细胞染色方法大全
细胞染色方法
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)的配制贮存液：70%酒精溶解，浓度100 μg/ml，配好后用锡纸包起来，避光，可在4摄氏度下长期保存。
使用浓度：贮存液用1xPBS稀释1000倍，最终浓度100 ng/ml。
10x PBS的配制80 g NaCl2 g KClg无水Na2HPO42 g无水KH2PO4加水到1000ml贮存液可根据需要用蒸馏水稀释荧光封片液mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，染色与观察：制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm.注意事项：DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。
上：正常绍鸭成纤维细胞核，下：凋亡核Lyso-Tracker Red是一种溶酶体(lysosome)红色荧光探针，可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。
Lyso-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的DND 99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针，可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。
中性红(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色，但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。
Lyso-Tracker Red呈红色荧光，检测时的最大激发波长为577nm，最大发射波长为590nm。
按照1:20000的比例稀释，可以配制1000ml Lyso-Tracker Red工作液。
可用于家蚕脂肪体细胞autophage监测。
见李胜文章。
细胞染色操作
细胞染色操作细胞染色是一种广泛应用于生物学研究的技术方法，通过染色剂将细胞的结构、组成以及功能等信息可视化。
细胞染色操作是进行细胞染色的关键步骤，下面将介绍细胞染色操作的基本流程和常用染色方法。
一、细胞染色操作的基本流程1. 固定：细胞染色前，需要将细胞固定在载玻片上，以保持其形态和结构。
常用的固定剂有甲醛和乙醛等，将细胞浸泡在固定剂中，使细胞膜和细胞内部结构固定。
2. 渗透：细胞固定后，需要将染色剂渗透到细胞内部，以便染色剂能够与细胞内的目标物质结合。
常用的渗透剂有甲醇、乙醇和醋酸等，将细胞浸泡在渗透剂中，使染色剂能够进入细胞内。
3. 染色：在细胞渗透后，可以选择合适的染色方法进行染色。
常见的染色方法包括荧光染色、核染色和蛋白质染色等。
荧光染色是利用荧光染料对细胞进行标记，常用的荧光染料有荧光素和荧光蛋白等。
核染色可以用来观察细胞核的形态和数量，常用的核染色剂有伊红和苏木精等。
蛋白质染色则是用来检测细胞内特定蛋白质的分布和表达水平，常用的蛋白质染色方法有免疫组织化学染色和免疫荧光染色等。
4. 洗涤：染色后，需要将细胞表面的多余染色剂洗去，以减少背景噪音的干扰。
洗涤的次数和时间可以根据具体染色方法和试剂的要求来确定。
5. 固定封片：细胞染色完成后，需要将载玻片固定在显微镜片上，以便观察和保存。
常用的固定封片剂有海藻糖溶液和透明胶等，将载玻片浸入固定封片剂中，使其固定在显微镜片上。
二、常用的细胞染色方法1. 荧光染色：荧光染色是利用荧光染料对细胞进行标记，以实现对细胞内目标物质的可视化。
常用的荧光染料有荧光素、荧光蛋白和荧光标记的抗体等。
荧光染色可以用于观察细胞内特定分子的分布和定位，例如观察细胞内的细胞器如线粒体、内质网和高尔基体等。
2. 核染色：核染色是用来观察细胞核的形态和数量。
常用的核染色剂有伊红、苏木精和荧光染料DAPI等。
核染色可以用于观察细胞核的大小、形状和染色性质，从而研究细胞的生长和增殖过程。
细胞染色-Hoechst细胞染色方法
细胞染色-Hoechst细胞染色方法1．贴壁细胞1) 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
2) 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
3) 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
4) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
5) 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
6) 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
使细胞接触封片液，切勿弄反。
7) 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
2. 悬浮细胞1) 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
2) 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
洗涤期间手动晃动。
3) 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
4) 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
5) 均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
6) 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
7) 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
8) H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
3. 组织切片1) 常规包埋切片后，脱蜡，透明。
2) PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
可在六孔板中操作。
3) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
细胞化学染色检验方法和要求
定义：
细胞化学染色是细胞学和化学相结合的一 门科学。它是以细胞形态学为基础，根据 化学反应的原理、应用涂片染色的方法观 察细胞的化学成分及其变化的重要方法。
各种类型血细胞的化学成分（酶，脂，糖， 蛋白，核酸）,分布及其量不完全相同,在病 理情况下,血细胞的成分可发生改变.
二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
原理:成熟中性粒细胞内的AKP在PH 9.4~9.6缓 冲
液中能水解基质液中的α-磷酸柰酚，产生α-奈 酚，其与重氮盐偶联，形成不溶性灰黑色偶氮染 料沉淀，定位于酶活性处。
AKP主要存在于中性成熟粒细胞内,其他细胞基 本阴性.
阳性程度：
- —— 胞浆中无紫黑色颗粒 + —— 胞浆中有一层棕黑色不透明或局限地 方 有紫黑色颗粒(约1/4) ++—— 胞浆中颗粒占胞浆1/2或遍布整个胞 浆，但较疏松 +++—— 胞浆中颗粒占3/4，颗粒染色浓 ++++——仅见核影，其余均是黑色
原理： 正常人骨髓中的储存铁主要存在于骨髓
小粒和幼红细胞中。骨髓小粒中的含铁血黄素 称细胞外铁，其中的三价铁与分子中的蛋白质 结合不牢，经稀盐酸处理后而游离，并能在酸 性亚铁氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞 内铁也可用此法显示。根据反应的强弱了解骨 髓中铁的含量。
细胞内铁：中、晚幼红细胞胞浆中有蓝绿色颗 粒,为铁蛋白. 铁粒幼细胞：胞质内有蓝绿色颗粒的幼红细胞. 环铁粒幼红细胞：胞质内有蓝绿色颗粒在6个以 上，并围绕于核周排列成环形者，超过1/2区
4.再障与PNH的鉴别 再障—— NAP增高 PNH —— NAP减低
慢粒与中性粒细胞性类白血病反应的鉴别
三、过氧化物酶染色（POX）
细胞的固定与染色
细胞的固定与染色细胞是构成生物体的基本单位，通过对细胞进行固定与染色，可以更好地观察和研究细胞的结构和功能。
本文将介绍细胞固定与染色的方法及其在生物学研究中的应用。
一、细胞固定细胞固定是指将活细胞杀死并使其保持在某种状态下，以便后续的观察和研究。
常用的细胞固定方法有以下几种：1. 乙醛固定法：将细胞置于4%乙醛溶液中固定约30分钟，然后用磷酸盐缓冲液洗涤。
乙醛固定可以使细胞结构保持完整，适用于常规细胞观察。
2. 热固定法：通常适用于血涂片、涂片或带有厚切片的细胞。
将玻片放在炉中，加热至细胞开始变形，迅速取出冷却。
热固定可以固定大部分细胞成分且保持形态，但可能引起一些细胞成分的破坏。
3. 有机溶剂固定法：将细胞浸泡于有机溶剂如醇类、醚类等中，使细胞内水分逐渐脱失，细胞内的结构保存较好。
但该方法不适用于某些特殊化学成分的固定。
二、细胞染色细胞染色是为了突出细胞的结构或特定组分而对细胞进行染色。
常用的细胞染色方法有以下几种：1. 吉姆萨染色法：将经固定的细胞涂片浸泡在甲醇中，然后放入吉姆萨液中染色。
吉姆萨染色可以同时染色细胞核和细胞质，常用于细胞基础研究。
2. 血红蛋白染色法：适用于红细胞或含有血红蛋白的细胞。
将细胞涂片浸泡在溴化乙锭溶液中染色，血红蛋白会被染成深红色，方便观察。
3. 免疫染色法：利用抗体的特异性与抗原结合，再用染色剂进行着色。
免疫染色可以用于检测特定蛋白质在细胞中的分布位置和表达水平。
三、细胞固定与染色在生物学研究中的应用1. 细胞学研究：细胞固定与染色是细胞学研究中的基础技术，通过观察染色后的细胞，可以研究细胞的结构、形态以及各种细胞器的分布和功能。
2. 细胞生长与分裂研究：利用细胞固定与染色技术，可以观察和研究细胞的生长、分裂和增殖过程，揭示生物体的发育与生长机制。
3. 病理学研究：细胞固定与染色技术在病理学研究中有重要作用。
通过染色，可以观察和诊断细胞和组织中的病变，如肿瘤、感染等。
细胞染色方法及原理
细胞染色方法及原理细胞染色是生物学的一个基础技术，它是在光学显微镜下观察和研究细胞形态和结构的重要手段。
细胞染色方法主要有两种：直接染色和间接染色。
直接染色是指将染料直接应用于细胞样本上，以染色剂与细胞内各种成分产生化学反应，使细胞的结构和形态得以显现。
间接染色则是先将染料应用于载玻片上的细胞样本，通过染色剂与样本内成分的亲和性，使样本中的目标分子标记出来，再用荧光显微镜等方法进行观察和分析。
直接染色直接染色法有许多种，其中比较常用的为H&E染色、吉姆萨染色、利伯曼染色、朗格(KOH)染色等。
H&E染色H&E染色是一种组织染色方法，通常用于病理学中观察组织切片的形态和结构。
这种染色方法基于酸性和碱性染料的亲和性，将形态和结构不同的细胞和组织的成分染色成不同的颜色，从而使它们在显微镜下易于区分和观察。
1. 组织切片烘干，清洁去除蜡垢。
2. 组织切片在浓甲醛中进行固定处理。
3. 组织切片在乙醇溶液中逐渐脱水。
6. 组织切片在染色盒中加入碱性染料碧基苏丹、酸性染料伊红，进行染色。
吉姆萨染色1. 细胞的悬液或细胞涂片，经过风干处理。
2. 片上加吉姆萨染色液。
3. 让染色液在室温下静置10-15分钟。
4. 加入相同容量的蒸馏水。
5. 充分洗去染色液。
6. 用红色染色液对细胞进行染色增强。
7. 最后再次漂洗片子。
利伯曼染色利伯曼染色方法基于利伯曼氏液体染色剂在酸性环境下与细胞成分之间的化学反应，此反应使得不同细胞成分在显微镜下呈现不同的颜色，从而可以隔离和观察各种细胞成分。
1. 细胞经过固定处理，去除胆碱酯酶和脂肪酶的影响。
2. 用pH3.5左右的利伯曼氏液体染色剂钙铵液溶解。
3. 细胞片在盐酸中进行处理，形成酸性条件。
4. 细胞片在液体染料中沉浸数小时，使其染色剂物质进入细胞内。
5. 染片在盐酸溶液中进行退色，清洗时间在20-30秒左右。
6. 将片子过水，并以乙醇调制为10%中度酸性溶液。
科普讲堂细胞染色的快、准、狠
引言概述：细胞染色是生物学和医学领域中一项重要的实验技术，通过使用染色剂将细胞内特定的结构或分子染色，从而能够更清晰地观察和研究细胞的结构和功能。
本文将继续探讨细胞染色技术的快速、准确、高效的方法。
正文内容：1.快速染色方法：1.1原位染色技术：原位染色技术利用特定的染色剂直接将目标分子染色，如荧光原位杂交（FISH），可以在短时间内获得高分辨率的染色结果。
1.2快速染色试剂盒：市场上现有的快速染色试剂盒，如液基细胞学染色试剂盒，能够在几分钟内完成染色过程，并且结果准确可靠。
2.准确染色方法：2.1免疫组化染色技术：免疫组化染色技术通过利用特异性抗体和酶联反应，能够准确地染色目标蛋白质、细胞器或细胞表面分子，广泛应用于病理学和细胞生物学研究。
2.2激光共聚焦显微镜：激光共聚焦显微镜结合荧光标记技术，能够以亚细胞级别的分辨率观察和研究细胞结构，提供准确的染色结果。
3.高效染色方法：3.1多参数流式细胞仪：多参数流式细胞仪结合多重荧光染色技术，能够同时检测多个目标分子的表达和功能状态，提高染色效率和准确性。
3.2增强染色灵敏性的方法：如放大革片染色法、醛固定染色法等，通过改进染色条件和处理方法，增强染色反应的灵敏性，提高染色效率。
4.详细阐述小点：4.1影响细胞染色效果的因素：样本处理、染色剂的选择和浓度、染色时间和温度等因素对细胞染色效果有重要影响。
4.2不同细胞类型的染色方法差异：由于细胞类型的差异，不同染色方法对不同细胞类型的适应性也有所不同，需要根据具体情况选择合适的染色方法。
4.3细胞硬化剂的应用：细胞硬化剂能够改变细胞的形态和结构，有助于染色剂的渗透和固定，提高染色效果。
4.4图像处理和分析软件的应用：图像处理和分析软件能够对染色结果进行定量分析和三维重构，提高研究的准确性和效率。
4.5细胞染色的应用领域：细胞染色技术广泛应用于病理学、生物医学研究、药物筛选、遗传学等领域，对疾病的诊断和治疗提供重要依据。
血细胞的染色方法
血细胞的染色方法
血细胞的染色方法有以下几种：
1. Wright染色法：这是最常用的一种染色方法。
首先将薄片
经过固定、脱水、清洁等处理，然后放置在含有Wright染料
的溶液中染色，之后再用清水洗去多余的染料。
这种方法可以使红细胞呈粉红色，细胞核呈紫色。
2. Giemsa染色法：这种染色方法与Wright染色法类似，但染
料的浓度和染色时间稍有不同。
这种方法可以使红细胞呈橙红色，细胞核呈紫色。
3. 苏木精-伊红染色法：首先将薄片经过固定、脱水、清洁等
处理，然后将薄片放入苏木精溶液中染色，之后再用酒精漂洗，最后用伊红染料染色。
这种方法可以使红细胞呈红色，细胞核呈蓝色。
4. 嗜酸性染色法：这种方法可以用来染色嗜酸性粒细胞。
常用的嗜酸性染料有尤伯霉素、柠檬酸镉等。
5. 免疫染色法：这是一种利用抗体与细胞特定抗原的特异性结合来标记细胞的染色方法。
它可以用来检测一些特定的细胞类型或疾病标志物。
以上是一些常用的血细胞染色方法，在实际应用中选择染色方法会根据具体需要和目的来决定。
细胞凋亡 染色种类
细胞凋亡染色种类
细胞凋亡染色有多种方法，包括以下几种常见的染色种类：
1. HE染色：这是一种常用的细胞凋亡染色方法，使用苏木素-伊红染料对细胞进行染色。
在光学显微镜下观察，凋亡细胞会呈现圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状的现象。
2. Giemsa染色：Giemsa染色也是一种常见的细胞凋亡染色方法。
正常细胞的核色泽均一，而凋亡细胞的染色质会浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状和凋亡小体等。
3. AO/PI双染色法：吖啶橙(AO)是一种荧光染料，能透过细胞膜使核DNA和RNA染色。
在荧光显微镜下观察，活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
碘化丙啶(PI)是一种DNA 结合性染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。
因此，通过AO/PI双染色法可以区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。
4. Hoechst染色：Hoechst染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。
在紫外光激发下，活细胞核呈均匀淡蓝色荧光，凋亡细胞则呈现亮蓝色，或核呈分叶状、边集的荧光。
5. TUNEL染色：这是一种检测细胞凋亡中DNA断裂的方法。
在细胞凋亡过程中，会激活DNA内切酶，导致DNA断裂。
TUNEL 染色可以标记这些断裂的DNA，从而检测细胞凋亡。
以上信息仅供参考，如需了解更多关于细胞凋亡染色的信息，建
议查阅专业书籍或咨询相关领域的专家。
细胞染色技术
细胞染色技术
细胞染色技术是一种重要的生物学研究方法，它可以帮助科学家们更好地了解细胞的结构和功能。
根据不同的目的和需求，细胞染色技术可以分为多种类型。
一、荧光染色技术
荧光染色技术是一种常用的细胞染色技术，它可以将特定的分子或结构染成荧光颜色，从而使其在显微镜下更加清晰可见。
荧光染色技术广泛应用于细胞生物学、分子生物学、免疫学等领域。
例如，通过荧光染色技术可以观察细胞内蛋白质的分布、细胞器的位置和数量等。
二、核酸染色技术
核酸染色技术是一种将DNA或RNA染色的方法，它可以帮助科学家们更好地了解细胞的基因组结构和功能。
核酸染色技术广泛应用于基因组学、遗传学等领域。
例如，通过核酸染色技术可以观察染色体的数量、形态和结构等。
三、组织染色技术
组织染色技术是一种将组织切片后染色的方法，它可以帮助科学家们更好地了解组织的结构和功能。
组织染色技术广泛应用于组织学、病理学等领域。
例如，通过组织染色技术可以观察组织中不同类型的细
胞、细胞的形态和数量等。
四、细胞周期染色技术
细胞周期染色技术是一种将细胞周期不同阶段的细胞染色的方法，它可以帮助科学家们更好地了解细胞的生命周期和分裂过程。
细胞周期染色技术广泛应用于细胞生物学、肿瘤学等领域。
例如，通过细胞周期染色技术可以观察细胞在不同阶段的形态和数量等。
总之，细胞染色技术是一种非常重要的生物学研究方法，它可以帮助科学家们更好地了解细胞的结构和功能。
不同类型的细胞染色技术可以应用于不同的领域，为生物学研究提供了有力的工具。
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Hoechst染色：
hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合 （主要为凋亡活细胞)在紫外
光下将核染为蓝色.
Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。
hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种 hoechsts33258,hoechst33342二
者区别不大,但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258
用于细胞固定后再染色,而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！
染色步骤
PI （Propidium Iodide碘化丙啶）染色
：
是一种可对DNA染色的细胞核
染色试剂，常用于细
胞凋亡检测. 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染
料(红色)，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞
膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细
胞,只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是
如果您只是想知道细胞的死亡情况,而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染
色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够!
annexin-v染色
细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变。其中,磷脂酰丝氨酸
(Annexin—V,PS）外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结
合.这样，Annexin—v 染色阳性，表示细胞处于早期凋亡状态。Annexin-V结合
不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微
镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就
发红色荧光.
JC—1染色 JC—1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以
单体（monomer）存在，发射光以绿光（～525nm）为主；而在高浓度时则可以
形成多聚体（aggregation)，发射光以红光（-590nm）为主.线粒体本身存在一定
的极性（polarization），其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H
+
流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的
形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)
时，线粒内JC—l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的
比值降低.JC—1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势（membrane
potential），而与线粒体的形态、体积和密度都无关,因而能更好地反映线粒体的
功能状态.由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检
测凋亡的早期发生。其实验方法如下.
JC—l染色非常简单。首先可将成品JC—1以DMSO配成储存液（1~5mg/ml）,
储存于-20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去
培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共
聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，
以橙色为主.该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/
绿信号强度，计算其强度比。
钙黄绿素—AM(Calcein-AM）:Calcein —AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内的酯酶作
用,Calcein —AM能脱去AM基,产生的Calcein能发出强绿色荧光（激发:490 nm，发射：
515 nm）。因此Calcein -AM仅对活细胞染色
细胞活力鉴定——台盼蓝染色法
原理：
细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着
色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。
用品：
1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml,用滤
纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。
2. 吸管、血细胞计数板、显微镜
步骤：
1、制备单细胞悬液。并作适当稀释（106 细胞/ml）
2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀.
3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞
结果统计：
镜下观察，死细胞被染成淡蓝色,而活细胞拒染。
根据下式求细胞活力:
活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100
注意事项:台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干
扰计数.
台盼蓝染色原理
通常认为细胞膜丧失完整性,细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是
检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而
死亡的细胞，膜的完整性丧失,通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此
原理，细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜,直接镜下计数或拍照后计数，实现对
细胞存活率比较精确的定量分析。
试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的原理，试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色
的原因
死细胞的细胞膜无屏障作用,台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。活细胞细胞膜有选
择透性，对台盼蓝的透性小，进入细胞慢。若染色时间过长,台盼蓝可能通过胞
吞或胞饮作用进入细胞。
方法 特点 染细胞类型 染色部位 激发光 颜色 意义
Hoechst染色 活细胞（主要是早期凋亡细胞) 细胞核 紫外激发 核染蓝色 检测早期凋亡
PI染色 坏死细胞或凋亡晚
期细胞 细胞核 绿光激发！ 核染红色 检测死细胞或凋亡晚期细胞
annexin—v染
色
早期凋亡细胞 细胞膜 不定 不定 早期凋亡
灵敏指标
JC—1染色
早期凋亡细胞 线粒体膜 绿光为主 功能好的细胞绿色为主反之红为主 早期凋亡
台盼蓝染色 死细胞 降解DNA
？ 蓝色
细胞存活率
Calcein-AM染色
活细胞 ？ 绿荧光光 黄绿色 活细胞数