实验二十一 显微镜下直接计数

实验二十一显微镜下直接计数

生物112 周泓兆1102040226

一、目的

学习并掌握利用血球计数板测定微生物细胞数的原理和方法。

二、原理

血球计数法具有直观、简便和快速的优点。其原理是：将经过适当稀释的菌体细胞或孢子悬液，加到血球计数板的计数室内，在显微镜下逐格计数。因为计数室的容积是固定的（0.1mm3），所以可将在显微镜下计得的菌数（或孢子数）换算成单位体积试样中的菌数。由此法得到的是死菌和活菌的总数。

血球计数板是一块特制的载玻片，中部有H形的沟槽将中部分为了上下两个计数室。计数室方格的边长为3mm，每个方格分为九个大格，正中央的大方格被分为25个中方格，每个中方格又被分为16个小方格，这样正中央的大方格总共分成400个小方格，每个小方格的边长为1/20mm，则每个小方格的体积为1/4000mm3（计数室的高度为0.1mm）。每一立方毫米的细胞数为每一小方格的体积为1/4000mm3（计数室的高度为0.1mm）。每一立方毫米的细胞数为每一小方格的×4000。由此得到如下公式：

每一毫升的菌（个）=

16细胞数

平均每个中方格中的菌

×稀释倍数×4000×1000

三、材料

1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）

2.其它：血球计数板，18×180mm试管分装9ml，10ml无菌水，无菌滴管，吸水纸，擦镜纸，振荡器。

四、实验步骤

1.制备菌悬液：向酿酒酵母菌斜面内加入10ml无菌水，用无菌接种环刮下菌苔后，充分震荡，然后稀释至10-3，待用；

2.加菌液：先用擦镜纸将血球计数室擦净，用无菌滴管取少许酿酒酵母菌稀释液滴入上下两个计数室内，盖上专用的盖玻片，绝对不能有气泡，否则重做。

3.计数：先在显微镜下找到计数室，在正中央的大方格沿对角线取九个中方格，计数每个中方格，计数每个中方格的菌数。

五、结果与讨论

酿酒酵母的血球板计数

格数 1 2 3 4 5 6 7 8 9 平均数数目 2 0 2 6 4 3 3 3 3 2.89

每一毫升的菌（个）=

16细胞数

平均每个中方格中的菌

×稀释倍数×4000×1000=2.89×1×4000×1000/16=722500（个）

班级数据如下：

菌体密度

（个/ml）

下四分位1087500

最小值175000

最大值39444444

上四分位3527778

中位数1500000

1.打开血球计数板盒子的时候一定要小心，防止打破。

2.挑起的菌苔不宜过多，菌悬液浓度不宜过大，否则难以计数。

3.滴加菌悬液时应当滴在盖玻片与血球计数板的交界处，不宜滴加过多，防止流到盖玻片之上。如果流到盖玻片之上则需用吸水纸擦净。

4.先用低倍镜确定计数室的位置，再换成高倍镜进行计数。