提取香菇多糖的详细方案
香菇多糖的提取工艺

复合酶解、 酸处理结合热水浸提法提取香菇多糖的改进工艺 原料 → 复合酶解→酶解液→ 水浸提→ 酸浸提→ 浸提物→ 真空浓缩→ 浓缩 液→ 酒精沉淀→ 沉淀物→ sevage法脱蛋白→ 水相→ 丙酮洗涤→ 多 糖粗制品
操作要点
1、原料预处理 选取质量合格的干香菇若干,经植物高速磨碎机 磨成粉末, 称取相应香菇粉末 , 加入适量酒精使香菇粉末成糊状。
香菇多糖(1entinan,LNT) 香菇多糖是从优质香菇子 实体中提取的有效活性成分,是香菇的主要有效成分, 是一种宿主免疫增强剂(host defense potentiator, HDP),临床与药理研究表明,香菇多糖具有抗病毒、抗 肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用。
香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成 分,香菇多糖中的活性成分是具有分支的β— (1—3)— D—葡聚糖,主链由β—(1—3)连接的葡萄糖基组成,沿 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ链随机分布着由β—(1—6)连接的葡萄糖基,呈梳状 结构。
8 、 sevage法脱蛋白 将上述沉淀溶于适量的蒸馏水中,分别加 入 20 %体积的氯仿和 7 %体积的异戊醇生成絮状凝聚物, 用高速离 心机在 5000r pm离心 15min得沉淀。重复上述操作, 直至无凝聚物 生成。
9、丙酮洗涤脱水 将酒精沉淀物用丙酮洗涤脱水两次, 倒入放 有干燥滤纸的培养皿中 (滤纸重0.98g) ,然后将培养皿放在 50℃ 的 烘干箱中进行干燥 3h ,得到香菇多糖粗制品。
香菇多糖提取方法探讨

香菇多糖提取方法探讨
1 引言
香菇多糖作为功能性酒类的一种,具有独特的作用,如抗氧化、抗癌、抗衰老等,是发展分子营养学的重要方向。
因此,研究香菇多糖的提取方法十分必要。
在保证活性物质的完整性和活性的前提下,从自然资源中高效提取,进一步完善多糖技术,是当前香菇多糖研究发展的重要研究课题。
2 香菇多糖的提取方法
1.有机溶剂抽提法:这种方法通常采用有机溶剂,使植物细胞外部的多糖受到溶解,从而将香菇多糖从菇落液中提取出来。
这种溶剂抽提法虽然可以提取大量多糖,但容易对抗氧化剂和其他生物活性物质产生不良影响。
2.超声波提取法:利用超声波作用于总淀粉中,可以迅速将其分解,从而达到香菇多糖的极高提取率。
超声波提取可以保持多糖中活性物质的完整性,在节约能源和保护环境的前提下提取多糖,具有重要的科研价值。
3.发酵法:发酵主要是利用酶的水解作用,将香菇总淀粉分解成多糖,从而实现多糖的提取。
发酵法可以从香菇中获取大量多糖,但节点操作需要特殊的技术,且存在一定的安全风险,需要特别注意。
3 结论
以上是香菇多糖提取方法的简单介绍,每种方法都具有自身优势和局限性。
提取前要考虑植物体结构、多糖特性及其枯萎情况,选择合适的提取方式,以保持多糖的活性和完美性,实现高效率的提取。
香菇多糖的提取

香菇多糖的提取原理从菌丝体中,利用它在酒精和水,及酶液的不同溶解度来提取胞内多糖。
将菌丝体抽提、浓缩、离心,取上清液脱色透析,透析液再浓缩、离心,最后用溶液沉淀、洗涤干燥而成。
无论何种提取法,其主要步骤基本相同:预处理→浸提(多糖与细胞分离)→过滤→浓缩→醇析→干燥→粗多糖2.1 热水浸提法这是最早采用的一种传统方法:香菇多糖溶于水,热水浸提时,香菇组织细胞膨胀破裂,多糖成分浸出。
热水浸提香菇多糖,浸提时的料液比、温度、时间、pH、醇析时的乙醇添加倍数及提取次数是影响多糖得率的主要因素。
对料液比而言,若加水太少,提取不彻底;加水太多,容易降低提取液的固形物含量,不利于以后的分离,且加重了工业生产中的后续工艺,一般为1:20左右。
对温度来说,随着提取温度的升高,粗多糖得率逐渐升高,在80%一95%时达到高峰,再提高温度时,粗多糖得率升高趋势趋于平缓,考虑到高温会破坏多糖的结构,影响其生物活性,同时高温提取对工业化生产的设备要求更严格。
所以,提取温度一般以80℃一95℃为宜。
随着提取时间的延长,粗多糖得率逐渐增加,0.5h一3h之间趋势明显,继续延长提取时间,多糖得率加趋势逐渐趋于平缓,一般浸提时间为8h一12h。
热水浸提时的pH为自然pH值,大约在6—8之间。
而对醇析时提取液的乙醇浓度来说,随着其逐渐升高,多糖得率亦逐渐增加,但乙醇浓度达到75%后再继续添加乙醇,对粗多糖得率的影响不大,所以提取液的乙醇浓度最好不超过75%。
当然,提取次数对多糖得率也有一定的影响,多糖得率随着提取次数的增加而增加,但提取次数超过2次后,多糖得率增加缓慢,趋于平缓。
我们通常可以确定2次提取为比较适宜的提取次数 [5]总的来说,热水浸提法的最佳提取条件由具体的实验环境而定,一般可根据正交实验确定。
应注意几点:(1)浸提过程必须充分,这是前提。
(2)浸提后过滤时应尽量趁热过滤,否则温度降低,物质问的黏度增大,过滤时间增长。
香菇多糖的分离提取

香菇多糖的分离提取一、实验目的掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。
二、实验原理在组织中,多糖多与蛋白质以共价相结合,所以在生化产品制备工艺中,往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开,以促进多糖在提取时的溶解。
碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。
现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。
提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀,也可用其他方法使变性沉淀,如适当调pH和加热等。
苯酚试剂可与香菇多糖中的已糖及其糖醛酸起显色反应,生成橙黄色化舍橱,于49Ohm处比色,定量。
三、实验材料1.实验器材循环水式真空泵;旋转蒸发仪;粉碎机;恒温水浴锅;纱布;搪瓷缸;真空干燥器;721型分光光度计;15ml具塞试管。
2.实验试剂(1)95%乙醇;甲醇(化学纯);乙醚(化学纯);木瓜蛋白酶(中性);纤维素酶;0.2 mol/L十六烷基三甲基氢氧化铵水溶液;10 mol/L 氢氧化钠溶液;葡萄糖标准溶液(1mg/ml,10m/m]);苯酚试液。
(2)复合酶液:以PBS缓冲液做溶剂,其中蛋白水解酶浓度为8 %,纤维素酶浓度为4%;(3)苯酚溶液:称取苯酚(AR级)10 g加水190 g溶解后,置于棕色瓶,备用。
四、实验方法步骤(一)香菇多糖的分离1、预处理:取干香菇4 g,用粉碎机粉碎或捣碎。
2、提取:将捣碎的干香菇置于250 ml三角瓶中,在搅拌的条件下加7倍量水混匀, 加热至90℃,搅拌保温60 min,降温至40℃时转移到40℃水浴保温;并加入适量0.45 ml 复合酶(蛋白水解酶浓度为8 %,纤维素酶浓度为4%),pH值为自然(pH 6.4),搅拌反应60 min,然后迅速升温到90-100 ℃,灭活1min,降温后纱布过滤,收集滤液。
3、浓缩:将以上滤液置于旋转蒸发仪中,然后减压浓缩至l/5体积时,停止浓缩。
4、沉淀:将浓缩液置于搪瓷缸中,在搅拌的条件下,加1 倍量乙醇,然后静置过夜。
香菇多糖的提取方案(毕业论文05142)

重庆三峡学院毕业设计(论文)题目香菇多糖提取工艺的研究院系生命科学与工程学院专业生物技术年级 2008级学生姓名鲜晓洪学生学号 200813064121 指导教师王兆丹职称讲师完成毕业设计(论文)时间 2011 年 5 月目录一文献综述 (2)1香菇多糖及香菇简介 (2)2 国内研究现状 (2)2.1 原料预处理技术 (3)2.2 粉碎技术 (3)2.3 超声波技术 (3)3存在的问题和发展趋势 (4)4 论文的选题与研究内容 (4)二实验部分 (5)1材料与方法 (5)1.1 材料 (5)1.2 仪器与设备 (5)1.3 实验方法 (5)1.3.1 苯酚- 硫酸法测定多糖标准曲线的制作 (5)1.3.2香菇多糖提取方法的确定 (5)1.4 实验步骤 (6)1.5 单因子实验 (7)1.5.1不同料液比对香菇多糖提取率的影响 (7)1.5.2 不同超声时间对香菇多糖提取率的影响 (8)1.5.3 不同浸提温度对香菇多糖提取率的影响 (8)1.5.4不同浸提时间对香菇多糖提取率的影响 (9)1.5.6最后确定每个因素的最佳水平条件的因素水平见表1。
(9)2 结果与分析 (10)3讨论 (12)4 结论 (12)致谢 (13)参考文献 (14)英文译文 (15)香菇多糖提取工艺的研究鲜晓洪(重庆三峡学院生命科学与工程学院生物技术专业2008级重庆万州 40400)摘要以香菇作为原料,研究香菇中多糖提取得率及其影响因素。
优化影响超声波辅助水浸提法提取香菇多糖的因素, 提高多糖的提取率。
设计单因子试验和多因子的正交试验, 研究料液比、超声波处理时间、浸提温度、浸提时间4个因子对香菇多糖提取率的影响。
超声波辅助水浸提法提取香菇多糖的最佳条件为: 料液比1:25、超声波处理10 min、100 ℃浸提2. 0 h。
在该条件下, 香菇多糖提取率为4. 05%。
通过优化提取条件提高了香菇多糖的提取率, 为香菇多糖的开发利用奠定了基础。
3 王博 香菇多糖的提取

香菇多糖的提取一,实验目的:掌握热水侵泡法分离多糖类化合物的原理和方法。
二,实验原理:多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,所以用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可以将蛋白类物质提取出来,所以用乙醇除去提取液中的蛋白.三,实验材料与设备:香菇,葡萄糖,乙醇,苯酚,浓硫酸,紫外可见分光光度计,恒温浴槽。
四,制作标准曲线;采用苯酚硫酸法,以葡萄糖为标准物,称取105℃干燥至恒重的无水乙醇的葡萄糖14.8mg,置100ml容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,分别取:0.0ml ,0.4ml ,0.6ml ,0.8ml ,1.0ml ,1.2ml ,1.4ml ,1.6ml ,1.8ml ,加水补充至2.0ml,再加1ml 5%的苯酚溶液,迅速加入5ml的浓硫酸,摇匀,静置20分钟,冷却至室温,以蒸馏水为空白,在490mm波长处测定吸光度,绘制标准曲线,得到回归方程为:y=0.006x +0.032,R=0.9991,线性范围是:0~266.4ug.标准曲线的绘制:假如葡萄糖0 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 溶液的量mlA490 0.005 0.016 0.020 0.019 0.029 0.031 0.041 0.044 0.049五,操作步骤:1 提取取干香菇粉粉碎,称取20g,置于250ml烧杯中,加入100ml蒸馏水在石棉网上加热至沸腾,并不断搅拌,30min后抽滤,滤渣在用100ml的蒸馏水溶液煮沸30min,合并两次滤液,加热浓缩至20ml,溶于95%乙醇中,搅拌并冷却至室温,静置1h,以4000r/min离心10min,沉淀,真空干燥,得到粗香菇多糖。
2 除蛋白粗糖50ml 100℃热水溶解,加sevage溶液10ml,剧烈震动10min,静置10min,4000r/min离心10min,取上清液,加sevage溶液反复操作5次。
3 纯化粗糖置于烧杯中,加蒸馏水50ml溶解,加入等体积的0.15mol/L 的CTAB与硼酸缓冲溶液,静置10min,4000r/min离心得沉淀用2mol/L的乙醇溶解,静置10min,4000r/min离心后取上清液加等体积的甲醇,静置24h。
什么是香菇多糖 香菇多糖提取方法
什么是香菇多糖香菇多糖提取方法香菇多糖是最近几年人们经常听到的一个名字,它是一种新型药物,从香菇中提纯,可以提高人类身体免疫力,也能预防和治疗癌症,更能保护肝脏抗氧化,对人类身体有多种好处,只是这种香菇多糖是怎么提取的呢?如果你们想知道,就看看下面对香菇多糖提取方法的具体介绍吧。
香菇多糖提取方法
1、香菇多糖提取第一步
香菇多糖在提取时,应该先把香菇洗净,然后去掉它的根部再把它上层的伞状物切成小块,然后放在干燥箱中进行烘干,烘干以后取出制成香菇粉,然后加入蒸馏水,调匀以后进加热,经过多次处理,得到初步的香菇多糖。
2、香菇多糖加工第二步
提取出最初的香菇多糖以后还要进行去除蛋白质的的处理,具体处理方法是把提取出的初步多糖加入一度的开水溶解,然后加入Sevage 溶液,加入以后先静置,再进行巨烈的晃动,来回操作五次,最后把上层的清液取出。
3、香菇多糖加工第三步
香菇多糖在去除蛋白以后还要进行必要的纯化,具体做法是把香菇多糖放在烧杯中,加入蒸馏水进行溶解,然后再依次加入硼酸和甲醇,经过离心处理以后,静放二十四小时,就能取出真正的香菇多糖。
不过提取时工艺要求十分严格,在家庭中是无法操作的。
香菇多糖提取实验汇报
超声波法提取香菇多糖研究背景:香菇多糖的性质:香菇多糖以β~1,3葡聚糖为主,含有少量的木糖和甘露糖,具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能用途:抗肿瘤药。
为化、放疗辅助药。
主要用于胃癌、肺癌、乳腺癌。
生产技术状况:因为香菇多糖的用途广泛,提取比较方便,越来越多的人投身于这方面的研究,是的提取技术方面的大幅度提升。
状况良好。
操作过程:方案设计:香菇多糖的提取香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器(水预热在60℃左右)→提取45min(中间停顿2次,每次5min)→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min(中间超声波停2次,每次5min)→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用香菇多糖的测定:1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质:采用氯化钙法:将溶液PH 调节至8---9,加热到85℃,加入氯化钙使浓度达5% (w/v),搅拌,冷却至室温,过滤,得脱蛋白多糖液。
2.制作标准曲线:准确吸取1mg/ ml 葡萄糖标准溶液1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0ml 置于50ml 容量瓶定容,准确吸取该系列溶液各2ml ,然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。
3. 样品的测定:取去完蛋白的样液2ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度。
将吸光度控制在0.2-0.8人员分工:我们分成两组来完成实验,因为有两组待测夜要进行测定。
然后标准溶液是由第一大组完成。
由于操作比较简单,我们就一起完成。
1人对溶液进行去蛋白,2人制作待测液,1人对待测液进行测定,并记录数据。
实验现象:配置待测液时,加入浓硫酸后溶液变成橙黄色。
从而可来额定吸光度。
香菇多糖发酵提取工艺流程
香菇多糖发酵提取工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
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在进行香菇多糖发酵提取之前,需要进行充分的准备工作。
高压热水浸提法提取香菇多糖工艺优化
高压热水浸提法提取香菇多糖工艺优化
简介:
香菇是一种营养丰富、风味独特的食用菌,其中的多糖具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等多种功效。
本文旨在优化高压热水浸提法提取香
菇多糖的工艺,以提高多糖提取效率和产率。
一、实验材料和仪器
(略)
二、实验步骤
1. 香菇的预处理:(略)
2. 热水浸提工艺的优化探索:
在实验室中,我们探索了不同的工艺参数对高压热水浸提法提取香
菇多糖的影响。
下面是具体的操作步骤:
(略)
三、结果与分析
1. 高压热水浸提法提取香菇多糖的效果评价:
通过测定不同参数下提取液中多糖含量,我们评价了不同工艺条件
下的多糖提取效果。
结果表明,(略)
2. 工艺参数对多糖提取的影响分析:
我们分析了不同参数对多糖提取效果的影响,并得出以下结论:(略)
四、工艺优化
结合实验结果和分析,我们对高压热水浸提法提取香菇多糖的工艺参数进行了优化。
我们主要优化了以下几个方面:
(略)
五、结论
通过本次实验,我们得出了以下结论:
(略)
最后,本文优化了高压热水浸提法提取香菇多糖的工艺,明确了适宜的工艺参数,并获得了较高的多糖提取效率和产率。
这一工艺优化结果为提取香菇多糖的应用研究提供了重要参考依据,对于香菇多糖的开发和利用具有重要意义。
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原料:香菇。
NaHCO固体,浓硫酸,95%乙醇稀盐酸,PH试纸,复试剂:蒸馏水,葡萄糖,苯酚,铝片,3合酶(木瓜蛋白酶:纤维素酶=2:1),设备和仪器:100ml容量瓶,6个50ml容量瓶,玻璃棒,蒸馏装置(温度计、沸石、三口烧瓶、冷凝管),烧杯若干,锥形瓶若干,棕色瓶一个,抽滤瓶,1、2、5、10ml吸液管,电子天平,真空干燥箱,恒温水浴锅,紫外分光光度计,粉碎机,40、60、80、100目的筛子,DL700-0.55×1.5超高压等静压机(上海大隆高压设备厂),真空泵,THZ-82A台式恒温振荡器,台式离心机。
1、标准葡萄糖溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100.0mg,加蒸馏水溶解并定容于100ml容量瓶中,摇匀,配成浓度为1mg/ml标准葡萄糖溶液备用。
2、5%苯酚试剂的配制。
苯酚水浴加热溶解后称取100g,加铝片0.1g(先用1:6的盐酸除去铝片表面氧化铝后,再称量使用),加入碳酸氢钠30g,蒸馏,收集178-182℃的馏分,取馏出液7.5g,加入蒸馏水150mL,得5.0%的苯酚溶液,置于棕色瓶中备用。
3、标准曲线绘制以葡萄糖作为标准品,采用苯酚—硫酸比色法,用紫外分光光度计测定多糖含量。
精密吸取已配制的葡萄糖标准品溶液0.5,1,1.5,2,2.5,3ml置于6个50ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度线,摇匀。
精密吸取2ml,分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,以溶剂蒸馏水为空白作对照,在400~600nm内扫描,最大吸收波长为490nm。
在490nm处,测吸光值,以浓度为纵坐标,吸光值为横坐标,绘制标准曲线,得出葡萄糖标准品浓度Y(ug/ml)与吸光值X的回归方程:Y=15.336X-0.0298,R2=0.9997。
在2.5~15.0 ug/ml 范围内呈线性关系。
预处理:将新鲜清洗干净,除去其根部,将剩下的菌伞挤压,切小块放入真空干燥箱干燥,待香菇恒质量,放入粉碎机中粉碎,将粉碎后的香菇粉依次通过40,60,80,100目的筛子,得到40目以下、40~60目、60~80目、80~100目、100目粒度以上的样品,过筛之后把各级香菇粉分别装到清洁干燥的烧杯中,编号贴上标签,置于真空干燥箱中待用。
热水法提取香菇多糖的方案原料:香菇。
试剂:0.5%NaOH,95%乙醇,蒸馏水。
设备和仪器:烧杯(若干),玻璃棒,温度计,锥形瓶(若干),漏斗,水浴锅,称量天平,THZ-82A 台式恒温振荡器,台式离心机,紫外线分光光度计。
提取的方法与步骤:1、粉碎度对提取率的影响分别称取40、60、80、100目的香菇粉5g,放入到250mL的锥形瓶中,加入蒸馏水100ml,混合均匀后置于90℃水浴锅中,水浴提取2h,提取两次,提取结束,冷却至室温,将两次提取液混合后过滤,取2ml滤液分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,即以溶剂蒸馏水为空白作对照,在490nm 处用分光光度计测吸光值,计算多糖提取率,得到粉碎度与提取率的关系。
2、料液比对提取率的影响称取80目的香菇粉5g六份,放入到250mL的锥形瓶中,分别加入蒸馏水75、100、125、150、175、200ml,混合均匀后置于90℃水浴锅中,水浴提取2h,提取两次,提取结束,冷却至室温,将两次提取液混合后过滤,取2ml滤液分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,即以溶剂蒸馏水为空白作对照,在490nm处用分光光度计测吸光值,计算多糖提取率,得到粉碎度与提取率的关系。
3、提取温度对提取率的影响称取80目的香菇粉5g,放入到250mL的锥形瓶中,加入蒸馏水100ml,混合均匀后置于65、75、80、85、90、95、100℃水浴锅中,水浴提取2h,提取两次,提取结束,冷却至室温,将两次提取液混合后过滤,取2ml滤液分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,即以溶剂蒸馏水为空白作对照,在490nm处用分光光度计测吸光值,计算多糖提取率,得到粉碎度与提取率的关系。
4、提取时间对提取率的影响称取80目的香菇粉5g五份,放入到250mL的锥形瓶中,加入蒸馏水100ml,混合均匀后置于90℃水浴锅中,水浴提取2、3、4、5、6h,提取结束,冷却至室温,将两次提取液混合后过滤,取2ml滤液分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,即以溶剂蒸馏水为空白作对照,在490nm处用分光光度计测吸光值,计算多糖提取率,得到粉碎度与提取率的关系。
5、提取次数对提取率的影响称取80目的香菇粉5g四份,放入到250mL的锥形瓶中,加入蒸馏水100ml,混合均匀后置于90℃水浴锅中,水浴提取2h,提取1、2、3、4次,提取结束,冷却至室温,将两次提取液混合后过滤,取2ml滤液分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,即以溶剂蒸馏水为空白作对照,在490nm处用分光光度计测吸光值,计算多糖提取率,得到粉碎度与提取率的关系。
复合酶法提取香菇多糖的方案原料:香菇,试剂:蒸馏水,稀盐酸,PH试纸,复合酶(木瓜蛋白酶:纤维素酶=2:1),滤纸设备和仪器:真空干燥箱,粉碎机,40、60、80、100目的筛子,烧杯(若干),三角瓶(若干),水浴锅,量筒,漏斗,称量天平,THZ-82A台式恒温振荡器,台式离心机。
提取的方法与步骤:单因素实验条件确定:1、物料粒度对香菇多糖提取率的影响分别称取40目以下、40~60目、60~80目、80~100目、100目粒度以上的香菇粉各2g,放入到250mL的三角瓶中,标号贴上标签,各加入蒸馏水30mL(料液比1∶15),混合均匀后置于50℃水浴锅中,水浴1h,调节PH至6.5;称取适量的按一定比例混合的复合酶(木瓜蛋白酶:纤维素酶=2:1),放入100mL的烧杯中,加入5ml蒸馏水溶解,香菇溶液放在水浴中预热至酶解温度55℃,将酶液加入到香菇溶液中,在恒温振荡器上提取,反应结束,过滤,将三角瓶放到沸水锅中,10min沸水浴灭酶,灭酶结束,冷却至室温,将酶提取液放入到离心管中,调至4000r/min离心,取上清液,即得到酶提取多糖清液;将滤液稀释一定的倍数(3倍),取2ml溶液分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,即以溶剂蒸馏水为空白作对照,在490nm处用分光光度计测吸光值,计算多糖提取率,得到物料粒度与提取率的关系。
2、料液比对香菇多糖提取率的影响准确称取80~100目粒度的香菇粉5份,每份2g,放入到250mL的三角瓶中,标号贴上标签,分别加入蒸馏水20mL(料液比为1∶l0),30mL(料液比为1∶15),40mL(料液比为1∶20),50mL(料液比为1∶25),60mL(料液比为1∶30),混合均匀后置于50℃水浴锅中,水浴1h,调节PH至6.5;称取适量的按一定比例混合的复合酶(木瓜蛋白酶:纤维素酶=2:1),放入100mL的烧杯中,加入5ml蒸馏水溶解,香菇溶液放在水浴中预热至酶解温度55℃,将酶液加入到香菇溶液中,在恒温振荡器上提取,反应结束,过滤,将三角瓶放到沸水锅中,10min沸水浴灭酶,灭酶结束,冷却至室温,将酶提取液放入到离心管中,调至4000r/min离心,取上清液,即得到酶提取多糖清液;将滤液稀释一定的倍数(3倍),取2ml溶液分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,即以溶剂蒸馏水为空白作对照,在490nm处用分光光度计测吸光值,计算多糖提取率,得到料液比与提取率的关系。
3、复合酶浓度对香菇多糖提取率的影响准确称取80~100目粒度的香菇粉6份,每份2g,放入到250mL的三角瓶中,标号贴上标签,分别加入蒸馏水40mL(料液比为1∶20),混合均匀后置于50℃水浴锅中,水浴1h,调节PH至6.5;分别称取适量的按一定比例混合的复合酶(木瓜蛋白酶:纤维素酶=2:1)0.002g(为香菇粉干质量的0.1%),0.004g(为香菇粉干质量的0.2%),0.006g(为香菇粉干质量的0.3%),0.008g (为香菇粉干质量的0.4%),0.010g(为香菇粉干质量的0.5%),0.012g(为香菇粉干质量的0.6%),放入100mL的烧杯中,标号贴上标签,加入5ml蒸馏水溶解,香菇溶液放在水浴中预热至酶解温度55℃,分别将酶液加入到香菇溶液中,在恒温振荡器上提取,反应结束,过滤,将三角瓶放到沸水锅中,10min沸水浴灭酶,灭酶结束,冷却至室温,将酶提取液放入到离心管中,调至4000r/min 离心,取上清液,即得到酶提取多糖清液;将滤液稀释一定的倍数(3倍),取2ml溶液分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,即以溶剂蒸馏水为空白作对照,在490nm处用分光光度计测吸光值,计算多糖提取率,得到复合酶浓度与提取率的关系。
高压提取香菇多糖的详细方案NaHCO固体,浓硫酸,葡萄糖试剂:蒸馏水,苯酚,铝片,3设备和仪器:100ml容量瓶,玻璃棒,蒸馏装置(温度计、沸石、三口烧瓶、冷凝管),电子天平,紫外分光光度计,1、2、5、10ml吸液管,水浴锅,DL700-0.55×1.5超高压等静压机(上海大隆高压设备厂),真空泵,抽滤瓶。
提取的方法与步骤:1、溶剂的选择实验准确称取100目的香菇粉5份,每份1g,放入到200mL的烧杯中,标号贴上标签,分别加入40ml蒸馏水、5%乙醇、10%乙醇、95%乙醇、甲醇不同的溶剂,混合均匀,放入塑料袋中并封口,密封,室温浸泡24h,然后将样品放入高压容器内,启动高压油泵,升高到所需的压力,并在此压力下保持一定时间(压力:500MPa;保压时间:5min);然后快速打开控制高压油路的阀门,在2秒钟之内卸除压力,取出高压加工后的样品,去除包装后,抽滤去除滤渣,得到香菇多糖的提取液,将滤液稀释一定的倍数(3倍),取2ml溶液分别加入5%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入5ml浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15min,然后置冷水浴中冷却30min,即以溶剂蒸馏水为空白作对照,在490nm处用分光光度计测吸光值,计算多糖提取率,得到选择的溶剂与提取率的关系。