微生物直接计数法及测微技术
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物大小的测定及显微镜直接计数法微生物的大小测定与显微计数生32 程雨婧 2013012406一、实验目的1. 学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。
3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理1. 显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。
用于校正目镜测微尺的长度.目镜测微尺的中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度(见图1),再以后作为测量微生物细胞的长度。
2. 球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表示(μm)图一:测微尺的校正3. 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。
计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
计数区由400个小方格组成。
每个大方格边长为1mm，其面2积为lmm，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体3积为0.1mm。
使用血球计数板计数时，通常测定四或五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以16或25，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。
设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则: A441mL菌液中的总菌数= ×25×10×B=5×10×A?B (25个中格) 5图二:血细胞计数室构造三、实验器材1. 菌种:啤酒酵母2. 器材:普通光学显微镜、目镜测微尺镜头、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、试管、无菌水、血细胞计数板、计数器、吸管、生理盐水、移液器。
微生物显微技术及微生物计数法
微生物显微技术及微生物计数法•在实验室中常用的有:普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
通常在我们观察细菌、放线菌以及真菌等相对较大的微生物时,可以采用普通光学显微镜。
普通光学显微镜通常能将物体放1500~2000倍。
八、微生物计数法•显微直接计数法：利用血细胞计数板在显微镜下直接计数,能立即得到数值,但死活细胞都计数在内。
•平板计数法：是平板上长成菌落后再计数,反应较真实,但费时太长。
（一）微生物直接计数法•利用血细胞计数板进行直接计数。
•计数前需对样品做适当稀释,然后将经过适当稀释的菌悬液(或孢子悬液)放在血细胞计数板的计数室内,按照在显微镜下观察到的微生物数目代入计算公式运算后,即可得出单位体积微生物总数目。
•此法的优点是直观、快速。
•用于直接测数的菌悬液浓度一般不宜过低或过高(常大于106个/mL)。
活跃运动的细菌应现用甲醛杀死或适度加热以停止其运动。
•显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质,常不易分辨。
•菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petrof Hausser)细菌计数板。
•两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚,不能使用油镜,计数板下部的细菌不易看清。
•每个方格网共分九个大方格,中间的方格即为计数区。
•计数区分为16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格，即计数区都由400个小方格组成。
•每毫升菌悬液中含有细胞数=每个小格中细胞平均数(N)×系数(Κ)×菌液稀释倍数(d)。
系数K=400×104血细胞计数板的便用(1)稀释菌液：根据待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释,目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4~5个酵母细胞为宜,一般稀释100倍即可。
(2)准备计数板：取清洁干燥的血细胞计数板(使用前可通过显微镜检验计数板上有无污物,若有,则需清洗后才能进行计数),在中央的计数室上加盖专用的盖玻片。
实验七微生物血球计数板直接计数法和测微技术教案
1)目镜测微尺的校正：在10×镜下，看清镜台 测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺 与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使 目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重 合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的 刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜 台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每 格长10µm，所以可得
用10×镜观察并将计数室移至视野中央。
在10×镜下计数：计数4个（或5个）中格的 平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上 16（或25）就得出计数区总菌数，最后再换 算到每mL菌液中的含菌数。
注意胞的大小
测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺
实验目的
1．明确显微镜计数的原理并学习使用 血球计数板进行微生物计数的方法。
2．学习并掌握用测微尺测定微生物大 小的方法，增强微生物细胞大小的感 性认识。
二、基本原理
1．血球计数板计数原理
血球计数板是一块特制的载玻片，由四条槽 构成三个平台，中间较宽的又被一短的横槽隔 成两半，每边平台上刻有一个方格网，每个方 格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数 室。每个大方格边长为1mm，盖上盖玻片后， 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以 计 数 室 的 容 积 为 0 . 1 mm3（1×10-4ml）。 计 数时通常统计5个中方格的细菌数，再换算成 1ml菌液中的细菌数。
2．测微尺的使用原理
测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。镜台 测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片， 一般是将1mm分为100格，每格0.01mm （即10μm），用于校正目镜测微尺每格的 相对长度。目镜测微尺是一块可放入接目镜 内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度， 分50和100两种，通过镜台测微尺校正后， 可用于测量细菌的大小。
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物大小的测定及显微镜直接计数法微生物的大小测定与显微计数生32 程雨婧 2013012406一、实验目的1. 学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。
3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理1. 显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。
用于校正目镜测微尺的长度.目镜测微尺的中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度(见图1),再以后作为测量微生物细胞的长度。
2. 球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表示(μm)图一:测微尺的校正3. 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。
计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
计数区由400个小方格组成。
每个大方格边长为1mm，其面2积为lmm，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体3积为0.1mm。
使用血球计数板计数时，通常测定四或五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以16或25，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。
设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则: A441mL菌液中的总菌数= ×25×10×B=5×10×A?B (25个中格) 5图二:血细胞计数室构造三、实验器材1. 菌种:啤酒酵母2. 器材:普通光学显微镜、目镜测微尺镜头、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、试管、无菌水、血细胞计数板、计数器、吸管、生理盐水、移液器。
测定微生物总数的方法
测定微生物总数的方法测定微生物总数是微生物学研究中的一项重要任务，它可以帮助我们了解微生物在环境中的分布和数量。
本文将介绍几种常用的测定微生物总数的方法。
一、直接计数法直接计数法是最直接、最常用的测定微生物总数的方法之一。
它通过使用显微镜观察样品中的微生物细胞数目来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、土壤样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于玻璃片上，用显微镜观察。
3. 在显微镜下，使用目镜和物镜进行放大观察，并使用计数室或计数网格进行计数。
4. 统计不同视野中的微生物数量，并计算平均值，从而得到微生物总数。
二、培养法培养法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品在培养基上培养并生长，然后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取适量的样品，如空气、食品、药品等，制备适当的稀释液。
2. 取一定量的稀释液接种于含有富营养物的培养基上。
3. 将培养基培养在适当的温度和湿度条件下，使微生物生长繁殖。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
三、膜过滤法膜过滤法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品过滤到膜上，然后将膜放置在培养基上进行培养和生长，最后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 将稀释液通过膜过滤装置过滤到膜上。
3. 将膜放置在含有富营养物的培养基上进行培养和生长。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
四、荧光显微镜法荧光显微镜法是一种高级的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品染色，并利用荧光显微镜观察和计数荧光染色的微生物细胞来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于载玻片上，进行定性或定量染色。
微生物质量测定技术及应用研究
微生物质量测定技术及应用研究微生物是生活中一个重要的组成部分。
在环境保护、农业生产、药品生产等领域中，微生物的数量测定是一个非常重要的前提条件。
传统的测定方法需要耗费大量时间和人力物力，并且具有较大的误差。
而微生物质量测定技术及其应用的出现，大大提高了微生物测定的效率和准确度。
一、微生物质量测定技术微生物质量测定技术主要包括直接计数、浓度测定、生长曲线测定等几种方法。
1.直接计数法直接计数法是一种常用的微生物质量测定方法。
该方法是在显微镜下进行观察，通常使用作用于细胞分子中，使其显得更明显的染料进行染色。
常见的染色方法有革兰氏染色和健太染色。
虽然直接计数法有效，但该方法需要耗费大量时间，同时需要特殊的技能和技术背景。
2.浓度测定法浓度测定法是通过分析细胞中某一对特定化合物的反应，来推算细胞数量的一种方法。
这种测量方法可以快速准确地测量细胞数量，但需要使用复杂的设备，如光度计和分光光度计。
3.生长曲线测定法生长曲线法是一个定量的技术，可以测量微生物群落的密度和生长速度，并根据这些数据推断微生物在特定环境条件下的生长速度和最大生长密度。
生长曲线法可以测量大量样本，但该技术需要消耗较多的时间和资源，且需要对基本的微生物生理学和环境生态学知识有了解。
二、微生物质量测定技术的应用1.环境监测在环境监测中，微生物质量测定技术可以快速准确地确定环境中某些特定微生物的数量，帮助确定环境质量状况。
例如，检测空气中霉菌的数量以确保室内空气质量的安全，检测污染源中各种微生物的浓度以判断污染程度。
2.食品生产在食品生产中，微生物质量测定技术可以帮助监测微生物污染，确保食品安全。
例如，监测肉类、水果和蔬菜中的微生物，以便确定污染来源和检测不合格样品。
3.药品生产在药品生产中，微生物质量测定技术可以用于检测微生物在药品生产过程中的污染情况，确保纯度和楼容。
例如检测细菌和霉菌的污染程度以确保生产过程中没有无菌裂解和其他生产活性物质的污染。
微生物大小测定和微生物的显微镜直接计数法
微生物大小测定和微生物的显微镜直接计数法一、实验目的1、了解显微测微尺的结构及掌握显微测微尺用于测量菌体大小的方法。
2、学习使用血细胞计数板计酵母菌细胞数的原理和方法。
二、实验原理（一）、显微测微尺的使用：可用于测量微生物细胞或孢子的大小，它包括镜台测微尺和目镜测微尺两部分。
镜台测微尺是一块特制的载玻片，其中央有一全长为1mm 的刻度标尺，等分成100小格，可用它校正目镜测微尺每小格的长度。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形玻片，每小格的长度随目镜、物镜放大倍数的大小而变动。
在测量之前，应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大倍数物镜下，目镜测微尺每小格所代表的实际长度，再以它作为测量微生物细胞的尺度。
标定公式为：目镜测微尺每格长度(um)=（两条重合线间镜台测微尺的格数/两条重合线间目镜测微尺的格数）*10；计算公式：微生物大小(um)=目镜测微尺格数* 目镜测微尺每格长度(um) （二）、显微镜直接计数法：其原理是将经过适当稀释的微生物细胞或孢子悬液，加至血细胞计数板的计数室中，在显微镜下逐格计数。
由于计数室的容积是固定的（0.1mm3）,故可将在显微镜下计得的菌体细胞数换算成单位体积试样中的含菌量。
此法是一种常用的微生物总菌计数法。
血细胞计数板上的计数室位于中央平台短槽两侧的2个短平台；其上各有一方格网，它被划分成9大格，中央大格为计数室。
该计数室又被划分为400个小格，其中包括25个中格，四周均有双线界限加以区分。
计数公式：1ml菌液中的总菌数 =（5个方格中的总菌数/5）× 25 ×10000 × 稀释倍数三、实验器材菌种：酵母菌仪器：显微镜，镜台测微尺，目镜测微尺，血细胞计数板等其它：载玻片，盖玻片，擦镜纸等四、实验步骤（一）、微生物大小测定：1、装目镜测微尺；2、放置镜台测微尺；3、目镜测微尺的格数标定：按照标定公式的要求，分别测出低倍镜和高倍镜下的目镜测微尺每格所代表的实际长度。
实验六 微生物的大小测定和显微直接计数
五、实验结果
1、微生物大小测定实验结果
（1）将目镜测微尺校正结果填入下表： ）将目镜测微尺校正结果填入下表：
接物镜 低倍镜 高倍镜 油 镜 接物镜倍数 目镜测微尺格 数 镜台测微尺格 数 目镜测微尺每格代表 的长度(μm)
接目镜的放大倍数________
（2） 酵母细胞大小的测量结果： ） 酵母细胞大小的测量结果：
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的 特制玻片制成的。 特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的 构成三个平台。中间的平台较宽， 槽，构成三个平台。中间的平台较宽， 其中间又被一短横槽隔为两半， 其中间又被一短横槽隔为两半，每半边 上面个刻有一个方格网。 上面个刻有一个方格网。 方格网上刻有9个大方格 个大方格， 方格网上刻有 个大方格，其中只有中间 的一个大方格为计数室， 的一个大方格为计数室，供微生物计数 这一大方格为边长为1mm正方形， 正方形， 用。这一大方格为边长为 正方形 深度为0.1mm，其体积为 深度为 ，其体积为0.1mm3。 。
微生物 名称 目镜测微尺每 格代表的长度 /µm 宽 目镜测微 尺格数 宽度 /µm 目镜测微 尺格数 长 长度/将结果记录于下表中， 将结果记录于下表中，A表示五个中方格中的总 菌数； 表示菌液稀释倍数。 菌数；B表示菌液稀释倍数。
各中格中菌数 1 第一室 第二室 2 3 4 5 A B 二室平 菌数/ml 均值
(1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻 目镜测微尺的构造 其中央刻有精确的等分刻度，有等分为50小 片，其中央刻有精确的等分刻度，有等分为 小 格和100小格两种。刻度的大小是随使用的接目 小格两种。 格和 小格两种 镜和接物镜的放大倍数而改变， 镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用镜台 测微尺来标定。 测微尺来标定。 (2)镜台测微尺的构造 镜台测微尺为一块特制 镜台测微尺的构造 的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度， 的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度， 将长1mm的直线等分为 小格，每小格等于 的直线等分为100小格 小格， 将长 的直线等分为 10µm。 。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
微生物直接计数法及测微技术
实验类型：基础
学时：4(参考)
内容：
一、实验目的
1.了解血球计数板计数原理，并掌握计数方法。
2.掌握用测微尺测定微生物大小的方法。
二、实验原理
显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
因为计数板是一块特别的载玻片。
其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格(见图2—3—44)；另一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。
每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。
计数时，通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。
然后求出每个中方格的平均值，再乘上25或16，得出一个大方格中的总茵数，再换算成lml菌液中的总菌数。
若设5个中方格中总菌数为N，菌液稀释倍数为M，如果是25个中方格计数板，则计算方法为：
lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数×25×104×M=50000N·M(个)
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。
微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0．01mm(即10pm)。
镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
三、试剂与器材
1.材料酿酒酵母、藤黄微球菌和大肠杆菌的染色标本片、酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。
2.实验器材细胞计数板、显微镜、盖玻片、无菌毛细滴管、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、显微镜等。
四、实验内容
1.微生物直接计数法
菌悬液制备→镜检计数室→加样品→显微镜计数→清洗血细胞计数板
2.微生物测微技术
装目镜测微尺→校正→菌体大小测定
五、关键步骤及注意事项
1.防止加样空气泡产生。
2.调节显微镜光线的强弱适当。
六、思考题
1.根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差、力求准确?
2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1～2种可行的检测方法。
3.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?
提示：本文微生物直接计数法及测微技术属于实验设计文章，主要介绍微生物直方面的知识，内容仅供学习交流与参考，不代表中生网的观点。
原文地址:/biotech/exp/ExpDesign/2007/8673.html。