高效液相色谱法同时测定糕点中6种合成着色剂
高效液相色谱法同时测定食品10种合成着色剂
分析与检测高效液相色谱法同时测定食品10种合成着色剂□罗长琴重庆市万州食品药品检验所摘要：在食品工业发展过程中不可避免地要使用添加剂，其中合成着色剂因其性质稳定以及色彩明亮等具有广泛的 应用空间。
人们长期食用合成着色剂对身体具有一定的危害，因此应当对此进行控制。
本文选取了一定样本与试剂，运用 高效液相色谱法同时测定了食品中含有的10种合成着色剂，得到了比较满意的实验效果。
关键词：高效液相色谱法；食品；合成着色剂1材料选择与方法1.1仪器选择与试剂本次实验中选择的仪器是高效谱相色谱仪。
合成着色剂的标液为曰落 黄、亮蓝、柠檬黄、苋菜红以及胭脂 红，为0.5 mg/mL。
80%的诱惑红为 SIGMA-ALDRICH。
甲醛是液相色谱淋 洗液，60 m L的甲醒与40 m L的甲酸 进行混合，蒸馏水与20%的柠檬溶液 进行调节，将p H值调为6。
其他选择 的试剂是分析纯。
1.2溶液配制方法进行不同浓度的标准物质储备液的配制工作，喹啉黄为0.97 mg/mL，亮蓝为0.25mg/mL，日落黄、柠檬黄、靛蓝、胭脂红、胭脂红与苋菜红为0.5 mL,新红为0.75 mg/mL，诱惑红 为0.8mg/mL,选取2m L的储备液放置到50 m L的星瓶之中，加水混合 均匀以后将其配制成标准溶液。
基于 此绘制相应的峰面积与标准曲线。
1.3样品处理方法在样品处理方法上，首先配制样 品的溶液，根据聚酰胺吸附法进行色 素的提取工作，样品浓缩之后加水进 行溶解定容，在包括赤藓红的样品中 运用50%的甲醇进行溶解定容，之后 进行HPLC分析。
1.4液相色谱分析条件本次实验中的色谱柱为Agilent-ZORBAXSB-C 5n m, 4.6 m m X 250 mm,有机相为甲I S乙腈(3 :1), 进行梯度洗脱工作，通过多通道检测，最终达到的波长：亮蓝为625 nm，靛蓝为290 nm,新红、赤藓红与苋菜红为529 nm，柠檬黄与喹啉黄为428 nm，胭脂红与诱惑红为507 nm，日落黄为483 nm。
高效液相色谱法同时测定食品中10种合成着色剂
高效液相色谱法同时测定食品中10种合成着色剂合成着色剂因其色彩亮丽、性质稳定、价格低廉，成为食品工业常用的添加剂之一。
它们通常是以苯、甲苯、萘等化工原料合成，长期食用对人体健康具有一定的毒性，尤其是对少年儿童。
世界各国对合成着色剂的使用范围和限量都有严格的规定。
我国《食品添加剂使用卫生标准》[1]中规定准许使用的人工合成色素有11种。
GB/T 5009.35[2]规定高效液相色谱法同时测定胭脂红、苋菜红，柠檬黄、日落黄和亮蓝等8种合成着色剂。
GB/T 5009.141[3]则规定采用纸层析-分光光度法测定诱惑红。
喹啉黄尚未有法定的检测方法。
为了对食品中常用的合成着色剂进行更为全面的检测，对食品安全状态进行更有效地监督，本文借鉴国标中合成着色剂的前处理方法，对食品中的10种合成着色剂进行分离检测。
此法简便、灵敏、准确，结果满意。
1 材料和方法1.1 仪器与试剂仪器高效液相色谱仪Aglient LC 1100 DAD检测器：安捷伦公司。
标准品与试剂合成着色剂标液(柠檬黄，苋菜红，胭脂红，日落黄，亮蓝)：0.5mg/mL，购自国家标准物质中心；诱惑红(80％)：SIGMA-ALDRICH，Inc生产；新红、赤藓红、喹啉黄、靛蓝：Laboratories of Dr.Ehrenstorfer(Germany)生产；聚酰胺：过200目筛；pH6的水，蒸馏水加柠檬酸溶液(20％)调节pH=6；甲醇-甲酸(6+4)液；甲醇60mL，甲酸40mL，混匀；无水乙醇-氨水-水(7+2+1)：无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混匀；甲醇为液相色谱淋洗剂；水为MilliQ水；其余所用试剂均为分析纯。
1.2 标准溶液的配制及定量方法配制不同浓度的标准物质储备液，分别为：亮蓝0.25mg/mL,柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、靛蓝为0.5mg/mL, 诱惑红0.8mg/mL,赤藓红0.61mg/mL, 新红0.75mg/mL, 喹啉黄0.97mg/mL。
液相色谱法检测糕点中五种合成着色剂的条件优化
萃取柱（dikma，150 mg/6 mL）。 1.4 仪器条件
检 测 波 长 430、483、510 nm， 流速 1 mL/min，进样量 20 μL，梯度 洗脱程序见表 1。
表 1 梯度洗脱程序表
时间（min）
1 4 8 10 15
乙腈（%）
5 12 20 5 5
0.02 mol/L 乙酸铵 （%）
0.0
2.5
3.3 流动相的选择 本次研究采用了（a）0.02 mol/L 乙
酸 铵 - 甲 醇、（b）0.05 mol/L 磷 酸 氢 二 铵 - 甲 醇、（c）0.05 mol/L 磷 酸 氢 二铵 - 乙腈、（d）0.02 mol/L 乙酸铵 乙腈流动相体系。结果表明，b、c 体 系中柠檬黄、苋菜红、胭脂红不能出 峰，日落黄、诱惑红出峰但响应很低。 a、d 体系中 5 种目标物均能完全出峰， 响应值良好。但是在 a 体系中胭脂红、 日落黄、诱惑红响应时间间隔较近， 易受到杂峰干扰。对于极性物质乙腈 的溶解洗脱能力比甲醇强，且实际 进样过程中乙腈体系柱压比甲醇体系 小 15%，对色谱柱损耗较小，因此采 用 0.02 mol/L 乙酸铵 - 乙腈体系进行 洗脱。 3.4 流动相梯度选择
水浴条件下氮吹近干，加入 3 mL 甲醇
溶解待用。 2.2 过柱步骤
活 化： 依 次 用 5 mL 甲 醇、5 mL 10% 甲酸水活化；上样：加入待净化 液，弃去流出液；淋洗：加入 5 mL 甲 醇，弃去流出液；洗脱：加入 15% 氨 水甲醇溶液，收集流出液，在 40 ℃条 件下氮吹至干，用初始流动相定容至 1 mL，供分析。 3 结果与分析 3.1 标准曲线与检出限
95 88 80 95 95
2 试验方法
2.1 前处理方法
高效液相色谱法同时测定糖果中的6种合成色素
高效液相色谱法同时测定糖果中的6种合成色素王淑惠;刘印平;胡平;解彦平;何燕【摘要】高效液相色谱法测定糖果中人工合成色素.采用C18色谱柱,以甲醇和乙酸铵为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,多通道多波长,柱温25℃.结果表明,方法各组分检出限为0.020 7～0.036 1 mg/kg,线性范围为0.005～0.05 mg/mL,加标回收率为88.27％～109.6％,相对标准偏差RSD低于1.82％.该方法操作简便、准确、快速,提高了检出限,能够同时检测6种合成色素的含量,对国标检测方法起到了补充和完善的作用.【期刊名称】《应用化工》【年(卷),期】2013(042)009【总页数】4页(P1723-1725,1728)【关键词】糖果;合成色素;高效液相色谱法;多通道多波长【作者】王淑惠;刘印平;胡平;解彦平;何燕【作者单位】石家庄市疾病预防控制中心,河北石家庄050019;河北省疾病预防控制中心,河北石家庄050021;石家庄市疾病预防控制中心,河北石家庄050019;石家庄市疾病预防控制中心,河北石家庄050019;石家庄市疾病预防控制中心,河北石家庄050019【正文语种】中文【中图分类】TQ414.1;TQ420.6+6;O657.7食用色素基本分为两大类，即食用天然色素和食用合成色素。
食用天然色素直接来自动植物组织，能促进人的食欲，利于消化吸收。
但添加天然色素成本很高，且易褪色，被很多食品生产企业弃之不用。
食用合成色素常以苯、甲醛等化工产品为原料，经磺化，卤化等化合而成，工艺过程复杂，易混入有毒有害物质，具有一定的毒性和致癌性。
但合成色素有成本低廉、色泽鲜艳、着色力强等优点，故仍被广泛应用。
人工合成色素会对人体健康产生极大的危害，许多食用合成色素在生产过程中还可能混入重金属砷和铅，对于生长发育期的少年儿童，若过多长期地食用色素浓的食品，会影响神经系统，容易引起好动、注意力不集中、食欲减退等不良症状［1-3］。
高效液相色谱法同时测定糖果中6种合成着色剂及其铝色淀
４ １ ７ ４・
现代预 防医学 ２ ０ １ ６ 年第 ４ ３ 卷第 ２ ２ 期 Ｍ ｏ ｄ ｅ ｍ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， ２ ０ １ ６， Ｖ ｏ １ ． ４ ３，应用 ・
高效液相色谱法同时测定糖果 中 ６ 种合成着色剂 及其铝色淀
３ ６ ３ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ 。结论 该方法简便快速 ， 灵敏度高 ， 适合于糖果 中 ６种合 成着色剂 的测定。 关键 词： 合成着色剂 ； 铝色淀 ； 糖果 ； 高效液相色谱法
中 图分 类号 ： Ｒ １ ５ ５ ． ５ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ３—８ ５ ｏ ７ （ ２ ０ １ ６ ） ２ ２—４ １ ７ ４—０ ５
关 系， 相关系数（ ｒ 值） 大于 ０ ． ９ ９ ９ ， ３ 个浓度水平加标 回收率 为 ７ ０ ． ３ ％ 一１ １ ０ ％， 相对标准偏差 （ Ｒ Ｓ Ｄ） 为０ ． ０ ７ ％ 一１ １ ． ４ ％， 检
出限为 １ ． ０ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ 。应用该方法检测 了 １ Ｏ 件市售糖果样品 ， 检出柠檬 黄、 日 落黄 、 胭脂红 、 诱惑红和亮蓝 ， 其含量为 １ ． ５ ～
ｓ ｏ ｎ ｉ ｃ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ Ｎａ ＯＨ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｅ ｎ ｔ ｉ ｒ ｆ ｕ ｇ ｅ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｎ ａ ｔ ａ ｎ ｔ ｗｅ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｒ ｃ ｈ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｐ ｕ ｉ ｒ ｉ ｆ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｐ Ｗ ＡＸ ｓ ｏ ｌ ｉ ｄ— ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ
ｃ ｏ ｌ ｕ ｍ ｎ ． Ｂ ｙ ａ ｄ ｏ ｐ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｉ ｎ ｅ ￣ ｓ ｉ ｌ ＠Ｏ Ｄ Ｓ 一 ３ Ｃ １ ８ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍ ｎ ａ ｎ ｄ ａ ｍｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍ ａ ｃ ｅ ｔ ａ ｔ ｅ （ ０ ． ０ ２ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ） － ａ ｅ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ
高效液相色谱法测定糕点中5种食品添加剂
样品成分加标量/(mg/kg)检测值/(μg/mL)回收率/%表3回收率实验Table 3Test of the recovery rateLA 25022.7490.97DHA 12510.7686.12LNA 504.6092.04AA 50045.3190.62LNA 504.3386.54LA 25021.9987.97DHA 12510.2782.12AA 50043.4886.96LA 50052.44104.88DHA 25024.8199.25LNA 10010.94109.38AA 1000105.74105.74LNA 1008.8788.75LA 50045.1190.21DHA 25021.7587.00AA 100088.8588.851#2#3#4#各种组分，检测回收率。
添加的量和回收率如表3所示。
实验结果表明LNA ，LA ，AA 和DHA 的回收率在82.1%～105.7%之间。
4结论本文采用气相色谱法同时测定婴幼儿奶粉中的亚麻酸（LA ）、亚油酸（LNA ）、花生四烯酸（AA ）和二十二碳六烯酸（DHA ）的含量，该方法检测极限低，线性好，样品的重复性和回收率高，样品组分之间能得到较好的分离，为快速和准确测定婴幼儿奶粉中不饱和脂肪酸的含量提供借鉴。
参考文献：[1]马文宏，张燕，薛刚，等．二十二碳六烯酸（DHA ）、二十碳五烯酸（EPA ）、亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸（AA ）在婴幼儿配方奶粉中的测定[J].食品研究与开发,2007,28(8):142-144[2]余三文.不饱和脂肪酸的研究概况[J].国外医学.卫生分册,1998,11(4):16[3]GB/T 5413.4-1997婴幼儿配方食品和乳粉：DHA ，EPA 的测定[S].北京：中国标准出版社[4]GB/T 21676-2008乳与乳制品脂肪酸的测定———气相色谱法[S].北京：中国标准出版社收稿日期：2011-09-06高效液相色谱法测定糕点中5种食品添加剂杨春林1，李佳峻1，吴蔚1，胡强1，刘昊1，蒙辉2，李洪浩3（1．乐山市产品质量监督检验所食品化工中心，四川乐山614000；2．上海海丰现代农业有限公司，上海202179；3．四川省农业科学院，四川成都610066）摘要：建立糕点中常用的3种防腐剂和2种甜味剂的高效液相色谱（HPLC ）分析方法。
高效液相色谱法同时测定糕点中4种食用合成色素
高效液相色谱法同时测定糕点中4种食用合成色素米迎波;黄蔚;刘国;唐序文【摘要】建立高效液相色谱法检测糕点中4种食用合成色素的新方法.用乙醇-氨水-水(体积比为7;2;1)混合溶液提取样品中的食用合成色素,聚酰胺层析柱进行净化.色谱柱;Inertsil ODS-SP C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-乙酸铵溶液(0.02 mol/L),梯度洗脱,检测波长254 nm.加标回收率为91％～103％.结果准确可靠,方法易于推广.%A new analytical method was developed for determination for 4 synthetic pigment in cake product by high performance liquid chromatography (HPLC). The synthetic pigment in cake product in samples was extracted by ethanol-ammonia water-water (volume ratio 7 ' 2 ' 1)? And it was purified by poly amide chromatography column. The HPLC conditions: Inertsil ODS-SP C18 (150 mm × 4.6 mm, 5 μm). Aeetonitrile-0, 02 mol/L ammonium acetate solution as mobile phase, gradient elution and UV detection at 254 nm. The average recoveries were 91% to 103%. The result is accurate and easy to spread.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2011(027)004【总页数】4页(P78-81)【关键词】高效液相色谱;糕点;食用合成色素【作者】米迎波;黄蔚;刘国;唐序文【作者单位】怀化市质量技术监督局产商品质量监督检验所,湖南怀化418000;怀化市中方县质量技术监督局质量检验及计量检定所,湖南怀化418005;怀化市质量技术监督局产商品质量监督检验所,湖南怀化418000;怀化市质量技术监督局产商品质量监督检验所,湖南怀化418000【正文语种】中文食品色素是以调节食品色泽为目的的食品添加剂，又称食用染料或着色剂，分为天然色素和合成色素两大类，其中，合成色素因色泽鲜艳、着色力强、稳定性好、价格低廉等特点而被广泛使用。
食品中6种人工合成着色剂的快速检测
联 系人 简 介 ： 恒 （９ ６ ） 女 ， ： 帅 ， 士 ， 究 刘 １７ ， ：程 ｌ 顾 研
色谱 分 析 。 Ｅ ｉ ｍａ
１６ ２
化 学研 究 与 应 用
第２ ３卷
测波长 在 可见 光 区 ， １ ． ％ 亚 铁 氰 化 钾 溶 液及 以 ０６
（ ｈ ｎ ｄ ｒｄ ｃ ｕ ｌｙＳ ｐ ｒ ｓ ｎ＆ ｈｓ ｃ ｔ ｎ ｌｓ ｔ Ｃ ｗ ｇ ｕ６ ０ ４ ，Ｃ ｉ ） Ｃ ｅ ｇ ｕ Ｐｏ ｕ ｔ ａ ｔ ｕ ｅｖ ｉ Ｑ ｉ ｉｅ ｉ ｃｉ ｎ ｜ｍｅ ｔ ｎ ｄ １ ０ １ ｈｎ ｐ ｏ ｉ ａ
Ａｂ ￣ ｃ ｔ Ａ ｏ ｅ ｍｅｈ ｄ ｏ ｆ ｓ ｅｅ ｍｉａ ｉｎ ｆ ｓｘ ｉｄ ｏ ｙ ｔ ｅ ｉ ｏ ） ｎ ｓ ｎ ｏ ｄ ｌ Ｉｇ ｐ ｒ ｒ ｎ ｅ ｉ ｕｄ ｓ ｒ ； ： ｎ ｖ ｌ ｃ ｔｏ ｆ ｒ ａ ｔ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｏ ｉ ｋ ｎ ｓ ｆ ｓ ｎ ｈ ｔ ｃ ｂｒ ｔ ｉ ｆ ｏ ｓ ’ ｄ ｈ ｅｆ ｍａ ｃ ｌ ｉ ｏ ｃ ａ ｙ ｏ ｑ
成 为色 素分 析 的主 流 。 高效 液 色 谱 法 是 一 种 很 好 的分 离技 术 ， 用 高 效 液 相 色 谱 法 测定 人 １ 合 应 ： 成着 色剂 准 确 度 高 、 法 灵 敏 、 现 性 好 ， 国家 方 砸 为 标 准方 法 ， 样 品 的前 处 理 技 术 广 泛 采 媚 的 是 色 但
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高效液相色谱法同时测定糕点中6种合成着色剂作者：李明晖来源：《现代商贸工业》2018年第33期摘要：建立了一种同时测定糕点中胭脂红、苋菜红、日落黄、柠檬黄、亮蓝以及诱惑红的高效液相色谱法。
本方法先用石油醚-乙醚混合液除去样品中的油脂，再用95%的乙醇溶液浸提，结合聚酰胺吸附法提取，制成水溶液，高效液相色谱法254nm、625nm两个波长同时测定6种合成着色剂。
结果表明：采用该方法6种合成着色剂在浓度1.0～30.0μg/ml有良好的线性关系，相关系数均大于0.9999；方法检出限为柠檬黄0.5mg/kg、苋菜红0.5mg/kg、胭脂红0.5mg/kg、日落黄0.5mg/kg、亮蓝0.2mg/kg、诱惑红0.5mg/kg；回收率可达到81.0%～96.4%，相对标准偏差均不大于6.4%。
关键词：糕点；同时测定；合成着色剂；高效液相色谱法中图分类号：TB 文献标识码：Adoi：10.19311/ki.1672-3198.2018.33.0930 前言中国有一句话说的是色、香、味俱全，是对这道菜最好的评价。
糕点也不例外，“色”排在首位，作为糕点中最重要的感官指标之一，色泽直接影响到消费者的食欲。
许多商家为了从感官上吸引客户的眼球，除了在加工工艺等方面改进产品的色泽外，还会通过添加人工合成着色剂来增加产品的色泽。
较天然色素，人工合成色素颜色更加鲜艳，不易褪色，且价格较低。
因此，糕点生产企业存在超量超范围添加人工合成着色剂的情况，长期食用此类产品将严重危害人体健康。
英国多动症儿童治疗中心的专家们指出，食用色素不仅影响儿童的生理和心理健康，使他们情绪失控，出现大哭大叫、失眠等状态，还会对某些过敏体质的成年人产生影响，使他们出现易怒等情绪不稳定的状况。
根据笔者近几年的工作经历，在糕点的日常监督检验和型式试验中涉及的人工合成着色剂多为胭脂红、苋菜红、日落黄、柠檬黄、亮蓝以及诱惑红，这6种合成着色剂现行的国标方法为GB 5009.35-2016和GB 5009.141-2016，其中GB 5009.35-2016方法定性定量准确但其适用范围并未包含糕点，而诱惑红的检验方法GB 5009.141-2016试验步骤繁琐复杂，本方法先用石油醚-乙醚混合液除去样品中的油脂，再用95%的乙醇溶液浸提，结合聚酰胺吸附法提取，制成水溶液，高效液相色谱法测定，建立了一种同时测定糕点中胭脂红、苋菜红、日落黄、柠檬黄、亮蓝以及诱惑红的高效液相色谱法，取得了满意的结果。
1 材料与方法1.1 试验样品供试的10种糕点均为市售的普通糕点。
1.2 试验仪器与试剂试验基本仪器为高效液相色谱仪1260（二极管阵列检测器，美国安捷伦公司）仪器条件为：色谱柱：Welch Ultimate XB C18（4.6×150 mm，5μm）；进样量：10μL；柱温：35℃；二极管阵列检测器波长：254 nm，625nm。
梯度洗脱程序见表1。
电子天平ME204E（0.0001g，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），涡旋混合仪（江苏金坛市中大仪器厂），低速离心机（上海安亭）。
试验主要试剂为甲醇（色谱纯，CNW）、乙腈（色谱纯，CNW），聚酰胺粉、氨水（分析纯）、甲酸（分析纯）、无水乙醇（分析纯）、石油醚（分析纯）、乙醚（分析纯）、柠檬酸（分析纯）、乙酸铵（分析纯）、乙酸（分析纯）以上试剂均为国药集团化学试剂分析有限公司。
胭脂红、苋菜红、日落黄、柠檬黄、亮蓝（墨质检坛，浓度0.5mg/mL），诱惑红（墨质检坛，浓度1.0mg/mL）。
1.3 试验方法1.3.1 测定方法称取5g左右已经粉碎均匀的样品于离心管中，加入50mL石油醚-乙醚（V∶V=1∶1）漩涡震荡后离心，弃去上清液，待有机试剂挥发干，再加入30mL 95%乙醇溶液，旋涡震荡，置于60～70℃恒温水浴超声仪中反复超声浸提，合并浸提液，加入柠檬酸溶液调节pH到6左右，加热至60℃，加入1g聚酰胺粉调成糊状搅拌均匀，以垂融漏斗抽滤，用60℃pH=4的温水洗涤数次，然后用甲醇-甲酸混合溶液（V∶V=6∶4）洗涤数次，再用水冲洗至中性，用无水乙醇-氨水-水混合溶液（V∶V∶V=7∶2∶1）解吸数次，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发近干，加水溶解，定容至5.00 ml，过0.45μm水相滤膜，待测。
采用上述方法，对10种糕点中6种合成着色剂含量进行测定，每个样品平行测定 3 次。
1.3.2 方法验证通过重复性试验和添加回收试验对测定方法的稳定性和准确性进行验证。
（1）重复性验证：取有检出着色剂糕点样品5g，按照试验方法处理，平行样品5个，对各色素进行重复性实验，计算RSD。
（2）添加回收试验：取其中一个糕点样品5 g，平行测定6次，根据重复性试验中糕点各色素成分含量，选取5.0 mg/kg，10.0 mg/kg，30.0 mg/kg作为加标量，根据测定结果计算加标回收率。
（3）检出限试验：称取5g的阴性糕点样品，按照建立的方法平行测定11次。
1.4 标准溶液曲线制作吸取胭脂红、苋菜红、日落黄、柠檬黄、亮蓝标准溶液各1.00mL、诱惑红标准溶液0.50mL，用水定容于10mL容量瓶中，配置成50μg/mL的混合标准储备液。
取50.0μg/ml的混合标准储备液，逐级稀释成1.00μg/ml，5.00μg/ml，10.0μg/ml，20.0μg/ml，30.0μg/ml五个浓度，按照上述色谱条件进样，以各色素峰面积对浓度做线性回归分析。
2 结果与分析2.1 前处理的优化本方法根据糕点中含糖量、蛋白质、脂肪等较高，基质较复杂的特点，采用石油醚-乙醚混合溶液浸提除去脂肪，加入95%乙醇溶液加热超声浸提后，结合聚酰胺粉吸附法进行提取色素克服了水溶液-聚酰胺粉吸附法在操作过程中难抽滤、样品抱成团的问题，建立了一种糕点中着色剂测定的前处理方法。
2.2 流动相的优化考察了甲醇、甲醇：乙腈（10∶1，5∶1，5；5，1∶5，1∶10）不同配比作为流动相有机相条件下6种着色剂的分离情况。
结果发现采用甲醇：乙腈（v∶v=10∶1）为流动相有机相，克服了糕点基质、梯度洗脱带来的基线不稳，柱压增大等问题，基线更为平稳，而且各色素分离度、出峰时间合理。
本方法采用甲醇：乙腈（v∶v=10∶1）作为流动相有机相。
2.3 检测波长的选择利用检测器特有的可变波长的功能，考察了多个波长。
综合考虑，结合实际工作需要选出在254nm条件下测定柠檬黄、胭脂红、苋菜红、诱惑红、日落黄，625nm测定亮蓝。
254nm 的条件下上述5种合成着色剂响应值都较为理想，但是亮蓝的响应过小（见图1，图2）。
625nm的条件下亮蓝的响应最大，干扰较小。
2.4 该方法测定6种合成着色剂的线性关系及标准溶液谱图由表2可知，采用该方法测定糕点中6种合成着色剂，其标准曲线的线性关系均良好， r 值均大于0.9999；其中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红是254nm测定，亮蓝625nm测定。
由图1和图2（横坐标为时间min，纵坐标为响应值mAU）可知，采用该方法6种合成着色剂分离度、出峰时间、峰型、响应值都比较理想，满足试验要求。
2.5 该方法测定10中糕点中6种合成着色剂含量采用建立的方法，测定了市售的10种糕点中6种合成着色剂的含量，结果其中两个品种糕点检出柠檬黄分别为0.021g/kg、0.052g/kg，一个品种糕点检出胭脂红0.053g/kg。
糕点中柠檬黄和胭脂红两种着色剂在GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中指标为不得添加。
这几种着色剂超标的糕点相较其他品种颜色均较为鲜艳。
因此，建议广大消费者在购买糕点时慎重选择颜色艳丽的品种。
2.6 方法验证结果2.6.1 重复性试验重复性结果显示，RSD为4.9%，这说明试验重现性良好。
2.6.2 加标回收试验由表3可知，加标回收率为81.0%～96.4%，相对标准偏差均不大于6.4%，表明该方法测定结果准确度较高。
2.6.3 检出限试验采用3倍基线噪声水平作为检出限，则本方法的检出限为柠檬黄0.5mg/kg、苋菜红0.5mg/kg、胭脂红0.5mg/kg、日落黄0.5mg/kg、亮蓝0.2mg/kg、诱惑红0.5mg/kg，满足试验要求。
3 讨论与结论本实验，利用检测器特有的可变波长的功能，多波长下测定，通过对前处理和流动相的优化，克服了糕点中着色剂测定中遇到的基质大，难处理等干扰，建立了一种同时测定糕点中6种合成着色剂的分析方法。
结果表明，该方法的线性范围、回收率、检出限、精密度均可满足实际样品检测的要求。
值得注意的是，本文研究未涉及糕点彩妆以及糕点中的馅料。
此类糕点在运用该方法进行测定的时候，在样品前处理方面还需参照其他方法，以保证检测结果的准确性与可靠性。
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