真菌的常规检验法
检验科真菌检验流程PIM
深部感染分布于自然界，如土壤、腐败有机物、粮食和饲料等，有时也存在 于正常人体的皮肤和粘膜表面。
（一）分类和命名
其中大多数曲霉只发现了无性阶段，它们归属于半知菌亚门、丝孢菌纲、 丝孢菌目、丛梗孢科，少数种具有性阶段归入子囊菌亚门、不整子囊菌 纲、散囊菌目、散囊菌科。其中对人致病的曲霉主要有烟曲霉
全国临床检验操作规程
真菌病原学检验程序
临床标本
直接检查
分子生物学检测 直接镜检
经固定标本染色 墨汁法 法：亚甲蓝染色 染色法 法、革兰染色法、 P法A。S、荧光染色脑 痰 脓
脊 液汁 液
动
分离培养
物
实
沙氏培养基 验
KOH法
25°C 37°C
毛发 指甲 皮屑 脓汁 痰液
观察菌落 菌丝型 酵母型
镜 小生 检 培化
曲霉可侵犯机体许多部位，尤其是呼吸系统，引起肺曲霉病。曲霉可局限在肺内感 染也可播散到其他器官，甚至引起全身性感染。曲霉还可诱发超敏反应引起过敏性 支气管肺曲霉病。
有些曲霉可产生毒素引起食物中毒，有的毒素如黄曲霉毒素、杂色曲霉素有致癌作 用，特别是黄曲霉毒素与人类原发性肝癌的发生密切有关。
深部感染真菌检验
养反 应
病
检
检
理
测
测
组
抗
抗
织
原
体
标
本
葡聚糖
PAS
HE 甘露聚糖
全国临床检验操作规程（第四版） 783页图4-6-1
2015年3月第一版
真菌鉴定程序
标本的采集、运送和保存
检验真菌的方法
检验真菌的方法
1. 直接镜检法：将短柄棉签蘸取患部分泌物、皮屑、毛发等样本，涂于玻璃片上，用40倍至100倍的显微镜下观察，检测真菌的形态和数量。
2. 细胞学检查法：可采用细胞学方法检查骨髓、淋巴结等组织样本中是否存在真菌，包括涂片法、细胞学初筛法、细胞学制片法等。
3. 培养法：将样本接种于含有丰富营养成分的培养基上，利用真菌的生长特点判定是否存在真菌的培养。
4. 核酸检测法：查找真菌的DNA或RNA序列，并使用PCR 技术的手段拓展浓度，最后用电泳技术侦察出真菌的情况。
5. 基于免疫学的检测：包括诸如ELISA和荧光法等方法，主要检测真菌产生的免疫球蛋白或抗原，以用于检测真菌是否存在。
真菌的鉴定范文
真菌是一种广泛存在于自然界中的生物，也是一类常见的病原体。
在研究真菌时，鉴定其特征和分类是非常重要的步骤。
对真菌的鉴定需要注意其不同的形态、生长环境和遗传特征等多方面的因素，因此准确地识别真菌是一个相对困难的任务。
本文将讨论目前常用的真菌鉴定方法，包括形态学鉴定、遗传学鉴定和分子生物学技术。
1.形态学鉴定在真菌初步分类时，形态学鉴定是基本的方法。
这一方法通常会涉及到真菌菌丝体和子实体的形态特征。
菌丝体通常呈细丝状或短棒状，并且有时会形成分支或团块。
对于子实体，其外观（包括色彩、形状、质地和大小）以及内部的菌柄、孢子和异型等部分的特征都是鉴定的关键要素。
除了以上主要的形态学鉴定方法之外，还可以通过对真菌产生的代谢产物进行鉴定。
有些真菌会产生一些特殊的化合物，如次生代谢物等，这些代谢产物对真菌鉴定也有一定的帮助。
例如，人们可以通过对真菌产生的次生代谢物进行分析来判断其属于哪一品种或属。
2.遗传学鉴定随着技术的进步，越来越多的人选择了通过遗传学鉴定真菌。
这一方法建立在基因序列比对的基础上，主要利用真菌DNA序列的不同构成来对其进行分类。
在这一技术中，人们可以对真菌线粒体DNA序列、大肠杆菌RNA多序列比较和嵌合子单链多态性等进行分析。
遗传鉴定提供了一种非常准确的真菌鉴定方法，由于其几乎可以排除因为环境影响而导致的误判。
3.分子生物学技术在分子生物学技术中，PCR（聚合酶链式反应）和DNA杂交技术是最广泛应用的技术之一。
通过PCR技术，可以从真菌样品中扩增出自RNA的DNA片段（例如其特征序列），以此来进行鉴定。
DNA杂交技术则是基于双链碱基对形成的互补性，将RNA或DNA探针与指定标记DNA 杂交，从而实现对真菌物种的准确识别。
这些技术未来将会得到更广泛的应用和发展。
真菌的鉴定是一个相对复杂的过程，需要经验丰富、技术优秀的人员协助完成，同时多种技术的结合也是一个比较可行的解决方案。
随着科学技术的进步，我们可以更加准确地对真菌进行鉴定，从而更好地了解和利用这些生物的各个方面。
《食品中真菌的检验》课件
3 满足法规要求
真菌检测是许多行业的法 定要求，如食品、制药和 化妆品等，确保企业合规。
真菌在食品中的危害
食品变质
真菌可以导致食品变质，产生 异味和有害物质，影响食品的 风味和口感。
产生毒素
某些真菌会产生毒素，如黄曲 霉毒素和赭曲霉毒素，对人体 健康造成严重威胁。
传播感染
一些真菌可以在食品中繁殖并 传播，造成食品链中的感染和 传染。
3
检测分析
运用适当的检测方法和工具进行真菌的筛查、鉴定和计数。
真菌检测的常见问题
• 如何区分有害真菌和无害真菌？ • 真菌检测是否适用于所有食品类别？ • 如何防止假阳性和假阴性结果？ • 如何选择合适的检测方法和仪器？
真菌检测的案例研究
面包真菌检测
通过培养法和光学显微镜观察， 检测出面包中的镰刀菌和白色念 珠菌。
真菌检测的方法
培养法
通过将食品样品在培养基上 培养，观察和识别真菌的生 长来进行检测。
分子生物学方法
使用PCR等技术，检测和鉴 定食品中的真菌DNA和RNA。
光学显微镜法
使用光学显微镜观察和识别 食品中的真菌形态特征。
真菌检测的步骤
1
样品采集
从食品中采集样品，确保样品代表性和卫生。
2
样品处理
根据检测方法的要求，处理样品以提取和富集真菌。
奶酪真菌检测
使用分子生物学方法，检测出奶 酪中的蓝曲霉和黄霉菌，确保产 品质量。
水果真菌检测
采用PCR技术，检测出水果中的 霉菌，提供食品安全指导。
总结和展望
通过本课件，我们了解了真菌检测的重要性和危害，并探讨了检测的方法、步骤以及一些常见问题和案例研究。 希望能够帮助大家更好地了解和应用真菌检测技术，保障食品安全。
真菌检验
蒸馏水100 ml配制：用蒸馏水将氯化钠溶解即可。 25、观察菌落形态时应注意什么？ 观察菌落形态时应注意：（1）菌落性质，是酵母菌还是霉菌；（2） 菌落大小，一般病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大；（3） 菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深。（4）致病性 真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉；致病性真菌有时使培养基 开列，但污染霉菌很少引起培养基开列。 26、分离皮肤真菌的皮肤真菌实验培养基是什么？ 培养基是：（DTM）含蛋白胨、葡萄糖、酚红、放线菌酮、庆大霉素、 四环素等成分。由于皮肤真菌的代谢产物呈碱性，以致其生长周围 的培养基呈红色。 27、分离新生隐球菌的选择培养基是什么？ 分离新生隐球菌的选择培养基是左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养 基，因新生隐球菌有酚氧化霉（Plrno oxidase）活性，此霉与左旋 多巴和枸橼算铁反映时，能氧化O-联苯酚形成黑素而呈褐色至黑色， 或酚氧化霉和咖啡酸作用而显棕色菌落。 28、真菌培养的方法有几种？各自优缺点是什么？ 培养方法有平皿培养、大试管培养和玻片培养等。平皿培养的优点 是表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只 能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。大试管培养 的优点是水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保 存。玻片培养（为量培养、小培养）是将培养皿的真菌培养切成一 个1cm*1cm的小方块在无菌载玻片中央，然后将真菌点种于小方块培 养基的一侧，再盖上无菌盖玻片后培养，培养后将其盖玻片放入另 一载玻片上于显微镜下观察菌丝和孢子，可用于真菌菌种的鉴定。 29、真菌的生化反映有哪些？ 检验真菌常用的生化反映有糖（酵）类发酵试验、同化碳源试验、 同化氮源试验或利用硝酸钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、 明胶液化试验和脲酶试验等。主要用于检验深部感染的真菌。 30、配置培养基的一般步骤是什么？ （1）按要求称取脱水培养基，倒入所要求量的蒸馏水中，反复搅拌 使各成分混合成均匀混悬液。（2）各成分混合均匀后以文火缓慢加 热并不断搅拌，煮沸1 min，不能过热，以免破坏有效成分。（3） 分装试管应在高压灭菌前，而分装平皿应在高压灭菌后，均待培养 基冷却至45-50度时分装。（4）高压灭菌一般为118-121度，6.81kg
真菌的微生物检验
一、白色念珠菌
白色念珠菌（canidia Albicans）又称白色假 丝酵母菌，广泛存在于自然界，也存在于正 常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在 正常机体中数量少，不引起疾病 。 为条件致病性真菌。
由于生活环境如营养温度氧气等的改变有些真菌的这类真菌称为dimorphicfungus如球孢子菌组织胞浆菌及芽生真菌孢子和细菌芽胞的区别真菌孢子细菌芽胞抵抗力不强6070短时间杀死强煮沸短时间不死数目一条菌丝可产生多个孢子一个细菌体只形成一个芽孢作用为繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在细胞内外形成只在细菌细胞内形成形状形态色泽多样圆形或椭圆形真菌的形态构成营养菌丝气生菌丝生殖菌丝有性孢子由同一菌体或不同菌体上的二个细胞融合形绝大多数属于非致病性真菌所具有分生孢子分生孢子梗的顶端或侧面大分生孢子小孢子菌属表皮癣菌属小分生孢子叶状孢子菌丝细胞直接形芽生孢子隐球菌念珠菌关节孢子厚膜孢子新型隐球菌子囊孢子菌丝末端形成膨大的囊状结构即孢子囊内含很多孢子根霉菌真菌菌丝形态大多数真菌常用沙保氏培养基sda培养
2．分离培养： 取毛发、皮屑、甲屑等标本，用70％乙醇 消毒，接种沙保氏琼脂斜面培养基，25℃培养 7～14天，根据菌落形态及颜色、并挑取菌落 镜检菌丝及孢子的特征进行鉴定。
毛癣菌属
小孢子菌属
表皮癣菌属
3．荧光检查：本法主要用于头癣检查。病 发在滤过紫外灯照射下可发出不同色泽 的荧光，如黄癣菌病发呈暗绿色荧光， 白癣小孢子菌属的病发呈亮绿色荧光 等。
谢
谢
形态特征 小分生孢 子
梨形、棒 形， 较多见 棒形，卵圆 形， 较少见 无
菌
丝
毛癣 菌属
真菌感染的常规检验方法
真菌感染的常规检验方法真菌的临床实验室检查一般包括标本采集、直接镜检、染色镜检、分离培养、生化反应及免疫学试验等。
以直接镜检和分离培养最重要。
1标本采集不同真菌感染应采用不同的临床标本。
浅部真菌感染可以采集毛发、皮屑、指(趾)甲、痂等，标本在分离前常先用75％的乙醇消毒。
深部真菌感染的检查可取痰、尿液、口腔或阴道分泌物、脑脊液、各种穿刺液和活检组织等。
采集标本时应注意无菌操作。
采集标本后应及时转运至实验室进行检查，一般不超过1～2h，以免标本变质污染。
标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。
2检查方法2.1 直接检查法直接镜检是最简单也是很有价值的实验室诊断方法。
其优点在于简便、快速，无菌部位的阳性结果可直接确定真菌感染。
但是，除了少数真菌外，多数不能确定其种类。
由于阳性率较低，阴性结果亦不能排除诊断，有时需反复检查或做其他方法检查以进一步确定。
直接镜检对于浅表和皮下真菌感染最有帮助。
2.1.1 不染色标本检查取皮屑、毛发、指(趾)甲屑等标本置于载玻片中央，滴加100～200g／L KOH溶液1～2滴，以盖玻片覆盖后在火焰上微微加热，使组织或角质溶解、透明后，先于低倍镜检查有无真菌菌丝或孢子，再以高倍镜检查其特征，可初步诊断真菌感染。
2.1.2 染色标本检查有些真菌如深部真菌需要染色后才能更清楚地观察，常用的染色方法如下。
(1)革兰染色法：多用于白假丝酵母菌、孢子丝菌和新近感染的组织胞浆菌等。
所有真菌均为革兰阳性。
(2)乳酸酚棉蓝染色法：取标本于载玻片上，滴加染液，加上盖玻片后于镜下观察，真菌被染成蓝色。
该法适用于各种真菌的直接检查，培养物涂片检查及小培养标本保存等。
(3)荧光染色法：用0.1％吖啶橙对标本涂片和组织切片进行染色，在荧光显微镜下观察，白假丝酵母菌、皮炎芽生菌、球孢子菌为黄绿色，新型隐球菌、鼻孢子菌为红色，组织胞浆菌为红黄色，曲霉菌为绿色。
2.2 分离培养法真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。
检验科真菌学常见检测与分析方法
检验科真菌学常见检测与分析方法在检验科真菌学中，常见的检测与分析方法有多种，本文将详细介绍其中的几种方法。
一、直接镜检法直接镜检法是最常用的真菌检测方法之一。
该方法通过将待检样品直接放置在显微镜下观察，利用显微镜放大功能，检测并鉴定真菌的存在。
该方法操作简便，可以迅速获取初步结果，但其只能观察到菌丝、孢子等大型的真菌结构，对于微小的真菌可能存在漏检的情况。
二、培养法培养法是真菌学研究中较为常用的方法之一。
通过将待检样品放置于培养基上，促使真菌生长繁殖，从而观察和鉴定真菌的种类和数量。
培养法可以提供更多的细节信息，如真菌的形态、颜色、生长速度等，有助于进一步分析和鉴定。
然而，培养法需要较长的时间，一般需要数天至数周，且对于一些难以培养的真菌无法得到准确的结果。
三、PCR技术PCR（聚合酶链反应）是一种在分子生物学中广泛应用的技术。
在真菌学中，PCR技术可以用来检测和分析真菌DNA，从而确定真菌的存在和种类。
该方法的优势在于其高度敏感性和快速性，能够快速检测到微量真菌，并且可以对样品中的复杂菌群进行分析。
然而，PCR技术需要专门的实验设备和试剂，且对实验操作要求较高。
四、质谱分析质谱分析是一种基于质荷比的分析方法，可以用于真菌学中的检测和鉴定。
通过将待检样品进行质谱分析，可以得到真菌的分子质谱图谱，进一步进行真菌的鉴定和分类。
质谱分析具有高灵敏性和高分辨率的特点，可以准确地确定真菌的种类。
然而，质谱分析设备昂贵且操作复杂，需要专业的技术人员进行操作和解读结果。
综上所述，真菌学的常见检测与分析方法包括直接镜检法、培养法、PCR技术和质谱分析。
每种方法都有其优势和局限性，选择合适的方法需要根据具体情况和实验目的进行综合考虑。
在真菌学研究和检测过程中，通过运用这些方法，可以对真菌进行准确的检测和分析，为疾病的防控和治疗提供重要的科学依据。
检验科常见病原微生物检测方法
检验科常见病原微生物检测方法在检验科工作中，常见的病原微生物检测方法是非常重要的。
通过准确、快速地检测出病原微生物，可以帮助医生进行更精准的诊断，从而有效地指导治疗措施。
本文将从细菌、病毒和真菌三个方面介绍检验科常见病原微生物的检测方法。
一、细菌检测方法1. 细菌培养法细菌培养法是最常用的细菌检测方法之一。
通过在富含营养物质的培养基上培养样本，观察细菌的生长情况，可以初步确定感染的细菌种类。
细菌培养法可以对细菌进行鉴定和药敏试验，为抗生素的选择提供参考依据。
2. 快速细菌检测方法为了缩短检测时间，提高诊断效率，现代医学发展了多种快速细菌检测方法，如PCR法、质谱法等。
这些方法可以在较短的时间内准确地鉴定出致病细菌，为临床治疗提供更及时的支持。
二、病毒检测方法1. 病毒抗体检测病毒感染后，机体会产生相应的抗体。
通过检测患者血清或其他体液中的病毒抗体水平，可以确定是否感染了某种病毒。
常用的方法包括ELISA法、免疫荧光法等。
2. 核酸检测病毒的核酸检测是一种非常敏感和特异性的检测方法，可以在感染初期就能够检测到病毒的存在。
PCR法是应用最广泛的核酸检测方法，可以快速准确地鉴定出病毒种类。
三、真菌检测方法1. 真菌培养法真菌培养法是检测真菌感染的常规方法之一。
通过在含有真菌营养物质的培养基上培养样本，观察真菌的生长情况，可以确定感染的真菌种类，并进行药敏试验。
2. 真菌抗体检测真菌感染后，机体会产生相应的抗体。
通过检测患者血清中的真菌抗体水平，可以确定感染的真菌种类。
免疫荧光法、免疫印迹法等是常用的检测方法。
综上所述，检验科常见病原微生物的检测方法包括细菌、病毒和真菌三个方面，每一种方法都有其独特的优势和适用范围。
在实际工作中，应根据具体情况选择合适的检测方法，以确保诊断的准确性和迅速性。
希望本文能对您有所帮助。
食品中真菌的检验
霉菌酵母菌快速检验纸片 使用方法
▪ 1．取样品25g（或mL）放入含有225mL无 菌水的玻璃瓶内，经充分振摇做成1:10的 稀释液，用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液 1mL，注入含有9mL灭菌水的试管内，用 1mL灭菌吸管反复吸吹50次做成1:100的稀 释液，以此类推，每次换一支吸管。
▪ 2．一般食品选3个稀释度进行检测，含菌 量少的液体样品（如食用纯水和矿泉水等） 可直接用原液检测。将检验纸片水平放台 面上，揭开上面的透明薄膜，用灭菌吸管 吸取样品原液或稀释液1mL，均匀加到中央 的滤纸片上，然后轻轻将上盖膜放下，静 置5分钟。
霉菌酵母菌 快速检验纸片
该检验纸片可用于各类食品及饮用水中霉菌 和酵母菌的计数，由霉菌营养培养基、吸水凝 胶和酶显色剂等组成。与上面的传统方法相比， 省去了配制培养基、消毒和培养器皿的清洗处 理等大量辅助性工作，随时可以开始进行抽样 检测，而且操作简便，通过酶显色剂的放大作 用，使菌落提前清晰地显现出来，培养时间由 一周缩短为48-72小时，非常适合于食品卫生 检验部门和食品生产企业使用 。
二、操作要点
（一）、采样
▪ 2、海运进口粮的采样：每一船仓采取表层、 上层、中层及下层四个样品，每层从五点 取样混合，如船仓盛粮超过10000t，则应 加采一个样品。必要时采取有疑问的样品 送检。
二、操作要点 （一）、采样
3、谷物加工制品(包括熟饭、糕点、面包 等)、发酵食品、乳及乳制品以及其他 液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食 品250g，装入灭菌容器内送检。
▪ 3．用手指先沿方格区边缘刮一下， 防止水外流，然后再在中间轻轻推 刮，使水分在纸片方格区内均匀分 布，并将气泡赶走。
▪ 4．将加了样的检验纸片每15片叠放在 一起，放入自封袋中，平放在28－35℃ 培养箱内培养48-72小时。5．霉菌和酵 母菌在纸片上生长后会显示蓝色斑点， 霉菌菌落显示的斑点略大或有点扩散， 酵母菌落则较小而圆滑，许多霉菌在培 养后期全呈现其本身特有的颜色。选择 菌落数适中（10-100个）的纸片进行计 数，乘以稀释倍数后即为每克（或毫升） 样品
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真菌的常规检验法
实验室检查：
♦标本采集分离培养
♦直接镜检生化反应
♦染色镜检免疫学试验
一、临床标本的采集
♦1．皮肤的角质性物质：毛发、指(趾)甲、头屑、皮屑等。
2．各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。
♦3．血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。
4．脓汁及渗出物。
二、检验方法
（一）标本直接检查法
不染色标本检查
染色标本检查
（二）培养检查
（三）鉴定
①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。
②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等）
③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。
④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。
微生物学检查步骤：
取患部标本
（毛发、皮屑等）__置载玻片__加10%NaOH（或10%KOH）→微加温消化
→镜检（观察菌丝和孢子）
直接镜检的意义
①有诊断意义，如浅部真菌病等；
②通过真菌的形态，可确定某些致病性真菌的属或种, 如假丝酵母菌的厚膜孢子等；
③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。
直接镜检的局限性：
①阴性结果不能排除真菌感染；
②有假阳性结果。
因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。
2. 染色标本检查
♦（1）革兰染色：各种真菌均染成革兰阳性。
♦（2）乳酸酚棉蓝染色
♦（3）糖原染色：
♦又称过碘Schiff（简称PAS或PASH）。
真菌细胞壁由纤维素和几丁质组成，含有多糖。
过碘酸使糖氧化成醛，再与品红－亚硫酸结合，成为红色，故菌体均染成红色。
为真菌染色最常用的方法之一。
♦（4）嗜银染色（GMS）：染成黑色
♦（5）粘蛋白卡红染色法（MCS）：主要用于新生隐球菌荚膜的染色。
隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。
♦（6）荧光染色：主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。
（二）培养检查法
♦本法可确定菌种，辅助直接检查的不足。
①菌落性质：酵母菌还是霉菌；
②菌落大小：致病性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大；
③菌落颜色：病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；
④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开裂；污染性真菌菌落不下沉，很少引起开裂。
标本培养观察
标本→沙保培养基→观察菌落形态、假菌丝
标本→玉米粉琼脂培养基→观察厚垣孢子
2、培养方法
♦接种工具为接种针、接种钩、接种环、接种铲（刀）♦（1）试管培养：多用于菌种传代接种与保存。
♦（2）大培养：用平皿或培养瓶培养。
♦（3）小培养可观察结构特征及发育的全过程。
♦ 1）玻片小培养法
♦ 2）郭可大钢圈小培养法：
♦材料：培养基、钢环（用铁环或废电线的铝丝制成）、载玻片、盖玻片、毛细管、石蜡等。
钢圈小培养法
先将无菌钢圈以热石蜡固定在玻片和盖玻片之间，钢环开口处深入底部加入培养基。
加够半环即可凝固。
用接种针取少量材料，接种在培养基表面。
将接种好的玻片，放在平皿内，并放湿纱布以防干燥。
逐日镜检，一般约7ｄ即可长好。
根据菌丝和孢子的结构特点进行真菌类别的鉴定。
真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。
培养真菌的温度为28℃，但深部真菌为37℃。
菌落形态是鉴别真菌的判断依据。
动物实验
目的是分离病原性真菌、确定真菌菌种的致病性、研究药物对真菌的作用等。
如假丝酵母菌接种家兔或小白鼠，肾脏明显肿胀，肾皮质部位有白色脓疡。
（三）真菌的鉴定
1.真菌的生化反应
用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。
1）糖(醇)类发酵试验 37℃，观察糖发酵情况。
2）同化碳源试验含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养基(45℃)混合，然后在培养基上分别加糖，置25℃孵育观察结果。
若24h后无变化可重复加糖。
如能同化则在糖周围有生长圈，否则无生长圈。
一般对双糖发酵的真菌能同化或利用糖类或碳源。
主要用于酵母菌的鉴定。
3）同化氮源试验同化碳源试验相同，但需用无氮源的培养基，不要加糖类，而加入硝酸钾。
用于观察酵母菌对硝酸钾的利用情况。
4）明胶液化试验：某些真菌可液化明胶。
5）尿素分解试验石膏样癣菌、新生隐球菌等可分解尿素。
6）测定淀粉样化合物：某些真菌可产生淀粉样化合物，遇碘后变成兰色
7）牛乳分解试验；真菌可使牛乳酸化、凝固、胨化、碱化等
2、芽管试验
取少许待检的白色念珠菌接种于0.5mL人或兔血清中，混匀，直37℃水浴2-3h后，取出一接种环菌液，涂片、镜检。
有芽管产生者为白色念珠菌，其他念珠菌不产生芽管。
3、厚垣孢子形成试验
本试验亦是鉴定白色念珠菌的重要方法之一，在玉米粉聚山梨酯-80琼脂培养基培养本菌，镜检观察到厚垣孢子及假菌丝。
4、核酸检测
G+C mol％分类鉴定法
常用热变性温度法。
原理是DNA加热变性使碱基氢键被打开，双链螺旋变成单链，导致核苷酸碱基在260nm紫外吸收明显增加，完全变成单链后，紫外吸收增加停止。
紫外吸收增加的中点值温度为热变性温度（Tm）。
真菌DNA中 G+C 碱基对含量多，Tm值就高。
可直接反映 G+C 碱基对的绝对含量。
计算公式为：G+C mol％=(Tm-53.9)×2.44
真菌核型的脉冲电泳分析
原理：PFGE有两个方向的电场在设定的脉冲时间里交替变换，使大分
子DNA在移动中不断改变自己的形状及迁移方向，从而绕过细小的凝胶
孔隙而得以分离。
较大的DNA分子泳动慢些，较小的快些，有许多因素影
响电泳带型，分离真菌等大分子量的DNA宜用较低电压和较长脉冲时间。
用PFGE分析真菌核型，可直接比较其遗传背景,从电泳核型差异中进行
分类鉴定,又能取得基因结构的基本数据，构建出大尺度物理图谱。
随机扩增多态性DNA(RAPD)分析
RAPD分析是一种利用随机合成的单个寡核苷酸引物，通过PCR扩增靶细胞
DNA，扩增产物凝胶电泳，分析DNA片段大小和数量的多态性，从而比
较靶基因差异的一种技术。
由于病原性真菌基因组庞大，RAPD分析适
用于真菌的鉴定与分类。
5、免疫学试验
用于检测深部感染真菌的抗体，作为辅助诊断组织胞浆菌、念珠菌、曲霉菌。
♦检测深部感染真菌的抗原，用于早期、快速、特异的诊断。
❖乳胶凝集法检测新型隐球菌病患者的荚膜多糖抗原❖ ELISA法检测白色念珠菌感染者的甘露聚糖抗原
❖免疫荧光法检测孢子丝菌病患者的可溶性抗原
❖放射免疫法检测组织胞浆菌的循环多糖抗原
6、荧光检查
本法主要用于头癣检查。
病发在滤过紫外灯照射下可发出不同色泽的荧光，如黄癣菌病发呈暗绿色荧光，白癣小孢子菌属的病发呈亮绿色荧光等。
微生物检验方法
1．直接镜检：常用墨汁涂片法。
2．分离培养：在沙保培养基上，室温、37℃ 2～3天即可长出典型酵母型菌落。
有荚膜者菌落粘稠。
有肥厚的荚膜，折光性强，一般染料不易着色，难以发现，称隐球菌
在沙保氏琼脂及血琼脂培养基上，于25及37℃皆可生长，而非病原性隐球菌在37℃不能繁殖。
3．糖同化及发酵试验：本菌不发酵各种糖类，但能同化葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、半乳糖、肌醇，不同化乳糖。
4．酚氧化酶试验：在含Ｌ-多巴橘橼酸铁和咖啡酸培养基中，经２～５天培养，新型隐球菌出现棕黑色菌落。
５．尿素酶试验：新型隐球菌产生尿素酶，在尿素培养基（含尿素及酚红指示剂）中分解尿素形成氨和CO2，以致培
养基的pH值升高，使酚红由黄变为粉红色为阳性，而白色念珠菌为阴性。
三、真菌感染的防治原则
1、对于皮肤癣菌的感染，应注意个人卫生并辅以抗真菌药物治疗；（达克宁霜剂、癣药水等）
2、对于深部感染真菌，去除各种诱发因素，应以提高机体免疫力为主并辅以抗真菌药物治疗；
3、治疗抗真菌药物主要有：两性霉素B、制霉菌素、咪康唑、酮康唑、灰黄霉素、克霉唑等，但应注意这些药物的毒副作用。
四、真菌毒素的检测
真菌产生有毒的代谢产物，可引起急慢性真菌中毒症，引起消化道中毒症状，而且可进入人体内引起病变，如引起肝脏损伤的黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素；引起肾脏损害的桔青霉素；引起中枢神经系统损害的黄绿青霉素等。
甚至有的毒素具有致癌性，如黄曲霉毒素与肝癌发生有关。
检测真菌毒素有许多方法，如检测黄曲霉毒素有生物学方法和ELISA法等。
♦生物学方法主要用于检测真菌毒素的毒性，如用鸡胚、小白鼠作毒性试验，观察动物中毒死亡或出现肿瘤。
♦ELISA法操作简便，并具有安全快速高效、费用低，适用于大批量标本的筛选。