微生物学检验法
食品微生物学检验金黄色葡萄球菌
引用的作品
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血浆凝固酶实验
血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到5 mLBHI和营养琼脂小斜面，36 ±1℃培养18 h～24 h 。 取新鲜配置兔血浆0.5 mL ，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2mL～0.3mL ，振荡摇匀，置 36 ±1℃温箱或水浴箱内。 每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置 时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为 对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36±1℃培 养18 h～48h ，重复试验。
第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计 数
结果
列出完成实验所使用的所有步骤。 切记要为步骤加编号。 添加实验照片。
第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数
最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释 培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优 势，但却具有特殊生理功能的类群 其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆 脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断 该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生 物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫 化和反硫化细菌等。）的数量和检测污水、牛奶及其他食品 中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进 行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因 不能使用平板计数时才采用。 MPN法原理与局限C:\Users\华侃\Desktop\MPN法的原理与局 限性分析.pdf
微生物学设计实验_环境微生物的检测
• 根据Logistic模型可以求出与暴露时间相对应的菌体 含量：
图3-6
• 根据实验数据，可以得到一个具体函数关系式，这 可较准确地得出一定范围内任意时刻的细菌含量。
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参考文献
• 中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验方 法 微生物指标
• 姜起源，谢金星，叶俊， 《数学模型》，清华大学 出版社
• 当天平均温度14.1，当时的相对湿度82%，室外有 微风，近几天属阴雨天气。
实验步骤
• 本大组分为五小组，每组两人
• 五个小组依次测室外、实验室、厕所、大厅和超净台的微 生物含量。
• 具体步骤为：清洗双手—酒精清洁手部—用报纸包裹灭过 菌的平板到各个环境中—开盖接种半个小时—盖盖后报纸 包好拿回实验室—取出放入培养箱48小时—取出观察—对 比统计——结果分析
• 熊文山，瓶(桶)装饮用纯净水微生物检测方法，检测 与分析，2007年第10卷第6期
• /view/1262256.htm
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4、相对于室外、大厅、厕所，教室内空气中的微生 物含量要少，教室内接种的平板里有五个菌落，这 可能跟教室内的空气相对不流通，人流较少等等因 素有关。
5、在超净台上做的实验产生了三个菌落，而且其直 径要小得多。这与其它的比较，微生物含量明显较 少。但是我们认为超净台上空气的微生物含量应该 没这么多，可能在操作中有少许污染。
• 3）同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空 白对照。
• 4）待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于 36℃±1℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为 水样1ml中的菌落总数。
• 5）对每个样品都进行上面步骤并计数。
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3、菌落计数报告方法
• 在对菌落进行计数时，需要参照GB/T5750.12— 2006中的菌落计数及报告方法。
食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验
沙门氏菌检验程序
1 取消样品分类，前增菌液统一为“缓冲蛋白胨 水” 原国标：BPW FDA、AOAC：多种前增菌液 ISO：BPW
2 对所有样品均进行8-18h前增菌 原国标只对冻肉、乳品、蛋品等加工食品进 行前增菌，FDA、AOAC、ISO、Canada MFHPB、CCFRA等组织或国家对所有样品都 进行前增菌。
65.3 81.0 52.0 83.2 80.0 83.0 86.2 106.6 77.7 68.4 98.4 71.6 100.0
I： 进口 C：国产
SS琼脂 上面的志 贺氏菌和 沙门氏菌
C-BS
I-BS
C-HE
I-HE
I-XLD
C-XLD（变形菌落-错误）
I-XLD
样品+BPW+SC+BS
DUPONT Qualicon BAX System 应用DNA分子核酸探针或基因探针技 术制造的全自动PCR分析仪。将已知核 苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法 标记，加入已变性的被检DNA样品中， 在一定条件下即可与该样品中有同源序 列的DNA区段形成杂交双链，从而达到 鉴定样品中DNA的目的。
AOAC 967.25－967.28
处理样品 35℃ 1mL+10mLSC 35℃ 24±2h XLD & HE & BS 35℃ TSI 35℃ 纯培养物 尿素酶＋ 非沙门菌 尿素酶－ 24±2h（BS 24h&48h） & LIA 24±2h 不纯培养物 MAC or XLD or HE 纯培养物 非 沙 门 菌 非 沙 门 菌 24±2h 1mL+10mLTT
35± 1℃ 18~24h & 48h TSI & LIA 血清学试验
微生物学--细菌检验基本技术
• 常用的指示剂：酚红、中性红、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、 甲基红等
一、培养基
（二）培养基分类
1．按成分分类
• 合成培养基：是人工合成，组分明确，都是无机盐和化学 纯物质组成的培养基 • 天然培养基：也称复合培养基。是指含有化学成分不完全 明了或各批物质的成分很难一致的天然物质所组成的培养基， 如蛋白胨、牛肉膏、肉浸液、鸡蛋、马铃薯等。细菌检验常 用
一、培养基
6．灭菌 • 高压蒸汽灭菌
• 无糖：103．4kPa
121．3℃维持
15~20min
• 有糖： 68．95kPa 115℃ 维持
15min
• 间歇蒸汽灭菌法：血清、牛乳、鸡蛋 • 血清凝固器灭菌
一、培养基
7．质量检验 • 无菌试验：将制好的培养基在35℃温箱培养过夜，判定是否 灭菌合格 • 效果检查：按不同的培养要求，接种相应菌种，观察细菌的 生长、菌落形态、色素、溶血及生化反应等特征，判断培养基 是否符合要求
（2）结果 抗酸性细菌和非抗酸性细菌
三、细菌染色标本的检查-革兰染色
三、细菌染色标本的检查
•未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌 •脱色经复染呈蓝色为非抗酸性细菌
三、细菌染色标本的检查
3．其他染色方法
（1）鞭毛染色 （2）荚膜染色
第二节 细菌的培养与分离技术
重点提示
• 培养基的主要成分及作用 • 培养基的种类 • 培养基制备的基本程序 • 细菌接种与培养方法 • 细菌在培养基中的生长现象
2020/2/28
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常用诊断流程
• 表解法 区别比较复杂细菌，将各种细菌及其多 种
特性列成矩阵表格，使相互区别点十分明显，便于分析 比较
•
肠杆菌科初步分属
现代微生物学检验基本技术
现代微生物学检验基本技术随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
第一节微生物形态学检查细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。
一、显微镜检查由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1．普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油（浸）镜放大1 000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2．暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3．相差显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4．荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸收滤光片二种。
用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。
食品微生物检验学
食品微生物检验学二、食品微生物检验学1、概念食品微生物检验学是运用微生物学的实际与技术，研讨食品中微生物的种类、特性等，树立食品微生物学检验方法和确定食品卫生的微生物学规范的一门运用性迷信。
2、特点1)研讨对象以及研讨范围广:食品种类多，各有特征，散布不同；微生物的种类十分多，数量庞大；在食品来源、加工、运输等都能够遭到各种微生物的污染。
2)触及学科多样 :触及生物学、生物化学、工艺学、发酵学等方面的知识，以及兽医学方面的知识等。
3)适用性及运用性强:在促进人类安康方面起着重要的作用。
检验——应用、控制微生物——防止食品蜕变和根绝因食源性病害——保证食品卫生的平安。
4)采用规范化(受法规约束):«中华人民共和国国度规范——食品卫生检验方法»是法定的检验依据。
3、目的为消费出平安、卫生、契合规范的食品提供迷信依据，保证人类取得契合卫生要求、适于人类消费的食品。
4、食品微生物检验学的义务1)研讨各类食品中微生物种类、散布及其特性2)研讨食品的微生物污染及其控制，提高食品的卫生质量3)研讨微生物与食品保藏的关系4)研讨食品中的致病性、中毒性、致腐性微生物5)研讨各类食品中微生物的检验方法及规范5、食品微生物检验的开展食品微生物检验学的开展是与整个微生物学的开展是分不开的。
人类很早就末尾应用微生物的许多特性为人类的消费、生活效劳，现代人类早已将微生物学知识用于工农业消费和疾病防治中，公元前二千多年的夏禹时代，就有仪狄酿酒的记载。
北魏(公元386～534年)«齐民要术»一书中详细记载了制醋的方法。
临时以来官方常用的盐腌、糖渍、烟熏、风干等保管食物的方法，实践上正是经过抑制微生物的生长而防止食物的腐朽蜕变。
在预防医学方面，我国自古就有将水煮沸后饮用的习气。
明朝李时珍在«本草纲目»中指出，将病人的衣服蒸事先再穿就不会传染上疾病，说明已有消毒的记载。
1)致病菌检测阶段微生物的发现：首先观察到微生物的是荷兰人吕文虎克(Antory Van Leeuwenhoek，1632～1723)。
《微生物学检验》课件——第十五章 厌氧菌
破伤风抗毒素 (tetanus antitoxin,TAT) 类毒素注入机体可刺激其产 生具有中和外毒素作用的抗 毒素。可中和破伤风痉挛毒 素。用于破伤风感染的治疗 及紧急预防。
厌氧培养法
1 厌氧罐培养法 2 厌氧器袋法 3 厌氧手套箱法
鉴定
1 形态与染色：
可通过革兰染色观察厌氧菌的染色性、形态及某些特殊 结构，但由于培养基种类及培养时间不同，某些菌种的染色 结果易由革兰阳性变为阴性，此时可用拉丝试验（用于判断 厌氧性革兰阳性菌和革兰阴性菌，方法是加30g/L氢氧化钾 1滴于载玻片上，取一接种环的细菌与之混合，经1min后用 接种环轻轻挑起，能拉起丝状者为革兰阴性菌，不能拉起丝 状者为革兰阳性菌。）协助判断。
二、临床意义
致病机理
3. 使肌体的屈肌， 伸肌和 呼吸肌的运动神经元同 时兴奋，出现破伤风所 特有的“肌肉痉挛”、 “苦笑面容”和“角弓 反张”。
二、临床意义
二、临床意义
小儿破伤风
苦笑面容
二、临床意义
免疫性：抗毒素免疫
破伤风类毒素 （tetanus toxoid) 破伤风痉挛毒素有较强的免疫 原性，经0.3%甲醛作用后可 脱去毒性而保留抗原性，成为 类毒素，可作为疫苗预防破伤 风。用于高危人群
能在低氧分压或无氧条件下生长的细菌。
特点: 种类多 分布广 感染可发生于人体各个部位
厌氧菌
厌氧菌
厌氧芽胞梭菌 无芽胞厌氧菌：一般是
人体正常菌群，致病力弱
厌氧菌特点
特点 种类 分布 致病
芽胞厌氧菌
1个菌属 自然界
外源性感染 多以外毒素致病
无芽孢厌氧菌
40多属 人和动物体内
内源性感染 多为条件致病菌
二、临床意义
微生物学检查方法验证与评价要求
微⽣物学检查⽅法验证与评价要求微⽣物学检查⽅法验证与评价要求审评三部霍秀敏宁黎丽成海平魏农农摘要：本⽂系统阐述了微⽣物限度和⽆菌检查法验证的内容和技术评价要求，⽬的是规范微⽣物限度和⽆菌检查⽅法验证⼯作，供注册申请⼈在进⾏微⽣物限度和⽆菌检查研究时参考，微⽣物限度和⽆菌检查的评价要求，可⽤于具体的审评⼯作。
关键词：微⽣物学检查；⽅法验证；评价要求。
⼀、概述本⽂中的微⽣物学检查⽅法包括微⽣物限度检查法和⽆菌检查法。
微⽣物限度检查法系检查⾮规定灭菌制剂及其原料药、辅料受微⽣物污染程度的⽅法；包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
⽆菌检查法系⽤于检查药典要求的⽆菌药品、原料药、辅料等是否⽆菌的⽅法；若检查结果符合规定，表明在该检验条件下未发现微⽣物污染。
中国药典2000年版及以前的版本虽然收载了微⽣物限度检查法和⽆菌检查法，但在如何保证检验⽅法的科学性及检验结果的准确性⽅⾯存在⼀些问题，与国外药典的相关要求⽐较有⼀定差距，关键是未明确对检验⽅法进⾏必要的⽅法学验证。
以前品种的申报资料中⼀般仅提供微⽣物限度检查或⽆菌检查的检查结果，⽆⽅法学验证内容。
但从保证药品安全性的实际出发，不同品种需要选择建⽴各⾃适当的检查⽅法，即使是仿制药，由于不同⽣产企业采⽤的⼯艺、辅料等的不同，其产品可能表现出不同的抑菌特性，进⾏微⽣物限度检查或⽆菌检查时，具体的检查⽅法也不能简单地照搬，需要通过试验验证核实已有的试验⽅法和检测系统是否适⽤，因此，也需要进⾏必要的⽅法验证。
中国药典2005年版对微⽣物限度检查法和⽆菌检查法进⾏了修订完善，明确规定进⾏药品微⽣物限度检查或⽆菌检查时应进⾏⽅法验证，⽬的是确认试验中应选择药典收载的何种供试液制备⽅法、何种测定⽅法，以及验证确定的检测系统是否适⽤于该药品的检验。
如果供试品有抑菌性，影响测定结果，则应采⽤适当的⽅法消除供试液的抑菌活性后再进⾏检查。
也就是说，只有通过⽅法验证，才能确定针对具体品种的具体的检验⽅法，保证采⽤的⽅法的科学性和检验结果的准确性。
微生物学实验
微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。
2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。
2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。
（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。
3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。
4.四、步骤：1.标记。
组号/姓名、日期、样品来源。
2.接种。
3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。
5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。
2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。
2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。
二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。
微生物学检验标准-4789
食品卫生微生物学检验标准-4789名称∙12/08GB 4789.9-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验∙12/08GB 4789.11-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验∙12/08GB 4789.14-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验∙12/13GB 4789.7-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验∙12/13GB 4789.26-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验商业无菌检验∙12/13GB 4789.28-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求∙12/13GB 4789.31-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验∙12/13GB 4789.39-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数∙06/12GB 4789.38-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数∙06/12GB 4789.34-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定∙06/12GB 4789.13-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验∙06/12GB 4789.5-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验∙06/11现行有效的4789系列食品微生物学检验标准汇编（2012年7月更新）∙04/23食品安全国家标准食品微生物学检验标准汇编 GB4789系列（2010版，已根据卫生部2010年5月26日的勘误公告进行更新）∙04/22GB 4789.40-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验∙04/22GB 4789.35-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验∙04/22GB 4789.30-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验∙04/22GB 4789.18-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验乳与乳制品检验∙04/22GB 4789.15-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数∙04/22GB 4789.10-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验∙04/22GB 4789.4-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验∙04/22GB 4789.3-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数∙04/22GB 4789.2-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定∙04/22GB 4789.1-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验总则∙03/19GB/T 4789.39-2008 食品卫生微生物学检验粪大肠菌群计数∙03/19GB/T 4789.38-2008 食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数∙03/19GB/T 4789.34-2008 食品卫生微生物学检验双歧杆菌检验∙03/19GB/T 4789.30-2008 食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验∙03/19GB/T 4789.27-2008 食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留检验∙03/19GB/T 4789.10-2008 食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验∙03/19GB/T 4789.9-2008 食品卫生微生物学检验空肠弯曲菌检验∙03/19GB/T 4789.8-2008 食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验∙03/19GB/T 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验菌落总数测定∙03/19GB/T 4789.1-2008 食品卫生微生物学检验总则∙09/28GB/T 4789.36-2008 食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157：H7/NM检验∙09/28GB/T 4789.4-2008 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验∙09/24GB/T 4789.7-2008 食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验∙04/11食品卫生微生物学检验标准汇编 GB/T4789系列（2003-2008版）∙04/07GB/T 4789.3-2003 食品卫生微生物学检验大肠菌群测定∙06/21GB/T 4789.32-2002 食品卫生微生物学检验大肠菌群的快速检测∙05/09GB/T 4789.33-2003 食品卫生微生物学检验粮谷、果蔬类食品检验∙05/09GB/T 4789.31-2003 食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬体检验方法∙05/09GB/T 4789.30-2003 食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验∙05/09GB/T 4789.29-2003 食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验∙05/09GB/T 4789.28-2003 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂∙05/09GB/T 4789.27-2003 食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留量检验∙05/09GB/T 4789.16-2003 食品卫生微生物学检验常见产毒霉菌的鉴定∙05/09GB/T 4789.26-2003 食品卫生微生物学检验罐头食品商业无菌的检验∙05/09GB/T 4789.25-2003 食品卫生微生物学检验酒类检验∙05/09GB/T 4789.24-2003 食品卫生微生物学检验糖果、糕点、蜜饯检验∙05/09GB/T 4789.23-2003 食品卫生微生物学检验冷食菜、豆制品检验∙05/09GB/T 4789.22-2003 食品卫生微生物学检验调味品检验∙05/09GB/T 4789.21-2003 食品卫生微生物学检验冷冻饮品、饮料检验∙05/09GB/T 4789.20-2003 食品卫生微生物学检验水产食品检验∙05/09GB/T 4789.19-2003 食品卫生微生物学检验蛋与蛋制品检验∙05/09GB/T 4789.18-2003 食品卫生微生物学检验乳与乳制品检验∙05/09GB/T 4789.17-2003 食品卫生微生物学检验肉与肉制品检验∙05/09GB/T 4789.15-2003 食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数∙05/09GB/T 4789.14-2003 食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验∙05/09GB/T 4789.13-2003 食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌检验∙05/09GB/T 4789.12-2003 食品卫生微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验∙05/09GB/T 4789.11-2003 食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验∙05/09GB/T 4789.10-2003 食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验∙05/08GB/T 4789.4-2003 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验∙05/08GB/T 4789.2-2003 食品卫生微生物学检验菌落总数测定∙05/08GB/T 4789.1-2003 食品卫生微生物学检验总则∙05/08GB/T 4789.9-2003 食品卫生微生物学检验空肠弯曲菌检验∙05/08GB/T 4789.7-2003 食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验∙05/08GB/T 4789.6-2003 食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验∙05/08GB/T 4789.5-2003 食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验。
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微生物学检验法：
微生物学检查法
标本
因鼠疫传染性极强，采集标本时必须严格无菌操作。根据病型采取淋巴结穿刺液、肿胀部位
组织液、脓汁，血液和痰等。人和动物尸体可取肝、脾、肺、病变淋巴结以及心血等。陈旧
尸体取骨髓。将采集标本送至有严密防护措施的专门实验室进行检查，禁止在一般实验室进
行操作。
直接涂片镜检
除血液标本外，一般均需涂片或印片，干燥后用甲醇固定，革兰染色或吕氏美兰染色，镜检。
在不同材料中，菌体大小、形态有很大差异，除典型形态外，往往可见菌体呈多形态性，需
加以注意。
分离培养与鉴定
血液标本需先置肉汤中进行增菌培养。分离培养一般选用血琼脂平板，28摄氏度24小时后，
可见较小的露滴状菌落，继续培养则菌落增大至1～2毫米，中央厚而致密，周边逐渐变薄。
取可疑菌落进行涂片染色镜检，噬菌体裂解试验，血清凝集试验，特异荧光抗体染色等作出
鉴订。
血清学试验
可用于检查鼠疫耶尔森菌抗原或特异性抗体。敏感而特异的试验方法有ELISA、固相放射免
疫分析，SPA协同凝集试验等。
检测核酸
用DNA探针杂交方法或PCR技术检测鼠疫耶尔森菌核酸，有助于鼠疫的诊断。PCR敏感性
极高，蚤体内有10个鼠疫耶尔森菌感染即可用PCR技术检出。
诊断检查
诊断：取决于病人有接触史及肺部受累表现，病因诊断取决于痰、血或淋巴结吸出物革兰染
色、培养，有条件的单位可作直接荧光素标记抗体染色，可提供快速的病因诊断。