培养基模拟灌装

培养基模拟灌装【基本概念】无菌工艺模拟试验就是指采用微生物培养基替代产品(无菌粉末分装的培养基灌装试验实际是将产品替代品溶入培养基中，不是直接替代产品)对无菌工艺进行评估的验证技术。

无菌工艺模拟试验也被称为培养基灌装或培养基灌装试验。

通常需要将培养基暴露于设备、容器密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。

然后，将装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长，并对结果进行评价，借以确定实际生产中产品被污染的概率。

【法规】[1]中国GMP 无菌附录第四十七条无菌生产工艺的验证应当包括培养基模拟灌装试验。

应当根据产品的剂型、培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性选择培养基。

应当尽可能模拟常规的无菌生产工艺，包括所有对无菌结果有影响的关键操作，及生产中可能出现的各种干预和最差条件。

培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应当连续进行3次合格试验。

空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装试验。

培养基模拟灌装试验通常应当按照生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。

培养基灌装容器的数量应当足以保证评价的有效性。

批量较小的产品，培养基灌装的数量应当至少等于产品的批量。

培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应当遵循以下要求:(一)灌装数量少于5000支时，不得检出污染品。

(二)灌装数量在5000至10000支时:1.有1支污染，需调查，可考虑重复试验;2.有2支污染，需调查后，进行再验证。

(三)灌装数量超过10000支时:1.有1支污染，需调查;2.有2支污染，需调查后，进行再验证。

(四)发生任何微生物污染时，均应当进行调查。

[2]EU GMP Annex 1 Manufacture of Sterile Medicinal Products66. Validation of aseptic processing should include a process simulation test using a nutrient medium (media fill).Selection of the nutrient medium should be made based on dosage form of the product and selectivity, clarity, concentration and suitability for sterilisation of the nutrient medium.67. The process simulation test should imitate as closely aspossible the routine aseptic manufacturing process and include all the critical subsequent manufacturing steps. It should also take intoaccount various interventions known to occur during normal production as well as worst-case situations.68. Process simulation tests should be performed as initialvalidation with three consecutive satisfactory simulation tests pershift and repeated at defined intervals and after any significant modification to the HVAC-system, equipment, process and number of shifts. Normally process simulation tests should be repeated twice a year per shift and process.69. The number of containers used for media fills should besufficient to enable a valid evaluation.For small batches, the number of containers for media fills shouldat least equal the size of theproduct batch. The target should be zero growth and the following should apply:When filling fewer than 5000 units, no contaminated units should be detected.When filling 5,000 to 10,000 units:a) One (1) contaminated unit should result in an investigation, including consideration of a repeatmedia fill;b) Two (2) contaminated units are considered cause for revalidation, following investigation.When filling more than 10,000 units:a) One (1) contaminated unit should result in an investigation;b) Two (2) contaminated units are considered cause for revalidation, following investigation.【实施指导】培养基模拟灌装的试验方法无菌工艺模拟试验必须尽可能模拟整个工艺过程，不同类型的无菌产品工艺流程有差别，这就要求无菌工艺模拟试验必须根据无菌产品的类型特点来设计试验方法。

具体产品类型包括:溶液灌装、悬浮液灌装、冻干产品、无菌粉末、无菌霜剂/乳膏剂/乳剂/凝胶/无菌滴眼剂、临床试验样品和小批量产品等。

参考药品GMP指南无菌制剂 12.1 无菌工艺模拟试验[3]方法培养基模拟灌装的实施培养基灌装模拟的是整个工艺过程，包括混合和灌装。

培养基灌装是用于评估整个无菌工艺过程，用以表明如果严格按照工艺要求生产，产品的无菌性有可靠保证。

培养基灌装应在与实际生产相同的条件(环境，设备等)下尽量模拟实际生产完成操作。

应充分考虑生产时可能造成污染的各种因素，应对常规生产中的各种干扰活动进行模拟，应模拟常规生产可能遇到的最差状况下的操作。

通常需要考虑:培养基的选择和处理;培养基灌装试验频率;生产线最长允许运行时间(长时间生产可能导致污染风险增加，例如人员疲劳导致操作失误带来污染)，班次更换、暂停及必要的更衣灌装批次量生产线的运行速度及设置实际生产可能出现的正常干扰次数、类型及复杂程度，以及非常规的干扰和活动(例如设备维修、中断、设备的各种调整)环境监测方案和取样操作关键区域内最多可以容纳的总人数及人员可能的活动容器的密封系统(如规格/大小、类型、对设备的兼容性)无菌条件下的运输、转移次数(如容器转移、加胶塞、加无菌原辅材料) 灌装过程中的称重微生物污染水平测试必要的书面规程说明，如无菌操作相关的规定，允许进行清场的条件[4]参考药品GMP指南无菌制剂 12.2 无菌工艺模拟试验的实施培养基模拟灌装的结果解读培养基灌装结果的接受标准在GMP中有明确规定。

当培养基灌装出现污染时，不管是否符合合格标准，都必须进行调查，科学评估工艺的可靠性以及上市产品可能存在的风险。

对于超出标准的结果，应当在调查清楚原因后再次进行培养基灌装。

培养基灌装试验结果被认作无效的情况是及其罕见的。

更不能直接将失败的培养基灌装结果视为无效。

只有在符合明确的书面规程要求的情况下才能做出试验无效的判定，此时，应给出支持文件并充分说明理由，并且在实际生产中遇到类似情况时也应同样处理。

参考药品[5]GMP指南无菌制剂 12.3 无菌工艺模拟试验结果解读【实例分析】培养基模拟灌装的批次量确定灌装的数量应该满足可以准确模拟正常生产操作的要求。

正常生产操作一般包括但不限于: 典型或常规的干扰动作人员配备水平换班更衣灌装时间如果灌装工艺使用的是隔离器操作,关键的灌装阶段没有或极少人工操作,实际生产的批次量是50000瓶，两个班次在一天内完成。

可以考虑的模拟灌装批次是5000瓶，灌装时间持续两个班。

如果灌装工艺使用的是手工灌装操作,实际生产的批次量是3000-10000瓶，最多一个批次在两个班次内完成。

可以考虑的模拟灌装批次是10000瓶，灌装时间持续两个班。

理由:使用隔离器的操作可以避免人为干扰的污染，因此风险低，而手动灌装操作有很高的污染风险。

在这种情况下，隔离器可以进行最低数量单位的灌装，而手工灌装操作将进行最大数量的灌装(接近或达到最大批量)。

参考药品GMP 指南无菌制剂 12.2 无菌工艺模拟[6]试验的实施培养基模拟灌装结果的污染调查发现污染瓶的调查应从人、机、料、法、环各个方面进行调查。

原因调查应包括如下项: 生产环境监测数据(粒子、浮游菌、沉降碟等)对人员的监测结果高效过滤器的完整性检测数据层流台性能数据(气流流速、压差记录等)生产房间的监控数据(空气流向、工作台面气流方向速度)人员培训情况，操作资质和能力干扰模拟的执行情况无菌室生产用具和其他相关物品的储存情况微生物鉴定结果，至少要鉴定到属。

有条件的话可以鉴定到种以帮助确定来源清洁消毒流程的执行情况设备仪器的校验结果生产前后产品过滤器的泄露测试数据生产过程发生的偏差设备的CIP/SIP的情况培养基的培养研究生产线和培养基的历史数据分析[7]参考药品GMP指南无菌制剂 12.3 无菌工艺模拟试验结果解读PDA与无菌产品和灭菌工艺有关的技术报告PDA technical report NO.22 Process simulation testing for aseptically filled products, 1996PDA technical report NO.28 Process simulation testing for Sterile Bulk Pharmaceutical chemicals,2006PDA technical report NO.36 Current Practices in the Validation of Aseptic Processing, 2001【参考资料】1 中国GMP 无菌附录2 EU GMP Annex 1 Manufacture of Sterile Medicinal Products3 药品GMP 指南无菌制剂 12.1 无菌工艺模拟试验方法4 药品GMP指南无菌制剂 12.2 无菌工艺模拟试验的实施5 药品GMP指南无菌制剂 12.3 无菌工艺模拟试验结果解读6 药品GMP指南无菌制剂 12.2 无菌工艺模拟试验的实施7 药品GMP指南无菌制剂 12.3 无菌工艺模拟试验结果解读。