半制备液相色谱
高速逆流色谱技术
l 高速逆流色谱是液相色谱的一种新技术，无需载体，从几种色谱原理方法可以清晰说明。
大约50年前，根据对两种液体进行分配的理念，产生了两种相似的方法：逆流分配技术和液-液色谱分配技术，即：逆流色谱和液相色谱。
30年前，日本Sanki Engineering Ltd.利用前一种技术开发出了高性能的逆流色谱仪（HPCPC），它结合了液相色谱中的快速、高效和先进技术。
HPCPC尤其在利用色谱技术进行半制备和全制备的应用中倍受瞩目，它和采用色谱柱技术的液相色谱在四个方面具有显著优势：● 无样品损失：因为流动相和固定相都是液体，样品可以全部回收。
● 大容量和高的分离能力：流动相和固定相的体积比明显很高，从而无需更大的理论塔板数，就可以获得更大的容量和更高的分离能力。
● 十分灵活的两相系统：（两种、三种、四种溶剂混合）为了获得一种纯的化合物，实验中需要比较灵活的更改流动相，HPCPC可以很方便地调整两相的极性。
● 溶剂消耗少：相对于色谱柱制备系统，对于同样的制备量，HPCPC的溶剂消耗量只有十分之一，使用逆流色谱在实验室完成分离后，可以直接放大到生产规模。
● 固定相价格低：另一个显著优点是逆流色谱的固定相是溶剂，相比色谱柱中的填充材料价格低很多；而且固定相可以很容易再生，一些添加的物质如手性选择剂或复杂的配位体可以无损失地回收，国际上出版的论文可以提供十分有用的信息和应用参考。
新型的高速逆流色谱仪HPCPC广泛地应用于化学领域的纯化，如抗生素、缩氨酸、丹宁酸、皂角苷、油脂、药品等，将来的发展可以预见更大规模和产量的HPCPC设备出现，在化学领域将更加广泛地应用，如手性药物分离等。
与传统制备液相的优势● 逆流色谱仪HPCPC十分快速由于固定相溶剂通过离心力保留在分配通道中，可以不用顾及分离精度的高低要求而让流动相的流速保持很高。
● 明显优于传统制备液相由于逆流色谱仪HPCPC不需要固定相，不会出现对十分昂贵的样品产生不可逆转的保留，而在传统色谱柱的液相色谱中，经常出现的变性和分解现象在逆流色谱不会产生，同时保留了原来的生物活性。
制备型高效液相色谱的实验方法
制备型高效液相色谱的实验方法陈明杰;危凤【摘要】Preparative high performance liquid chromatography has been widely applied in medicine, fine chemical and food, particu- larly applicable to separate high added value and high purity products. Tbis paper introduced the experiment teaching of preparative high performance liquid chromatography in separation of tocopherol, explored how to set up teaching content, and the ways of improving students ＂abilities to analyze and solve problems. The stvdents＇application abilities were strengthened.%制备型高效液相色谱已广泛应用于医药、精细化工、食品等行业,特别适用于分离高附加值、高纯度的产品。
通过制备型高效液相色谱分离生育酚各组分的教学实践,探讨了制备型高效液相色谱实验教学内容的设置,以及通过实验教学提高学生独立分析和解决问题能力的方法,强化了学生的应用能力。
【期刊名称】《实验科学与技术》【年(卷),期】2012(010)004【总页数】3页(P23-25)【关键词】制备型高效液相色谱;实验教学;生育酚;方法【作者】陈明杰;危凤【作者单位】浙江大学宁波理工学院生物与化学工程分院,浙江宁波315100;浙江大学宁波理工学院生物与化学工程分院,浙江宁波315100【正文语种】中文【中图分类】O658.11制备型高效液相色谱并非分析色谱的简单放大，两者有许多不同。
乙氧苯柳胺—2—葡萄糖苷酸的分离鉴定
乙氧苯柳胺一一 ２葡萄 糖苷酸 的分离鉴定
初 大丰 顾景 凯 钟 大放 司端运 周 慧
（ 吉林大 学生命科 学学 院．长春 １０ ２ ２ Ｌ ３０ ３ ，沈 阳药科大学药物代谢 与动 力学实验室 ， 阳 １０ １ ） ４ 沈 １０ ５
摘要
报道 了治疗痤疮新 药乙氧苯柳胺［ （一 Ⅳ一４乙氧苯基 ） 一 一 羟基 苯 甲酰胺］ ２ 的葡 萄糖 苷酸结合 物的制备方
１３ Ｅ ＩＭｓ样 晶制备及 Ｅ ＩＭｓ分析 ． Ｓ— Ｓ— 根据 给药前 后尿 样色谱 图 的 比较 ，对可 能 的代 谢物色谱 峰收集流 分后进行 Ｅ ＩＭＳ分析． Ｓ— 选择 负离子 方式 检测 ， 用全 扫描一级 质谱方 式获得待 测物 的准分 子离子 峰 ［ 先 Ｍ—Ｈ］ ，然后 采用 一 Ｅ ＩＭｓ技 术对 准分子 离子 峰及其 碎片离 子峰 进行 多级质谱 分析 ， Ｓ— 获得相 应 的分子离 子质谱 匿．
维普资讯
Ｖｏ ． ３
Ｃ ＭＩ ＡＬ Ｊ ＨＥ Ｃ ＯＵＲ ＮＡＬ Ｏ ＨＩ Ｓ Ｆ Ｃ ＮＥ Ｅ ＵＮＩ Ｅ Ｉ Ｅ Ｖ ＲＳＴＩ Ｓ
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基垒项 目． 国家 自拣科学基垒重点项 目（ 批准号 ， ９３ｌ０和面上项 目 ３ ９０８） 基垒 （ 批准号， ０７８９膏助． ３００７） 骥呆人 俯介 展景虮（９３ 出生） 男 ， １６年 ， 博士， 副教授 ． 主要从事葑暂代谢与葑暂动力学矸芄 Ｅ ￣ ［ ｇｊ ｈｉ ６． － Ｌ ｕ ＠１３峙ｔ ｉ
Ｕｎ ｙ４０超导核磁共振仪（ ｉ ０ ｔ 美国 Ｖ ｒ ｎ公 司） Ｌ Ｑ 液相色谱／ ａａ ｉ ； Ｃ 质谱联用仪（ 国 Ｆ ｎ ａ 美 ｉ ｉ ｎ公司） ｎｇ ，配
植物甾醇提取分离方法研究进展
植物甾醇提取分离方法研究进展作者：梁娇张鹰来源：《食品安全导刊·中旬刊》2020年第08期植物甾醇作为一种新资源食品，有较高的应用价值。
植物甾醇主要存在于植物油不皂化物中，随着现代提取技术的发展，植物甾醇提取方法也更加多样化，本文概述了植物甾醇提取分离方法。
植物甾醇来源植物甾醇（phytosterol）是植物中的一种有益的活性营养成分。
甾醇按照其来源可分为：植物甾醇、动物甾醇和菌类甾醇。
其中β-谷甾醇（β-sitosterol）、豆甾醇（stigmasterol）和菜油甾醇（campesterol）等属于植物甾醇[1]。
其中植物甾醇结构因侧链上的结构不同使其具有的生理功能不同。
植物甾醇的提取分离方法溶剂结晶法溶剂结晶法分为单溶剂和多溶剂的重结晶法。
结晶是指蒸汽或溶液中的某些或某种成分以晶体状析出的现象。
在工厂和实验室等机构分离提纯该物质常用该法。
冯文欢[2]等对98%混合植物甾醇进行纯化，经2次重结晶，最终豆甾醇的纯度可达99.36%。
层析法层析法包括柱层析、半制备液相色谱法等。
极性较小的物质一般用柱层析的方法分离，甾醇的极性较低，可根据相似相溶原理通过石油醚或甲醇等低极性溶剂将甾醇从混合物中分离，制备型液相色谱可大量地对混合物进行分离。
许帅[3]通过对莲心的丙酮提取物使用柱层析进行分离，甾醇酯的纯度为95.56±1.32%，回收率为95.70±3.05%。
皂化法皂化法是用熟石灰或生石灰在60℃～90℃將溶剂提取物皂化，将游离脂肪酸酯化成溶于水的盐，经萃取除去游离脂肪酸，得到不皂化物。
项发晖[4]等通过对鲍鱼性腺无水乙醇提取物皂化得到鲍鱼性腺甾醇纯度达14.08%，相较于鲍鱼性腺粗甾醇纯度8.62%显著提高。
蒸馏法蒸馏法包括分子蒸馏和常规蒸馏。
分子蒸馏是一种液-液分离技术，原理为在0.1～10Pa（帕斯卡）的高真空条件下，不同物质分子运动的平均自由程差异来进行分离;常规蒸馏则是一种气-液分离技术，在常压条件下进行分离[5]。
c18 色谱柱 规格
C18色谱柱规格
C18色谱柱的规格依靠内直径(ID)、长度(L)和填料颗粒大小(dp)来标示。
１．ID：通常为2.1mm、3.0mm、4.6mm或10mm。
其中2.1mm 和3.0mm的柱用于高效液相色谱(HPLC)，4.6mm的柱用于传统液相色谱(LC)，而10mm的柱用于半制备或制备规模下的分离。
一般来说，柱的内径越小，越适合用于分离小分子化合物，但是柱的压力会相应地增加，加重操作难度。
相反，内径较大的色谱柱适用于分离大分子化合物，如蛋白质和多肽。
２．L：通常为50mm、100mm、150mm或250mm。
较短的柱适用于快速分离和分析，适合于高通量的实验室应用；长柱适用于分离复杂混合物，但操作流程较慢，需要较长时间才能获得足够的分离效果。
实验室仪器设备9大分类【最新版】
实验室仪器设备9大分类色谱仪器液相色谱等度液相色谱仪、二元高压手动液相色谱仪、二元高压全自动液相色谱仪、四元高压液相色谱仪、半制备型高效液相色谱仪、紫外检测器荧光检测器、蒸发光散射检测器、蒸发光专用空压机、示差检测器光化学衍生器、色谱工作站、在线脱气机、审计追踪色谱工作站柱温箱、液相色谱柱、专用液相色谱耗材......气相色谱气相色谱仪、FID检测器、ECD检测器、TCD检测器、FPD检测器顶空进样器、热解析仪、空气压缩机、氢气发生器、氮气发生器氢空一体机、氮空一体机、氮氢空一体机、气体净化器不锈钢脱氧管、气体流量计、玻璃透明脱氧管、气相色谱柱专用气相色谱耗材、空气发生器......光谱仪器重金属元素检测自动进样火焰原子吸收分光光度计、自动进样石墨炉原子吸收分光光度计、原子吸收分光光度计(火焰-石墨炉一体)、原子吸收分光光度计(单火焰)、原子吸收分光光度计(氢化物-火焰一体)、氢化物发生器原子专用空压机、元素灯、标准液、原子专用高纯乙炔气、原子专用高纯氩气、原子专用高纯氮气、原子专用冷却水循环泵微波消解仪、预加热处理器、原子荧光分光光度计、火焰光度计......薄层含量检测双波长薄层色谱扫描仪、全波长薄层色谱扫描仪、自动化型双波长薄层色谱扫描仪、全能型薄层色谱扫描仪、带紫外观察仪全能型薄层色谱扫描仪、电动点样器、电动条带点样器全自动点样仪、全软件全自动点样仪、超细电动喷雾器、双喷头超细电动喷雾器、全自动喷雾系统、全自动预制板铺板机电子展开仪、全自动展开仪......薄层鉴别高端薄层色谱成像系统、薄层色谱成像系统、薄层色谱摄影仪、暗箱式摄影仪、薄层成像仪、紫外反射透射仪、三用紫外分析仪、四用紫外分析仪、二用紫外分析仪......红外光谱仪傅里叶红外光谱仪、红外分光光度计、红外测油仪、红外压片机压片模具、玛瑙研钵、红外烘烤箱、光谱纯溴化钾、药品红外光谱集红外液体池(密封池)、强防腐特氟龙液体池、红外气体池、药包材检测专用附件包、其他附件、红外窗片系列、光栅光谱仪、光化学反应仪......紫外鉴别及含量检测可见分光光度计、双光束紫外可见分光光度计、单光束紫外可见分光光度计、主机扫描型紫外可见分光光度计、其他紫外可见分光光度计......其他分析仪器抗生素效价测定仪、过滤器完整性测试仪、TOC总有机碳分析仪、二氧化硫测定仪、手套检漏仪、冰点渗透压摩尔浓度测试仪、酶标仪多路数据记录仪......样品制备浓缩与氮吹旋转蒸发仪油浴系列、旋转蒸发仪水浴系列、多歧管旋转蒸发仪、循环水真空泵、台式循环水真空泵、单表多抽头真空泵、旋转蒸发仪(器)、低温冷却液循环泵、玻璃反应釜、A型平行蒸发仪、B型平行蒸发仪、真空控制系统、定量型平行浓缩、平行浓缩氮吹仪、自动氮吹浓缩仪、水浴氮吹仪、干式氮吹仪旋转蒸发器、部分配套低温泵、RV系列真空反应器、平行浓缩蒸发仪自动密闭氮吹仪、超声波高温高压反应釜、恒温密闭式超声波反应器、氮气吹扫仪、玻璃仪器烘干器、真空泵、高压反应釜高低温循环装置......摇床脱色摇床、立式摇床、卧式摇床、台式摇床、水浴摇床、叠加摇床转移摇床、3D摇床、万向摇床侧摆摇床、旋转摇床、旋转培养器......搅拌器恒温磁力搅拌器、多头磁力搅拌器、多功能磁力搅拌器、大功率磁力搅拌器、集热式磁力搅拌器、平板式搅拌器增力电动搅拌器、六连电动搅拌器、控温电动搅拌器数显直流恒速搅拌器、强力电动搅拌器、电动搅拌器、磁力搅拌器其他搅拌器、多用途试管搅拌器......振荡混合气浴恒温振荡器、水浴恒温振荡器、制冷浴恒温振荡器、高温油浴振荡器、垂直多用振荡器、多用调速振荡器、往复振荡器康氏振荡器、恒温振荡器、回旋振荡器、微量振荡器、振荡培养箱低速振荡器、摆动振荡器、青霉素振荡器、敞开式振荡器快速混匀器、血液溶浆机、漩涡混合器、振荡水槽、梯度混合器培养器专用振荡仪、空气恒温振荡器、试管振荡器、微孔板振荡器超级混匀仪......摇瓶机大容量摇瓶机、大容量摇瓶机(双层)、小容量摇瓶机、小容量摇瓶机(双层)......粉碎混匀组织捣碎机、可调高速匀浆机、电动匀浆机、高速万能粉碎机内切式匀浆机、手提粉碎机、摇摆粉碎机、连续投料粉碎机超声波粉碎机、组织研磨仪、混匀仪、多功能粉碎机......水浴锅/水箱/恒温槽电热恒温水浴锅、电热恒温水槽、低温恒温水槽、超级恒温油槽电热恒温水温箱、超级恒温水浴、超级恒温水槽、恒温金属浴低温循环水槽、低温恒温水浴、微量恒温器、干浴恒温器恒温加热平台......电热蒸馏水器5L/小时电热蒸馏水器、10L/小时电热蒸馏水器、20L/小时电热蒸馏水器、50L/小时电热蒸馏水器、100L/小时电热蒸馏水器、200L/小时电热蒸馏水器、400L/小时电热蒸馏水器、600L/小时电热蒸馏水器烘干器/烘干箱、高纯水蒸馏器......超纯水机反渗透纯水机、去离子纯水机、通用型超纯水机、双级反渗透超纯水机超纯水机、纯水机配件......离心机低速离心机、高速离心机、高速冷冻离心机、低速大容量冷冻离心机、脱帽离心机、血库离心机、涂片离心机、迷你离心机、美容离心机石油离心机、乳脂离心机、离心沉淀机、冷冻超大容量离心机、大容量冷冻离心机、电动离心机、过滤离心机......显微镜生物显微镜、荧光显微镜、相衬显微镜、偏光显微镜、体视显微镜金相显微镜、UIS显微镜、倒置显微镜、视频显微镜、数码显微镜电脑显微镜、透反射显微镜、暗场显微镜......高压灭菌器手提式灭菌器、立式翻盖灭菌器、立式手轮式灭菌器、立式智能灭菌器卧式灭菌器、红外接种灭菌器......固相萃取圆形固相萃取装置、方形固相萃取装置、数控固相萃取装置、全自动固相萃取装置......细菌多点接种仪MIC多点接种仪、细菌多点接种系统......微生物检测设备菌落计数器、半自动菌落计数器、智能菌落计数器、微生物限度检查仪匀浆仪、集菌仪、过滤器......均质器系列拍击式均质器生物样品均质器高速分散均质器球型研磨仪超声波细胞破碎仪......培养基制备分装全自动培养基分装仪、全自动培养基制备仪......色谱制备溶剂过滤器、量筒式过滤器、罩杯式过滤器、无油真空泵、旋片式真空泵、恒流泵、蠕动泵、真空泵过滤器、皮带式真空泵单级真空泵、高温循环器、真空加氯机、恒温循环器......精密称量分析天平、精密天平、台秤、平台秤、珠宝天平、水分测定仪、便携式天平、其他天平、密度天平......超声波清洗机ES系列超声波清洗机、旋钮式超声波清洗机、数控超声波清洗机、高功率数控超声波清洗机、高频数控超声波清洗机、双频数控超声波清洗机、三频数控超声波清洗机、恒温数控超声波清洗机、升降式数控工业超声波清洗机、低频超声波清洗机、台式超声波清洗单槽式超声波清洗器、大功率超声波清洗器、触控显示屏超声波清洗机......箱体设备培养箱生化培养箱、低温生化培养箱、霉菌培养箱、控湿霉菌培养箱、二氧化碳细胞培养箱、厌氧培养箱、恒温恒湿培养箱、光照培养箱人工气候箱、隔水式电热恒温培养箱、电热恒温培养箱、干燥、培养两用箱、多功能培养箱、振荡培养箱、层照培养箱、微生物培养箱精密恒温培养箱、低温培养箱、其他培养箱......干燥箱电热恒温干燥箱、高温干燥箱、电热鼓风干燥箱、台式鼓风干燥箱箱式电阻炉/马弗炉、热空气消毒箱、真空干燥箱、远红外干燥箱胶片箱、高低温试验箱、高低温湿热箱、高低温交变湿热箱、高低温交变试验箱、精密鼓风干燥箱、立式鼓风干燥箱、自然对流干燥箱、其他干燥箱、电热板、电热套......医用冷藏箱医用冷藏保存箱-药品、试剂、疫苗实验室层析柜、-25℃立式低温保存箱、-25℃卧式低温保存箱、-40℃立式低温保存箱、-40℃卧式低温保存箱、-60℃立式低温保存箱、-60℃卧式低温保存箱、-86℃立式低温保存箱、-86℃卧式低温保存箱、-130℃卧式低温保存箱、4℃医用血液保存箱、血小板恒温保存箱、车载冰箱、2-8℃医用冷藏箱低温冷阱......药品稳定性试验箱、综合药品稳定性试验箱(单箱)、综合药品稳定性试验箱(多箱)、药品强光照射试验箱、药品高温试验箱、步入式药品稳定箱、试验箱、其他......其他试验箱氘灯试验箱、紫外光试验箱、盐雾试验箱(热)、老化试验箱可扩展试验箱、种子发芽箱......安全存储单瓶气瓶柜、双瓶气瓶柜、三瓶气瓶柜、易燃液体存储柜(黄)、可燃液体储存柜(红)、弱酸弱碱储存柜(蓝)、高端毒害品储存柜PP 药品柜/试剂柜、器皿柜全钢药品柜、无管式净气净化型药储柜、易燃品毒害品储存柜、强酸强碱柜......洁净区检测全钢通风橱全钢通风橱(1000/1200/1500/1800)生物安全柜台式生物安全柜、单人操作生物安全柜(30%外排、全排)、双人操作生物安全柜(30%外排、全排)、三人操作生物安全柜(30%外排、全排)、其他......净化工作台垂直流超净工作台(单人单面/单人双面/双人单面/双人双面)、水平流超净工作台(单人单面/单人双面/双人单面/双人双面)、其他......手持式尘埃粒子计数器、台式尘埃粒子计数器、大流量尘埃粒子计数器、其他......浮游菌采样器便携式浮游菌采样器、台式浮游菌采样器、狭缝式空气浮游菌采样器、大气采样器、粉尘采样器......其他仪器风量罩、空气检测仪、环境参数测试仪、风速仪温湿度计(仪)、温湿度记录仪、压差计、噪音计、照度计、臭氧浓度检测仪发烟笔、风量仪、除湿机、甲醛检测仪、氧气检测仪、氨气检测仪、TVOC检测仪、苯检测仪、可燃气体检测仪、电子记录仪、烟气分析仪、食用油品质及PH值、红外热像仪、转速仪、电工表系列压力仪、绝缘电阻测试仪、震动与对中、钳形表、万用表、二氧化碳检测仪、木材水分检测仪、分析仪、其他洁净区仪器......药检仪器固体制剂系列智能溶出度仪、避光溶出杯、溶出取样系统、真空脱气仪、崩解仪脆碎度测试仪、智能片剂硬度仪、熔点仪、振实仪、冻力测试仪、勃式粘度测试仪、明胶透明度测试仪、厚度测试仪、融变时限测试仪、片剂四用测试仪、硬度仪、低温药物光照试验仪、药物透皮扩散试验仪、包衣机、精密恒温酶测定仪、切片机、制丸机......液体制剂系列智能微粒检测仪、细菌内毒素测定仪、智能热源渗透压测定仪、无菌检查、澄明度检测仪、药物溶液颜色测定仪、澄清度检测仪、微粒分析仪......其他制剂系列锥入度计、膏药软化点测定仪......药包材检测水汽透过率检测仪、气体透过率测试仪、电子拉力机(仪)、拉力机试验专用裁样器、热封仪、落球冲击测定仪、密封试验仪耐压试验仪、耐破度测定仪、垂直度偏差测定仪、应力仪(机)数显轴偏差仪、数显圆跳动仪、底/壁/边厚仪、折断力仪、撕拉力仪内压力试验机、玻璃瓶罐/玻璃管抗冲击仪、电子塑瓶(袋)试验机电子数显扭矩仪、玻璃容器抗热震性、热冲击仪、数显玻管直线度仪、光学投影数显测量仪、测厚仪、粘力(性)测试仪、撕裂度仪、其他药包材检测仪器......食品检测食品安全检测脂肪测定仪、纤维测定仪、蛋白滴定仪、蒸煮器、黄曲霉素检测仪冷水机、饲料混合均匀度测定仪、氮磷钙测定仪、直链淀粉测定仪、其他食品检测仪器......农药残留速测仪、土壤分析仪器、谷物检测、农业气象监测、植物生理检测、病虫害检测、环境记录仪、农业工具箱、糖度计果蔬检测、种子检验......多参数综合水质检测仪、单参数水质分析仪、BOD测定仪、消解器自动红外测油仪、重金属测定仪、水质污染物测定仪、便携式/快速水质检测箱、土壤检测COD速测仪、水分分析仪......试剂水质测定试剂、重金属试剂、无机污染物、有机污染物......综合环境检测箱、二氧化氯仪、防雷水位仪......。
冠突散囊菌与金黄色葡萄球菌混合发酵次级代谢产物及细胞毒活性
3）两种菌混合发酵：先取 JH 菌悬液 2 mL 接种于米饭培 养基中，28℃培养 3 d 后，再接入 JP 菌悬液 2 mL，28℃继续培 养 27 d，平行接种 6 瓶。 1.4 发酵粗提物制备
将供试样品用 RPMI1600 μL，阴性对照组加等体积的 RPMI1640 完全培养基，每组设 3 个复孔，持续培养 48 h 后，再 加入 10 μL MTT 溶液继续培养 4 h。弃去上清，每孔加入 150 μL 二甲基亚砜（DMSO），置微量振荡器上低速振荡 10 min，使结晶物充分溶解，置于酶标仪 570 nm 处测量各孔的吸 光度（OD 值），计算细胞增殖抑制率。
采用 MTT 法对化合物 1～7 进行细胞毒活性评价，对人肺 癌 A549 细胞、人乳腺癌 MCF-7 细胞、人肝癌 Bel-7402 细胞均 培养于含 10%的胎牛血清（FBS）及 2 mmol/L 谷氨酰胺（L-glu⁃ tamine）的 RPMI1640 完全培养基中，人结肠癌 Colo205 细胞培 养于含 10%胎牛血清的 D-MEM/F-12 培养基中。取对数生 长期的细胞，分别用培养基稀释为细胞悬液，将浓度均调整 为 5.0×103 个/mL，分别接种于 96 孔细胞培养板内，每孔加细 胞悬液 100 μL，将培养板置于 37℃，5%CO2，95%相对湿度的 细胞培养箱中培养 24 h 后待用[16]。
细胞株：人肺癌 A549 细胞、人乳腺癌 MCF-7 细胞、人肝 癌 Bel-7402 细胞和人结肠癌 Colo205 细胞，来源美国 ATCC。 1.1.2 培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基：取 38 g·L-1 马铃薯葡萄糖琼
高效液相色谱实验技术问题解答
1、高效液相色谱是如何实现高效、快速、灵敏的?解：气相色谱理论和技术上的成就为液相色谱的发展创造条件，从它的高效、高速和高灵敏渡得到启发，采用5一10四微粒出定相以提高柱效，采用高压泵加快液体流动相的流速;设计高灵敏度、死体积小的紫外、荧光等检测器，提高检测灵敏度，克服经典液相色谱曲缺点，从而到达高效、快速、灵敏。
2、与气相色谱法相比高效液相色谱有哪些优点和不足?解：气相色谱的分析对象是在校温下具有一定的挥发性、对热稳定购物质。
因此它只限于分析气体和沸点低的化合物或挥发性的衍生物。
而高效液相色谱由于以液体作为流动相，只要被分析的物质在选用的流动相中有一定的按解度，便可以分析，所以适用性广，不受样品挥发性和热稳定性的限制，特别适合于那些沸点高、极性强、热稳定性差的化合物，例如，生化物质和药物、离子型化合物、热稳定性差的天然产物等。
在目前已知的有机化台物中，只有20%样品可不经化学处理而能满意地用气相色谱别离，80%的有机化合物要用高效液相色谱分析。
气相色谱中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用、而高效液相色谱的流动相不仅起运载作用，而且流动相对组分有一定亲合力，可以通过改变流动相种类和组成提高别离的选择性，另外可作流动相的化合物多，选择余地广。
与气相色谱相比，高效液相色谱的另一个优点是样品的回收比较容易，只要开口容器放在柱子末端，就可以很容易地将所别离的各组分收集。
回收是定量的，可以用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。
高效液相色谱不足的是，日前检测器的灵敏度不及气相色谱。
必须特别注意“柱外效应”对柱效率及色谱别离的影响。
3、试比较气相色谱与液相色谱的H-u曲线，分析产生不同的原因。
解：从图可看出，气相色谱和液相色谱得到的H-u曲线，形状迥然不同，流动相的流速对柱效的影响也不一样，在气相色谱的H-u曲线上，塔板高度H随u变化呈双曲线.曲线有一最低点，这时柱效最高，板高最小，流速最正确。
药物分离纯化技术-制备色谱分离技术
亲疏水性选择，一般分离大分子时，选 择疏水性的基质，活性易保持；
30
制备色谱技 术
常规柱色谱的操作
(1)装柱：干法和湿法；
(2)上样：液体上样和拌样上样，样品带尽 可能窄；
(3)洗脱：始终保持洗脱剂液面高于柱床表 面，可梯度洗脱；
(4)流分收集：常采用固定体积收集法，结 合TLC检验；
21
(6)
网吸 酰极 中 或非 骨 和
制
状附 结和 构分 ，子 大筛 比分 表离 面相 积结
合 ：
胺性 基、 、强 氮极 氧性 等 基 团含 ；氧
硫 基
----
----
等 极 性 甲 基 丙 烯 酸 酯
二极 乙性 烯、 基弱 苯极 聚性 合 而 成苯 ；乙
烯
----
架 结 构 决 定 树 脂 的 极 性 ：
R
制备色谱技术 Si O H+R O H
Si O R
Si OH + SOCl2
Si Cl
(2) 健合硅胶
Si Cl + RNH2
Si NHR
Si Cl + RX M g
Si R
18
制备色谱技术
(3) 氧化铝 碱性氧化铝：其水提取液为pH9-10，常用于碳氢化合物的分离，从碳氢化
合物中除去含氧化合物。 中性氧化铝：5%乙酸处理，水提取液为pH7.5，适用于醛、酮、醌、某些
切割谱带更加方便；
a. 自动化：自动点样仪、自动程序 展开仪、薄层扫描仪、多种强制 流动技术、多种联用技术如傅立 叶变换红外、拉曼、质谱等。
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制备色谱技术
常规制备薄层色谱PTLC 薄层板制备 为了增大上样量，增加了吸附剂用量。 固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、
山楂叶提取物中牡荆素、金丝桃苷、异槲皮苷对照品的制备
山楂叶提取物中牡荆素、金丝桃苷、异槲皮苷对照品的制备文蕾;林云良;高红梅;李峰;姜姣姣;宋祥云;付瑞明;王岱杰【摘要】采用高速逆流色谱结合半制备液相色谱技术快速分离山楂叶中低含量的牡荆素、金丝桃苷、异槲皮苷单体.以氯仿-甲醇-水-正丁醇(4∶3∶2∶1.5,V/V)为溶剂系统,流速为5.0 mL/min,转速为850 r/min,检测波长为254 nm,从山楂叶黄酮提取物中富集得到含牡荆素、金丝桃苷、异槲皮苷3种化合物的混合组分,经半制备液相进行二次分离纯化,得到纯度大于98%的牡荆素、金丝桃苷、异槲皮苷单体.研究结果表明,该技术对山楂叶中低含量黄酮类化合物的分离快速、高效,且纯度高.%Three low content flavonoids, such as vitexin, hyperoside and isoquercitrin from Crataegi Folium were rapidly separated and purified by high-speed counter-current chromatography (HSCCC) combined with pre-HPLC.The total flavonoids from Crataegi Folium were firstly separated by HSCCC, with a solvent system of chloroform/methanol/water/ n-butanol (4∶3∶2∶1.5, V/V), flow-rate of 5.0 mL/min, rotation speed of 850 r/min, detection wavelength of 254 nm.A mixed component was separated from crude flavonoids, containing vitexin, hyperoside, and isoquercitrin.Then, the mixture was separated by pre-HPLC and vitexin, hyperoside, and isoquercitrin were obtained, with the purity over 98%, respectively, as determined by HPLC.Experimental results show that it is an efficient method for separation of low content flavonoids with high purities from Crataegi Folium by HSCCC combined with pre-HPLC.【期刊名称】《山东科学》【年(卷),期】2017(030)004【总页数】6页(P13-18)【关键词】山楂叶;牡荆素;金丝桃苷;异槲皮苷;高速逆流色谱;半制备液相色谱【作者】文蕾;林云良;高红梅;李峰;姜姣姣;宋祥云;付瑞明;王岱杰【作者单位】山东中医药大学药学院,山东济南 250355;山东省分析测试中心,山东省中药质量控制技术重点实验室,山东济南 250014;山东省分析测试中心,山东省中药质量控制技术重点实验室,山东济南 250014;山东省分析测试中心,山东省中药质量控制技术重点实验室,山东济南 250014;山东中医药大学药学院,山东济南250355;山东省分析测试中心,山东省中药质量控制技术重点实验室,山东济南250014;山东省分析测试中心,山东省中药质量控制技术重点实验室,山东济南250014;山东省分析测试中心,山东省中药质量控制技术重点实验室,山东济南250014【正文语种】中文【中图分类】R284.2山楂叶(Crataegi Folium)为蔷薇科(Rosaceae)植物山里红(Crataegus pinnatifida Bge.Var. major N. E. Br.)或山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥叶，具有活血化瘀、理气通脉、化浊降脂等多种功效，在我国山东、陕西、山西等地均广泛分布[1]。
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半制备液相色谱
1 液相色谱技术
液相色谱是一种分离和分析不同混合物的常见分析技术，由于它
可以快速和有效地分离有机物中的特定成分，因此得到了广泛的应用。
液相色谱的原理是，当通过柱子（容器内的固定的二元组成），由流
体力学和表面化学作用，有机物将被混合物分隔成多个组分，由高压
活性剂吸附在柱子表面上，不同的成分根据其矩阵容量而分离出来，
沿着柱子的不同地方被分离成不同的梯度，从而获得有机物的分离和
分析。
2 半制备液相色谱
半制备液相色谱是在一步液相色谱研究的基础上，充分利用柱前
回收的研究方法。
是指在一步液相色谱峰前，充分利用一步液相色谱
的分离机理，对柱前回收的混合物进行再细分离，通过细调恒流速度
和其它参数，大大提高了一步液相色谱分离效率并降低了色谱分析时间。
3 优点
1、能够有效改变和提高混合物的分离和色谱分析效率。
2、优化溶剂系，增大分离和分析的动力学和热力学梯度，以达到
最佳的分离效果。
3、降低体积，减少样品和溶剂的使用量，保护柱材料有效地减少污染，有利于环境保护。
4、适用于实验室的液相色谱技术体系，大大简化了分析路径和分析流程，节省了时间和人工。
4 应用
半制备液相色谱技术广泛应用于有机物分析，主要用于分离和分析混合物中复杂的有机化合物，特别是配基降解类药物研究，具有更多靶组件或反应产物分析的能力，可以帮助研究人员更精确快速地合成新药物，改进原料药生产过程，安全有效地改善供应渠道，降低制药成本。
此外，还可以用于食品安全的检测，例如对维生素和污染物的检测，也可以应用于工业水中的污染物，如重金属、有机氯农药等检测。