Hedgehog信号通路通过ERK通路介导肝细胞癌的侵袭和转移(1)
初级纤毛相关基因KIF3A通过Hedgehog信号通路影响口腔鳞状细胞癌增殖研究
延边大学医学学报 ２０２２年３月 第４５卷 第１期与疾病报告２０２０概要［Ｊ］．中国循环杂志，２０２１，３６（６）：５２１－５４５．［２］ ＭＥＤＩＮＡ－ＬＥＹＴＥ ＤＪ，ＺＥＰＥＤＡ－ＧＡＲＣíＡ Ｏ，ＤＯＭíＮＧ－ＵＥＺＰéＲＥＺ Ｍ，ｅｔ ａｌ．．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｉｎｆｌａｍ－ｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｂｉｏｍａｒｋ－ｅｒｓ ａｎｄ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ ＪＭｏｌ Ｓｃｉ，２０２１，２２（８）：３８５０．［３］ ＨＵＡＮＧ Ｃ，ＨＵＡＮＧ ＷＨ，ＷＡＮＧ Ｒ，ｅｔ ａｌ．．Ｕｌｉｎａｓｔａｔｉｎｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｓｗｉｔｃｈｉｎｇ ｏｆ ＰＤＧＦ－ＢＢ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＶＳＭＣｓ ｖｉａ Ａｋｔ／ｅＮＯＳ／ＮＯ／ｃＧＭＰ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ Ｄｅｖｅｌ Ｔｈｅｒ，２０２０，１４：５５０５－５５１４．［４］ 赵高峰．延边地区朝鲜族ＳＭＡＲＣＡ４基因ＳＮＰｒｓ１１２２６０８与冠心病相关性研究［Ｄ］．延吉：延边大学，２０２０．［５］ ＩＭ ＰＫ，ＭＩＬＬＷＯＯＤ ＩＹ，ＫＡＲＴＳＯＮＡＫＩ Ｃ，ｅｔ ａｌ．．Ａｌ－ｃｏｈｏｌ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ａｎｄ ｒｉｓｋｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ａｎｄ ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃａｎｃ－ｅｒｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ：Ａ １０－ｙｅａｒ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ０．５ｍｉｌｌｉｏｎａｄｕｌｔｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２０２１，１４９（３）：５２２－５３４．［６］ ＲＯＳＣＨ ＰＪ．Ｃｏｕｌｄ ｔｈｅ ｂｅｎｅｆｉｔｓ ｏｆ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ａｌｃｏｈｏｌ ｏｕｔ－ｗｅｉｇｈ ａｌｌ ｉｔｓ ｒｉｓｋｓ［Ｊ］．Ｓｔｒｅｓｓ Ｈｅａｌｔｈ，２０１３．［７］ ＷＡＬＬＥＲＡＴＨ Ｔ，ＰＯＬＥＯ Ｄ，ＬＩ Ｈ，ｅｔ ａｌ．．Ｒｅｄ ｗｉｎｅ ｉｎ－ｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ：ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｔｈａｔ ｍａｙ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｉｔｓ ｂｅｎｅ－ｆｉｃｉａｌ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｆｆｅｃｔｓ［Ｊ］．ＪＡＣＣ，２００３，４１（３）：４７１－４７８．［８］ ＺＨＡＯ Ｆ，ＪＩ Ｚ，ＣＨＩ Ｊ，ｅｔ ａｌ．．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｙｅｌｌｏｗｗｉｎｅ ｏｎ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ－１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｉｎ ｒａｔ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｉｃａ，２０１６，７１（１）：２７－３４．［９］ 金春花，刘文博，关宏锏，等．一氧化氮合酶各种亚型的信号通路对心力衰竭的作用机制与治疗的研究进展［Ｊ］．中国循环杂志，２０１７，３２（８）：８３０－８３２．［１０］ＷＡＧＮＥＲ ＭＣ，ＹＥＬＩＧＡＲ ＳＭ，ＬＯＵ ＡＢ，ｅｔ ａｌ．．ＰＰＡＲγｌｉｇａｎｄｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ＮＡＤＰＨ ｏｘｉｄａｓｅ，ｅＮＯＳ，ａｎｄ ｂａｒｒｉｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｈｒｏｎｉｃ ａｌｃｏｈｏｌ ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｅｓ，２０１２，３６（２）：１９７－２０６．［１１］ＴＩＲＡＰＥＬＬＩ ＣＲ，ＬＥＯＮＥ ＡＦ，ＹＯＧＩ Ａ，ｅｔ ａｌ．．Ｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｎｄ ａｌｔｅｒｓ ｔｈｅ ｒｅ－ｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００８，６０（３）：３３１－３４１．［１２］ＣＨＥＮ ＳＳ，ＷＡＮＧ ＺＹ，ＺＨＯＵ Ｈ，ｅｔ ａｌ．．Ｉｃａｒｉｉｎ ｒｅ－ｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｖｉａ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ｐ３８／ＣＲＥＢ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ａｋｔ／ｅＮＯＳ／ＮＯ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｅｘｐ ＴｈｅｒＭｅｄ，２０１９，１８（６）：４７７４－４７８０．■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■［基金项目］ 国家自然科学基金项目（编号：８１５６０１７９）．［收稿日期］ ２０２２－０１－０３［作者简介］ 黄银珠（１９９５—），女，硕士，研究方向为口腔颌面外科．［通信作者］ 金成日，Ｅｍａｉｌ：ｊｃｒ１１０５＠１６３．ｃｏｍ．初级纤毛相关基因ＫＩＦ３Ａ通过Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路影响口腔鳞状细胞癌增殖研究黄银珠，李京旭，金成日（延边大学附属医院口腔科，吉林延吉１３３０００）［摘要］ ［目的］探讨初级纤毛相关基因ＫＩＦ３Ａ通过Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路对口腔鳞状细胞癌增殖能力产生的影响．［方法］选择人舌鳞癌Ｔｃａ８１１３细胞株作为研究对象，分为ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染组和对照组．采用蛋白印迹实验和实时荧光定量实验检测各组ＫＩＦ３Ａ、Ｓｈｈ、Ｇｌｉ１蛋白及ｍＲＮＡ的相对表达水平；利用ＭＴＴ细胞增殖实验观察Ｔｃａ８１１３细胞增殖能力的变化．［结果］蛋白印迹实验结果显示，与对照组比较，ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染组ＫＩＦ３Ａ、Ｓｈｈ、Ｇｌｉ１蛋白表达水平均明显下调（Ｐ＜０．０５）；实时荧光定量实验结果显示，与对照组比较，ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染组ＫＩＦ３Ａ、Ｓｈｈ、Ｇｌｉ１ｍＲＮＡ表达水平均明显下调（Ｐ＜０．０１）；ＭＴＴ细胞增殖实验结果显示，细胞培养２４ｈ时两组细胞增殖间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），细胞培养４８、７２ｈ时ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染组增殖率较对照组明显降低（Ｐ＜０．０１）．［结论］沉默初级纤毛相关基因ＫＩＦ３Ａ可能通过调控Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路抑制口腔鳞癌的增殖能力．［关键词］ 口腔鳞状细胞癌；初级纤毛；ＫＩＦ３Ａ；Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路ＤＯＩ：１０．１６０６８／ｊ．１０００－１８２４．２０２２．０１．００２［中图分类号］ Ｒ ７３９．８ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ １０００－１８２４（２０２２）０１－０００７－０４·７·■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｙａｎｂｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍａｒ．２０２２ Ｖｏｌ．４５ Ｎｏ．１Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｉｌｉｕｍ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ＫＩＦ３Ａｏｎ ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ Ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙＨＵＡＮＧ Ｙｉｎｚｈｕ，ＬＩ Ｊｉｎｇｘｕ，ＪＩＮ Ｃｈｅｎｇｒｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｙａｎｂｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｊｉ １３３０００，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥＴｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｉｌｉｕｍ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ＫＩＦ３Ａｏｎ ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ．ＭＥＴＨＯＤＳ Ｈｕｍａｎ ｔｏｎｇｕｅ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｔｃａ８１１３ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｄ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｑＰＣＲ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＫＩＦ３Ａ，Ｓｈｈａｎｄ Ｇｌｉ１ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｍＲＮＡ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ．ＭＴＴ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｃａ８１１３ｃｅｌｌｓ．ＲＥＳＵＬＴＳ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＫＩＦ３Ａ，Ｓｈｈ ａｎｄ Ｇｌｉ１ｉｎ ｔｈｅ ＫＩＦ３Ａ－ＳｉＲＮＡ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｑＰＣＲ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＫＩＦ３Ａ，Ｓｈｈ ａｎｄ Ｇｌｉ１ｉｎ ｔｈｅ ＫＩＦ３Ａ－ＳｉＲＮＡ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０１）．ＭＴＴ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ａｆｔｅｒ ２４ｈｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ＫＩＦ３Ａ－ＳｉＲＮＡ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｆｔｅｒ ｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ ｆｏｒ ４８ａｎｄ ７２ｈ（Ｐ＜０．０１）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮＳｉｌｅｎｃｉｎｇ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｉｌｉｕｍ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ＫＩＦ３Ａｍａｙｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｙ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ Ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｐｒｉｍａｒｙ ｃｉｌｉａ；ＫＩＦ３Ａ；Ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ 口腔癌人数约占全世界罹患恶性肿瘤人数的３％，其中鳞状细胞癌比例超过９０％．２００５年，ＷＨＯ将口腔鳞状细胞癌（ＯＳＣＣ）定义为一种具有不同分化程度和侵袭性的肿瘤，早期可出现广泛的淋巴结转移，好发于４０～７０岁的烟酒爱好者［１］．口腔癌患者５年生存率约为５０％［２］，患者术后预后差和５年生存率低的主要原因为患者未及时就诊、淋巴结转移及复发［３］．控制ＯＳＣＣ的侵袭转移能力对预后至关重要，认为可偿试从分子水平出发找出更好的治疗方法［４］．初生纤毛属于一种细胞表面的细胞器，在脊椎动物发育和人类遗传疾病中发挥着重要作用．纤毛对发育信号的响应是必需的，而越来越多的证据表明初级纤毛是专属于Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号传导的［５］，而Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号传导对肿瘤的发生发展起着重要作用．研究［６］结果显示，多种肿瘤组织中均存在Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号的异常激活，如肺小细胞癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、恶性胶质瘤、髓母细胞瘤及多发性骨髓瘤等．ＫＩＦ３Ａ属于初级纤毛内运输系统，具有维持和发挥初级纤毛正常功能的作用［７］．本研究探讨了初级纤毛相关基因ＫＩＦ３Ａ通过Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路对ＯＳＣＣ增殖能力产生的影响．１ 材料与方法１．１ 细胞 人舌鳞癌细胞株Ｔｃａ８１１３购自美国菌种保藏中心（ＡＴＣＣ），置于延边大学附属医院中心实验室封存．１．２细胞培养与转染 取Ｔｃａ８１１３细胞置于温度３７℃、二氧化碳体积分数５％、饱和湿度９５％的恒温孵育箱中，用含１０％（质量分数）ＦＢＳ、青链霉素的ＤＭＥＭ高糖型培养基传代培养．在转染前１ｄ，将Ｔｃａ８１１３细胞分为对照组和ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染组后接种至６孔板中，待生长至８０％时进行细胞转染．ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染组转染ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ，对照组未进行转染．转染操作按照ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ２０００Ｒｅ－ａｇｅｎ转染说明书进行．ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ序列（５′－３′）：ＵＡＡ ＧＧＡ ＡＵＧ ＣＵＧ ＡＡＧ ＡＡＧ ＡＣＧ ＡＧＵ Ｃ．１．３ 蛋白印迹实验 转染２４ｈ后分别收集两组细胞，并加入ＲＩＰＡ与ＰＭＳＦ混合（１００:１）冰上裂解细胞，提取细胞总蛋白，采用ＢＣＡ试剂盒测定总蛋白水平．取各组标本行８％（质量分数）十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）电泳，转膜，室温下用５％（质量分数）脱脂奶粉封闭２ｈ．ＴＢＳＴ洗涤３·８·■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■延边大学医学学报 ２０２２年３月 第４５卷 第１期次，每次１０ｍｉｎ，加入兔抗人Ｋｉｆ３ａ一抗（１:１ ０００）、兔抗人Ｓｈｈ一抗（１:２ ０００）、兔抗人Ｇｌｉ１（１:１ ０００）及兔抗人ＧＡＰＤＨ（１:１ ０００）后置于湿盒中，于４℃冰箱中孵育过夜；次日ＴＢＳＴ洗涤３次，每次１０ｍｉｎ，分别加入山羊抗兔ＩｇＧ二抗（１:１０ ０００）后置于湿盒中室温孵育２ｈ；ＴＢＳＴ洗涤３次，每次１０ｍｉｎ，加入增强型化学发光剂ＥＣＬ显影．以ＧＡＰＤＨ为内参，采用Ｉｍａｇｉｎｅ Ｊ软件分析蛋白条带灰度值．１．４ 实时荧光定量实验 转染２４ｈ后分别收集两组细胞，采用ＴＲＮｚｏｌ法提取细胞中的总ＲＮＡ，反转录为ｃＤＮＡ，按照ＲＴ－ＰＣＲ试剂盒说明书以ｃＤＮＡ为模板进行扩增．测定循环阈值（Ｃｔ），采用２－△△Ｃｔ法进行统计．实验重复３次．引物序列，ＫＩＦ３Ａ－正向：５′－ＡＧＡ ＧＣＧ ＴＣＡ ＡＣＧ ＡＧＧ ＴＧＴ ＴＴ－３′；ＫＩＦ３Ａ－反向：５′－ＴＡＴ ＴＧＡ ＴＣＧ ＧＣＡ ＴＣＴ ＴＧＧ ＣＣＣ－３′；Ｓｈｈ－正向：５′－ＣＴＣ ＧＣＴ ＧＣＴ ＧＧＴ ＡＴＧ ＣＴＣ Ｇ－３′；Ｓｈｈ－反向：５′－ＡＴＣ ＧＣＴ ＣＧＧ ＡＧＴ ＴＴＣ ＴＧＧＡＧＡ－３′；Ｇｌｉ１－正向：５′－ＡＧＣ ＧＴＧ ＡＧＣ ＣＴＧ ＡＡＴＣＴＧ ＴＧ－３′；Ｇｌｉ１－反向：５′－ＣＡＧ ＣＡＴ ＧＴＡ ＣＴＧＧＧＣ ＴＴＴ ＧＡＡ－３′；ＧＡＰＤＨ－正向：５′－ＧＧＡ ＧＣＧＡＧＡ ＴＣＣ ＣＴＣ ＣＡＡ ＡＡＴ－３′；ＧＡＰＤＨ－反向：５′－ＧＧＣ ＴＧＴ ＴＧＴＣＡＴＡＣＴ ＴＣＴＣＡＴＧＧ－３′．１．５ ＭＴＴ细胞增殖实验 转染２４ｈ后分别收集两组细胞，以５ ０００个／孔接种于９６孔板中，每组设置５个复孔．培养２４、４８、７２ｈ后弃去旧培养液，每孔加入１００μＬ ＭＴＴ（５ ｇ／Ｌ），于３７℃、５％（体积分数）二氧化碳、９５％饱和湿度的恒温孵育箱中培养４ ｈ，弃去上清液终止反应，每孔加入１００μＬ ＤＭＳＯ，置于振荡器３ ｍｉｎ溶解结晶后在酶标仪波长４９０ ｎｍ处测定各孔的光密度（ＯＤ）值，计算相对细胞增殖率．相对细胞增殖率（％）＝（实验组ＯＤ值／对照组ＯＤ值）×１００％．１．６ 统计学分析 采用Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０软件进行数据分析．计量数据以均数±标准偏差（ ｘ±ｓ）表示，进行两个样本均数的ｔ检验，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义．２ 结果２．１ 沉默ＫＩＦ３Ａ基因后对Ｔｃａ８１１３细胞Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路中Ｓｈｈ、Ｇｌｉ１蛋白表达水平的影响 与对照组比较，ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染组２４ｈ时ＫＩＦ３Ａ、Ｓｈｈ及Ｇｌｉ１蛋白表达水平均明显降低，差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０５），见Ｆｉｇｕｒｅ １．ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ，＊Ｐ＜０．０５．Ｆｉｇｕｒｅ １ Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＫＩＦ３Ａ，Ｓｈｈａｎｄ Ｇｌｉ１ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｃａ８１１３ｃｅｌｌｓ２．２ 沉默ＫＩＦ３Ａ基因后对Ｔｃａ８１１３细胞中Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路Ｓｈｈ、Ｇｌｉ１ｍＲＮＡ表达水平的影响 与对照组比较，ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染２４ｈ组ＫＩＦ３Ａ、Ｓｈｈ及Ｇｌｉ１ｍＲＮＡ表达水平均显著降低，差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０１），见Ｆｉｇｕｒｅ ２．ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ，＊＊Ｐ＜０．０１．Ｆｉｇｕｒｅ ２ Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＫＩＦ３Ａ，Ｓｈｈａｎｄ Ｇｌｉ１ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｃａ８１１３ｃｅｌｌｓ２．３ 沉默ＫＩＦ３Ａ基因后对Ｔｃａ８１１３细胞增殖能力的影响 ＭＴＴ检测结果显示，细胞培养２４ｈ时ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染组与对照组细胞增殖间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；细胞培养４８、７２ｈ时，ＫＩＦ３Ａ－ｓｉＲＮＡ转染组与对照组比较增殖显著受到抑制（Ｐ＜０．０１），见Ｆｉｇｕｒｅ ３．·９·■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｙａｎｂｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍａｒ．２０２２ Ｖｏｌ．４５ Ｎｏ．１ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ，＊＊Ｐ＜０．０１．Ｆｉｇｕｒｅ ３ Ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｔｃａ８１１３ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ３ 讨论初级纤毛为多数分化型细胞表面上的感觉附属物，具有化学感觉和机械感觉功能，在细胞周期控制中具有重要的作用．以往的研究认为初级纤毛在快速增殖的细胞上是找不到的，如癌症细胞，但ＫＯＷＡＬ等［８］通过一种初级纤毛标志物Ａｒｌ１３ｂ在ＨｅＬａ和ＭＧ６３细胞中发现了初级纤毛．未在ＯＳＣＣ中查看是否存在初级纤毛是本研究的不足之处．ＫＩＦ３Ａ属于初级纤毛内运输系统，在维持和发挥初级纤毛功能中起重要作用．ＨＯＡＮＧ－ＭＩＮＨ等［９］的研究结果显示，沉默ＫＩＦ３Ａ基因表达后可降低胶质母细胞瘤中初级纤毛的数量，最终促进肿瘤的发生．玄云泽等［１０］首次在ＯＳＣＣ中发现有初级纤毛，后来有学者亦在口腔白斑与ＯＳＣＣ组织中发现了初级纤毛，ＥＧＦＲ－Ａｕｒｏｒａ Ａ异常信号被激活后，口腔黏膜癌变过程中原发性纤毛逐渐减少［１１］．本研究结果显示，利用ｓｉＲＮＡ技术沉默ＫＩＦ３Ａ基因后ｍＲＮＡ和蛋白表达水平明显降低，提示初级纤毛的检出率降低．Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路对胚胎发育及肿瘤的发生发展具有重要意义．研究［１２－１３］结果显示，Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路的异常激活与皮肤、乳腺、肺及消化道等多种恶性肿瘤的发生、增殖密切相关．程志芬等［１２］利用Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路特异性抑制剂环巴胺处理Ｔｃａ８１１３细胞株后，Ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄ的ｍＲＮＡ和蛋白表达明显减少，且细胞增殖受到抑制．ＫＵＲＯＤＡ等［１４］的研究结果显示，给予Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路抑制剂可抑制肿瘤前沿血管内皮细胞的增殖、迁移，进而抑制肿瘤的增殖和迁移．在小细胞肺癌中，沉默ＫＩＦ３Ａ后初级纤毛明显减少，且Ｓｈｈ信号通路介导的Ｇｌｉ１ｍＲＮＡ表达水平明显降低［１５］，此结果与本研究结果相符．研究［１６］结果显示，Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路转录因子Ｇｌｉ１的激活是恶性肿瘤的一个不良预后因素，利用环巴胺阻断Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路可抑制Ｇｌｉ１激活，并增强头颈部鳞癌对放疗的敏感性，提示Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路影响头颈部鳞癌的放疗预后．总之，本研究揭示了初级纤毛相关基因ＫＩＦ３Ａ在人舌鳞癌Ｔｃａ８１１３细胞Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路中的作用，初步解释了沉默ＫＩＦ３Ａ后可能通过抑制Ｈｅｄｇｅｈｏｇ信号通路影响ＯＳＣＣ细胞的增殖能力，为ＯＳＣＣ患者的靶向治疗提供了理论依据．［参 考 文 献］［１］ ＤＩ ＰＡＲＤＯ ＢＪ，ＢＲＯＮＳＯＮ ＮＷ，ＤＩＧＧＳ ＢＳ，ｅｔ ａｌ．．Ｔｈｅｇｌｏｂａｌ ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ－ａｄｊｕｓｔｅｄｌｉｆｅ－ｙｅａｒ ａｐｐｒｏａｃｈ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｓｕｒｇ，２０１６，４０（２）：３９５－４０１．［２］ ＢＲＯＣＫＬＥＨＵＲＳＴ ＰＲ，ＢＡＫＥＲ ＳＲ，ＳＰＥＩＧＨＴ ＰＭ．Ｏｒａｌｃａｎｃｅｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ：ｗｈａｔ ｈａｖｅ ｗｅ ｌｅａｒｎｔ ａｎｄ ｗｈａｔ ｉｓ ｔｈｅｒｅｓｔｉｌｌ ｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ［Ｊ］．Ｆｕｔｕｒｅ Ｏｎｃｏｌ，２０１０，６（２）：２９９－３０４．［３］ ＢＡＶＬＥ ＲＭ，ＶＥＮＵＧＯＰＡＬ Ｒ，ＫＯＮＤＡ Ｐ，ｅｔ ａｌ．．Ｍｏ－ｌｅｃｕｌａｒ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＪＣＤＲ，２０１６，１０（９）：Ｚ１８－Ｚ２１．［４］ 陈新，徐文华，周健，等．口腔鳞状细胞癌现状［Ｊ］．口腔医学，２０１７，３７（５）：４６２－４６５．［５］ ＧＯＥＴＺ ＳＣ，ＡＮＤＥＲＳＯＮ ＫＶ．Ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｉｌｉｕｍ：ａ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｃｅｎｔｒｅ ｄｕｒｉｎｇ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅ，２０１０，１１（５）：３３１－３４４．［６］ 那玉岩，刘万林．纤毛相关疾病：细胞学机制及转化应用进展［Ｊ］．中国组织工程研究，２０１６，２０（２４）：３６４２－３６４８．［７］ ＮＩＥＷＩＡＤＯＭＳＫＩ Ｐ，ＮＩＥＤＺＩółＫＡ ＳＭ，ＭＡＲＫＩＥＷＩＣＺŁ，ｅｔ ａｌ．．Ｇｌｉ ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃｅｌｌｓ，２０１９，８（２）：１４７．［８］ ＫＯＷＡＬ ＴＪ，ＦＡＬＫ ＭＭ．Ｐｒｉｍａｒｙ ｃｉｌｉａ ｆｏｕｎｄ ｏｎ ＨｅＬａａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ Ｉｎｔ，２０１５，３９（１１）：１３４１－１３４７．［９］ ＨＯＡＮＧ－ＭＩＮＨ ＬＢ，ＤＥＬＥＹＲＯＬＬＥ ＬＰ，ＳＩＥＢＺＥＨ－ＮＲＵＢＬ Ｄ，ｅｔ ａｌ．．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ＫＩＦ３Ａｉｎ ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅ－ｒｉｖｅｄ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ：ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｉｌｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｈｅｄｇｅ－ｈｏｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１６，７（６）：７０２９－７０４３．［１０］玄云泽，李书进，金成日，等．初级纤毛相关基因ＫＩＦ３Ａ通过调控ＥＭＴ过程在口腔鳞状细胞癌中的作用机制研究［Ｊ］．重庆医学，２０２０，４９（１）：７－１２．［１１］ＹＩＮ Ｆ，ＣＨＥＮ Ｑ，ＳＨＩ Ｙ，ｅｔ ａｌ．．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＥＧＦＲ－Ａｕ－ｒｏｒａ Ａ ｉｎｄｕｃｅｓ ｌｏｓｓ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｉｌｉａ ｉｎ ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｏｒａｌ Ｄｉｓ，２０２２，２８（３）：６２１－６３０．［１２］程志芬，崔演，玄延花．Ｐｔｃｈ和Ｓｍｏ在舌鳞状细胞癌Ｔｃａ８１１３细胞中的表达及其意义［Ｊ］．口腔医学研究，２０１５，３１（５）：４３３－４３６．［１３］ＫＯＮＳＴＡＮＴＩＮＯＵ Ｄ，ＢＥＲＴＡＵＸ－ＳＫＥＩＲＩＫ Ｎ，ＺＡＶＲＯＳＹ．Ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｏｍａｃｈ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ ＯｐｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１６，３１：７６－８２．［１４］ＫＵＲＯＤＡ Ｈ，ＫＵＲＩＯ Ｎ，ＳＨＩＭＯ Ｔ，ｅｔ ａｌ．．Ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｏｎｉｃ ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅ－ｓｉｓ［Ｊ］．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１７，３７（１２）：６７３１－６７３７．［１５］ＣＯＣＨＲＡＮＥ ＣＲ，ＶＡＧＨＪＩＡＮＩ Ｖ，ＳＺＣＺＥＰＮＹ Ａ，ｅｔ ａｌ．．Ｔｒｐ５３ａｎｄ Ｒｂ１ｒｅｇｕｌａｔｅ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ａｎｄ ｌｉｇａｎｄ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＨｅｄｇｅｈｏｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，２０２０，１３０（８）：４００６－４０１８．［１６］ＧＡＮ ＧＮ，ＥＡＧＬＥＳ Ｊ，ＫＥＹＳＡＲ ＳＢ，ｅｔ ａｌ．．Ｈｅｄｇｅｈｏｇｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｄｒｉｖｅｓ ｒａｄｉｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｏｍａ－ｄｒｉｖｅｎｔｕｍｏｒ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｎｃｅｒｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１４，７４（２３）：７０２４－７０３６．■·０１·■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■。
Hedgehog信号通路在肾透明细胞癌中的表达及作用
Hedgehog信号通路在肾透明细胞癌中的表达及作用李晓明;杨春雨;关有良【摘要】目的：研究人肾透明细胞癌（RCCC）中Hedgehog信号通路相关因子Shh、Ptch、Smo和Gli1蛋白的表达，探讨Hedgehog信号转导通路的异常激活与RCCC的关系。
方法应用免疫组织化学方法检测76例RCCC标本及12例癌旁正常肾组织，应用蛋白免疫印迹技术检测10例新鲜癌组织及癌旁正常肾组织中Shh、Ptch、Smo和Gli1蛋白的表达。
结果 Shh、Ptch、Smo和Gli1蛋白在RCCC中的异常表达率（分别为52.6%、63.2%、44.7%、60.5%）高于正常肾组织(分别为8.3%、16.7%、8.3%、25.0%)。
且其表达与患者的年龄、性别和肿瘤大小无显著相关，而与肿瘤临床分期有关，随肿瘤的恶性程度加重，表达率增加。
结论 Hedgehog信号转导通路在RCCC中呈现高度激活状态，此通路的激活可能与RCCC的发生、发展密切相关，有望成为治疗RCCC的靶点。
%Objective To investigate the expression of Shh, Ptch, Smo and Gli1 proteins who belongs to components of Hedgehog signaling pathway, and to explore the relationship between the abnormal activated of Hedgehog signaling path⁃way with renal clear cell carcinoma (RCCC). Methods Protein expressions were examined by immunohistochemistry in 76 cases of human RCCC and 12 pericarcinomatous tissues. And 10 fresh specimens from cancer tissues and pericarcinoma⁃tous tissues were used to examine expressions of Shh, Ptch, Smo and Gli1 by Western blotting. Results The expressions of examined proteins were higher in RCCC than that in pericarcinomatous tissue. Shh (52.6%vs 8.3%), Ptch (63.2%vs 16.7%), Smo (44.7%vs 8.3%) and Gli1 (60.5%vs 25.0%). The increased proteins levelswere disassociated with age, gender, and tu⁃morous size in RCCC. But it was significantly correlated with TNM stage of RCCC. The expressions were gradually increased with higher TNM stage of RCCC or more invasive malignancy. Conclusion Hedgehog signaling pathway is highly activated in RCCC. It might be involved in initiation, progression of RCCC, and it might be used as the target for RCCC treatment.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2014(000)012【总页数】4页(P1202-1204,1253)【关键词】肾透明细胞癌;Hedgehog信号通路;免疫组织化学;印迹法,蛋白质【作者】李晓明;杨春雨;关有良【作者单位】辽宁医学院组织胚胎学教研室邮编121001;辽宁医学院附属第一医院病理科;辽宁医学院附属第一医院泌尿外科【正文语种】中文【中图分类】R737.11肾细胞癌(renal cell carcinoma，RCC)是起源于肾实质泌尿小管上皮的恶性肿瘤。
Sonic Hedgehog信号通路在肝细胞癌中的表达及意义
Sonic Hedgehog信号通路在肝细胞癌中的表达及意义罗小军;孔宪炳;阎雄;周江山【摘要】背景与目的:有研究表明Sonic Hedgehog(SHH)信号通路参与多种肿瘤的发生和发展,本研究通过检测SHH信号通路中蛋白Shh、Gli2在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,探讨其与HCC各临床病理特征的关系和意义.方法:采用免疫组织化学法检测30例肝癌组织及10例正常肝组织中蛋白Shh、G1i2的表达;RT-PCR法检测10例HCC组织及相应癌旁组织中和肝痛细胞系HepG2、Huh7中Shh和Gli2mRNA的表达.结果:免疫组织化学法检测结果显示Shh、Gli2在HCC组织中阳性率分别为63.3%(19/30)和66.7%(20/30);Gli2的表达与HCC病理分级和肝门静脉侵犯相关(P=0.017,P=0.024).Shh、Gli2在正常肝组织中无表达.RT-PCR检测结果显示HCC组织和HepG2、Huh7细胞系中都存在Shh、Gli2 mRNA的表达.HCC组织中Shh、Gli2基因表达高于癌旁组织(P<0.05);Shh、Gli2 mRNA在Huh7中的表达强度高于HepG2,但两者间差异无统计学意义(P>0.05).结论:Shh和Gli2在HCC细胞系和组织中的高表达,可能参与了肝癌的发生和发展,为肝癌的防治研究提供了新的实验依据.【期刊名称】《中国癌症杂志》【年(卷),期】2010(020)001【总页数】5页(P12-16)【关键词】Sonic Hedgehog信号通路;肝细胞癌;表达【作者】罗小军;孔宪炳;阎雄;周江山【作者单位】重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,重庆,400016【正文语种】中文【中图分类】R735.7在哺乳动物中，Hedgehog（HH）信号通路主要由HH配体（Sonic hedgehog，Shh；Indian hedgehog，Ihh；Desert hedgehog，Dhh），2个跨膜蛋白受体Ptch和Smo，核转录因子Gli（Gli1、Gli2和Gli3）以及下游目的基因（Ptch、Gli1、WNT、EGF和Cyclins等）组成。
MAPK 信号通路在肝细胞癌发生发展中的作用
MAPK 信号通路在肝细胞癌发生发展中的作用王兆林;王盖昊;于晓辉【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2016(000)002【摘要】The mitogen activated protein kinase(MAPK)signal pathways play important regulatory roles in the oc-curence and development of tumors. The process of apoptosis,proliferation,invasion and metastasis on hepatocellular carcinoma(HCC)cells also closely associated with MAPK signal pathways,such as p38MAPK,ERK and JNK,etc. we will discuss the roles of MAPK signal pathways in tumorigenesis of HCC of these three signal transduction pathway.%丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）信号通路对多种肿瘤的发生发展过程起着重要的调节作用。
肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞的凋亡、增殖、侵袭和转移等过程与p38MAPK、ERK、JNK 等 MAPK 信号通路同样有密切联系。
本文将从这三条信号转导通路对MAPK 信号通路在HCC 发生发展中的作用进行综述。
【总页数】5页(P326-330)【作者】王兆林;王盖昊;于晓辉【作者单位】兰州大学第二临床医学院，甘肃兰州 730050;兰州大学第二临床医学院，甘肃兰州 730050;兰州军区兰州总医院消化内科，甘肃兰州 730000【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.MAPK信号通路在肝癌发生发展及治疗中的作用 [J], 次旦旺久;林坤;卢再鸣;赵相轩;王晓明2.Hedgehog信号通路在肝细胞癌发生发展中的作用 [J], 刘佳;朱琴梅;胡弘毅;王甦3.Wnt和相关信号通路交互作用在非小细胞肺癌发生发展中的作用 [J], 李玉婵;孙杰4.Wnt和相关信号通路交互作用在非小细胞肺癌发生发展中的作用 [J], 李玉婵;孙杰;5.β2肾上腺素能受体信号通路在肝细胞癌发生发展中的作用 [J], 王芳;王凤梅;吕洪敏;韩涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
【国家自然科学基金】_gli1_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140729
科研热词 胰腺肿瘤 胰岛素样生长因子2型 信号传导 hedgehog
推荐指数 1 1 1 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7
科研热词 hedgehog信号通路 胃肿瘤 增殖 乳腺癌 rna干扰 rab23 mkn28细胞
推荐指数 2 1 1 1 1 1 1
科研热词 gli1 hedgehog信号通路 hedgehog 信号通路 ln229细胞 cyclopamine 高表达 高氧症 高氧 颌面发育 雌激素受体 间质 转录因子 表皮生长因子受体 脂肪沉积 胰腺肿瘤 胚胎发育 肿瘤 肺泡ⅱ型上皮细胞 肝细胞癌 肝癌 编码区 结肠癌 细胞黏附 细胞增殖 类风湿 生物信息学 猪 滑膜 新生儿 效应分子 抗凋亡蛋白 成骨分化 慢性胰腺炎 急性肺损伤 大鼠 基因表达谱 基因克隆 单核细胞 动态张应力 关节炎 入侵 免疫组织化学 信号系统 介导 人牙周膜干细胞 乳腺癌细胞 vimentin sonic hedgehog通路 smo shh p物质
推荐指数 5 3 3 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
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推荐指数 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2014年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
2014年 科研热词 gli1 皮质 电针 sonic hedgehog smo shh ptch1 pancreatic cancer mcao chronic pancreatitis 推荐指数 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1
血管形成过程中内皮细胞分化的信号传导通路
血管形成过程中内皮细胞分化的信号传导通路姜霞【摘要】在运动损伤中,软组织损伤的恢复涉及到内皮细胞的分化—血管的再形成发生;另外在某种特定的内环境下,血管内皮细胞可发生反分化现象,最后使得软组织发生钙化或骨化成骨.目前研究表明,一些细胞因子、信号传导通路、转录因子的共同作用是内皮细胞分化过程的主要媒介者.细胞因子之间的交互作用及信号传导通路的激活都能诱导那些激活内皮细胞分化有关基因的转录,最终分化为动脉、静脉和淋巴管内皮细胞.重点从信号传导通路的角度来阐述内皮细胞分化过程中分子信号的调控机制.【期刊名称】《武汉体育学院学报》【年(卷),期】2012(046)006【总页数】5页(P82-86)【关键词】内皮细胞;细胞因子;信号传导通路;软组织损伤【作者】姜霞【作者单位】武汉体育学院医院,湖北武汉430079【正文语种】中文【中图分类】G804.7近年来，关于内皮细胞分化的研究取得了一些实质性的进展，但与我们对造血系细胞向其他细胞分化的分子机制的了解相比，内皮细胞的分化调控机制了解甚少。
目前学者开始关注上皮细胞极性调控与内皮细胞反分化形成的分子机制、炎症与细胞内外环境调控内皮细胞反分化的机制以及TGF-β等信号通路诱导、维持和逆转上皮细胞转分化过程的分子机制等方面研究。
围绕信号通路（包括Smad途径、非Smad途径）和整个信号网络如何交叉协同作用和调控内皮细胞反分化的分子机制，来发现新的内皮细胞反分化的调控基因，从而更加深入地了解内皮细胞分化及反分化在相关的胚胎发育和疾病发生、发展过程中的重要作用及分子机制。
本文对近年来关于内皮细胞分化调控的信号转导通路的研究进行综述。
内皮细胞可分为3种主要的结构类型：连续有孔型、连续无孔型、不连续型［1］。
（1）连续无孔型。
连续无孔型内皮细胞主要存在于动脉、静脉、脑毛细血管、皮肤、肌肉、心脏和肺内血管中。
在这种结构类型的内皮细胞中，紧密连接和粘着连接是形成组织细胞内连接点的两种主要连接类型。
Hedgehog信号通路在鳞状细胞癌中的研究进展
Hedgehog信号通路在鳞状细胞癌中的研究进展王俊菊【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2012(037)011【总页数】3页(P1399-1401)【关键词】癌,鳞状细胞;Hedgehog;信号通路;综述【作者】王俊菊【作者单位】蚌埠医学院第一附属医院,口腔颌面外科,安徽,蚌埠,233004【正文语种】中文【中图分类】R730.261Hedgehog(Hh)信号通路对哺乳动物的器官发育、维持成熟组织内环境稳定、慢性炎症的组织修复、癌症的发生等发挥重要作用［1］。
有研究［2］证实，与Hh 信号通路有关的肿瘤有胃癌、胰腺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、髓母细胞癌、基底细胞癌、子宫颈癌、鳞状细胞癌(SCC)等，该途径的异常和任何分子的突变均与这些肿瘤的发生、发展、转移有关。
现就Hh信号通路与SCC的关系作一综述。
1 Hh信号通路的组成Hh信号通路包括配体、膜蛋白复合物、核转录因子和目的基因。
1.1 Hh配体 1980 年，Nusslein-volhard 等［3］在研究果蝇基因突变时首次发现Hh基因，并因此获得了诺贝尔奖。
该基因在果蝇中只发现1个，但哺乳动物中发现3种Hh同源基因，分别编码Shh、Ihh和 Dhh蛋白［4］，其中 Shh位于7q36(7号染色体长臂36区)，8 909个碱基，3个外显子，编码462个氨基酸，是已知生物作用最广泛的。
Hh蛋白是高度保守的分泌型糖蛋白，具有自我催化和脂质修饰功能。
相对分子量为46 000的Hh前体蛋白经过自身催化为相对分子量20 000的氨基端Hh-N和相对分子量26 000的羧基端Hh-C。
其中Hh-N的羧基端与胆固醇共价结合，经过棕榈酰化为活化的蛋白，然后在Dispatched蛋白的作用下从分泌型细胞释放、运输［5］。
1.2 膜蛋白受体 Patched(Ptch)和Smoothened(Smo)是靶细胞膜上接收和转导Hh信号的膜蛋白。
Ptch位于9q22.3，是12次跨膜的跨膜蛋白，有2个胞外结合域和1个胞内结合域。
转录因子阴阳1在肝细胞癌中的作用
!L"!转录因子阴阳１在肝细胞癌中的作用周 洁ａ，华芸豪ｂ，王晓美ａ，牛俊奇ａ吉林大学第一医院ａ．感染病与病原生物学中心肝胆胰内科，ｂ．感染控制科，长春１３００２１摘要：肝细胞癌（ＨＣＣ）起病隐匿，大多数患者确诊时进展至中晚期，错过了最佳治疗时机，往往预后不良。
转录因子阴阳１（ＹＹ１）是一种多功能转录因子，可调节多种重要基因的转录，在多种肿瘤中发挥重要作用。
既往研究显示，ＹＹ１影响ＨＣＣ许多生物学行为，如增殖、凋亡、迁移和血管生成，还与ＨＣＣ的耐药性及不良预后密切相关。
本文系统总结了ＹＹ１在ＨＣＣ发生发展中的作用相关研究进展，为ＨＣＣ的治疗提供一定的理论依据。
关键词：癌，肝细胞；转录因子；锌指基金项目：国家自然科学基金（８１９７０５１９）ＲｏｌｅｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＹｉｎＹａｎｇ１ｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａＺＨＯＵＪｉｅ，ＨＵＡＹｕｎｈａｏ，ＷＡＮＧＸｉａｏｍｅｉ，ＮＩＵＪｕｎｑｉ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｐａｔｏｌｏｇｙ，ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄＰａｔｈｏｇｅｎｉｃＢｉｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００２１，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＮＩＵＪｕｎｑｉ，ｊｕｎｑｉｎｉｕ＠ｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００１－５４１５－２０２４）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）ｏｆｔｅｎｈａｓａｎｉｎｓｉｄｉｏｕｓｏｎｓｅｔ，ａｎｄｍｏｓｔｐａｔｉｅｎｔｓａｒｅｉｎｔｈｅａｄｖａｎｃｅｄｓｔａｇｅａｎｄｈａｖｅｌｏｓｔｔｈｅｂｅｓｔｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｙｆｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔａｔｔｈｅｔｉｍｅｏｆｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｒｅｓｕｌｔｉｎｇｉｎａｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ａｓａｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ，ＹｉｎＹａｎｇ１（ＹＹ１）ｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆａｖａｒｉｅｔｙｏｆｉｍｐｏｒｔａｎｔｇｅｎｅｓａｎｄｐｌａｙｓａｋｅｙｒｏｌｅｉｎｖａｒｉｏｕｓｔｕｍｏｒｓ．ＰｒｅｖｉｏｕｓｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔＹＹ１ａｆｆｅｃｔｓｍａｎｙｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｂｅｈａｖｉｏｒｓｓｕｃｈａｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｉｓｃｌｏｓｅｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆＨＣＣ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｒｏｌｅｏｆＹＹ１ｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＣＣ，ｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＨＣＣ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ；ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒｓ；ＺｉｎｃＦｉｎｇｅｒｓＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（８１９７０５１９）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２２．０８．０３９收稿日期：２０２２－０２－０８；录用日期：２０２２－０３－１０通信作者：牛俊奇，ｊｕｎｑｉｎｉｕ＠ｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 原发性肝癌是全球第六大常见癌症，也是癌症相关死亡的第三大原因。
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简介--- HH信号 通路
越来越多的证据 表明，HH信号途 径 在多种类型的肿 瘤中起着重要的 作用，例如，基 底细胞癌，胰腺 癌，结肠癌，胃 癌癌，小细胞肺 癌，前列腺癌， 乳腺癌，早期儿 童肝母细胞瘤， 食管癌。
简介--HH信号通 路与肿瘤
HH信号通路在人肝癌异常激活， 该途径被认为参与HCC的发展。 此外，HH信号通路的激活与HCC 的侵袭和转移密切相关 。HH信 号通路的活化标志物，Gli1在 HCC肿瘤组织中明显上调，Gli受 抑制也抑制肝癌肿瘤在体内和体 外的生长和转移 HH信号通路影响MAPK / ERK的 磷酸化导致癌变
简介--HH信号通 路与肝癌
MMP-9在各种人类癌症中主要是 与肿瘤的迁移，侵袭和转移相关 SMO和MMP-9在肝癌组织中的过 表达与肿瘤侵袭转移相关 我们研究Hh信号通路在肝癌侵袭 和转移的的机制，特别是集中研 究Hh信号通路之间的以及和 MAPK信号通路的相互关系
简介--MMP-9
这些数据表明shh，大大提高 Bel7402细 胞了迁移和侵袭能力。
细胞侵袭和迁移
确定Hh信号通路是否通过ERK1／ 2促进肝癌细胞迁移侵袭。MAPK 抑制剂，U0126和PD98059，在 细胞体外采用Bel-7402细胞侵袭 和迁移实验 。 Shh的显著增加BEL-7402细胞的 侵袭和迁移（P＜0.01）。U0126 和PD98059显著减少shh增加的 Bel-7402迁移细胞数量
患者和标本:86例 HCC患者 试剂 细胞培养 免疫组织化学染色 Boyden小室侵袭实验 伤口愈合实验 Western blots 分析 统计分析
材料和方法
对86例肝癌组织和肝癌细胞系BEL-7402的样品进行了检测。 方法 SHH蛋白的表达，核胶质瘤相关致癌基因-1（Gli1），肝癌组织中的MMP9和P-ERK1 / 2使用免疫组织化学,Western blot 分析 Boyden小室法和伤口愈合实验被用来量化检测Bel-7402细胞的侵袭和转移。
转移的HCC组织，Shh阳性表达，p-ERK1／2， MMP-9明显强于无转移的肝组织。Gli1在转移和非 转移性HCC组织细胞核之间的表达具有显著的差异 性（P＜0.01）
这些结果提示HH信号通路通 过调节的MMP-9和P-ERK1 / 2 蛋白表达介导人HCC的侵袭和 转移。
结果表明 KAAD-cyc在 2.KAAD-cyc 抑制肝癌细胞侵袭和迁移 组织培养板的表面显 著抑制肝癌细胞迁移， 显着降低伤口的愈合 区域，与对照组相比 降低45.87%。 同时，KAAD-cyc显著 下降细胞到下室的细 胞的数量 分别用1μmol／L和 4μmol/L KAAD-cyc 处 理 24小时，Boyden小 室入侵检测，抑制率 分别为 43.50%±15.41%和 56.36%±15.17%
3. KAAD-cyc抑制Bel-7402 侵袭的迁移，减少Bel-7402细胞中Gli1, p-ERK1/2蛋白 的表达，但Shh的增加Gli1, p-ERK1/2蛋白的表达。U0126和PD98059抑制Shh诱 导的 Bel-7402细胞侵袭和转移的作用，减少GLI1蛋白的表达，但他们对Gli1的 表达无影响
目的：探讨刺猬因子（ 目的HH） 信号通1.肝细胞癌（HCC）是最常见的原发性肿瘤，具有多方面的分子发病机制。肝 癌成为第五个最常见的恶性肿瘤，癌症相关死亡的第三大原因，最重要的是， 肝癌的发病率正在增加 2.侵袭和转移是肝癌的两个基本特性，确定肝癌患者的预后 3.许多信号转导途径被认为参与肝癌的侵袭和发展，包括MAPK途径，PI3K/ AKT /mTOR通路，Wnt /β-catenin通路，HGF / c-Met通路，Hh信号通路
总的来说，这些数据表明KAADcycC能抑制 Bel-7402肝癌细胞的侵 袭和转移
shh 显著提高 Bel-7402 shh 增加肝癌 Bel-7402 细胞迁移，显着增加 创面愈合的面积。 同 时 ， 当 细 胞 在 0.13μμg ／ ml 和 0.5μg/mLshh 处 理 24 h，Shh可能增加下室 BEL-7402细胞的迁移 入 侵 检 测 ， 在 0.13μg/mL Shh 增 量 率为 49.99%±14.04% ， 0.5μg/mL Shh 增量率 为69.28%±20.29%
HH信号通路通过调节MAPK /ERK通路的 表达，代替MAPK / ERK通路诱导Gli1的 表达，参与人肝癌细胞侵袭和转移
4.人肝癌BEL-7402细胞检测，KAAD-cyc抑制MMP-9蛋白表达，Shh上调MMP-9 蛋白表达，U0126和PD98059都能够抑制Shh升高的MMP-9的表达
4.U0126和 PD98059抑 制Shh诱导 的BEL-7402 细胞迁移和 侵袭
5.KAAD-cyc 在BEL-7402 中显著抑制 GLI1， pERK1／2， MMP-9蛋白 表达
6. Shh在BEL-7402中显著抑制GLI1， p-ERK1／ 2，MMP-9蛋白表达
7.U0126和PD98059显著抑制MMP-9，p-ERK1／2的浓度依赖性的方式的表达。 不过，U0126和PD98059都对Gli1的表达没有影响
结果—1.侵袭和转移的HCC 肝组织中Shh，GLI1， p-ERK1／2，和MMP-9过表达
对 86例有无侵袭和转移的肝癌肝组进行织免疫组化染色 结果表明:1.Shh， Gli1，p-ERK1/2和MMP-9的表达与年龄和肿瘤直径无明显相 关性 2.与肿瘤的病理分级和肿瘤转移有显着的相关性 3. Gli1的表达与MMP-9和p-ERK1／2表达也呈显著的相关性（P＜0.01）
因此，我们得出结论，HH信号通路通 过MAPK / ERK通路介导MMP-9蛋白的表 达
我们假设和推断， HH信号通路 激活ERK通路，随后，ERK通路 上调MMP-9蛋白的表达，从而 介到人肝癌的侵袭和转移。这些 数据可能有助于确定新的诊断标 记物和高侵袭性肝癌的治疗靶点
HH信号通路通过ERK结论 通路上调 MMP-9蛋白的表达介导人肝癌 的侵袭和转移
1.与无转移HCC组织相比，转移 HCC组织的Shh，Gli1 ，MMP-9， 和P-ERK1 / 2的表达，明显增强 2. Gli1的表达也与MMP-9和ERK1 ／2的表达呈正相关
表明HH信号通 路可能通过调节 MMP-9和P-ERK1 / 2蛋白的表达参 与人HCC 的侵袭 和转移