免疫组织化的应用范围
免疫组化方法
（五）、神经内分泌标记物： 嗜铬素A（Chromogranin, CgA）：
存在于神经元，神经内分泌细胞及其肿瘤中。 突触素（Synaptophysin, Sy）：
生的抗体，可识别有限的抗原决定簇，特异 性强。
（二）显示物：
主要有： 1、酶标反应：
①碱性磷酸酶（Alkatine phasphoeroaidase, HRP)
AP与不同的底物作用，可形成不同颜色的终产物。 与萘酚（As-Mx）和快蓝（Fast blue）作用； 与快红（Fast red）作用。 缺点：形成的沉淀溶于有机溶剂。
三、主要方法： （一）、直接法： （二）、间接法：特点：是经过了第二抗体放大
效应 （三）、PAP法：以过氧化物酶和抗过氧化酶抗体
形成复合物，通过第二抗体的桥接与第 一抗体结合，然后以酶底物反应检出。
（四）、ABC法：
生物素（Biotin）和卵白素（Avidin）为具 有高度亲合性的物质，一个卵白素分子可结合4 个生物素。当生物素标上特定的标记物质后or与 抗体结合后仍能与卵白素结合，因此，将抗体结 合上生物素，然后与卵白素和带有特殊标记物的 生物素的结合反应，而以适当方式显示。
2）、对于阳性结果的定量判断： -，+，++，+++等分级和计数统计。
垂体腺瘤 ACTH
乳腺癌 ER
乳腺癌 c-erbB-2
六、免疫组化在病理诊断及鉴别诊断 和研究中的 应用
（一）、中间丝免疫组化的意义： 中间丝有五种：
免疫组化表达量-概述说明以及解释
免疫组化表达量-概述说明以及解释1.引言1.1 概述免疫组化是一种重要的实验技术，用于检测细胞和组织中蛋白质的表达情况。
通过免疫组化技术，可以通过特异性抗体与目标蛋白质结合，然后使用可视化方法显示其位置和表达水平。
免疫组化在疾病诊断中起到了至关重要的作用。
通过检测病理标记物的免疫组化表达量，可以帮助医生确定疾病的类型、分级和预后。
例如，在肿瘤学领域，免疫组化可以用来检测肿瘤标志物的表达，从而帮助确定肿瘤的类型和预测治疗效果。
免疫组化表达量的评估方法有多种，常见的包括光密度分析、百分比阳性细胞计数和定量分析等。
这些方法可以定量地评估目标蛋白质在细胞和组织中的表达水平，从而为疾病诊断和治疗提供有力的依据。
本文旨在探讨免疫组化表达量的意义和评估方法。
首先，将介绍免疫组化的基本原理，包括抗体与目标蛋白质的结合原理和可视化方法的选择。
其次，将重点讨论免疫组化在疾病诊断中的应用，包括肿瘤学、免疫学和神经科学等领域。
最后，将探讨免疫组化表达量的意义和评估方法，包括常用的定量分析和光密度分析等技术。
免疫组化表达量的研究具有重要的意义和应用前景。
通过评估目标蛋白质在细胞和组织中的表达水平，可以深入了解疾病的发生机制和进展过程，为疾病的早期诊断和个体化治疗提供重要参考。
然而，免疫组化表达量的评估方法仍存在一定的局限性，例如抗体的特异性和选择性等问题，今后的研究需要解决这些问题并加以改进。
综上所述，免疫组化表达量是一项具有重要意义和应用前景的研究领域。
通过对目标蛋白质的表达水平进行定量分析，可以为疾病诊断和治疗提供有力的依据，推动医学领域的发展和进步。
然而，与发展潜力相对应的是研究的局限性和展望，需要不断改进和完善免疫组化技术，提高其准确性和可靠性，以更好地为临床实践提供支持。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章结构部分主要介绍了整篇文章的组织框架和章节安排。
通过清晰地列出各个章节的标题和内容，读者可以更好地理解文章的逻辑结构和内容安排。
免疫组化
什么是免疫组化免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
（一）免疫组织化学技术的基本原理免疫组织化学技术是用显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。
即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。
通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。
组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
免疫学的基本原理决定了免疫组织化学技术具有高度特异性，因此，免疫组织化学技术从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。
只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。
ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，所以免疫组织化学技术又具有敏感性高的特点。
免疫组化及电镜技术
特性 组成 特异性
亲和力 交叉反应
单克隆抗体与多克隆抗体特性的比较
多克隆
单克隆
多种类抗体的混合物 单一种类的抗体
低
高
针对多个抗原决定族 针对单一的抗原决定族
平均亲和力较高
不定，较低
高
低
反差
6.抗原与抗体的特异性结合
抗原与抗体的结合具有高度的特异性。在抗体的轻链和重链的可变区中有3个特 殊的易变部位（即在第30位、50～60位和第100位氨基酸残基附近）这些部位称为超 变区。超变区直接参与抗原接合部位的组成，形成的接合部位是一个浅平穴槽，槽 大小约1.5nm×0.6nm×0.6nm抗原决定族在空间呈互补性地嵌入槽内，借分子间的范 德华力、疏水作用静电引力以及氢键而相互结合。
免疫组织化学（Immunohistochemistry）
一、定义
应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位 的定性、定位、或定量研究，这种技术称免疫组织化（immunohistochemistry） 或 免疫细胞化学（immunocytochemistry），简称免疫组化。免疫组化技术是1941年 Coons等学者首创的，随着其理论及技术的发展，目前已发生了日新月异的变化。
厚约3～ 5μ m，放置37℃温箱烘烤过夜，以减少脱片。 （2）冷冻切片：2μ m。 （3）振动切片：特点是组织经固定后不需包埋，只要用胶水粘在载物台上即 可切片。切片较厚，可将阳性部位作电镜包埋。神经组织应用较多。
四、免疫组化染色过程中的基本技术
（一）蛋白酶消化技术进行固定时，抗原决定簇有可能被固定剂所封闭，因此 在抗原抗体反应前，常用蛋白酶处理组织切片，使抗原决定簇充分暴露出来， 并使组织的通透性增高，以利抗原抗体最大限度地结合增强特异性染色。
病理科为什么要做免疫组化
龙源期刊网 病理科为什么要做免疫组化作者：郑宏来源：《学习与科普》2019年第15期随着医学技术的快速发展，免疫组化也被越来越多的应用到了病理科检查里面。
但是，很多病人在接受免疫组化时心里都是充满了疑惑的，其既不知道免疫组化是什么，也不明白自己为什么要接受免疫组化。
甚至还有一部分病人认为医生让自己接受免疫组化就是为了挣钱，导致了医患矛盾的出现，对治疗工作的顺利展开造成了极大的阻碍。
所以，接下来本文就对免疫组化及其原理进行了简单介绍，然后阐述了病理科为什么要安排病人进行免疫组化检查。
一、什么是免疫组化？所谓免疫组化实际上就是应用抗原抗体反应这一原理，通过化学反应来让标记抗体的显色剂显色对组织细胞里多肽和蛋白质等抗原进行定位、定性以及相对定量研究的一种新细胞化学技术。
按照标记物种类的不同，免疫组织化学技术主要分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等几种。
免疫组化的基本原理就是抗原抗体反应。
抗原和抗体结合的时候会出现非常大的特异性，免疫组化就是通过此原理的有效利用，先完成细胞或者组织里面的相应化学物质制取，将其当成抗原或者半抗原，然后再利用免疫动物完成特异性抗体的获取，最后再通过这个特异性抗体去探测细胞或者组织里面是否有同类抗原存在。
又因为抗原、抗体以及其复合物都是没有颜色存在的。
所以，还需要通过组织化学的方法完成抗原抗体结合部位的着色，从而更加准确的完成对人体里面未知抗原的定位、定性以及定量研究工作，为后续的判断工作提供更有力的支持和保障，有效避免判断失误的情况发生。
二、病理科安排病人做免疫组化的原因？在最近这几年，随着各种特异性抗体的产生，通过传统的检查技术已经没有办法完成病情的准确判断了。
以肿瘤研究为例，在免疫组化技术出现以前，对肿瘤的诊断和分类还局限于细胞水平，而引入免疫组化技术后，则使研究的深度提高到了生物化学水平、分子水平。
同时免疫组化这一新的细胞化学技术还拥有特异性强、敏感性高、定位准确以及形态功能相结合等优点，可以帮助医生更为精准的完成病情判断，从而为后续治疗工作的展开提供更为强有力的依据。
免疫组织化学
免疫组织化学(傅琦博)-免疫组织化学引言酶工程是生物工程的重要组成部分，近几十年来，随着研究手段的更新和技术水平的提高，产生了一门以研究酶在细胞内的存在及其动态，以阐明组织细胞的结构和功能为主要内容的科学——酶组织化学。
酶组织化学是利用酶化学反应的产物可在光学显微镜或电子显微镜下被识别的特性，借以从形态学角度判定酶在组织细胞内的存在的部位的一门技术，其基础是组织化学。
它具有将形态学、生物化学和生理学联系起来的特点，在生物学、生物化学、医学生物领域内日益发挥着重要的作用。
研究组织细胞内特定酶分布的酶组织化学方法大致分为：（1）利用酶的活性反映的方法；（2）利用抗原抗体反应（免疫应答）证实酶的存在部位的方法。
后者也被称之为免疫组织化学。
免疫组织化学概述免疫组织化学简称免疫组化，是应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分，进行原位的定性、定位或定量的研究。
这种技术称为免疫组织化学技术。
免疫组化是利用抗体与抗原的结合具有高度特异性的特点，采用一直的抗体检测组织或细胞的抗原物质，以期确定组织或细胞是否存在未知抗原，并进行定性、定位或定量的研究。
抗原与抗体结合形成的免疫复合物是无色的，故必须借助组织化学方法，将抗体抗原反应部位显示出来。
它的主要研究方法是免疫组织染色法（简称免疫染色法），食用该方法检测细胞内物质，必须具备两个条件：①作为检测对象的物质须具有抗原性，能制作出与之相应的特异、高效价的抗体；②在免疫反应发生之前，目标物质要保持抗原性，同时还要保持在组织细胞内的稳定状态。
要检测抗原，就要用与之相应的抗体进行免疫反应，同时要用可视的标记标出抗原或抗体，采用这种方法的免疫染色法称为标识抗体法或标识抗原法，常用的表示抗体法有直接法、间接法、补体结合法以及多重染色法等。
直接法是标识要检出的抗原的抗体，然后进行反应的方法，其特异性高，但检出的敏感度不如间接法，标识抗体的食用范围手局限。
间接法是以未标识的第一抗体进行反应，接着标识以第一抗体为抗原所制作的抗体（即第二抗体）进行重叠反应，间接的证明抗原，这种方法的缺点是容易出现非特异性反应，但敏感度较高，标识抗体的用途也广；补体结合法是将间接法中的第二抗体作为标识抗补体抗体食用；多重染色法则是在同一标本上检出多种抗原物质的方法，可以用反复进行的重复标记的直接法，也可以用酶标记的重复进行的间接法。
免疫组化、免疫荧光、流式细胞术的应用比较及常见问题分析-精选文档
免疫组化流程示意图
IHC二抗原理及选择
1. SABC法
原理：SABC法是利用链酶亲和素 (Streptavidin)与生物素(Biotin)特有的高度亲 和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过 氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP， 然后与链酶亲和素按一定比例混合，形成 SABC复合物。用生物素化二抗与第一抗体 结合，再与SABC复合物联结形成抗原～抗 体～生物素化二抗～ SABC复合物。最后用 底物显色剂显色。 特点：该法具有灵敏度高以及低背景染色 等特点。
免疫组织化学结果分析
免疫组织化学常见问题分析
1.显色过深
一抗浓度过高或孵育时间过长，建议降低 一抗浓度或减少孵育时间。 孵育温度过高，建议室温或4℃孵育。
HRP标记二抗孵育时间过长，建议缩短时
2.非特异性显色
石蜡切片脱蜡不彻底，建议延长脱蜡时间。 操作过程中冲洗不充分，建议增加冲洗的 次数与冲洗时间。
IHC常用酶标二抗原理示意图
IHC显色方法原理及选择
1. DAB显色法
产品描述：二氨基联苯胺( 3，3’diaminobenzidine，DAB ) 是过氧化物酶 (Peroxidase) 的显色底物，在过氧化物酶的 催化下，DAB显色工作液会于反应部位产生 不溶于酒精的棕褐色沉淀。本试剂盒适用于 辣根过氧化物酶（HRP）系统的免疫组化显 色。 试剂盒组成： DAB显色原（20×）（试剂A） DAB底物缓冲液（1×）（试剂B）
间。
组织富含内源性的生物素与过氧化物酶， 建议使用相关试剂进行封闭。
发生抗原异位。 蛋白封闭不充分，建议增加蛋白封闭时间。
病理报告提示做“免疫组化”，这是怎么回事
病理报告提示做“免疫组化”，这是怎么回事病理报告是判断患者肿瘤性质的关键依据，采取什么样的治疗方法、应用哪些治疗药物等都需要按照病理报告的结果来进行。
而在有些患者的病理报告中常常会提示到做“免疫组化”，“免疫组化”是什么？为什么要做“免疫组化”呢？下面就让我们一起来探讨探讨。
1什么是“免疫组化”“免疫组化”的全称是“免疫组织化学”，其最早于20世纪70年代就被运用在病理诊断当中了，具体指的是根据免疫学中抗原与抗体的特异性结合原理，采用一定的检测技术与方式对患者的组织细胞进行综合性的研究。
这个过程中所采用的技术方式为利用显色剂如荧光素、同位素等对细胞抗体进行显色标记，然后根据一定的标准确定细胞内多肽与蛋白质等抗原的性质，主要研究内容包括定位、定性和相对定量三个方面。
在病理报告中提示患者做“免疫组化”，主要是为了更进一步诊断与明确患者的病情，并为患者的疾病治疗、预后等环节提供参考，这一诊断技术的广泛运用充分体现了人们在肿瘤疾病研究中取得的进步成就，也代表了病理诊断水平的提升。
2“免疫组化”在病理诊断中的具体应用（1）诊断与鉴别诊断恶性肿瘤“免疫组化”可以帮助医生和患者诊断与鉴别诊断恶性肿瘤，患者检查出患得肿瘤后要想弄清楚它究竟是恶性的还是良性的，就需借助“免疫组化”技术进行诊断，在过去只依靠病理切片的观察来做判断，存在一定的不准确性，且对复杂性肿瘤无法做出准确诊断，而通过“免疫组化”不仅可以实现良性与恶性的诊断，而且还可以鉴别诊断出是淋巴癌、恶性黑色素瘤、小细胞癌等具体情况。
（2）病理分型“免疫组化”可以帮助医生和患者对肿瘤进行病理分型，由于临床上一些肿瘤的组织形态较为相似，如果仅用病理切片进行鉴别诊断容易出现判断失误，而通过免疫组化技术能够精准区分肿瘤类型，如对淋巴瘤和软组织肿瘤的区分等，从而为后续治疗方案以及预后措施的选择提供参考。
（3）明确恶性肿瘤组织来源“免疫组化”可以帮助医生和患者明确恶性肿瘤组织的真正来源，找到转移癌的病灶位置。
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免疫组织化的应用范围
在常规病理诊断中应用免疫组化主要有以下八个方面
的意义：
1. 对肿瘤的组织起源进行鉴别分析和确定诊断。
2. 对肿瘤的良、恶性进行综合判断。
3. 发现微小转移灶。
4. 激素受体的检测，以指导临床治疗。
5. 激素类细胞的定性和定位。
6. 指导肿瘤分期。
7. 指导肿瘤预后的判断。
8. 免疫性疾病的辅助诊断。