植物组织培养设备及其使用.pptx
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植物组织培养常规技术幻灯片PPT
（3）确定最佳的取材时期 。 （4）内部已污染的材料弃之不用 。 2. 材料表面灭菌 （1）对灭菌剂的要求 （2）常用灭菌剂种类 （3）灭菌方法
常用外表灭菌剂的使用及其效果
种类
酒精 升汞 漂白粉 次氯酸钠 次氯酸钙
使用浓度 （%）
70-75 0.1-0.2 饱和上清液 2-10 9-10
灭菌时间 （分）
使用超净工作台应注意的问题
超净工作台不应安装在尘埃太多的地方。
在使用前应预热30-40分钟。
操作前应先将实验材料和操作器械、药品等物品事 先放入台内，不要中途拿进。
台面上放置的东西不宜太多，特别是注意不要把东 西迎面堆的太高，以免挡住气流。
定期检查，更换过滤器。
〔六〕接种器械的灭菌
❖灭菌方法 灼烧灭菌法：
离心机
〔五〕驯化移植室
❖ 用途：主要用于试管苗的驯化和移栽；也可用于 母株的预栽培。
❖ 设施：室内应备有弥雾装置、荫棚、移植床〔苗 床〕、恒温恒湿控制仪、光照调节装置等设施以 及培养土、培养盆〔钵〕、育苗盘等器材。
❖ 驯化移植室1、2
二、常用仪器设备与器械
〔一〕常用仪器设备： 超净工作台 ；高压蒸汽灭菌锅 ；冰箱 ；烘箱 ； 天平 ；蒸馏水器 ；酸度计 ；摇床与转床 ；光照 培养箱
20~50
15
75~150
20
250~500
25
1000
30
1500
35
2000
40
121℃ 122℃ 120℃
排汽一 定舒缓， 以免造成 培养基沸 腾，沾染 瓶塞引起 污染。
负压过滤器
〔三〕植物材料消毒
1．减少材料带菌的防范措施 （1）取材前对母株的预处理 ：减少带菌机会，改善生理
常用外表灭菌剂的使用及其效果
种类
酒精 升汞 漂白粉 次氯酸钠 次氯酸钙
使用浓度 （%）
70-75 0.1-0.2 饱和上清液 2-10 9-10
灭菌时间 （分）
使用超净工作台应注意的问题
超净工作台不应安装在尘埃太多的地方。
在使用前应预热30-40分钟。
操作前应先将实验材料和操作器械、药品等物品事 先放入台内，不要中途拿进。
台面上放置的东西不宜太多，特别是注意不要把东 西迎面堆的太高，以免挡住气流。
定期检查，更换过滤器。
〔六〕接种器械的灭菌
❖灭菌方法 灼烧灭菌法：
离心机
〔五〕驯化移植室
❖ 用途：主要用于试管苗的驯化和移栽；也可用于 母株的预栽培。
❖ 设施：室内应备有弥雾装置、荫棚、移植床〔苗 床〕、恒温恒湿控制仪、光照调节装置等设施以 及培养土、培养盆〔钵〕、育苗盘等器材。
❖ 驯化移植室1、2
二、常用仪器设备与器械
〔一〕常用仪器设备： 超净工作台 ；高压蒸汽灭菌锅 ；冰箱 ；烘箱 ； 天平 ；蒸馏水器 ；酸度计 ；摇床与转床 ；光照 培养箱
20~50
15
75~150
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250~500
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121℃ 122℃ 120℃
排汽一 定舒缓， 以免造成 培养基沸 腾，沾染 瓶塞引起 污染。
负压过滤器
〔三〕植物材料消毒
1．减少材料带菌的防范措施 （1）取材前对母株的预处理 ：减少带菌机会，改善生理
第二章-植物组织培养设备及其使用只是课件
②恒温箱：又称培养箱，可用于原生质体和酶 制剂的保温，也可用于组织培养材料的保存及 暗培养。
③摇床与转床：在液体培养基中，可改善培养基中 的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤组织中获 得单个细胞。但注意要设定适合的温度及转速。
4.驯化设备
①温室 ②防虫网室
5、其它辅助设备
①培养基灌装机及洗瓶机
第二章-植物组织培养设备及其 使用
2.接种设备：无菌超净工作台 用于培养材料的消毒及接种。
使用前，将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启，灭 菌15min后，关闭杀菌按钮，打开照明按钮，即可在上 面进行操作。
电炉
推车
酒精灯
封口膜
接种器具
灭菌器
பைடு நூலகம்
培养瓶
3.培养设备
①带日光灯的培养架，主要用于接种后材料的培养。
②空调机：用于接 种室和培养室温度 的控制。
③ 除湿机：使培
养室的湿度保持 在定的范围内。
⑤冰箱：用于在常温下易变 性或失效的试剂和母液的储 藏，细胞组织和试验材料的 冷冻保藏，以及某些材料的 预处理。
④烘箱：用于干燥洗净后的玻 璃器皿，还可用80℃的温度烘 干组织培养植物材料以测定干 物质。
⑥纯水机与蒸馏水 发生器：
是实验室必备的仪 器。
⑦天平和显微镜：天平包括分析 天平，电子天平，药物天平等， 用于制备母液时培养基组成成分 的称取。如一些需要量少的激素 和微生素类物质，天平的精确度 要到0.0001g，这就要求精确度 更高的分析天平。
显微镜包括解剖镜，生物显微镜，倒置显微镜等。 如茎尖的分离则需要解借助解剖镜。
⑧酸度计：用于校正培养基和酶制剂的PH。
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植物组织培养培养基及操作技术ppt课件
培养基及其配制
（3）赤霉素
GA3（赤霉酸）： 作用：促进幼芽伸长生长，促进不定胚发育成小
植株。
赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有 影响：当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部 分化，比值低时有利于韧皮部分化。
“雪亮工程"是以区（县）、乡（镇） 、村（ 社区） 三级综 治中心 为指挥 平台、 以综治 信息化 为支撑 、以网 格化管 理为基 础、以 公共安 全视频 监控联 网应用 为重点 的“群 众性治 安防控 工程” 。
培养基及其配制
5、有机附加物 （天然复合物）
浓度： 10%—20% 150-200ml／L 150—200g／L 0.01%-0.05%
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培养基及其配制
不同植物对培养基最适pH值的要求不同(见表)
种类 杜鹃 越桔
蚕豆 番茄
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第一节 培养基的成分和种 类
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植物组织培养培养基及操作技术 ppt课件
1、多数植物要求pH5.6-5.8 2、用0.1-1N的NaOH和0.1-1N的HCI调节. 3、注意： 经高压灭菌后，培养基pH会下降0.2-0.8,故
调整pH值时,应高于0.5；
pH的大小会影响琼脂的凝固能力，当pH>6.0 时，培养基将会变硬，pH <5.0时，琼脂凝固 不好。
ppt课件
21
ppt课件
23
培养基及其配制
（一）培养基的种类
1、根据态相不同：固体培养基、液体培养基
2、根据培养物培养过程：初代培养基、继代培养基
3、根据作用不同：诱导培养基、增殖培养基、 生根培养基
4、根据营养水平：基本培养基、完全培养基、 改良培养基。
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24
培养基及其配制
初代培养基： 指用来第一次接种外植体的培养基。
5
培养基及其配制
3、肌醇
• 又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。 • 使用浓度：一般为lOOmg／L， • 作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状
体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用， 对细胞壁的形成也有作用。
ppt课件
6
培养基及其配制
4、氨基酸 (amino acid）
特点：是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸 硫胺素。
(5)KM—8P培养基:它是1974年为原生质体 培养而设计的。
特点：是有机成分较复杂，它包括了所有的 单糖和维生素。
ppt课件
29
2、White培养基 ◆1943年由White为培养番茄根尖而设计 ◆ 1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素 ◆无机盐浓度较低 ◆使用广泛 ◆在生根培养、胚胎培养中有良好的效果
0.02 6.2 0.25
调整pH值时,应高于0.5；
pH的大小会影响琼脂的凝固能力，当pH>6.0 时，培养基将会变硬，pH <5.0时，琼脂凝固 不好。
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培养基及其配制
（一）培养基的种类
1、根据态相不同：固体培养基、液体培养基
2、根据培养物培养过程：初代培养基、继代培养基
3、根据作用不同：诱导培养基、增殖培养基、 生根培养基
4、根据营养水平：基本培养基、完全培养基、 改良培养基。
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培养基及其配制
初代培养基： 指用来第一次接种外植体的培养基。
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培养基及其配制
3、肌醇
• 又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。 • 使用浓度：一般为lOOmg／L， • 作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状
体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用， 对细胞壁的形成也有作用。
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培养基及其配制
4、氨基酸 (amino acid）
特点：是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸 硫胺素。
(5)KM—8P培养基:它是1974年为原生质体 培养而设计的。
特点：是有机成分较复杂，它包括了所有的 单糖和维生素。
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2、White培养基 ◆1943年由White为培养番茄根尖而设计 ◆ 1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素 ◆无机盐浓度较低 ◆使用广泛 ◆在生根培养、胚胎培养中有良好的效果
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组织培养实验室仪器及操作技术ppt课件
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二、仪器与设备
1、基本设备 冰箱、电炉、酸度计、纯水器、
天平、培养基分装器、搅拌器等。
精选ppt课件2021
11
冰箱 电炉
酸度计
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12
纯 天水 平器
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13
搅拌器
培养基分装器
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14
2、灭菌设备
蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、 过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
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5、用沾有70%—75%酒精的纱布擦拭盛培养基 的培养器皿，放进工作台。
6、把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的 酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。
7、在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。
8、打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口 各部分都烧到。
精选ppt课件2021
200
800
精选ppt课件2021
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五、灭菌技术
1、灭菌方法
物理方法： 物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理
除菌、过滤、离心、沉淀等
化学方法： 消毒剂、抗菌素灭菌
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2、灭菌
（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在9.8×104—10.8×104Pa 温度在121℃ 灭菌20—30min
溴水
1~2
过氧化氢 10~12
升汞
0.1~1
酒精
70~75
抗生素 4~5（mg/L
硝酸银
1
易 易 易 易 最易 较难 易 中 较难
5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 0.2~2 30~60 5~30
植物组织培养的设备与使用方法
植物组织培养的设备与使用方法植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。
要达到无菌操作和无菌培养，就需要认为创造无菌的环境，使用无菌的器具，同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。
无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备，实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。
但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。
图1 组培室分区布局1.实验室基本组成a)无菌操作室在植物组织培养中，无菌操作室（clean chamber）是进行植物材料的分离及培养体转移的一个重要场所。
由于植物组织培养需长时间的无菌操作，所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。
微生物的培养生长时间短，而植物组织培养短的一个月，长的达几年。
所以，防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。
无菌操作室基本要求是：干净无菌、密闭、光线好。
一般安装滑动门，使空气不致流动，以防外界菌及尘埃的侵入；墙壁光滑平整，地面平坦无逢，便于清洁工作；室内安装紫外灯，以便灭菌，还要有照明装置及灯座，以备临时增加设备之用；室内有超净工作台、移动式载物台（医用平板推车）、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。
面积根据工作性质可大可小，小的无菌操作室一般一间5~7㎡即可。
接种室内主要安放超净工作台，分单人使用和双人同时连续作业使用两种。
超净台中准备接种用的器具，如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等，以及酒精灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶等。
如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种，还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜，以便观察、解剖和分离细小的外植体。
小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等，也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。
无菌室外最好设置预备室作为缓冲间，以防工作人员进出时带进杂菌。
控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。
预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔，便于观察和参观。
植物组织培养设备及条件专选课件
备用
常用消毒剂消毒灭菌比较表
消毒剂
使用浓度 （%）
去除难易
消毒时间 （min）
效果
次氯酸钙 次氯酸钠 漂白粉
溴水 过氧化氢
升汞 酒精 抗生素 硝酸银
9~10 2
饱和溶液
1~2 10~12 0.1~1 70~75 4~5（mg/L
1
易 易 易 易 最易 较难 易 中 较难
5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 0.2~2 30~60 5~30
饱和蒸汽压力与其对应的温度
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984
0
100
2
103.6
4
106.9
6
109.8
8
112.6
10 115.2
12 117.6
14 119.9
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。 化学室/准备室、接种室、培养室。
接种室：植物材料的消毒、接种、培养物转移、试管苗继代、
原生质体制备及其它需要进行的无菌操作。设备：紫外光源、超 净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（镊子、剪刀、解剖刀、 接种针）。清洁和消毒，减少与外界空气对流，穿实验服及换鞋 以减少带入杂菌。
15
121.0
1.055
16
122.0
1.125
18
124.1
1.266
20
126.0
1.406
22
127.8
1.543
常用消毒剂消毒灭菌比较表
消毒剂
使用浓度 （%）
去除难易
消毒时间 （min）
效果
次氯酸钙 次氯酸钠 漂白粉
溴水 过氧化氢
升汞 酒精 抗生素 硝酸银
9~10 2
饱和溶液
1~2 10~12 0.1~1 70~75 4~5（mg/L
1
易 易 易 易 最易 较难 易 中 较难
5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 0.2~2 30~60 5~30
饱和蒸汽压力与其对应的温度
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984
0
100
2
103.6
4
106.9
6
109.8
8
112.6
10 115.2
12 117.6
14 119.9
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。 化学室/准备室、接种室、培养室。
接种室：植物材料的消毒、接种、培养物转移、试管苗继代、
原生质体制备及其它需要进行的无菌操作。设备：紫外光源、超 净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（镊子、剪刀、解剖刀、 接种针）。清洁和消毒，减少与外界空气对流，穿实验服及换鞋 以减少带入杂菌。
15
121.0
1.055
16
122.0
1.125
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124.1
1.266
20
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1.406
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2、生产计划的制定
制定的要点： 1）对各种植物的增殖率应做出切合实际的估算； 2）要有植物组织培养信不过各的技术储备； 3）熟悉各种组培苗的定植时间和生长环节； 4）要掌握组培苗可能产生的后期效应。 全年生产量=全年出瓶苗数×炼苗成活率
3、工厂化生产的工艺流程
根据植物组织培养的技术路线，拟定工艺 流程：如：茎尖→表面消毒→接种诱导 培养基→茎尖生长→病毒检测鉴定→培 养无根小植株→培养生根→完整小植株 →炼苗20-25天→移栽成活。
1．市场需求的预测 2．市场占有率的预测
生产规模与生产计划
1、试管苗增殖率的估算
增殖率：是指植物快速繁殖中间繁殖体的繁殖率。 估算试管苗的繁殖量，是以苗、芽或未生根嫩茎为 单位，一般以苗或瓶为计算单位。 年生产量（Y）决定于每瓶苗数（m）、每周期增殖 倍数（X）和年增殖周期数（n），其公式为： Y=mXn
• 琼脂（0.5~0.8%）
– 琼脂粉 – 琼脂条
• 植物生长调节剂
• 细胞分裂素类
– KT 6-BA ZT
• 生长素类
– IAA IBA NAA 2,4-D
• 赤霉素类
– GA3
• 天然添加物
– 椰子汁 酵母提取液 土豆汁 麦芽提取物等
•水
– 蒸馏水 纯净水 – 自来水
• pH值（5.6~5.8）
小结：
• 1、商业化经营管理思想 • 2、市场营销经营策略 • 3、市场预测：(1)市场需求预测；(2)市场占有率预
测。 • 4、试管苗增殖率
年生产量（Y）决定于每瓶苗数（m）、每周期增殖倍数 （X）和年增殖周期数（n），其公式为：Y=mXn
显微镜包括解剖镜，生物显微镜，倒置显微镜等。 如茎尖的分离则需要解借助解剖镜。
⑧酸度计：用于校正培养基和酶制剂的PH。
培养基成分
• 基本组成
• 无机元素
– 1 大量元素：N P K C a Mg S – 2 微量元素: Fe B Zn Cu Mo Cl
• 有机成分
– 维生素 肌醇 氨基酸
•糖
– 蔗糖 葡萄糖 果糖
⑤冰箱：用于在常温下易变 性或失效的试剂和母液的储 藏，细胞组织和试验材料的 冷冻保藏，以及某些材料的 预处理。
④烘箱：用于干燥洗净后的玻 璃器皿，还可用80℃的温度烘 干组织培养植物材料以测定干 物质。
⑥纯水机与蒸馏水 发生器：
是实验室必备的仪 器。
⑦天平和显微镜：天平包括分析 天平，电子天平，药物天平等， 用于制备母液时培养基组成成分 的称取。如一些需要量少的激素 和微生素类物质，天平的精的分析天平。
成本核算与效益分析
一、成本核算的方法
二、效益分析
1．成本核算 2．产销对路 3．规模生产，提高利润
降低成本提高效益的措施
1.掌握熟练的技术技能，制定有效的工艺流程，提高生产效率 2.减少设备投资，延长使用寿命 3.降低器皿消耗，使用廉价的代用品 4.节约水电开支 5.降低污染率，提高成品率 6.提高繁殖系数和移栽成活率 7.发展多种经营，开展横向联合 8.商品化生产的经营管理
操作技术
组培苗工厂化生产的 经营与管理
一、经营思想
• 经营思想是从事经营活动、解决经营问题 的指导思想，它是随着生产力发展而发展 的。在经营思想指导下形成经营管理理论， 经营管理理论用于指导生产经营实践，不 断促进生产力发展。
二、市场营销
（一）、经营策略 （二）、市场预测 （三）、产品的营销
2.接种设备：无菌超净工作台 用于培养材料的消毒及接种。
使用前，将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启，灭 菌15min后，关闭杀菌按钮，打开照明按钮，即可在上 面进行操作。
电炉
推车
接种器具
酒精灯
灭菌器
封口膜
培养瓶
3.培养设备
①带日光灯的培养架，主要用于接种后材料的培养。
②恒温箱：又称培养箱，可用于原生质体和酶 制剂的保温，也可用于组织培养材料的保存及 暗培养。
– 1mol/L HCl 或 NaOH
• 其它
– 吸附剂（活性炭） – 抗氧化剂（Vc 柠檬酸等）
培养基种类
• MS培养基 • Miler培养基 • Nitsch培养基 • H培养基 • White培养基 • N6培养基
培养条件
• 温度：25℃左右 • 光照：3000lx~10000lx • 时间：12~16h
注意事项：①对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介 质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严 格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变 质或效力降低，不能随意延长时间；②对于一些布制品，如实 验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装 好，高压灭菌20-30min；③高压灭菌前后的培养基，其pH值下 降0.2-0.3单位。因此，调PH值时，可适当调高0.－0.3个单位。
③摇床与转床：在液体培养基中，可改善培养基中 的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤组织中获 得单个细胞。但注意要设定适合的温度及转速。
4.驯化设备
①温室 ②防虫网室
5、其它辅助设备
①培养基灌装机及洗瓶机
②空调机：用于接 种室和培养室温度 的控制。
③ 除湿机：使培
养室的湿度保持 在定的范围内。
1.灭菌设备：高压蒸气灭菌锅 用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。
工作原理：在密闭的蒸锅内，0．1MPa的压力下， 锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死 各种细菌及其高度耐热的芽孢。
使用方法：首先检查灭菌锅内是否有水，而且水刚好淹住加热 器，然后放入灭菌材料，对称拧紧灭菌锅上的螺丝，关闭放气 阀通电。待压力上升到0．05MPa时，打开放气阀，放出空气， 待压力表指针归零后，再关闭放气阀。三次放气后，关阀再通 电，压力表上升达0．1-0．15Mpa时，维持20min后，断电，待 压力降至零时，打开入入气阀，取出灭菌材料。
第七节 园林植物的组织培养育苗
• 概述
1 繁殖速度快 2 繁殖脱毒苗 3 不受季节限制
组织培养繁殖的基本原理
• 细胞全能性 • 植物体中每个完整细胞核的细胞，都具有
该植物的全部遗传信息和产生新的完整植 株的能力。
• 体细胞（植株的一部分） 完整植株
组培条件
• 组培室的建立
接种室
准备室
培养室
植物组织培养设备