残糖检测方法

DNS为3.5二硝基水杨酸,还原糖(以葡萄糖计)与3.5二硝基水杨酸(DNS)反应,产生颜色变化,这种颜色变化与释放还原糖(以葡萄糖计)的量成正比关系,通过在550nm的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物)可以确定还原糖生产的量

DNS试剂的配置方法:

溶液A:称分析纯NaoH104g溶于1300ml水中,加入30g分析纯3.5一二硝基水杨酸。

溶液B:称分析纯酒石酸钾钠910g，溶于2500ml水中，再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。

将A、B溶液混合，加入1200ml水，贮存于棕色瓶中，暗处放置一星期后可使用。

1 葡萄糖测定

（1）1mg/mL 葡萄糖标准液

小烧杯取分析纯葡萄糖置于烘干箱中烘干至，于分析天平中准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖10mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到10mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至10mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂

将6.3g DNS （分析天平中称取于小烧杯）和262mL 2M NaOH 溶液（大量筒称取250ml+小量筒称取12ml），加到500mL（量杯量取）含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中（在微波炉中加热1min溶解），再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

1．制作葡萄糖标准曲线

取7 支10mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。

1mg/ml葡萄糖标准溶液蒸馏水 DNS 葡萄糖含量光密度值

管号（ml）（ml）（ml）（mg/ml）（OD540）

0 0 1 0.75 0

1 0.1 0.9 0.75 0.01

2 0.2 0.8 0.75 0.02

3 0.3 0.7 0.75 0.03

4 0.4 0.6 0.7

5 0.04

5 0.5 0.5 0.75 0.05

6 0.6 0.4 0.75 0.06

将各管摇匀，取试管架置于水浴锅中，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色（分光光度计预热20分钟）。调波长540nm，用0 号管调零点，测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线