定性测定的性能验证

定性测定系统/试剂 性能验证


特异性 敏感性 测定下限 重复性（包括CUT－ OFF值的重复性） 准确性 抗干扰能力
性能验证的合格标准从何而来？
试剂盒说明书
国际和／或国际标准
什么时候进行性能验证

使用新的检测试剂或系统时
更换检测试剂或系统时


如何获得系统或试剂的“临界点”

检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的 临界浓度。 如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一 系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能 够获得50%阳性和50%阴性结果的那个稀释度。 这一稀释度的分析物浓度即为临界点。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
定义

确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊 断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测 结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过 设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲 敏感性为代价）以及高阳性预测值。螺旋体抗 体荧光吸附（FTA-ABS）梅毒血清学试验就 是一种用于VDRL梅毒血清学试验等筛查试验 之后的确认试验。

制备足够40次重复检测的3份样本：分别为处 于临界浓度、高于临界浓度20%和低于临界浓 度20%的样本。 重复检测样本40次，确定每一份样本结果为阳 性和阴性的百分比。 评价临界浓度是否准确？评价+20至-20%的浓 度范围是否包含于、位于或者超出这种方法的 95%区间？
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
C50是否准确？
40次测试
1 阳性结果 =<13/40(32.5%) >=27/40(67.5%)
C50
不正确
2
阳性结果
（14-26）/40（35%-65%）
正确
不同C50重复检测次数与检 出阳性数的关系
阳性结果
重复性 次数 百分比 真正百分比 样本的实
检测总
次数 20 40 100 10 20 50 50% 50% 50% 30%-70% 35%-65% 40%-60%

定 义

Fra Baidu bibliotek
阳性结果的可靠性（‘预示值’）：即测定为 阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%

阴性结果的可靠性:则为一份给出阴性结果的 样本实际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的 试剂检测结果的影响（100,000人）
-20% ～ +20% 浓 度 范 围 在 用该方法检测浓度超过 C50+20%的
C5-C95区间之内 样本检测结果不一致
-20% ～ +20% 浓度范围包含 用该方法检测， C50+20% 的样本检 了C5-C95区间 测结果一致
-20% ～ +20% 浓度范围只是 用该方法检测， C50+20% 的样本检 部 分 地 在 C5-C95 区 间 内 。 测结果一致。浓度-20%的样本用该 （ +20% 包含了 C5-C95 区间， 方法却不一定能得到一致结果。 但 -20% 浓 度 的 样 本 在 C5C95区间内。）
批内重复性的验证
高、中、低三个浓度的样本，在一
批检测内，重复检测20次（孔）， 计算所得S/CO值的均值和SD，计 算批内CV%。 判断结论：应≤试剂说明书所标明 的批内变异。ELISA的批内变异 CV%应≤10%。
批间重复性的验证
高、中、低三个浓度的样本，在10
天以上时间内单次（孔或管）重复 进行20批检测，计算所得S/CO值的 均值和SD，计算批间CV%。 判断结论：应≤试剂说明书所标明的 批间变异。 ELISA的批间变异CV% 应≤15%。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
定义

诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或 状况是否存在的诊断性定性试验。例如各种微 生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。 因临床上对治疗的及时的要求，诊断试验应具 有很好的敏感性和特异性。如果诊断试验后还 进行确认试验，那么诊断试验的特异性要求可 以稍微降低。
定 义

临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中， 其检测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现阳性结果和确定患者患病）；注：该 临床疾病必须由不依赖于被评价试验的标准确 定。 临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中， 其检测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。

定 义

阳性测定能力指数（DI（＋））：可定义为一 实验对阳性标本测定后给出阳性结果的能力 （通常称为“敏感性”）； DI（＋）=[真阳性 /（真阳性+假阴性）]×100% 阴性测定能力指数（DI（－））：则为对阴性 样本测定给出阴性结果的能力（通常称为“特 异性”）； DI（－）= [真阴性/（真阴性+假 阳性）]×100%
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
重复性验证
CUT-OFF的重复性（同时包
含测定下限的验证） 批内变异的验证 批间变异的验证
重复性验证的质量控制
结 果 10%感染率 检出 (+) 未检出 (－) 1%感染率 检出 (+) 未检出(－)
+
－ 敏感性 (TP/[TP+FN]) 特异性 (TN/[TN+FP]) 阳性预示值 TP/[TP+FP] 阳性预示值 TN/[TN+FN]
9,500
4,500 95% 95%
500
85,500
950
4,950 95% 95%
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
编制性能验证的SOP
定义

筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群
（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样 本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血 清学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有 高敏感性以确保真阳性结果的检出。因此通常筛查试验比 诊断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查 试验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重， 这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。 尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实，但 是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴性 结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液传 播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。

质控品：如方法学比较在10天内完成，则每一批 次都要对每份质控样本进行检测，共提供20次重 复检测结果。如果方法比较研究超过20天，则每 一批次都要对每份对照样本进行单次检测，总计 也提供20次重复结果。 如出现失控，则当次检测结果无效。在当天或第 二天安排新批次的检测以替换不合格的批次。实 验室要分析失控的原因。不合格批次在10天内不 应超过1次或20天内不超过两次。如若超出，所 在实验室应中止检测工作并咨询试剂制造商以确 定原因并采取纠正措施。 CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance;
不精密度曲线
100% 90%
Percent Positive Results
0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% C5 C 50 Claimed Cutoff C 95
Percent Negative Results
80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
际浓度
C30-C70
候选方法的-20%～+20%浓度范 围是否包含了C5-C95区间？
1 +20%
-20% 2 +20% -20% 3 +20% -20%
阳性结果=<35/40(87.5%)
阴性结果=<35/40(87.5%) 阳性结果>=36/40(90%) 阴性结果>=36/40(90%) 阳性结果>=36/40(90%) 阴性结果=<35/40(87.5%)
4 +20% -20%
阳性结果=<35/40(87.5%) 阴性结果>=36/40(90%)
-20% ～ +20% 浓度范围只是 用该方法检测， C50-20% 的样本检 部 分 在 C5-C95 区 间 内 。 测结果一致。 （ +20% 在 C5-C95 区间内， 但 -20% 包 含 了 C5-C95 区 间。）
临床实验室为什么更新检测试剂或 系统？新的试剂或系统

更易于操作


更高的检测性能
更经济 更能满足实验室测定要求
性能验证前的准备



应熟悉待验证的试剂或系统 进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试 剂的处理和储存、合理的检测方案、对结果合 理的解释以及系统的质量控制等。 制定质量保证计划 确定患者样本的数量及强弱（评价重复性） 确定比较的方法
50
94,050
9500/[9500+4500]=67.9% 85500/[85500+500]=99.4%
950/[950+4950]=16% 94050/[94050+50]=99.9%
样本的准备

质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和
阳性。

样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必 须保证一致性。

临界点（CUT-OFF）的(精密度） 重复性指的是什么？
是为正在评价的检测试剂或系统建
立分析物的临界浓度(C50)，并且
确保临界浓度±20%的范围处于
95%区间内(C95)。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
定性测定的性能验证
李金明 卫生部临床检验中心
临床定性检验的报告方式
有反应、无反应、阳性、阴性
是、不是（或有、没有）
“性能验证”？
ISO15189实验室认可的要求？
（任务？）
实验室检测临床应用的必需？
高速列车性能验证



空气动力学 速度 车体转向架运行 固定、悬挂的零部件强度 稳定性 舒适感 故障率 ……
Actual Concentration
两种不同方法的不精密度曲线比较
100% 90%
Percent Positive Results
80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% C2 5 C1 5 C1 95 C2 95
Actual Concentration
验证步骤

Approved Guideline
重复性验证：样本浓度
CUT-OFF重复性验证：样本浓度
应接近临界值。不宜用阴性或强阳 性样本。
批内和批间变异验证：高、中和低
三个浓度（与试剂盒说明书中所述 相适应）
CUT-OFF重复性和 测定下限验证
临界点的定义
同样一份样本，在多次重复实
验中各有50%的几率获得阳性
或阴性的结果时该分析物的浓 度。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
临界点（CUT-OFF)与试剂盒阳性反 应判断值（CUT-OFF值）的区别

这里的临界点指的是一个处于试剂检测临界点 的样本浓度，其一旦确定，是不变的。 试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测 定结果的由阴性和阳性对照信号值按一定公式 计算出来的信号值，每次测定都会有所差异。