蛋白质浓度的测定实验报告

蛋白质浓度的测定

一．试验原理

考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感性。

在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系。故可用于蛋白质浓度的测定。

二．试验设备与试剂

设备：普通离心机，721型分光光度计

试剂：标准蛋白液（100ug/ml）

三．实验材料

新鲜绿豆芽

四．实验内容

1.标准曲线的制备

取9支干净的试管，按表进行编号并加入试剂。

2.样品蛋白的测定

（1）样品蛋白液制备

准确称取2g新鲜绿豆芽胚轴的部分，研磨成匀浆，离心分离（4000r/min,10min）。取上清液用0.9%nacl定容到10ml。

（2）含量测定

另取两只干净的试管，加入样品液0.1ml，0.9mlnacl和考马斯亮蓝染液4.0ml，混匀。室温静置3min，与波长595nm处比色，读取吸光度。

五．实验结果

1.标准曲线

结果如表所示，并以吸光度为纵坐标，个标准液含量为横坐标做标准曲线。

标准曲线

y = 0.0075x - 0.0023

R 2

= 0.9846

-0.100.10.20.30.40.50.60.70.80

50

100

150

蛋白质含量

吸光度

A595

线性 (A595)

2. 样品蛋白含量的测定

样品蛋白的比色结果如表，根据直线方程求出每支试管中蛋白质含量。

试管号 A595

蛋白质含量 10 0.186 25.15

11 0.179 24.17

根据公式求出样品绿豆芽蛋白质含量

六．结果与讨论

结果： 绿豆芽蛋白质含量=1233.0ug/g

讨论：1.试液为混合均与就取样2.量取溶液时读数有误差3.读取A 值时有读数误差4.比色杯中的误差