葡萄糖氧化酶法的实验报告

葡萄糖氧化酶法的实验报告

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篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法

葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖

【原理】

葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

【试剂】

1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用

1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。

2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4．酶酚混合试剂酶

试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。

5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。

6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以

12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。

7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。

【操作步骤】

1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。

2．手工操作法取试管3支，按下表操作。

读取标准管及测定管吸光度。

【计算】

【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。

【临床意义】

1．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾

上腺分泌增加时。2．病理性高血糖

(1)糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不

足的糖尿病患者。

(2)内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质

功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。

(3)颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。

(4)脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使

血糖轻度增高。3．生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动。

4．病理性低血糖(特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等)

(1)胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌

过多。

(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。

(3)严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能

低下，肝脏不能有效地调节血糖。

【注意事项】

1．葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡

萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。国外某些商品葡萄糖氧(:葡萄糖氧化酶

法的实验报告)化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一

反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用。

2．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但

不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。

3．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

取草酸钾6g，氟化钠4g。加水溶解至100ml。吸取0.1ml到试管内，在80℃以下烤干使用，可使2～3ml血液在3～4天内不凝固并抑制糖分解。

4．本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，

再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠。

5．严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。

【评价】线性范围至少可达22.24mmol/L，回收率94%～105%，批内cV为0.7%～2.0%。批间cV为2%左右，日间cV

为2%～3%。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，73份标本

葡萄糖氧化酶法均值为8.31mmol/L，已糖激酶法均值

8.21mmol/L，相关系数为0.9986，回归方程y=1.0026x－2.29。本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。