护方面遵循相关的管理规定，确保实验人员和实验环境的安全。
从生物安全防护基本要求考虑，结核病诊断实验室应尽量和其他区域分开，宜形成一个相对独立的实验区域。
结核病诊断实验室主要分为涂片实验室和培养与药敏实验室。
其实验室建设的基本要求分述如下：结核病诊断实验室中的涂片实验室应符合BSL-2实验室要求，但开展结核菌培养与药敏实验时实验室应符合BSL-3实验室的基本要求。
（一）涂片实验室基本要求1.涂片实验室应进行合理分区布局，并应在实验室出口处设专用洗手池。
2.实验室的墙面、地板和天花板应平整、防滑，便于清洁，不渗水，并耐化学品和消毒剂的腐蚀。
3.实验台面应耐高温、耐酸碱、防水。
4.实验台柜应牢固、平稳，台柜间应留有一定距离，便于清洁。
5.实验室如采用开窗自然通风时，应设置防蚊虫纱窗。
6.实验室应有符合要求的照明，但要防止强光和避免反光。
7.实验室应配备必要消毒设备，如高压灭菌器和消毒喷雾装置。
8.实验室人口处宜设置更衣处。
（二）培养与药敏实验室基本要求本实验室除满足涂片实验室的要求外，还应达到以下要求：1.实验室应设带锁并能自动关闭装置及可视窗。
2.实验室应设实验操作区和准备区，应具有足够的空间用于实验操作和实验用品的放置。
3.实验区域内应配备高压灭菌器及其他消毒装置。
4.实验操作区应配置Ⅱ级生物安全柜。
5.实验室宜设应急洗眼和喷淋冲洗装置。
6.实验室应有可靠的电力供应保障和应急照明系统。
重要设备如生物安全柜、培养箱、冰箱等应有备用电源或UPS等辅助电源。
7.实验室入口处应有明显的生物危害标识，实验室内应设有在黑暗中能辨别方向的标识。
结核病实验室基本建设要求
结核病实验室基本建设要求结核病实验室的建设，包括新建、改建和扩建，必须遵守国家有关法律、法规和规定，以及适应和满足社会对结核病控制和卫生服务的需求。
一、选址要求结核病实验室建设首先考虑生物安全、环境保护和建筑技术规范等规定和要求，同时要避开化学、生物、粉尘、噪声、震动、强电磁场等污染源及易燃易爆场所。
二、建设设计和建造应符合国家和地方建设规划。
参照《生物安全实验室建筑技术规范（GB 50346-2011)》和《实验室生物安全通用要求（GB 19489-2008)》保证实验室用房达到生物安全标准，要有单独的办公用房。
三、验收参照GB/T37140-2018检验检测实验室技术要求验收规范，实验室设计时应保证对生物、化学、辐射和物理等危险源的防护水平控制在经过评估的可接受程度，防止危害环境。
四、实验室生物安全及基本要求实验室环境安全：结核病实验室设计原则遵循《WS233-2017病原微生物实验室生物安全通用准则》中关于实验室设施和设备要求。
按照《人间传染的病原微生物名录》，针对结核分枝杆菌的各项操作，应在生物安全二级或三级实验室中进行。
结核属于第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。
二级生物安全实验室从事高志致病性病原微生物实验室活动除应满足《人间传染的病原微生物名录》对实验室防护级别的要求外还应向省级卫生和计生行政主管部门申请。
三级和四级生物安全实验室从事高致病性病原微生物实验活动，应取得国家卫生和计生行政主管部门颁发的《高致病性病原微生物实验室资格证书》。
五、实验室分区及其基本要求标本登记不少于3m²，涂片镜检实验室不少于15m²，培养基制备不少于15m²，储存室不少于10m²，培养室不少于15m²，药敏及鉴定不少于25m²，分子生物学实验室不少于30m²，消毒洗刷不少于10m²，培训/会议室建议在20m²左右。
结核病的实验室诊断方法及评价
耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性，1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行，2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
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一、实验室生物安全
实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。
实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合相关的标准和要求。
实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，格按照标准化、规化的操作程序进行各项实验室操作。
菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。
废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应格按照《中华人民国传染病防治法》和《中华人民国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。
（一）痰涂片镜检实验室基本要求
1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。
3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。
4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。
5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。
6.实验室应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。
7.实验室应设置洗手池、洗眼器或喷淋设备。
8.实验室中的器具和实验台应坚固耐用，在实验台、生物安全操作柜和其他设备之间及下面，应留有足够空间，以便于清洁。
9.实验室中可开启的窗户应安装纱窗。
10.实验室应有适当的消毒设备。
11.在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开放置。
12.实验室应装备开展痰涂片检查所需要的仪器和设备。
（二）结核分枝杆菌培养实验室基本要求
1.满足生物安全二级的基本要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。
3.个人防护，在实验室工作时，应该穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。
4.实验室墙壁、天花板和地板应光滑、易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒
剂的腐蚀，地面应防滑。
5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。
6.实验室的门应带锁并可自动关闭，应有可视窗。
7.实验室应配备二级生物安全操作柜、高压蒸汽灭菌器，以及分离培养所需的设备等。
8.应设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。
9.有可靠的电力供应和应急照明，必要时，重要设备如培养箱、生物安全操作柜、冰箱等应设备用电源。
10.实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。
11.应有足够的存储空间摆放物品，以便使用，在实验室工作区域外还应留有供长期使用的存储空间。
（三）结核分枝杆菌抗结核药物敏感性试验实验室基本要求
结核分枝杆菌药物敏感性试验，要求在生物安全二级及以上环境中进行。
二、全国各级结核病实验室的基本要求
（一）人力资源基本要求
1.数量要求（出乡镇级可以兼职外，其余均要求专职，“--”为不要求）
乡镇区县地市省级
工作容
涂片1（可兼职） 2 2 2 2
分离培养- 1 1 2 2
消毒+洗涮- - - 1 1
药敏、鉴定、菌库管理- - 1 2 3
培训、现场督导、盲法复检- - 2 2 6
实验室诊断新技术及实施性研究- - - 1 6
合计- 3 6 10 20
2.资质要求
各级结核病实验室人力资源资质要求
岗前培训在职培训
时间频度时间涂片及相应质量保证4天1次/年3天/次培养及相应质量保证 2 1次/年3天/次药敏、鉴定及相应质量保证 2 1次/年3天/次
（二）工作区面积基本要求
各级结核病实验室工作区面积要求
功能收集标
本登记
涂片
镜检
培养基
制备
储存室培养
药敏及
鉴定
分子生物
学检测
消毒
洗刷
培训/
会议室
面积
(m2)
3 15 15 10 15 25 30 10 20 注：除工作区外，还应设置独立于试验区以外的办公区。
是否设立4℃冷库和37℃温室视
具体工作而定，不作为基本要求容。
（三）实施、设备、材料、生物安全的基本要求
1.涂片实验室
涂片实验室设施、设备、材料、生物安全的基本要求
房间及设施一个独立房间，有上下水及电的供应，通风和照明良好，试剂柜，调节室温度湿度的设备（不得使用风扇）
仪器双目光学显微镜（配油镜头），荧光显微镜（开荧光涂片镜检），定时器
耗材痰盒，破片，竹签，染色架，破片干燥架，破片盒，加热棒，漏斗，废物缸，滤纸、显微镜镜油
试剂碳酸复红（若自行配制染液，需苯酚（分析纯）和碱性复红（生物染色专用）），亚甲基蓝，盐酸酒精
生物安全实验室门能关闭、实验室能通风、生物安全柜、高压灭菌器、紫外灯、消毒剂、工作服、口罩、帽子、手套，实验室出口处有洗手池
质量控制阳性、阴性质控片，质控制度
2.分离培养实验室
培养实验室设施、设备、材料、生物安全的基本要求
房间及设施符合BSL-2要求、有上下水及电的供应，通风和照明良好，试剂柜，调节室温度湿度的设备（不得使用风扇）
仪器培养箱、（液体培养设备）、普通冰箱、蒸汽凝固灭菌器（若自制培养基）、涡旋振荡器、定时器、天平、离心机
耗材痰盒、培养管及培养管架、移液管、废液（物）缸试剂氢氧化钠、蒸馏水、培养基
生物安全实验室门能自动关闭、Ⅱ级生物安全柜、高压灭菌器、紫外灯、消毒剂、防护服、N95口罩、帽、手套、实验室出口处有洗手池洗手池、洗眼器等
质量控制质控制度、质控记录
3.药敏试验、菌种鉴定实验室
药敏试验、菌种初步鉴定实验室设施、设备、材料、生物安全的基本要求
房间及设施符合BSL-2要求、上下水、供电、通风、照明、温度湿度调节（不得使用风扇）、计算机、局域网或传真设备
仪器培养箱、（液体培养设备）、普通冰箱（具备4℃冷藏、-20℃冷冻功能）、蒸汽凝固灭菌器（若自制培养基）、涡旋振荡器、定时器、天平、离心机、环形加热炉（灭菌接种环）、超低温冰柜（如果需要菌株长期保存）
耗材痰盒、培养管及培养管架、移液管、接种环、冻存管、废液（物）缸试剂氢氧化钠、蒸馏水、培养基、菌种鉴定所用试剂
生物安全门禁系统、实验室气流控制、Ⅱ级生物安全柜、高压灭菌器、紫外灯、消毒剂、防护服、N95口罩、帽、手套、洗手池、洗眼器等
质量控制质控制度、质控记录
4.分子生物学实验室
分子生物学实验室设施、设备、材料、生物安全的基本要求
房间及设施试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区，如使用全自动分析仪，区域可适当合并
仪器（一）试剂储存和准备区
冰箱、混匀器、微量加样器、紫外灯、离心管、吸头、手套、工作服等耗材。
（二）标本制备区
冰箱、高速冷冻离心机、混匀器、水浴箱或加热模块、微量加样器、超声波水浴仪（如需处理大分子DNA）、紫外灯、超净工作台、消耗品等。
（三）扩增反应混合物配制和扩增区
核酸扩增仪、微量加样器、紫外灯、耗材等
(四)扩增产物分析区
专用仪器设备（视检验法不同而定）、微量加样器、紫外灯、耗材等。
试剂相关检测试剂盒
生物安全各区域必须有明确的标记，各工作区域的设备、物品专用。
进入各工作区域按照单一向进行，即试剂储存和准备区—>标本制备区—>扩增反应混合物配制和扩增区—>扩增产物分析区。
实验室出口处有洗手池
质量控制空白对照、阳性对照、阴性对照所需的试剂或菌株质控制度
4、分子生物学实验室要求
试剂储存、准备区
8级 +20Pa
标本制备区
-20Pa
8级 微正压
缓冲间
-20Pa
8-9级 扩增区
-20Pa
8-9级扩增产物分析区
机房
假想平面PCR实验室布置图
假想平面PCR实验室布置图
试剂储存、准备区
8级 +20Pa
标本制备区
-20Pa
8级 -20Pa
8-9级 扩增区
-20Pa 8-9级扩增产物分析区缓冲间
缓冲间缓冲间缓冲间。