AFP项目性能验证方案
人甲胎蛋白AFP酶联免疫分析
人甲胎蛋白（AFP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中甲胎蛋白（AFP）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人甲胎蛋白（AFP）水平。
用纯化的人甲胎蛋白（AFP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入甲胎蛋白（AFP），再与HRP标记的甲胎蛋白（AFP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的甲胎蛋白（AFP）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人甲胎蛋白（AFP）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
孕早期血清学产前筛查的性能验证
孕早期血清学产前筛查的性能验证张艳秋（太仓市疾病预防控制中心，江苏 太仓 215400）【摘要】目的：通过时间分辨荧光免疫法分析孕早期血清AFP和β-HCG，评估AFP和β-HCG的临床价值，建立完善的检测体系，有助于降低新生儿缺陷的发病率、致畸率。
方法：使用美国PerKinElmer公司AFP/β-HCG 测定试剂盒进行精密度、正确度、线性范围三方面的性能验证。
结果：AFP和β-HCG检测试剂盒的精密度、正确度及线性范围其与厂家提供的数据基本一致，该方法具有高精密度和正确度，能够满足临床样本检测的性能要求。
结论：血清学指标联合超声进行产前筛查，胎儿染色体异常的检出率大大增高，应用于临床筛查。
【关键词】AFP/β-HCG；产前筛查；性能验证【中图分类号】R714.5 【文献标识码】A 【文章编号】2096-5249（2022）30-072-04出生缺陷严重影响着新生儿的生存和后续生活质量，也给家庭和社会造成了巨大的负担，所以临床上多采取产前筛查的方法预防新生儿缺陷的发生，做好产前筛查且明确诊断并及时终止妊娠能显著降低新生儿畸形率。
但是由于产前筛查覆盖率偏低，筛查方案多样化，检测技术平台和风险评估软件不统一而带来筛查诊断效能低下。
血清学产前筛查以无创、迅速、价格低等优点在产前筛查中占有极其重要的地位。
唐氏综合征即21-三体综合征发病普遍，一直是各国医学工作者关注热点[1]，众多国内外研究发现，在检测出怀有21三体综合征的孕妇中，其血清AFP的浓度下降而β-HCG浓度升高。
为了提高筛查诊断效能和保障母婴健康，全市统一孕早期血清学产前筛查方案，检测技术平台和风险评估软件。
毋庸置疑孕早期血清学产前筛查主要集中在AFP 和β-HCG研究上[2]。
在未受累妊娠中，妊娠后母体血清中的AFP水平迅速增加，而羊水中的浓度则减少；如果羊水和母体血清中AFP显著升高，则提示胎儿开放性神经管缺陷。
上述特征在孕16～18周时最为显著，可通过检测母体血清AFP水平来筛查神经管与腹壁缺损[2]。
Axceed260检测系统精密度和正确度性能验证
Axceed260检测系统精密度和正确度性能验证刘海;张伟;王红艳;刘榕峰;张影;刘萍;赵方【摘要】目的：评价Axceed 260磁微粒全自动化学发光免疫分析系统测定前列腺特异抗原（PSA ）、游离前列腺特异性抗原（fPSA）、甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）的精密度和正确度，以验证其厂家声明的检测系统性能。
方法利用CLSI EP15‐A3《用户对精密度的验证和偏倚的评估‐批准指南第3版》对Axceed 260磁微粒全自动化学发光免疫分析仪进行一系列肿瘤标志物检测，分析其系统精密度和偏倚。
以高、中、低3个水平浓度伯乐质控371、372、373作为精密度和正确度验证标本，采用Axceed 260对4项肿瘤标志物检测项目进行测定，每份标本重复测定5次，持续5 d ，收集有效数据排除离群值，计算4项肿瘤标志物检测试剂盒的重复性、实验室内不精密度、正确度验证区间，并与厂家提供的指标比较，如果实验室数值低于厂商数值或精密度验证上限，则精密度验证通过，如果测量结果平均值在正确度验证区间内则正确度验证通过。
结果在该实验条件下，Axceed 260磁微粒全自动化学发光免疫分析仪的精密度和偏倚与厂商声明的性能一致。
测定PSA、fPSA、AFP、CEA 4个项目的371重复性分别为3．15％、4．21％、4．26％、2．20％，实验室内不精密度分别为3．15％、4．45％、4．26％、5．01％；测定372的重复性分别为4．95％、4．62％、5．64％、0．96％，实验室内不精密度分别为4．95％、5．07％、8．68％、1．70％；测定373的重复性分别为2．03％、2．10％、2．85％、0．89％，实验室内不精密度分别为2．29％、3．14％、4．05％、1．77％。
与同厂家的对应指标（重复性＜6．25％，实验室内不精密度＜12．5％）相比精密度验证通过。
正确度验证中，测定371时，PSA、fPSA、AFP、CEA的均值分别为0．83 ng／mL、0．41 ng／mL、2．48 ng／mL、21．40 ng／mL ，偏倚验证区间分别是0．01～1．59 ng／mL、0～0．95 ng／mL、0．92～3．66 ng／mL、14．42～23．38 ng／mL ；测定372时，PSA、fPSA、AFP、CEA的均值分别为3．19ng／mL、2．24 ng／mL、15．8 ng／mL、115．47 ng／mL ，偏倚验证区间分别是1．62～4．84 ng／mL、0．72～3．12 ng／mL、11．45～18．35 ng／mL、104．51～125．49 ng／mL ；测定373时，PSA、fPSA、AFP、CEA的均值分别为18．0 ng／mL、10．6 ng／mL、34．7 ng／mL、230．6 ng／mL ，偏倚验证区间分别是14．8～22．4 ng／mL、8．74～14．46 ng／mL、25．87～34．93 ng／mL、229．61～260．39 ng／mL ；全部项目的测定结果均值均在验证区间内，通过正确度验证。
甲胎蛋白定性检测(Alpha-Fetoprotein,AFP)标准操作规程SOP
一、甲胎蛋白定性检测（Alpha-Fetoprotein，AFP）1．检验目的检测血清AFP主要是用于原发性肝癌、生殖系统肿瘤等恶性肿瘤的诊断或或鉴别诊断，可以动态观察相关疾病的发生发展过程、疗效及预后评估，另外还可作为唐氏综合征、早期胎儿先天性畸形及肝癌高发区的普查指标。
2．方法原理采用ELISA双抗体夹心法：向抗AFP抗体包被的聚苯乙烯反应板微孔内加入待检标本，再加酶标记抗AFP抗体，加入酶底物显色，用终止液终止反应，测定吸光度值，测定光密度，查标准曲线，计算待测标本中AFP含量。
3.性能指标此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml。
4．标本收集4．1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4．2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4．3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
4．4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管4．5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
4．6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。
检验科性能验证方案(仅供参考)
性能验证(仅供参考)1 生化生化室项目需要验证的参数包括批内精密度，批间精密度，正确度，线性范围、参考区间，可报告区间等。
适用时，还要考虑分析灵敏度（仅对那些在接近0的低值有临床意义的项目有必要进行确定，必要时，可引用说明书中给出的低值）和干扰试验。
1.1 精密度1.1.1 标本准备及要求质控品、已经检测过的病人标本或具有血清基质的定值材料。
每个项目均需选择至少正常和病理两个浓度水平的验证材料进行验证。
所用样本一定要稳定，其基体组成应尽可能相似于实际检测的病人标本，样本中的分析物含量应在该项目的医学决定水平附近。
1.1.2 方案1.1.2.1 方案1：对验证材料每天分析1批次，2个浓度，每个浓度重复测定4次，连续5天。
记录结果并计算均值、标准差和批内精密度(%)。
1.1.2.2 方案2：批内精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法，同批次内检测混合的新鲜临床标本20次。
记录结果并计算均值（X）、标准差（SD）和批内变异系数CV（%）。
批间精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法（或将室内质控品按照常规标本的方法一样测定，测定结果在遵照厂商参数不出控的前提下），同批次内检测混合的新鲜临床标本20次，同一批号室内质控品某一时间段（至少20 天）的室内质控数据逐步累积最终得出均值、标准差。
1.1.3 结果判断从美国临床实验室室间质量评估允许误差表中查阅评价项目的允许误差范围，由实验数据统计的批内不精密度和批间不精密度小于允许误差范围的1/4和1/3作为检测系统不精密度性能的的可接受标准（或用卫生部临检中心的允许总误差、卫生标准等），且又小于厂商提供的精密度性能指标，说明由实验室评价的检测系统的不精密度性能可接受，符合要求。
若大于判断限，检测系统的不精密度是否符合要示，应再进一步做统计学处理作出判断。
1.2.1 卫生部临检中心室间质评含盖的项目，则以卫生部临床检验中心室间质评结果为准；成绩在80%者即为验证通过。
甲胎蛋白AFP定量测定作业指导书
甲胎蛋白AFP定量测定作业指导书1. 原理抗原或抗体包被的微粒子，是由多孔高分子粒子制成，具有很好的亲水性，悬浮性极佳，微粒子可与玻璃纤维不可逆结合，从而提高了反应的特异性。
标本与微粒子以一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，以反应终了后，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其它的不要成份，加入基质液，基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。
当该物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的分化率，从而决定被测物质的浓度。
2. 标本采集：2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集血清样本，取被检者静脉血，用无菌取血针抽取病人静脉血3ml，收集干燥试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用。
采集血浆样本，用无菌取血针取被检者静脉血3ml，收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用。
3. 标本储存：待测样本室温不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，避免反复冻融。
4. 标本运输：室温运输5. 标本拒收标准：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂：6.1 试剂名称：甲胎蛋白（AFP）诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：美国雅培制药有限公司6.3 包装规格：100Test/kit6.4 试剂盒组成：AFP诊断试剂6.5 试剂储存条件及有效期：试剂盒贮存2-8℃条件，有效期12个月。
7. 仪器设备：7.1 仪器名称：AXSYM免疫自动分析仪7.2 仪器厂家：美国雅培公司7.3 仪器型号：AXSYM Tm型7.4 仪器校准：本仪器校准由厂家工程师负责校准8. 操作步骤：8.1样本处理：取待测样本血清或血浆置于样本杯中（不能有纤维蛋白，不能有气泡）。
8.2仪器准备：检查纤维杯，反应杯数量满足实验需要，废物桶和废液桶是否连接好，仪器的光路是否正常，环境温度是否符合要求，打印机的连接。
AFP作业指导书2.0
甲胎蛋白（AFP）检测作业指导书1.检验目的AFP来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道。
70－95%的原发性肝癌患者的AFP升高，越是晚期，AFP含量越高。
但尚未发现AFP含量与肿瘤大小、恶性程度等有关系。
AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌。
在转移性肝癌中，AFP一般低于350-400 IU/ml。
AFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者。
不推荐将AFP用于普通人群的癌症筛查。
孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂,无脑症,食管atresia或多胎,AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有Down's综合征的危险性2.检验原理：采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。
·第1步：10μl标本、生物素化的抗AFP单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗AFP单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。
·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过2点定标校正，3.性能参数：3.1 线性范围：线性检测结果见AFP方法学验证记录。
3.2精密度:批内n=20,批间n=20。
3.3准确度: 检测结果见临检中心/江苏省室间质评结果回报记录。
3.4 可报告范围: 0.605-60500 ng/ml，最大稀释倍数为50倍。
3.5 测量区间：血清/血浆: 0.605-1210ng/ml。
高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。
稀释后的标本AFP含量必须高于20IU/ml(24ng/ml)。
如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。
如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。
3.6 灵敏度：0.605ng/ml3.7特异性：无4. 样本要求4.1血清：按标准常规方法采集。
afp监测实施方案
afp监测实施方案AFP监测实施方案。
一、背景介绍。
AFP（Alpha-fetoprotein）是一种胎儿蛋白，通常在胎儿发育过程中由胎盘分泌。
在成人中，高水平的AFP通常与肝癌、睾丸癌等疾病相关联。
因此，AFP监测成为一种重要的肿瘤标志物监测手段。
二、实施方案。
1. 确定监测对象。
根据临床需求和病人情况，确定需要进行AFP监测的对象。
通常包括肝癌、睾丸癌等患者，以及高危人群。
2. 选择监测方法。
AFP监测可以采用血清学方法，通过血清中AFP水平的检测来进行监测。
也可以采用影像学方法，如超声、CT、MRI等影像学检查来辅助监测。
3. 制定监测频率。
根据患者病情和医生建议，制定AFP监测的频率。
通常情况下，监测频率为每3-6个月进行一次。
4. 确定监测结果的解读标准。
根据不同的疾病类型和病情严重程度，确定监测结果的解读标准。
一般来说，AFP水平的升高可能意味着肿瘤的存在或复发，需要及时进行进一步的检查和治疗。
5. 建立监测档案。
对于进行AFP监测的患者，建立完整的监测档案，包括监测结果、医生建议、治疗方案等信息，以便于日后的跟踪和分析。
6. 定期评估监测效果。
定期评估AFP监测的效果，包括监测结果与病情的关联性、监测频率的合理性等，及时调整监测方案，以提高监测的准确性和有效性。
7. 完善监测报告。
对于每一次AFP监测的结果，及时编制监测报告，并向患者和医生进行详细解读，以便于患者了解自身病情，并及时调整治疗方案。
8. 加强宣教工作。
加强对患者和医护人员的宣教工作，提高对AFP监测的认识和重视程度，以便于更好地开展AFP监测工作。
三、总结。
AFP监测作为一种重要的肿瘤标志物监测手段，在临床实践中具有重要意义。
通过制定科学合理的监测方案，加强监测工作的实施，可以提高对肿瘤的早期发现和诊断，为患者的治疗和康复提供有力支持。
因此，各医疗机构应重视AFP监测工作，不断完善监测方案，提高监测水平，为患者的健康保驾护航。
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甲胎蛋白(AFP) 检测方法学性能验证评价报告
验证内容：正确度、重复精密度、中间精密度、线性范围、临床可报告范围及参考区间的确认验证人员：王绮华、杨俊
一检测系统信息
项目：甲胎蛋白(AFP)
仪器名称: 雅培全自动免疫分析仪
仪器型号: I2000SR
试剂及厂商：雅培公司
检测方法：化学发光微粒子免疫检测法
二厂商提供的相关参数
三验证过程
1 正确度
1.1 目的：评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。
通过实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的准确性。
1.2 评价方法：参加卫生部临检中心的室间质评，本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标准，最近一次参加卫生部室间质评卫生部质控值。
1.3 结果判断方式：<1/2 CLIA’88
正确度验证试验数据记录表
2 精密度
2.1 重复精密度
2.1.1 目的：考察仪器检测方法的随机误差
2.1.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20个结果，判断这20个独立结果间的
一致程度
2.1.3 评价方法：选择新鲜混合血清标本（病人高值、低值）各20份，测量前先定标，再做
质控，质控结果在控制范围内，连续重复测定20次，计算SD，CV，得到重复
性精密度。
2.1.4 标本来源：高、低值标本均为混合血清。
2.1.5 结果判断方式：<1/4C LIA’ 88 6.25%
重复性精密度验证试验数据记录表
2.2 中间精密度：
2.2.1 目的：考察目前实验室检测方法中间精密度。
2.2.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20天，取得20个结果，判断这20个
独立结果间的一致程度。
2.2.3 评价方法：取一个月的室内质控值（高值、低值）计算CV、SD，得到批间精密度。
2.2.4 结果判断方式：<1/3 CLIA’ 88 8.33%
中间精密度验证试验数据记录表
3 线性范围（Linearity range, AMR）
3.1 目的：在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围
检测结果的准确性。
3.2 标本要求：
高值标本可使用病人混合血清。
一般地样本的高值推荐在AMR上限的90％，低值推荐在AMR下限的10％，但这不是绝对的规则。
最好有5个或以上的系列浓度的实验样品，数据点数不得低于4个，浓度范围遍布整个预期可报告范围。
3.3 评价方法：
a) 以50ul为一个体积单位，将高值标本与低值标本以3：1、2：2、1：3的体积比例混合，
加上高低值标本共5个标本按照由低到高测定，记录结果。
b) 线性统计：以直接测定结果计算得出的相应浓度为X，以通过稀释测定结果为Y，回归方
法学统计，得到a、b及r值。
3.4 结果判断：
①若a在0.97-1.03范围内，r2>0.95，作b与0有无显著性差异的t检验，如果P>0.05，则可直接判断线性范围在实验已涉及浓度。
②若a不在0.97-1.03范围内，b较大，舍去高值或低值组数据，另做回归统计，直至缩小的分析范围其回归方程的a和b的判断符合要求，则该范围为线性范围。
线性范围验证试验数据记录表
4 临床可报告范围（Clinical reportable range ,CRR）
4.1 目的: 分析各稀释浓度的线性关系，确定最高稀释倍数，从而确保高值样本报告的准确
性。
4.2 原理：未经过任何处理的病人检验标本，通过检测系统检测得到的可靠结果范围。
4.3 方法：结合本实验室制定的AFP的可报告范围（CRR）及该项目的检测范围，从而确定
该项目的最大稀释倍数，予以验证。
临床可报告范围试验数据记录表
4.4 结论：
AFP临床可报告范围0.4-1000ng/ml，最大稀释倍数50倍，当结果>1000ng/ml时，用肿瘤标志物稀释液进行50倍稀释，结果乘以稀释倍数，若50倍稀释结果仍超出报告>50000ng/ml。
5 灵敏度:
6 干扰物质
干扰物质对本项目的影响大小沿用厂商参数，详细内容见本项目SOP。
7 参考区间（Reference intervals）:
7.1 目的：选择20份体检合格的健康人标本，在检测系统上进行测定，对结果进行统计并与仪器说明书提供的参考区间进行比较。
7.2 方法：收集20 例正常健康人血清标本及时检测，要求其年龄，性别等均匀分布，对参考范围进行验证，只允许10%的数据超过所验证的参考范围，否则需建立参考范围。
验证范围：<13.4ng/ml
7.3 标本的要求
1) 体检合格健康的筛选者
2) 脂血、溶血均勿用
7.4 结果判断方式：R≥90%即合格
生物参考区间数据及验证记录表
7.5 结论：
若本实验室所检测的20个标本其检测结果个均在验证区间<13.4ng/ml内，故本实验室参考区间验证通过。
四总结(Summary)
甲胎蛋白试剂盒在雅培I2000免疫分析仪检测系统的精密度、正确度、线性范围、可报告范围及生物参考区间通过验证。
通过以上各项性能验证室验的结论，雅培I2000免疫分析仪检测系统达到检测要求，保证检验结果准确可靠，可以满足临床需求。