植物组培室设备及培养条件全攻略
植物组培实验室设置条件及器具.39页PPT

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11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人,越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智,自知者明。胜人者有力,自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
植物组培实验室设置条件及器具.
21、没有人陪你走一辈子,所以你要 适应孤 独,没 有人会 帮你一 辈子, 所以你 要奋斗 一生。 22、当眼泪流尽的时候,留下的应该 是坚强 。 23、要改变命运,首先改变自己。
24、勇气很有理由被当作人类德性之 首,因 为这种 德性保 证了所 有其余 的德性 。--温 斯顿. 丘吉尔 。 25、梯子的梯阶从来不是用来搁脚的 ,它只 是让人 们的脚 放上一 段时间 ,以便 让别一 只脚能 够再往 上登。
10植物组织培养实验室

(四)玻璃器皿的清洗
新购置的玻璃器皿:带有游离的碱性物质,先用1%的稀盐酸 浸泡1夜,再用肥皂水洗净,清水冲洗,蒸馏水冲淋,烘干。 已用过的培养器皿:去掉培养基,洗涤剂溶液浸泡,刷子刷 洗,自来水冲洗,蒸馏水冲洗。 较脏的玻璃器皿:洗衣粉或洗洁精刷洗,冲净,浸入洗涤液 中,按 上面方法洗涤,浸泡时间根据脏的程度定。 被污染的玻璃器皿:121高压蒸汽灭菌后,用洗涤剂刷掉污染 物,冲洗,重铬酸钾洗涤液浸泡,2h后取出,自来水冲洗,蒸馏 水冲淋。 用过的吸管或滴管:在洗涤液中浸泡2h以上,取出冲洗干净。
2、无菌操作室
功能:也叫接种室,进行材料的离体无菌操作, 是植物离体培养研究或生产中最关键的一步。 要求:房间一般不宜过大,10-20平方米即可。 要求封闭性好,干燥清洁,能较长时间保持无菌, 因此不宜设在容易受潮的地方;为便于消毒处理, 地面及内墙壁都应采用防水和耐腐蚀材料;地面要 求平坦无缝,便于清洁;为了保持清洁,无菌室应 防止空气对流。
2、生化分析实验室 培养细胞产物为主要目的实验室,应建立相应 的分析化验实验室,随时对培养物成分进行取样 检查。大型次生代谢物生产,还需有效分离实验 室。
第二节 仪器设备和器皿用具
一、基本设备配置
(一)常规设备
1、天平
植物组织培养实验室需要不同精度的天平。
感量0.001g的天平(分析天平)和感量0.0001g 的天平(电子天平)用于称量微量元素和一些较高 精确度的实验用品。 感量0.01g和0.1g的天平,用于大量元素母液配制 和一些用量较大的药品的称量。
3、解剖刀 进行组织切段,多用短柄可换刀片的医用不锈 钢解剖刀。
4、其他用具
接种铲、接种针在花药培养、花粉培养中有用
。
无菌操作器械
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训

植物组织培养的基本设备和无菌操作培训植物组织培养是一种重要的生物技术,它可以用来繁殖纯种植物、快速繁殖难以繁育的植物、生产无性系等。
在进行植物组织培养实验时,需要一些基本的设备和无菌操作培训,以确保实验的准确性和成功率。
首先,进行植物组织培养实验需要准备一个无菌工作台。
无菌工作台是用于提供无菌工作环境的设备,它可以有效地防止外界微生物的污染。
在工作台上进行操作时,可以通过UV灯消毒空气和工作台表面,以确保实验材料的无菌状态。
其次,植物组织培养实验需要使用无菌培养箱。
无菌培养箱是专门用来培养植物组织的设备,它可以提供恒温、恒湿和无菌的环境,保证植物组织的生长和繁殖。
在培养箱中进行实验时,需要定期清洁、消毒和更换无菌培养基,以保证培养环境的无菌性。
此外,进行植物组织培养实验还需要使用一些基本的无菌操作器具,如无菌吸管、无菌移液器、无菌培养瓶等。
这些器具可以帮助实验人员在无菌条件下进行操作,避免外界微生物的污染。
对于实验人员来说,他们需要接受一定的无菌操作培训,以掌握正确的无菌操作技能。
在无菌操作过程中,实验人员需要穿戴无菌手套、口罩和无菌服装,严格按照无菌操作规程和流程进行操作,避免外界微生物的污染。
总的来说,植物组织培养的基本设备和无菌操作培训是非常重要的,它们可以帮助实验人员在无菌条件下进行植物组织培养实验,保证实验的准确性和成功率。
只有做好无菌操作,才能获得高质量的植物组织培养材料,为后续的应用研究和生产提供可靠的支持。
植物组织培养是一项重要的生物技术,在农业、园艺和植物育种等领域具有广泛的应用。
通过植物组织培养,可以获得大量无病害的植物材料,实现植物繁殖、植物株型改良、基因转化等目的。
然而,植物组织培养实验过程中,需要一定的无菌操作技能和必要的设备,才能保证培养物的无菌状态,从而确保实验的准确性和成功率。
在进行植物组织培养实验时,无菌工作台是必不可少的设备之一。
无菌工作台能够提供无菌环境,有效地阻止外界微生物的污染。
植物组织培养的设备与使用方法

植物组织培养的设备与使用方法植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。
要达到无菌操作和无菌培养,就需要认为创造无菌的环境,使用无菌的器具,同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。
无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备,实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。
但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。
图1 组培室分区布局1.实验室基本组成a)无菌操作室在植物组织培养中,无菌操作室(clean chamber)是进行植物材料的分离及培养体转移的一个重要场所。
由于植物组织培养需长时间的无菌操作,所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。
微生物的培养生长时间短,而植物组织培养短的一个月,长的达几年。
所以,防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。
无菌操作室基本要求是:干净无菌、密闭、光线好。
一般安装滑动门,使空气不致流动,以防外界菌及尘埃的侵入;墙壁光滑平整,地面平坦无逢,便于清洁工作;室内安装紫外灯,以便灭菌,还要有照明装置及灯座,以备临时增加设备之用;室内有超净工作台、移动式载物台(医用平板推车)、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。
面积根据工作性质可大可小,小的无菌操作室一般一间5~7㎡即可。
接种室内主要安放超净工作台,分单人使用和双人同时连续作业使用两种。
超净台中准备接种用的器具,如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等,以及酒精灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶等。
如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种,还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜,以便观察、解剖和分离细小的外植体。
小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等,也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。
无菌室外最好设置预备室作为缓冲间,以防工作人员进出时带进杂菌。
控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。
预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔,便于观察和参观。
【组培设备】组培室仪器设备配置

组培室仪器设备配置在植物组织培养过程中,根据所培养的植物种类、生产规模,选择合适的器材、设施是十分必要的,只有这样才能确保整个操作过程的顺利进行。
在器材、设施的选择上,不要贪大求洋,应该在其是否实用上多下功夫。
在研究型的组织培养操作中,往往对器材、设施的要求较高;而在生产型的组织培养中,则对器材、设施的要求却较为粗放,因此管理者必须根据实际情况来进行培养器材、设施的遴选。
亚龙组培-中国植物组织培养系统建设第一品牌在植物组织培养的过程中,从外植体的采收到试管苗的定植都必须要在特定的环境中进行,例如,培养基的配制要在专用的器材、设施中进行;外植体的接种要在专用的器材、设施中进行。
应该根据植物组织培养不同阶段的需要,选择不同的器材、设施。
只有从降低投入、提高工效、节约劳力等诸方面加以考虑,才能降低培养成本、提高培养效率。
在植物组织培养过程中,所使用的器材种类较多,但它们通常可以分为通用器具、盛具、计量器械、灭菌器械、接种器械、培养器械等几种类型。
在使用这些容器、设备时,必须要了解它们的基本用途,并学会它们的基本用法。
例如,不能给容量瓶加热;必须用磨砂玻璃灯罩来熄灭正在燃烧的酒精灯;应该定期更换超净工作室的无菌滤膜等等。
详细操作可参考具体设备、容器的使用说明。
组培设备(1)通用器械①烧杯:用来盛放、溶解化学药剂等。
常用的规格有50ml、100ml、250ml、500ml、1000ml。
②烘箱:用来烘干器械。
③恒温水浴:用来溶解琼脂等物质。
④玻璃搅拌棒:用来配制培养基。
⑤洗耳球:用来辅助吸取、转移少量液体。
⑥冰箱:用来贮存化学药剂、植物材料等。
⑦牛角勺:用来转移化学药剂。
⑧玻璃漏斗:用来过滤溶液。
⑨剪刀:用来修剪外植体或剪切嫩茎。
⑩器械架:在无菌操作期间用来放置灭菌的器械。
(2)各种盛具①搪瓷浅盘:用来承载各种器械容器。
②塑料盆:用于清洗培养容器。
③铁丝筐:用来盛放灭菌容器等物品。
④纯水水桶:用来存放去离子水或蒸馏水。
植物组织培养设备

植物组织培养所需基本设备一、灭菌设备1.高压蒸汽灭菌器,主要用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。
按结构可分为大型卧式、中型立式、小型手握式等不同类型;按控制灭菌压力、温度和时间的方式可分为手动控制、半自动和全自动,其中由微电脑控制的全自动高压蒸汽灭菌器的使用越来越普遍。
2.烘箱,一般用于玻璃器皿和接种器械的灭菌消毒,也可用于干燥玻璃器皿3.紫外灯,用于空气和环境的表面灭菌4.微孔滤膜过滤器,主要用于在高温灭菌条件下容易分解并丧失活性的生长调节剂和有机附加物等的除菌5.酒精灯和电热灭菌器,主要用于接种器械的灭菌,常用的电热灭菌器有玻璃珠灭菌器和红外线灭菌器二、接种设备1.超净工作台2.接种工具,包括解剖显微镜、镊子(小型尖头,枪型)、剪刀(大、小解剖剪,弯头剪)、解剖刀、接种真和接种环、酒精灯和灭菌器3.封口材料,包括棉塞、纱布或牛皮纸、皮筋或线绳、透明聚丙烯塑料膜、封口膜、耐高温的塑料纸、塑料盖三、培养设备1.培养器皿,包括试管、三角瓶、培养皿、果酱瓶等2.培养设备,包括固定式培养架、旋转式培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱3.环境调控设备,包括节能日光灯、定时器、空调、加湿器和去湿机四、检测设备1.组织切片设备切片机,磨刀机,烤片机,染缸2.显微观察设备(1)双目体式显微镜,用于剥离茎尖以及在瓶外观察培养物生长分化情况(2)倒置显微镜,可从培养器皿的底部观察培养物,也可用于液体培养材料的观察(3)相差显微镜,可以观察到细胞中透明物的微结构及凹凸面(4)干涉显微镜,可以测定各种细胞结构的光程差,据此测定细胞和组织的干重(5)电子显微镜,可进行更精细结构的观察(6)血球计数板,用于测定单位体积培养液中的细胞数目五、驯化设备1.驯化容器,一般使用营养钵和穴盘2.移植床,用于摆放驯化容器3.移栽基质,一般可选用珍珠岩、蛭石、砂子等4.迷雾装置,用于驯化初期对培养苗的喷雾补水,规模较小可用喷壶5.遮阳网。
植物组织培养实验室的基本要求
植物组织培养实验室的基本要求
植物组织培养实验室基本要求如下:
1. 实验室环境:实验室应具备充足的自然光照或者人工照明,并保持适宜的温度和湿度。
实验室内应保持清洁,并采取合适的措施防止尘埃和微生物的污染。
2. 设备需求:实验室应配置必要的设备,包括培养箱、植物生长灯、显微镜、培养皿和多功能离心机等。
这些设备要保持良好的工作状态,并定期进行维护和检修。
3. 培养基和试剂:实验室应准备不同种类的培养基和试剂,以满足不同植物组织培养的需求。
这些培养基和试剂应具备高质量,且需要储存在符合要求的条件下,以保证其稳定性和有效性。
4. 安全措施:实验室应制定相应的安全管理制度,并配备必要的安全设施,如安全柜和消防设备等。
实验人员应经过培训,了解正确的实验操作方法和急救知识,以提高实验室操作的安全性和可靠性。
5. 实验操作规范:实验室应建立完善的操作流程和实验记录制度,保证实验操作的标准化和规范化。
实验人员应严格按照实验操作规程进行操作,并详细记录实验数据和结果。
6. 废物处理:实验室应配备合适的废物处理设施,对实验产生的废弃物进行正确处理,避免对环境和人体造成污染和危害。
7. 人员素质要求:实验室人员应具备相关专业知识和技能,且具备较高的实验技术水平。
人员应具备良好的团队合作精神和沟通能力,并遵守实验室的规章制度和安全规范。
最后,实验室应定期进行质量管理和风险评估,不断改进实验室的管理体系和技术水平,以确保实验室的正常运行和科学研究的顺利进行。
植物组培的条件.
植物组织培养实验教学中所需要的实验条件植物组织培养的大致过程是:在无菌条件下,将植物器官或组织(如芽、茎尖、根尖或花药)的一部分切下来,放在适当的人工培养基上进行培养,这些器官或组织就会进行细胞分裂,形成新的组织。
不过这种组织没有发生分化,只是一团薄壁细胞,叫做愈伤组织。
再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下,愈伤组织便开始分化,产生出植物的各种器官和组织,进而发育成一棵完整的植株。
一、培养条件1、温度:大多数植物23-32℃,一般25±2 ℃。
低于15 ℃或高于35 ℃对植物的生长不利,其中26~27℃最适合。
2、光:包括光照强度、时间长短、光照质量等。
组织培养通常在散射光线下进行。
光的影响可导致不同的结果。
有些植物组织在暗处生长较好,而另一些植物组织在光亮处生长较好,但由愈伤组织分化成器官时,则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。
有些次生物质的形成,光是决定三因素。
3、渗透压:渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。
在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。
通常1~2个大气压可促进植物组织生长,2个大气压以上时,出现生长障碍,6个大气压时植物组织即无法生存。
4、酸碱度:一般植物组织生长的最适宜pH为5~6.5。
在培养过程中pH 可发生变化,加进磷酸氢盐或二氢盐,可起稳定作用。
5、湿度条件培养容器中湿度100%培养室的湿度一般70 % -80 %的相对湿度。
6、通气:悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。
小量悬浮培养时巨常转动或振荡,可起通气和搅拌作用。
大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。
二、实验设备(一)可以分为几个室1、洗涤室(区)玻璃器皿和塑料器皿2、药品室存放常用的化学试剂、无机盐类、有机物、生长调节剂等3、制备室培养基的配制等4、灭菌室即消毒室,是培养基、玻璃器皿、塑料器皿和其他物品消毒灭菌的地方5、操作室也称接种室,是开展组织培养研究包括接种、继代、细胞融合等的场所。
植物组培实验室配置清单
植物组培实验室建设 目 录 1、功能简述 ................................................................................................................................... 1
1) 准备室 .............................................................................................................................. 1 2) 灭菌室 .............................................................................................................................. 1 3) 缓冲间 .............................................................................................................................. 1 4) 无菌操作室 ...................................................................................................................... 1 5) 培养室 .............................................................................................................................. 2 2、设备及耗材清单 ....................................................................................................................... 2 1) 试验设备清单 .................................................................................................................. 2 2) 常备试剂清单 .................................................................................................................. 6 ① MS培养基必备试剂 ............................................................................................ 6 ② 常备激素及辅助试剂 .......................................................................................... 6 植物组培实验室建设 1、功能简述 植物组织培养实验室一般应包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,这也是组织培养实验所必须具备的基本条件。要培养成大田苗还要有相应的驯化室、温室。
植物组织培养实验室简介基础设备解决方案、常用设备使用清单汇总
植物组织培养实验室简介基础设备解决方案、常用设备使用清
单汇总
描述
植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论,近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。
植物的组织培养广义又叫离体培养,指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞,原生质体等,通过无菌操作,在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
•方案1 : 植物组织培养实验室布局规划及设备清单
•
•设备清单汇总:。
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植物组培室设备及培养条件全攻略组培室建设首要考虑的问题就是组培室需要哪些设备条件和需要什么样的培养条件。
对这些有了全面了解以后,我们便可以因地制宜地新建或利用现有房屋建设实验室。
在设计组培室时,一般情况应按组培的流程来设计,同时考虑人物分流顺畅,空间合理利用。
植物组织培养要求严格的无菌的条件,需要一定专业仪器设备、器材和用具,同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
第一、实验室一个标准的组织培养实验室应当包括洗涤室、•配置室、接种室、培养室、观察室(冷却室)、灭菌室、洗苗室等。
在实际中可结合可行条件,合并一部分。
(一)洗涤室洗涤室完成玻璃器皿和其它仪器的清洗、干燥和贮存。
室内应配备大型水槽,用于培养器皿的洗涤,最好是内衬白瓷砖的水泥槽。
为防止碰坏玻璃器皿,可铺橡胶板,上下水道要畅通。
备有大型塑料筐,用于放置培养器皿。
可直接置于搁架上,以节约空间和便于运输工作。
备有空干架,以空干涮净的培养器皿。
(二)配置室、灭菌室(可分开)准备室要求明亮、通风。
在准备室内要完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。
如果房间较多,可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。
洗涤室专门负责试管苗出瓶与培养器皿的清洗工作;配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。
为完成培养基的制备工作,准备室还应配备以下仪器设备:1.工作台。
其高度应方便配制工作。
2.药品柜。
用以放置常用药品。
3.普通冰箱。
主要用于贮存母液、各种易变质、易分解的化学药品以及植物材料等。
4.电子分析天平和托盘天平。
电子分析天平精确度为0.001g,用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等微量药品;托盘天平精确度为0.1g,用于称取用量较大的糖和琼脂等。
天平应放置在干燥、不受振动的固定操作台上。
5.纯水仪或电蒸馏水器。
纯水仪提供纯水,水质好。
电蒸馏水器,采用硬质玻璃或金属制成。
蒸馏水用于配制母液或培养基,配培养基可用自来水来代替,若实验要求严格的话,则须用蒸馏水。
6.磁力搅拌器磁力搅拌器用于加速搅拌难溶的物质,如各种化学物质、琼脂粉等。
磁力搅拌器还可加热,使之更利于溶解。
7.恒温水浴锅或恒温振荡水浴。
水浴锅用于难溶药品的溶解、琼脂的溶化等。
若没有水浴锅,也可用1500或2000W电炉或电饭锅代替。
电炉应配有铝锅。
8.酸度计组织培养中培养基pH值的准确度是十分重要的,应当使用酸度计,若无酸度计,也可使用pH试纸进行粗测。
首次使用酸度计前,应用标准液调节定位,然后固定。
测量pH时,待测液必须充分搅拌均匀。
如果培养基温度过高,测量时要调整pH计上的温度扭使之和培养基温度相当。
注意保护好玻璃电极,用后电极应用蒸馏水冲洗净,盖上电极帽。
9.培养基分装设备。
小型组织培养实验室可采用烧杯、漏斗等作为分装培养基的工具。
也可采用医用“下口杯”作为分装工具,在“下口杯”的下口管上套一段软胶管,加一弹簧止水夹,使用时非常合用。
更大规模或要求更高效率时,可考虑采用液体自动定量灌注设备。
10.高压灭菌锅。
用以进行培养基和器械用具的灭菌。
小规模实验室可选用小型手提式高压灭菌锅。
如果是连续的大规模生产,应选用大型立式的或卧式的高压灭菌锅。
通常以电作能源。
11.烘箱。
用于干燥洗净的玻璃器皿,也可用于干热灭菌和测定干物重。
用于干燥需保持80~100℃;进行干热灭菌需保持150℃,达1~3小时;若测定干物重,则温度应控制在80℃烘干。
12.恒温培养箱。
内有温度调节器,生化培养箱还配有光源,用于植物材料的培养。
(三)接种室接种室是是进行植物材料的分离接种及培养物转移的一个重要操作室。
其无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。
在工作方便的前提下,无菌操作室宜小不宜大,一般7~8m2;要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光洁,易于清洁和消毒。
无菌操作室应配置拉动门,以减少开关门时的空气扰动。
无菌操作室要求干爽安静,清洁明亮,在适当位置吊装1~2盏紫外线灭菌灯,用以经常地照射灭菌。
最好能安置一小型空调,使室温可控,这样可让门窗紧闭,减少与外界空气对流。
无菌操作室应设有缓冲间,面积2 m2为宜。
进入无菌操作室前在此更衣换鞋,以减少进出时带入杂菌。
缓冲间最好也安一盏紫外灭菌灯,用以照射灭菌。
无菌操作室的主要设备及用具有:1.接种箱在投资少的情况下,可以用接种箱来代替超净台。
接种箱依靠密闭、药剂熏蒸和紫外灯照射来保证内部空间无菌。
但操作活动受限制,准备时间长,工作效率低。
2.超净工作台超净台的优点是操作方便自如,比较舒适,工作效率高,准备时间短。
开机10分钟即可操作,可进行长时间使用。
并可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。
3.无菌操作用的器具。
按单人超净台上的用量计:酒精灯1个;20~25cm长的医用镊子1把;4号解剖刀1把,解剖刀片若干;15cm医用剪1把;500ml广口瓶1只,内放酒精,现代专业组培室多用接种器械灭菌器和容器口灭菌器,用于浸泡镊子、刀、剪等;用于架放灼烧过的刀、镊子的小架。
4.搁架。
贮放高压灭菌后等待接种的培养基。
(四)培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。
培养室的大小可根据需要的培养架的大小、数目、及其它附属设备而定。
其设计以充分利用空间和节省能源为原则。
高度比培养架略高为宜,周围墙壁要求有绝热防火的性能。
培养材料放在培养架上培养。
•培养架大多由金属制成,一般设5层,•最低一层离地高约100厘米,其它每层间隔30厘米左右,培养架即高1.7米左右。
•培养架长度,因一般在每层上端装置日光灯,以供照明,所以都是根据日光灯的长度而设计,如采用40W日光灯,则长1.3m,30 W的长1米即可。
宽度一般为60cm。
培养室最重要的因子是温度,一般保持在20~27℃左右,可安装窗式或立式空调机。
要求温度因热带植物和寒带植物等的种类不同而异,最好不同种类有不同的培养室。
室内湿度也要求恒定,相对湿度以保持在70~80%为好,可安装加湿器。
培养架上装置日光灯时,可安装定时开关钟控制照明时间,植物组织培养的光照强度一般在1000~4000勒克斯(lux),每天照明10~16小时,也有的需要连续照明。
短日照植物需要短日照条件,长日照植物需要长日照条件。
现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为能源,这样不但可以节省能源,而且组培苗接受太阳光生长良好,驯化易成活。
在阴雨天用灯光作补充。
补光光源目前专业的组培室用全光谱冷光灯或led组培专用灯。
第二、设备和器材(一)玻璃器皿在组织培养中配制培养基和进行培养需大量的玻璃器皿。
要求由碱性溶解度小的硬质玻璃制成,以保证长期贮存药品及培养的效果;培养用的还要求透光度好,能耐高压高温,能方便放入培养基和培养材料的器皿,根据培养的目的和要求,可以采用不同种类、规格的玻璃器皿.其中以试管、三角瓶、培养皿等使用较多。
最常使用的是三角瓶,规格有100、250、500毫升等,一般使用100毫升三角瓶,无论静止或振荡培养皆适用。
其培养面积大,利于组织生长,受光也比试管好。
由于瓶口较小,亦不易污染。
培养皿常用9、12厘米直径等规格,要求上、下能密切吻合。
这在游离细胞、原生质体、花粉等的静置培养、看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等都需采用。
试管常用口径18×180 mm或20×200mm规格。
可用于培养较高的试管苗,另外也不易污染。
培养器皿还可就地取材,采用一些代用品。
工厂化生产可采用广口的200ml罐头瓶,加盖半透明的塑料盖,由于瓶口大,所以大量繁殖时操作方便、工作效率高,也减少了培养材料的损伤。
但缺点是易引起污染。
目前,培养容器和制备培养基所需的玻璃器皿渐被塑料器皿所代替。
塑料容器具有质轻、透明、不易破碎、成本低等优点,如培养容器多为平底方盒形,可增加培养的植株数,并能一层层地叠摞起来,从而节约空间。
这类塑料制品多是采用聚丙烯材料制成,能耐高温,可进行高压灭菌。
有些产品为一次性消耗品,不但可节省洗涤人工,还可节省时间,提高效率。
一次性塑料容器或带螺丝帽的玻璃瓶,无须另外配盖,使用时是非常方便的。
瓶口封塞可用多种方法,要具有一定的通气性和密闭性,以防止培养基干燥和杂菌污染。
以前封口常用棉塞。
不过这种封口办法夏季极易污染,且不易保持培养基湿度。
现在多采用聚丙烯塑料膜作为封口,以线绳结扎或橡皮圈箍扎。
为了增加通气性,可在里面衬一层硫酸纸或牛皮纸。
这样经济方便,且通气好。
也可采用专用的封口材料如封口膜。
在组织培养中配制培养基,贮藏母液,材料的消毒等需要各种化学实验用的玻璃器皿,包括100、250、1000毫升烧杯;100、1000毫升量筒;100、1000毫升试剂瓶(棕色)等等。
(二)器械用具1.镊子类主要采用医疗上用的镊子。
根据操作的需要有各种类型,若用100毫升的三角瓶作为培养瓶,可用20厘米长的镊子。
镊子过短.容易使手接触瓶口,造成污染。
镊子太长,使用起来不灵活。
某些微小部分的精细操作则用钟表镊子,如在分离茎尖幼叶时,由于其尖端锋利,所以几乎可代替剪刀使用。
2.剪刀类可采用五官科用的中型剪刀。
主要用于切断茎段、叶片等。
也可以用弯形剪刀,由于其头部弯曲,可以深入到瓶口中进行剪切。
3.解剖刀切割较小材料时可用解剖刀。
分离茎尖分生组织,有时也用解剖刀。
常用的解剖刀刀片可以经常调换,刀口要保持锋利状态,否则切割时会造成挤压,引起周围细胞组织大量死亡,影响培养效果。
4.解剖针解剖针用于深入到培养瓶中,转移细胞或愈伤组织。
也可用于分离微茎尖的幼叶。
第三、培养条件在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件,培养基组成、PH值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组培苗的生长和发育。
(一)温度温度是组织培养过程中的重要因素。
组织培养在最适温度下生长分化表现良好,大多数组织培养都是在23~27℃之间进行,很多研究者采用了25±2℃的恒温条件。
低于15℃时培养,组织会表现生长停止,高于35℃时对生长不利。
但是,不同植物培养的适温不同。
百合的最适温度是20℃、月季是25~27℃、番茄是28℃。
温度不仅影响组培苗的生长速度,也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。
如烟草芽的形成以28℃为最好,在12℃以下,33℃以上形成率皆最低。
不同培养目标采用的培养温度也不同,百合鳞片在30℃下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率都比在25℃下的高。
桃胚在2~5℃条件进行一定时间的低温处理,有利于提高胚培养成活率。
用35℃处理草莓的茎尖分生组织3~5天,可得到无病毒苗。
(二)光照组织培养中光照也是重要的条件之一,主要表现在光强、光质、以及光照时间方面:1.光照强度。
光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响,从目前的研究情况看,光照强度对外植体、细胞的最初分裂有明显的影响。
一般来说,光照强度较强,幼苗生长的粗壮,而光照强度较弱幼苗容易徒长。