免疫组化技术简介及相关临床应用
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2021/1/28
操作步骤
• 流程简介如下： 常规石蜡切片→脱蜡→抗原修复（根据
需要）→缓冲液冲洗（3min/2次）→室温下 孵育5min→缓冲液冲洗（5min/2次）→室温 下孵育5min →缓冲液冲洗（5min/2次）→滴 加一抗37℃孵育1-2小时→缓冲液冲洗（ 5min/2次）→室温下孵育30分钟→滴加二抗 室温下孵育1小时→缓冲液冲洗（5min/2次 ）→滴加DAB液→孵育3-5分钟→自来水充分 冲洗→复染→脱水→透明→封片→出诊断。
2021/1/28
临床应用
• 免疫组化的临床应用主要包括以下几方面： ⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断； ⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位； ⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型； ⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的 组 织学分类，因其种类多、组织形态相像，
2021/1/28
有时难以区分其组织来源，应用多种标志 物进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断 是不可缺少的； • ⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案 的确定，包括手术范围的确定。 • ⑹为临床提供治疗方案的选择。
2021/1/28
来，从而达到对组织或细胞中的未知抗原 进行定性，定位或定量的研究。 有如下基本特点： 1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确 4、形态与功能相结合
2021/1/28
所用抗体及标本类型
• 所用抗体类型 常用的抗体为单克隆抗体和多克隆
抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆 分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术 免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后 的抗原直接免疫动物后，从动物血中所 获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆 所产生的抗体混合物。
性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗 原暴露有一定的影响，但可进行抗原修 复，是免疫组化中首选的组织标本制作 方法。
2021/1/28
常用染色方法
• 免疫组织化学技术按照标记物的种类不 同可分为： 1，免疫荧光法，标记物为荧光素，通 过荧光显微镜观察； 2，免疫酶法，以酶标记抗体，抗原抗 体反应后显色，通过光镜或电镜观察，目前 最常用； 3，其它如亲和组织化学法、免疫铁蛋 白法、免疫胶体金法及放射免疫自显影法等 。
• 20世纪80年代该项技术在国外开始应 用于诊断疾病，国内比国外约晚10年，即 90年代开始运用于疾病的病理诊断。
2021/1/28
•
最近20多年来，该项技术得到飞速发展，特
别是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石
蜡切片上，因而大大促进了它在临床病理学上的
应用。
•
从开始发展至今，该项技术一直在基础医学
2021/1/28
小圆细胞肿瘤的免疫组化鉴别诊断
ＣＫ Vim ＥＭＡ LCA NSE
Des S-100 CgA
小细胞未分化癌
＋－ ＋ －
－
－
免疫组化技术简介及相关临床应用
2021/1/28
提纲
1、背景知识简介 2、定义及基本原理 3、所用抗体及标本类型 4、常用染色方法 5、操作步骤及结果判断 6、临床应用 7、相关图片 7、开展该项目注意事项
背景知识简介
• 免疫组化技术是20世纪70年代初Sterb Berger在酶标法的基础上,以免疫学的抗原 抗体反应为理论基础发展起来的一门方法 学。
常用于肿瘤病理鉴别诊断的免疫标记物 （举 例）
• 上皮组织：CK、EMA； • 特异性上皮标记：如TG、 PSA，TTF－1
等； • 间叶组织：vinmentin； • 肌组织：desmin、SMA、MSA、myosin、
myogenin、myoD1； • 血管内皮细胞：CD31、CD34、FVIIIRAg
和临床研究中发挥重要作用,为疾病尤其是肿瘤性
疾病的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了
强有力的手段。
•
目前绝大多数大中型医院都开展了该项技术
检查，我院有待开展此项技术。
2021/1/28
定义及基本原理
定义：
免疫组化，也称为免疫组织化学技术或
免疫细胞化学技术，是应用免疫学基本原 理—抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性 结合的原理，通过化学反应使标记抗体的
2021/1/28
CD15、CD30、Bcl—2、Sig(IgM和IgD) 等； • 胚胎性抗原：CEA、AFP等； • 细胞增殖抗原：PCNA、Ki-67等； • 激素：ER、PR、AR等； • 病毒：HBV、EBV、HPV等； • 癌基因和抑癌基因：c-erBb-2、nm23、 P53、P16和Bcl-2等
显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素
）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋
白质），对其进行定位、定性及定量的研
究
。
2021/1/28
基本原理： 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异
性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先 将组织或细胞中的某种化学物质提取出来， 以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获 得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或 细胞中的同类的抗原物质。然后再通过化学 显色方法将抗原抗体结合所在的部位显示出
或FVIII；
2021/1/28
• 组织细胞：CD68、Mac387、溶菌酶等； • 神经内分泌：
1、激素标记物：儿茶酚胺、5－HT、多肽 和肽释放因子等； 2、非激素标记物：NSE、CGA、Syn等； • 神经组织： S－100、MBP、Leu7、NSE、GFAP 、 NFP等； • 淋巴造血组织：CD45（LCA）、CD20（ L26）、 CD79a、CD3、 CD45RO、
2021/1/28
• 所用标本类型： 主要为组织标本和细胞标本两大类，
前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片 ）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞 爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组 织标本最常用、最基本的方法，对于组织 形态保存好，且能作连续切片，有利于各 种染色对照观察；还能长期存档，供回顾
2021/1/28
2021/1/28
ຫໍສະໝຸດ Baidu果判断
（表达部位、检测物质及常用标记物）
• 表达部位： 细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核、细胞
多部位及组织等； • 检测物质：
组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原 的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖 、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体 等都可用相应的特异性抗体进行检测。
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操作步骤
• 流程简介如下： 常规石蜡切片→脱蜡→抗原修复（根据
需要）→缓冲液冲洗（3min/2次）→室温下 孵育5min→缓冲液冲洗（5min/2次）→室温 下孵育5min →缓冲液冲洗（5min/2次）→滴 加一抗37℃孵育1-2小时→缓冲液冲洗（ 5min/2次）→室温下孵育30分钟→滴加二抗 室温下孵育1小时→缓冲液冲洗（5min/2次 ）→滴加DAB液→孵育3-5分钟→自来水充分 冲洗→复染→脱水→透明→封片→出诊断。
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临床应用
• 免疫组化的临床应用主要包括以下几方面： ⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断； ⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位； ⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型； ⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的 组 织学分类，因其种类多、组织形态相像，
2021/1/28
有时难以区分其组织来源，应用多种标志 物进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断 是不可缺少的； • ⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案 的确定，包括手术范围的确定。 • ⑹为临床提供治疗方案的选择。
2021/1/28
来，从而达到对组织或细胞中的未知抗原 进行定性，定位或定量的研究。 有如下基本特点： 1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确 4、形态与功能相结合
2021/1/28
所用抗体及标本类型
• 所用抗体类型 常用的抗体为单克隆抗体和多克隆
抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆 分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术 免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后 的抗原直接免疫动物后，从动物血中所 获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆 所产生的抗体混合物。
性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗 原暴露有一定的影响，但可进行抗原修 复，是免疫组化中首选的组织标本制作 方法。
2021/1/28
常用染色方法
• 免疫组织化学技术按照标记物的种类不 同可分为： 1，免疫荧光法，标记物为荧光素，通 过荧光显微镜观察； 2，免疫酶法，以酶标记抗体，抗原抗 体反应后显色，通过光镜或电镜观察，目前 最常用； 3，其它如亲和组织化学法、免疫铁蛋 白法、免疫胶体金法及放射免疫自显影法等 。
• 20世纪80年代该项技术在国外开始应 用于诊断疾病，国内比国外约晚10年，即 90年代开始运用于疾病的病理诊断。
2021/1/28
•
最近20多年来，该项技术得到飞速发展，特
别是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石
蜡切片上，因而大大促进了它在临床病理学上的
应用。
•
从开始发展至今，该项技术一直在基础医学
2021/1/28
小圆细胞肿瘤的免疫组化鉴别诊断
ＣＫ Vim ＥＭＡ LCA NSE
Des S-100 CgA
小细胞未分化癌
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免疫组化技术简介及相关临床应用
2021/1/28
提纲
1、背景知识简介 2、定义及基本原理 3、所用抗体及标本类型 4、常用染色方法 5、操作步骤及结果判断 6、临床应用 7、相关图片 7、开展该项目注意事项
背景知识简介
• 免疫组化技术是20世纪70年代初Sterb Berger在酶标法的基础上,以免疫学的抗原 抗体反应为理论基础发展起来的一门方法 学。
常用于肿瘤病理鉴别诊断的免疫标记物 （举 例）
• 上皮组织：CK、EMA； • 特异性上皮标记：如TG、 PSA，TTF－1
等； • 间叶组织：vinmentin； • 肌组织：desmin、SMA、MSA、myosin、
myogenin、myoD1； • 血管内皮细胞：CD31、CD34、FVIIIRAg
和临床研究中发挥重要作用,为疾病尤其是肿瘤性
疾病的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了
强有力的手段。
•
目前绝大多数大中型医院都开展了该项技术
检查，我院有待开展此项技术。
2021/1/28
定义及基本原理
定义：
免疫组化，也称为免疫组织化学技术或
免疫细胞化学技术，是应用免疫学基本原 理—抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性 结合的原理，通过化学反应使标记抗体的
2021/1/28
CD15、CD30、Bcl—2、Sig(IgM和IgD) 等； • 胚胎性抗原：CEA、AFP等； • 细胞增殖抗原：PCNA、Ki-67等； • 激素：ER、PR、AR等； • 病毒：HBV、EBV、HPV等； • 癌基因和抑癌基因：c-erBb-2、nm23、 P53、P16和Bcl-2等
显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素
）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋
白质），对其进行定位、定性及定量的研
究
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基本原理： 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异
性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先 将组织或细胞中的某种化学物质提取出来， 以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获 得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或 细胞中的同类的抗原物质。然后再通过化学 显色方法将抗原抗体结合所在的部位显示出
或FVIII；
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• 组织细胞：CD68、Mac387、溶菌酶等； • 神经内分泌：
1、激素标记物：儿茶酚胺、5－HT、多肽 和肽释放因子等； 2、非激素标记物：NSE、CGA、Syn等； • 神经组织： S－100、MBP、Leu7、NSE、GFAP 、 NFP等； • 淋巴造血组织：CD45（LCA）、CD20（ L26）、 CD79a、CD3、 CD45RO、
2021/1/28
• 所用标本类型： 主要为组织标本和细胞标本两大类，
前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片 ）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞 爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组 织标本最常用、最基本的方法，对于组织 形态保存好，且能作连续切片，有利于各 种染色对照观察；还能长期存档，供回顾
2021/1/28
2021/1/28
ຫໍສະໝຸດ Baidu果判断
（表达部位、检测物质及常用标记物）
• 表达部位： 细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核、细胞
多部位及组织等； • 检测物质：
组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原 的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖 、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体 等都可用相应的特异性抗体进行检测。
2021/1/28