仪器分析实验2017年度

仪器分析实验指导

实验一气相色谱内标法测定白酒中乙酸乙酯含量

一、实验目的

1、掌握气相色谱内标法测定白酒中乙酸乙酯含量

2、掌握气相色谱仪的结构及使用方法

二、实验原理

试样被汽化后，随同载气进入色谱柱，利用被测定的各组分在气液两相中具有不同的分配系数，在柱内形成迁移速度的差异而得到分离。分离后的组分先后流出色谱柱，进入氢火焰离子化检测器，根据色谱图上各组分峰的保留值与标样对照进行定性，利用峰面积（或峰高），以内标法定量。

三、实验仪器及试剂

仪器：气相色谱仪，氢火焰离子化检测器（FID）；色谱柱：白酒专用填充柱，微量注射器：10微升

试剂：乙醇，色谱纯（分析纯代替）。配成60%乙醇水溶液；

乙酸乙酯，色谱纯，作标样用。2%溶液（用60%乙醇水溶液配制）；

乙酸正丁酯，色谱纯，作内标用。2%溶液（用60%乙醇水溶液配制）；

四、实验步骤

1.仪器的准备，色谱条件的确定

检测器温度：260℃；进样口温度：240℃；

柱温程序：60℃保持1分钟，以3℃/分钟的速率升到90℃，然后以40℃

/分钟升到220℃。

2. 校正因子（f）的测定

吸取2%乙酸乙酯标准溶液1.0mL，移入100mL容量瓶中，然后加入2%内标液1.0mL，用60%乙醇溶液稀释至刻度。上述溶液中乙酸乙酯和内标的浓度均为0.02%（体积分数）。进行GC检测，记录乙酸乙酯和内标峰的保留值及其峰面积（或峰高），其比值计算出乙酸乙酯的相对校正因子（f）。

f= A1* d2/ A2* d1

C= f* A3* C1*10-3/ A1

其中：C---试样中乙酸乙酯的质量浓度，g/L;

f---乙酸乙酯的相对校正因子；

A1---标样f值测定时内标的峰面积（或峰高）；

A2---标样f值测定时乙酸乙酯的峰面积（或峰高）

A3---试样中乙酸乙酯的峰面积（或峰高）

A4---添加于酒样中内标的峰面积（或峰高）

C1---添加在酒样中）内标的质量浓度，mg/L。

d1---内标物的相对密度；

d2---乙酸乙酯的相对密度。

五、试样的测定

吸取10.0mL酒样于10mL容量瓶中，加入2%内标液0.20mL，混匀后，在与f值测定相同的条件性进样，根据保留时间测定乙酸乙酯峰的位置，并测定乙酸乙酯与内标峰面积，求出峰面积之比，计算出酒样中乙酸乙酯的含量。六、思考题

1. 简述程序升温的优点。

2. 白酒分析采用内标法定量，为什么？

实验准备：

仪器2台：气相色谱仪，备用氢火焰离子化检测器（FID）；色谱柱：SE-54色谱柱（50m*0.32mm*0..25mm），微量注射器：10微升

试剂：

60%乙醇水溶液配制：吸取60mL无水乙醇至100mL量筒，加纯净水至100mL即得；

2%乙酸乙酯标样：吸取1mL色谱纯乙酸乙酯至50mL量筒，加上述60%乙醇水溶液至50mL即得；

2%乙酸正丁酯内标：吸取1mL色谱纯乙酸正丁酯至50mL量筒，加上述60%乙醇水溶液至50mL即得；

实验二HPLC法测定饮料中人工色素的含量

一、目的与要求

1. 理解反相色谱的原理和应用。

2. 掌握外标定量方法。

二、基本原理

食品着色剂是以给食品着色为主要目的的添加剂，也称食用色素。食品着色剂使食品具有悦目的色泽，对增加食品的嗜好性及刺激食欲有重要意义。大量的

研究报告指出，过多的食用合成色素不仅不能向人体提供营养物质，某些合成色素甚至会危害人体健康，导致生育力下降、畸胎等等，有些色素在人体内可能转换成致癌物质。危害包括一般毒性、致泻性、致突性（基因突变）与致癌作用。

高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。

三、仪器与试剂

仪器: LC100高效液相色谱仪（ΜV检测器;二元梯度泵），上海五丰。

样品:前处理后的“美年达”色素浓缩样品液、日落黄色素标准溶液。

试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水、乙酸铵。

四、实验内容与步骤

1. 色谱条件

色谱柱Agilent XDB-C18 色谱柱(4.6mm ×250 mm，5μm) ;流动相：（A）0.02mol/L乙酸铵溶液，（B）甲醇；柱温：30 ℃；梯度洗脱程序为0 min~5.0 min，20 %B~35 %B；3.0 min~5.0 min，35 %B；5.0 min~10.0 min，35 % B ~98 % B；

10.0 min ~12.0 min，98 % B；12.0 min ~13.0 min，98 %B~20 %B；13.0 min ~15.0 min，20 %B~20 %B；检测波长484nm。

2. 标准液制备及标准曲线制备

准确称取制备好的日落黄色素标准样品5mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml日落黄色素标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 6μL, 8μL,10μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μg) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。3. 样品液制备

取商品“美年达”50ml于100ml烧杯中，80 ℃加热10分钟驱除二氧化碳，间歇搅拌。用水定容至100ml。

4. 色谱测定

用微量注射器分别吸取10μL标品、试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定性，确定落日黄色谱峰，并记录锋面积。

五、实验数据及处理

1. 以色谱峰面积为纵坐标。落日黄标准系列溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 根据试样溶液色谱图中落日黄峰面积，查出试样溶液中落日黄的含量，并计算样品中落日黄的含量（μg/mL）。

六、问题与讨论

1. 正相、反相色谱分离系统是如何定义的，它们分别适用于什么情况？

2. 为什么可以利用色谱峰的保留时间进行色谱定性分析？