臭牡丹根正丁醇提取物镇痛作用的研究

中国疼痛医学杂志Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｉｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２００７，１３，（６　臭牡丹根正丁醇提取物镇痛作用的研究　刘建新周　俐　周　青连其深　（赣南医学院药理教研室，赣州３４１０００）　

木　・３４９　

摘要　目的：研究臭牡丹根正丁醇提取物对疼痛小鼠的影响。方法：化学方法制备臭牡丹根正丁　醇提取物。镇痛试验中，采用扭体实验和热板法，在热板法中小鼠分别注射臭牡丹正丁醇与纳洛酮　或吗啡与纳洛酮，探测药物对不良刺激的延迟时间。炎性疼痛试验中，采用角叉菜胶诱发大鼠脚趾　肿胀模型，前列腺素类含量的测定通过紫外可见光分光光度法，经过０．５　ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钾甲醇溶　液，在５０￣Ｃ的温度中为异构后，在波长为２７８　ｎｍ处检测。结果：腹腔注射臭牡丹提取物，发现能明　显抑制０．６％醋酸诱发疼痛（Ｐ＜０．０１），在热板法中，在给臭牡丹药ｌ５分钟、３０分钟、６０分钟、９０　分钟后小鼠明显延长对不良刺激反应时间。实验表明同时给予臭牡丹提取物与纳洛酮１５分钟、３０　分钟、６０分钟、９０分钟后小鼠明显　长对不良刺激反应时间，提示纳洛酮不能翻转其镇痛作用。在　抗炎试验中，臭牡丹提取物呈剂量依赖性地抑制由角叉莱胶诱发炎性肿胀的前列腺素生成。结论：　臭牡丹正丁醇提取物具有镇痛作用，该作用阿片受体无关，与抑制前列腺素合成有关。　关键词　臭牡丹；正丁醇；前列腺素；角叉莱胶　

ＴＨＥ　ＳＴＵＤＹ　ｏＮ　ＡＮＴ　ｏＣＩＣＥＰＴＩＶＥ　ＥＦＦＥＣＴ　ｏＦ　ＣＬＥＲｏＤＥＮＤＲｏＮ　ＢＵＮＧＥＩ　ＳＴＥＵＤ　Ｒｏ．　ｏＴＳ　Ｎ．ＢＵＴＹＬ　ＡＬＣｏＨｏＬ　ＥＸＴＲＡＣＴ　ＩＮ　ＭＩＣＥ　ＬＩＵ　Ｊｉａｎ—Ｘｉｎ，ＺＨＯＵ　Ｌｉ，ＺＨＯＵ　Ｑｉｎｇ，ＬＩＡＮ　Ｑｉ—Ｓｈｅｎ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｇａｎｎａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇａｎｚｈｏｕ　３４　１　０００）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｂｕｎｇｅｉ　ｓｔｅｕｄ　ｒｏｏｔｓ　Ｎ—ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ　ｐａｉｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｎ—ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｂｕｎｇｅｉ　ｓｔｅｕｄ　ｒｏｏｔｓ　ＷＰ．Ｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ　ｔｅｓｔｓ，ｍｉｃｅ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｗｉｔｈ　ｗｒｉｔｈｉｎｇ　ｔｅｓｔ，ａｎｄ　ｈｏｔ　ｐｌａｔｅ　ｔｅｓｔ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｏｔ　ｐｌａｔｅ　ｔｅｓｔ，ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ　ｎａｌｏｘｏｎｅ（４０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．Ｐ．）ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｎ—ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｒ　ｎｏｒ—　ｐｈｉｎｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ．Ｌａｔｅｎｃｙ　ｔｏ　ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ　ｈｏｔ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｈｏｔ　ｐｌａｔｅ　ｔｅｓｔ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐａｉｎ　ｔｅｓｔｓ，Ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｈｉｎｄ　ｐａｗ　ｅｄｅｍａ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ　（ＰＧ）ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｓｓａｙｅｄ　ｂｙ　Ｕｖ—ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｗｉｔｈ　２７８　ｎｍ　ａｆｔｅｒ　０．５　ｍｏｌ／Ｌ　ＫＯＨ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ｒｅａｇｅｎｔ　ｄｉｓｓｉｍｉｌａｔｉｎｇ．ｃａｔａｌｙｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｓｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｔ　５０￣Ｃ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ，ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ　ｖｉａ　ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｈｅ　ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　０．６％ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ（Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ　ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｃｙ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｏｔ—ｐｌａｔｅ　ｔｅｓｔ　ｉｎ　１　５　ｍｉｎ，３０　ｍｉｎ，６０　ｍｉｎ，９０　ｍｉｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ　ｅｘ—　ｔｒａｃｔ　ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ　ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｎａｌｏｘｏｎｅ　ｍａｒｋｅｄ　ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ　ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｃｙ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｏｔ—ｐｌａｔｅ　ｉｎ　１５　ｍｉｎ，３０　ｍｉｎ，６０　ｍｉｎ，９０　ｍｉｎ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ｎａｌｏｘｏｎｅ　ｄｉｄ　ｎｏｔ　ｒｅｖｅｒｔ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｅｆｆｅｃｔ．　Ｉｎ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｔｅｓｔｓ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＧ　ｉｎ　ａ　ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ　ｉｎ　ｉｎｆｌａｍｅｄ　ｐａｗｓ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ　ｂｙ　ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｎ—ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｃｌｅｒｏｄｅｎ—　ｄｒｏｎ　ｂｕｎｇｅｉ　ｓｔｅｕｄ　ｒｏｏｔｓ　ｈａｖｅ　ａｎ　ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｅｔ．Ｔｈｅ　ａｎａｌｇｅｓｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｉＳ　ｎｏｔ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ａｃｔｉ—　ｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｐｉｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｂｕｔ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＧ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｂｕｎｇｅｉ　ｓｔｅｕｄ　ｒｏｏｔｓ；ｎ—ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ；Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ；Ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ　

江西省自然科学基金资助项目（０４４００１３）；江西省卫生厅中医药科研基金资助项目（２００３Ａ３４）　

维普资讯 http://www.cqvip.com 臭牡丹（ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｂｕｎｇｅｉ　ｓｔｅｕｄ）属马鞭草科　植物的干燥根，分布于我国四川、江西、福建、广东等　省。临床多用于疽、疔疮、乳腺炎、关节炎、肝炎等疾　病的治疗ｕ　Ｊ。我们曾报道臭牡丹水提取物具有镇　痛、抗炎、抗变态反应等作用　Ｊ。因此本研究通过　对其黄酮、生物碱等组分提取，确定其镇痛活性成　分，同时初步研究其干预疼痛的作用。　材料与方法　１．试剂与动物臭牡丹采自赣州，取适量臭牡　丹根加ｌ０倍量的蒸馏水煮沸２０分钟后过滤，残渣　再用蒸馏水加热提取一次。合并两次滤液，浓缩后　三倍量９５％的乙醇放置４８　ｈ后，减压过滤并回收滤　液中的乙醇至无醇味。分别用氯仿提取得总生物碱　组分、用醋酸乙酯提取得总黄酮组分、正丁醇提取物　组分，备镇痛试验用。角叉菜胶，加拿大进口分装，　用生理盐水稀释分ｌ０　ｇ／１供试验用。其他试剂均为　分析纯。　动物昆明种小鼠，体重（１９±２）ｇ，雌雄兼用，赣　南医学院实验动物中心提供。大鼠，体重（２１５±　２５）ｇ，雌雄兼用，江西省实验动物中心提供，合格证　号为ＪＸＡ－２００４１　１８。　２．臭牡丹正丁醇提取物对热刺激诱发痛的镇痛　效应取雌性小鼠４６只，体重１８ｇ一２２　ｇ，随机分为　５组：分别为对照组，臭牡丹Ｉ组（ｉｐ，０．５　ｇ／ｋｇ，ｎ＝　ｌ０），Ⅱ组（ｉｐ，１　ｇ／ｋｇ，ｎ＝１０），吗啡组（ｉｐ，１０　ｍｇ／　ｋｇ，ｎ＝１０），臭牡丹总黄酮组（ｉｐ，４ｇ／ｋｇ，ｎ＝８），臭　牡丹总生物碱组（ｉｐ，４　ｇ／ｋｇ，ｎ＝８）。用ＧＪ一８４０２型　热板测痛仪致痛（５５±０．５￣Ｃ）。以小鼠舔后足作为　痛反应的指标，选择痛阈潜伏期不超过３０　Ｓ的小　鼠，ｉｐ给药后ｌ５，３０，６０，９０　ｍｉｎ各测一次痛阈。　３．纳洛酮干预吗啡、臭牡丹正丁醇提取物镇痛　作用取雌性小鼠３０只，体重１８　ｇ～２２　ｇ，随机分　为３组：分别为对照组（ｉｐ，同体积的生理盐水＋纳　络酮４０　ｍｇ／ｋｇ，），臭牡丹正丁醇提取物Ⅱ组（ｉｐ，１　ｇ／ｋｇ＋纳络酮４０　ｍｇ／ｋｇ），吗啡组（ｉｐ，１０　ｍｇ／ｋｇ＋纳　络酮４０　ｍｇ／ｋｇ，）。用ＧＪ一８４０２型热板测痛仪致痛　（５５±０．５￣Ｃ），方法同上。ｉｐ给药后ｌ５、３０、６０、９０　ｍｉｎ各测一次痛阈。　４．臭牡丹正丁醇提取物对冰醋酸诱发痛的镇痛　效应　取小鼠５０只，雌雄兼用，体重１８　ｇ～２２　ｇ，随　机分为３组：分别为对照组，吗啡组，臭牡丹Ⅱ组。　对照组腹腔生理盐水１０　ｍｌ／ｋｇ；吗啡小鼠腹腔注射　１００　ｍｓ／ｋｇ。臭牡丹Ⅱ组小鼠腹腔注射１　ｇ／ｋｇ。给　中国疼痛医学杂志Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＰａｉｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２００７。１３，（６　药，４０　ｍｉｎ后ｉｐ　０．６％冰醋酸０．２　ｍｌ，分别记录ｌ０　ｍｉｎ内各组小鼠扭体次数。　５．臭牡丹正丁醇提取物抑制角叉菜胶引起大鼠　炎痛因子的效应取大鼠随机分为空白组（ｉｐ　ＮＳ，ｎ　：６），、模型组（ｉｐ　ＮＳ，ｎ＝６）、地塞米松组（ｉｐ　２　ｍｓ／　ｋｇ）、臭牡丹正丁醇提取物Ｉ组（ｉｐ０．５　ｓ／ｋｇ），、Ⅱ组　（ｉｐ　１　ｇ／ｋｇ）。模型组，地塞米松组，臭牡丹组Ｉ、Ⅱ　分别腹腔给药３０分钟后每鼠右后足跖皮内注射０．　１　ｍｌ的１％角叉菜胶致炎，与之相对应的空白组每　鼠右足跖皮内注射０．１　ｍｌ等体积的生理盐水。致　炎４小时后分别处死，将致炎足自踝关节上０．５　ｃｍ　处剪下，称重后剪碎皮肤并置于４玎ｌｌ的ＰＢＳ（５０　ｍｍｏｌ／Ｌ）液中浸泡１小时，浸泡液离心（４０００×ｇ，　１５　ｍｉｎ，一４℃），取上清液０．１５　ｍｌ，加入０．５　ｍｏｌ／　ＫＯＨ甲醇溶液１　ｍｌ，５０℃水浴中异构，２０　ｍｉｎ后加　入甲醇１．５　ｍ１，于２７８　ｎｍ处测定ＯＤ值，以每克炎　症组织相当的ＯＤ值表示前列腺素（ＰＧ）含量。　６．统计方法使用ＳＰＳＳ１１．０统计软件包，所　有数据用Ｘ±Ｓ表示，计量资料采用方差分析的Ｐｏｓｔ　Ｈｏｃ检验，两组之间的比较用ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差　异有显著性。　

结　果　１．臭牡丹正丁醇提取物对热刺激诱发痛的镇痛　效应　从表ｌ可以看出，热板法对于对照组不同时间　点（１５、３０、６０、９０　ｍｉｎ）雌性小鼠均有明显的疼痛反　应，且对疼痛阈值影响不明显。吗啡组在相应的时　间点与对照组相比，均表现具有提高小鼠疼痛的阈　值作用。臭牡丹总黄酮组和总生物碱组在不同时间　点与对照组相比对小鼠疼痛阈值的影响不明显（Ｐ　＞０．０５）。臭牡丹正丁醇组对小鼠疼痛阈值的提高　在不同的时间点（１５、３０、６０、９０　ｍｉｎ）存在着明显的　剂量一效应关系。　２．纳洛酮干预吗啡、臭牡丹正丁醇提取物镇痛　作用　从表２可以看出，对照组（生理盐水＋纳络酮）　在不同时间点（１５、３０、６０、９０　ｍｉｎ）雌性小鼠均有明　显的疼痛反应，且对疼痛阈值影响不明显。吗啡＋　纳络酮组在相应的时间点与对照组比较均不表现提　高小鼠疼痛阈值的作用，显示纳络酮能翻转吗啡对　小鼠的镇痛作用。同样方法，臭牡丹正丁醇提取物　＋纳络酮组与对照组相比纳络酮不能翻转臭牡丹正　丁醇提取物对小鼠的镇痛作用（Ｐ＜０．０１）。