液相色谱法在测定碳酸饮料中合成着色剂日落黄的探究
玻碳电极测定饮料中柠檬黄_日落黄
图 1 铁氰酸钾溶液的 CV 图文章编号 ： 1003-8507（2009）18-3514-03 中图分类号 ： R155.5 文献标识码 ： A【实验技术及其应用】玻碳电极测定饮料中柠檬黄、日落黄梁敏思 1， 邹永德 2， 王玉东 1， 白燕 1柠檬黄和日落黄是我国批准使用的 21 种合成着色剂之一。
食用合成着色剂大多为含有苯环或者氧杂蒽结构的化合物， 它 们颜色鲜艳、 稳定， 但对人体存在一定的毒性， 过多使用会对 人体产生危害。
我国已发布的食品中合成着色剂的国家标准参考检验方法有 3 种， 一是高效液相色谱法 ［1，2］， 二 是 薄 层 色 谱法 ［3］， 三 是 极 谱 法 ［4］。
有 文 献 报 道 用 分 光 光 度 法 ［5，6］ 等 方 法 测定 。
鉴于卫生检验工作的需要和电化学方法可对一些 物 质 定 性、 定量的特征， 以极谱法测定为参照， 我们对饮料中的柠檬 黄、 日落黄在玻碳电极上的伏安特性及定量检测的可行性进行 了研究。
结果表明， 在玻碳电极上测定饮料中的柠檬黄、 日落 黄， 方法简便， 结果准确， 并且较之极谱法更为环保。
1 实验部分 1.1 仪器与试剂BAS -100B 型电化学分析仪 （BAS 公司， 美国）， pHS -3C 型 精 密 pH 计 （ 中 国 ， 上 海 雷 磁 仪 器 厂 ） 。
柠 檬 黄 （ GB W100001） 和 日 落 黄 （ GB W100003） 浓 度 均 为 1.00 mg ／ml 。
铁氰化钾、 硝酸钾以及其他试剂均为分析纯， 实验用水为二次蒸馏水。
1.2 玻碳电极预处理基金项目 ： 国家质检总局科研项目经费资助课题 ［2002IK039］ 作者简介： 梁敏思 （1980-）， 女， 在读研究生， 研究方向： 生物分析化学通讯作者： 邹永德， E -mail ： wingdakcho *********；白燕， E -mail ： tbaiyan @作者单位 ： 1.暨南大学化学系 ， 广州 ， 510632； 2.南海出入境检验检疫局电 极 用 氧 化 铝 悬 浊 液 抛 光 ， 在 1 ︰ 1 甲 醇 中 浸 泡 30min ， 依次在 1︰1 硝酸、 1︰1 氨水、 1︰1 乙醇中超声 20 min ， 在 1 ︰1 硝酸中循环伏案扫描 5～8 次， 再次打磨、 抛光后， 以铁氰 酸钾溶液为基准 ， 于 +600～-200 m V 范围内进行循环伏安法 （Cyclic Voltam m etry ， C V ） 扫描至标准图形为止。
超高效液相色谱法快速测定饮料中11种合成色素
ＬＩ Ｙｏ ｎｇ － ｌ ｉ ，ＣＨＥＮ Ｙｉｉ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｍｅ ｔ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ １ ２ ０ ３ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
２ ２ ２ ０ １ ６ ． ｖ ｏ １ ． １ ９ ． Ｎ ｏ ． ６
饮 料 工 业
检测分析※
超高效液相色谱法快速测定饮料中
１ １ 种合成色 素
李 永 利 ，陈 鹰 ，李 杰
２ ０ １ ２ ０ ３ ） （ 上 海 市 计 量 测 试 技 术 研 究 院 ，上 海
摘
要 ：为 了同时检测饮料 中多种禁 限用合成色素 ，建立 了超高效液相色谱法测定 饮料制品 中合成色 素的检测方
ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｃ ａ ￣ｉ ｅ ｄ ｏ ｕ ｔ ｏ ｎ ａ Ｃ１ ８ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ （ ２ ． １ ｍｍ ｉ ． ｄ ｘ １ ０ ０ ｍｍ， １ ． ８ ＃ｍ） ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ＵＶ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｔ ２ ５ ０ ｎ ｍ ａ ｎ ｄ
Ｓ ｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｓ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏｆ １ １ Ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ｅ ｔ ｉ ｃ Ｃｏｌ ｏ ｒ ａ ｎ ｔ ｓ ｉ ｎ Ｂｅ ｖｅ ｒ ａ ｇｅ ｓ ｂ ｙ Ｕｌ ｔ ｒ ａ — ｐｅ ｒ ｆ ｏ ｍ ａ ｒ ｎ ｃ ｅ Ｌｉ ｑ ｕ ｉ ｄ Ｃｈｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐｈ ｙ
ｄ ｅ ｖ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ（ Ｒ Ｓ Ｄ） ｗ ｅ ｒ ｅ ｌ ｅ ｓ ｓ ｔ ｈ ａ ｎ ７ ． ５ ％． Ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ｉ ｓ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ．ａ ｎ ｄ ｃ ａ ｎ ｂ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｏｒ ｆ ｈｅ ｔ
饮品中着色剂的HPLC检测方法
饮品中着色剂的HPLC检测方法作者：陈丰来源：《科学与财富》2020年第26期摘要：着色剂又称食品色素，主要用途是使食品赋予色泽和改善食品色泽的物质。
目前世界上常用的食品着色剂有60余种，我国允许使用的有46种，按其来源和性质分为食品合成着色剂和食品天然着色剂两类。
天然着色剂主要是指由动、植物组织中提取的色素，常用的天然着色剂有辣椒红、甜菜红、红曲红、胭脂虫红、高粱红、叶绿素铜钠、姜黄、栀子黄、胡萝卜素、藻蓝素、可可色素、焦糖色素等等。
合成着色剂主要以苯、甲苯等化工产品为原料，经过一系列反应制成的。
中国食品添加剂使用卫生标准列入的合成色素主要有胭脂红、苋菜红、日落黄、赤藓红、柠檬黄、新红、靛蓝、亮蓝等等。
与天然色素相比，合成色素颜色更鲜艳，不易褪色，且价格较低，但是长期大量使用将会对身体造成伤害，因此需要对合成着色剂的添加量进行检测。
关键词：着色剂;HPLC检测;天然色素;人工色素合成着色剂的性质合成着色剂可分为偶氮类和非偶氮类两种结构。
在酸碱条件下，两种结构的合成着色剂均稳定。
按着色剂的溶解性可分为脂溶性着色剂和水溶性着色剂，脂溶性着色剂由于不溶于水，在体内不易排出，毒性较大等原因，在食品行业已经不允许添加，现在世界各国使用的合成着色剂大部分为水溶性偶氮类着色剂。
合成着色剂的毒性合成着色剂少量食用可经肝肾代谢排出体外，但是若长期或一次性大量食用素含量超标的食品，可能会引起过敏、腹泻等症状。
当摄入量过大，超过人体器官负荷时，会在体内蓄积，对肾脏、肝脏产生一定伤害。
胭脂红等染色剂还会使人体的免疫力下降，并且增加癌症的发病率，因此饮品中的着色剂的使用必须控制在合适的范围，而对着色剂含量的检测也具有十分重要的意义。
本实验参考GBT21916-2008《水果罐头中合成着色剂的测定高效液相色谱法》以及GBT5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》，采用高效液相色谱仪，对着色剂标准品，线性以及加标回收率等进行检测方法验证，并且检测实际饮品中柠檬黄、胭脂红、日落黄的添加情况。
阴离子交换树脂结合近红外漫反射光谱测定碳酸饮料中日落黄
阴离子交换树脂结合近红外漫反射光谱测定碳酸饮料中日落黄1%，105.8% 和99.5%。
富集使样品的最小检出浓度达到9.94 mg/L。
方法提高了近红外光谱技术的检测灵敏度，实现了饮料中微量日落黄的定量测定。
2010-07-06 收稿；2010-12-11 接受本文系长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室（延边大学）开放课题科研基金资助项目E-mail: 1 引言近年来，食品安全越来越为人们所重视。
食品添加剂的种类及用量已成为关注焦点。
合成食用色素因其能改善食品的外观且成本低廉而被广泛应用，但很多合成色素因具有潜在的毒性［1］，用量受到严格控制。
对于合成食用色素的使用，各国都有相应的标准［2］。
现有的合成色素测定方法有薄层色谱法［3］、伏安法［4］、极谱法［5］、分光光度法［6］、毛细管电泳法［7，8］、离子色谱法］2］及高效液相色谱法］2,9〜11］等。
近红外光谱技术作为一种快速、无损的分析手段被广泛应用于农业、石油、食品及医药等领域［12〜15］。
然而，由于近红外光谱分析方法的检测灵敏度较低，难以用于微量组分的检测。
本研究采用强碱性阴离子交换树脂富集饮料中的日落黄，利用近红外漫反射光谱技术对吸附有目标物的树脂直接检测，通过偏最小二乘回归建立定量模型，对碳酸饮料中的日落黄定量分析。
本方法提高了近红外光谱分析方法的检测灵敏度，且无需色素与吸附剂的分离，具有快速、简便的优点。
2 实验部分2.1 仪器与试剂Vertex 70 傅立叶变换多波段红外/ 近红外光谱仪（德国Bruker公司）；近红外漫反射积分球（德国Bruker公司）；SHB-ffi 循环水式多用真空泵（郑州长城仪器公司）；WE-3水浴恒温振荡器（天津欧诺仪器设备公司）；FE20台式pH计（梅特勒-托利多公司）；高效液相色谱仪（美国Waters 公司）。
DIAION SA10A强碱性阴离子交换树脂（W 24目，北京绿百草科技发展XX公司）；合成食用色素日落黄、柠檬黄、亮丽春红5R （纯度》85%上海晶纯试剂XX公司）；NaOH（分析纯，天津市北方天医化学试剂公司）；聚酰胺（用于层析，200目，石家庄伟天科学仪器设备XX公司）；碳酸饮料样品购自超市。
HPLC法测定饮料中日落黄含量的不确定度评定
HPLC法测定饮料中日落黄含量的不确定度评定
王梅;赵凤敏;刘威;董云雷;陈玥昕
【期刊名称】《包装与食品机械》
【年(卷),期】2011(029)004
【摘要】对HPLC测定饮料中的日落黄含量测定结果进行不确定度分析,通过对各影响因素的不确定度评定,标准曲线拟合对饮料中合成着色剂的测量结果不确定度的影响最大,其次是样品处理回收率和实验重复性引入的不确定度对实验结果也有较大的影响.结果表明,饮料中日落黄的含量为(81.61±2.80) mg/kg,k=2.
【总页数】4页(P21-24)
【作者】王梅;赵凤敏;刘威;董云雷;陈玥昕
【作者单位】中国农业机械化科学研究院,北京100083;中国农业机械化科学研究院,北京100083;中国农业机械化科学研究院,北京100083;中国农业机械化科学研究院,北京100083;中国农业机械化科学研究院,北京100083
【正文语种】中文
【中图分类】TS264.4
【相关文献】
1.HPLC法测定动物肝脏中维生素A含量的不确定度评定 [J], 祝海珍
2.HPLC法测定皮革与皮革制品中吡啶硫铜锌含量的不确定度评定 [J], 杨艺欢
3.HPLC法测定地耳草中槲皮苷和异槲皮苷含量的不确定度评定 [J], 邓祖磊;洪秋菊;崔田
4.HPLC法测定碳酸饮料中日落黄含量的不确定度分析 [J], 卢丽明;黄诚
5.HPLC法测定饮料中苯甲酸含量的不确定度评定 [J], 蒋红进;周美玲
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2023版 GB 5009.35 解读培训PPT--合成着色剂的测定
主要变化内容：
GB 5009.35-2023
替代的标准
变化内容
与 GB 5009.35-2016相比
6. 2%甲酸水溶液:移取甲酸 2 mL，用水稀释至 100 mL。
2023版标准中试剂和材料
标准品
1. 柠檬黄(CAS号：1934-21-0) 2. 新红(CAS号：220658-76-4) 3. 苋菜红(CAS号：915-67-3) 4. 靛蓝(CAS号：860-22-0) 5. 胭脂红(CAS号：2611-82-7) 6. 日落黄(CAS号：2783-94-0) 7. 诱惑红(CAS号：25956-17-6) 8. 亮蓝(CAS号：3844-45-9) 9. 酸性红(CAS号：3567-69-9) 10. 喹啉黄(CAS号：8004-92-0) 11. 赤藓红(CAS号：16423-68-0)
性和与峰面积比较进行定量。
试样中的合成着色剂用乙醇氨水溶液提取， 经固相萃取净化后，用配有二极管阵列检测 器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。
3. 样品前处理原理和提取方法
2）试样制备方式变化：新版标准试样制备方式更简单，分为液体和粉状，半固体和固体 试样，要求混合均匀即可。
2016版
2023版
1. 果汁饮料及果汁、果味碳酸饮料等：称取 20 g~40 g(精确至
速范围为10 r/min~ 500 r/min 7. 高速离心机:转速不小于15 000 r/min 8. 固相萃取装置 9. 氮气浓缩装置 10. WAX 混合型弱阴离子交换反相吸附或等效固相萃取柱,150 mg/6 mL 11. 针筒过滤器，PVDF(聚偏氟乙烯)或 PTFE(聚四氟乙烯)滤膜,孔径为 0.45 μm。
【VIP专享】食品中合成着色剂的测定06.07.02
食品中合成着色剂的测定1 范围本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。
本标准适用于食品中合成着色剂的测定。
本方法检出限：新红5ng，柠檬黄4ng,苋菜红6ng，胭脂红8ng,日落黄7ng，赤鲜红18ng，亮蓝26ng，当进样量相当0.025g时，检出浓度分别为0.2mg/Kg,0.16mg/Kg,0.24mg/Kg,0.32mg/Kg,0.28mg/Kg,0.72mg/Kg,0.72mg/Kg,1.04mg/Kg.第一法高效液相色谱法2 原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或掖-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
3 试剂3.1 正己烷。
3.2 盐酸。
3.3 乙酸。
3.4 甲醇：经0.5um滤膜过滤。
3.5聚酰胺粉（尼龙6：过200目筛。
3.6 乙酸铵溶液（0.02mol/L）;称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45um滤膜过滤。
3.7 氨水：量取氨水2Ml.加水100Ml.混匀。
3.8 氨水-乙酸铵溶液（0.02,mol/L）:称取氨水0.5mL，加乙酸铵溶液（0.02mol/L）至1000mL，混匀。
3.9 甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60mL，混匀。
3.10 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。
3.11 无水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取无水乙醇70mL，氨水20mL，水10mL，混匀。
3.12 三正辛胺正丁醇溶液（5％）：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
3.13 饱和硫酸钠溶液。
3.14 硫酸钠溶液（2g/L）。
3.15 pH6的水：水加柠檬酸溶液pH值到6。
3.16 合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100％质量的柠檬黄，日落黄，苋菜红，胭脂红,新红，赤鲜红，亮蓝，靛蓝各0.100g，置100mL容量瓶中，加Ph6水到刻度，配成水溶液（1.00mg/mL）。
高效液相色谱法同时测定饮料中十种着色剂
高效液相色谱法同时测定饮料中十种着色剂易声伟;朱永红;屠大伟;龚迎昆;赵博【期刊名称】《食品与发酵科技》【年(卷),期】2013(000)003【摘要】建立了饮料中10种人工着色剂（柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、诱惑红、赤藓红、亮蓝、新红、酸性红、罗丹明B）的高效液相色谱测定方法。
样品调pH值后，采用Welch Ultimate XB-C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），以0.02mol/L乙酸铵和甲醇梯度洗脱，采用紫外检测器检测。
10种人工合成色素在0.8-40mg/L范围内线性良好，相关系数(r)都在0.999以上，方法加标回收率为90.3-108.0%。
该方法简便，易操作，灵敏度高，分离度好，适用于饮料中10种着色剂的同时测定。
【总页数】4页(P68-71)【作者】易声伟;朱永红;屠大伟;龚迎昆;赵博【作者单位】重庆市计量质量检测研究院，重庆 401123;重庆市计量质量检测研究院，重庆 401123;重庆市计量质量检测研究院，重庆 401123;重庆市计量质量检测研究院，重庆 401123;重庆市计量质量检测研究院，重庆 401123【正文语种】中文【中图分类】TS207.3【相关文献】1.高效液相色谱法同时测定饮料中6种合成着色剂 [J], 张卉2.固相萃取-高效液相色谱法测定饮料中的9种合成着色剂 [J], 戴玉婷;杨晋青;葛淑丽;俞所银3.固相萃取-高效液相色谱法测定碳酸饮料中7种合成着色剂 [J], 张敏4.高效液相色谱法同时测定含乳饮料中7种合成着色剂 [J], 张敏莉5.高效液相色谱法同时测定含乳饮料中7种合成着色剂 [J], 张敏莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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液相色谱法在测定碳酸饮料中合成着色剂日落黄的探究
在GB/T5009.35的第一法中,使用高效液相色谱仪进行着色剂的测定,其样品处理,即色素的提取过程较为繁杂,操作难度较大,同时色素提取过程中损失较多,在254nm的波长下峰形较差。
通过试验,日落黄在484nm的波长下有良好的峰形效果。
标签：高效液相色谱碳酸饮料日落黄测定
合成着色剂日落黄作为食品添加剂,广泛的应用于食品加工生产中,尤其在橙汁类饮料中广泛使用。
过量的食用会对人体造成严重的伤害。
在碳酸饮料中对日落黄的测定大多采用液相色谱法[1],其原理是将饮料中的合成着色剂用聚酰胺粉吸附提取制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性与峰面积比较进行定量。
但是经大量实验发现聚酰胺粉难以将日落黄完全吸附,样品回收率低,同时在254nm波长下峰形分离效果不是很好,而在484nm波长[2]下由较好的峰形分离效果。
笔者通过查阅资料,多次试验对国标法进行了改进,提高了合成着色剂日落黄检测的准确性与快速性。
1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
高效液相色谱仪:LC20A,带紫外检测器,日本岛津公司;
超声波清洗器:KQ5200DE,昆山市超声仪器有限公司;
电热恒温水浴锅:DK98-Ⅱ型,北京中兴伟业仪器有限公司;
日落黄标准溶液:1mg/mL,GBW(E)100015,天津市卫生防病中心;
甲醇:色谱纯;
乙酸铵:分析纯;
柠檬酸:分析纯;
无水乙醇-氨水-水溶液:无水乙醇、氨水、水的体积比为7:2:1,分析纯;
实验用水为超纯水。
1.2 色谱参考条件色谱柱:ODS-C18柱(4.6mm×150mm);柱温:40℃;流动相:甲醇-0.02mol/L乙酸铵,流速为0.8mL/min;检测器:紫外检测器,波长484nm;梯度洗脱程序见表1。
1.3 实验方法将碳酸饮料超声20min,充分去除二氧化碳,准确吸取10mL样液定容至100mL;吸取5mL稀释后样液于小烧杯中,用柠檬酸调节至pH=6,放入60℃电热恒温水浴锅中水浴10min后,加入40mL水和1g聚酰胺粉,再水浴20min;将样品液过砂芯漏斗,用10mL水洗1次,再用無水乙醇-氨水-水溶液溶液解吸4次,每次5mL,收集解吸液于坩埚中,置100℃水浴蒸发至近干,加水溶解定容至5mL,经0.45μm滤膜过滤上机。
1.4 线性实验取浓度为0.5mg/L、1.0mg/L、
2.0mg/L、10.0mg/L标准工作液分别上机测定,得色谱图和校正曲线(图1),计算线性范围,线性相关系数R=0.9998,线性良好。
1.5 精密度与加标回收实验取浓度为
2.0mg/L的标准工作液重复进样4次,峰面积相对标准偏差为0.2%;在碳酸饮料空白样品中添加100mg/L日落黄标准溶液,进行回收率测定,结果为87.2%。
1.6 不同波长测定比较分别在254nm(图2)与484nm(图3)的波长范围下对浓度为
2.0mg/L的标准工作液进行测定比较,在254nm下峰形漂移较大,而在484nm下峰形较为良好,定量结果较为准确。
2 结论
在波长范围484nm条件下日落黄出峰效果明显好于254nm,同时国标法中聚酰胺粉吸附法操作方法复杂,不能有效完全的提取色素,本方法能够较为完全的提取色素。
3 注意事项
碳酸饮料中二氧化碳应充分去除,影响样品取样量重量;柠檬酸应精确调节样品液的pH值;收集解析液的抽滤瓶应保持干净,同时还应充分将抽滤瓶中的解析液全部转移至坩埚中;蒸干后的坩埚应仔细用水充分完全溶解,并全部转移至容量瓶中;在重复上机检测时应严格控制泵压,当泵压在6-7Mpa的范围内方可进行下一次实验。
4 讨论
本方法的色素提取解析理论上还可以应用在新红、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝等合成色素,而对于检测波长、流动相流速的最佳条件还处于摸索、试验阶段,对于这些方面的研究还有很大的拓展空间。
参考文献:
[1]GB/T5009.35-2003.食品中合成着色剂的测定.
[2]程小会,邓敬颂.液相色谱法测定果蔬汁中柠檬黄和日落黄方法优化《化学分析计量》2010年第19卷第2期.。