实验 血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
实验八血糖的测定（葡萄糖氧化酶法）
实验十 血糖的测定血液中的葡萄糖称血糖。
正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。
血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。
其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。
因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。
血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。
下边介绍两种方法供选择。
一、葡萄糖氧化酶法【目的】1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。
2. 掌握血糖测定的临床意义。
【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。
后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。
其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。
反应式如下：2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物POD2H 2O2H 2O 2O 2葡萄糖+葡萄糖酸+GOD+【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。
2. 酶试剂称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。
实验血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
4.试管50支，
6.记号笔6支
7.蒸馏水1瓶
此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。
【参考文献】
1.全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997,P616.
2.Trinder P. Ann Clin Biochem，1969, 6: 24-27.
血糖测定实验所需器材：
1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm），
2.恒温水浴箱（能调温度的，37C）,
>13000U/L
过氧化物酶（POD
>900U/L
R2
磷酸缓冲液（pH7.0）
100mmol/L
酚
11mmol/L
4-氨基安替吡啉
0.77mmol/L
葡萄糖标准液5.55mmol/L(100mg/dl)
【样本】
新鲜无溶血血清。
【步骤】
将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液
空白管
校准管
样品管
工作液
1.50 ml
1.50 ml
1.50 ml
蒸馏水
0.01 ml
校准液
0.01 ml
样品
0.01 ml
分别混合均匀，37C水浴10〜15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。
【计算】
葡萄糖
葡萄桃
【参考值】
血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L（70—110mg/dl）。
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法）
【目的】
体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。
【临床意义】
测验血糖实验报告
一、实验目的1. 了解血糖测定的原理和方法。
2. 掌握血糖仪的使用技巧。
3. 学会通过血糖测定结果评估血糖水平。
二、实验原理血糖测定是通过测量血液中的葡萄糖浓度来评估机体糖代谢状况的一种方法。
实验原理基于葡萄糖氧化酶法，即葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下，与氧气反应生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将色原氧化成有色物质，通过比色法测定吸光度，从而计算出血糖浓度。
三、实验器材1. 血糖仪2. 血糖试纸3. 尿液检测棒4. 酒精棉球5. 医用采血针6. 吸管7. 移液器8. 试剂瓶9. 移液管10. 比色皿四、实验步骤1. 标准化血糖仪和试纸- 将血糖仪和试纸取出，按照说明书进行标准化操作。
2. 采集血液样本- 使用酒精棉球消毒手指，然后用采血针对指尖进行采血。
- 将血液滴在血糖试纸上，等待试纸变色。
3. 测定血糖浓度- 将试纸插入血糖仪中，根据仪器提示读取血糖浓度。
4. 结果记录- 将测定结果记录在实验报告表中。
5. 尿液检测- 使用尿液检测棒检测尿液中的葡萄糖，观察结果。
五、实验结果与分析1. 血糖测定结果- 实验者1：血糖浓度为5.8mmol/L- 实验者2：血糖浓度为6.2mmol/L- 实验者3：血糖浓度为4.5mmol/L2. 尿液检测结果- 实验者1：尿液葡萄糖检测阴性- 实验者2：尿液葡萄糖检测阴性- 实验者3：尿液葡萄糖检测阳性根据实验结果，实验者1和实验者2的血糖浓度在正常范围内，而实验者3的血糖浓度偏低，可能与饮食、运动等因素有关。
尿液检测结果提示实验者3存在低血糖情况。
六、实验讨论1. 影响血糖测定的因素- 采血时间：空腹血糖、餐后血糖等不同时间段的血糖水平存在差异。
- 采血部位：指尖、耳垂等不同部位的血糖水平存在差异。
- 仪器误差：血糖仪的准确性和稳定性对测定结果有影响。
- 操作不规范：采血、滴血等操作不规范可能导致测定结果不准确。
2. 血糖测定的临床意义- 血糖测定是糖尿病诊断、治疗和监测的重要手段。
血糖测量实验报告
一、实验目的1. 掌握血糖测量的基本原理和方法。
2. 熟悉血糖仪的使用技巧和注意事项。
3. 了解血糖水平与人体健康的关系。
二、实验原理血糖是指血液中的葡萄糖含量，是人体重要的能量来源。
血糖水平受到多种因素的影响，如饮食、运动、情绪等。
正常人的空腹血糖水平一般在3.9-6.1毫摩尔/升（70-110毫克/分升）之间。
血糖测量是诊断糖尿病和其他代谢性疾病的重要手段。
本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖。
该方法利用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下分解生成水和氧气，氧气与色原反应生成有色的化合物，通过测定该化合物的吸光度值即可计算出血糖浓度。
三、实验器材与试剂1. 器材：血糖仪、血糖试纸、采血笔、采血管、酒精棉球、生理盐水、计时器等。
2. 试剂：葡萄糖标准溶液、葡萄糖氧化酶试剂、过氧化物酶试剂、缓冲液等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：1.1 准备一系列不同浓度的葡萄糖标准溶液。
1.2 将标准溶液分别加入比色皿中，加入葡萄糖氧化酶试剂，混匀。
1.3 在一定时间内测定各溶液的吸光度值。
1.4 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血糖测定：2.1 采血：用采血笔采集手指末梢血，注意消毒。
2.2 将血液滴在血糖试纸上，等待试纸变色。
2.3 将试纸插入血糖仪，读取血糖值。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：1.1 通过绘制标准曲线，可以得到葡萄糖浓度与吸光度值之间的关系，从而计算出样品中的葡萄糖浓度。
2. 血糖测定：2.1 通过血糖仪测定，可以得到受试者的血糖值。
六、实验结论1. 本实验成功绘制了葡萄糖标准曲线，为血糖测定提供了依据。
2. 通过血糖仪测定，得到了受试者的血糖值，为临床诊断提供了参考。
七、实验注意事项1. 实验前应充分了解实验原理和操作步骤。
2. 使用血糖仪时，应严格按照说明书操作，注意保养。
3. 采血时，应注意消毒，避免感染。
实验报告血糖的测定
一、实验目的1. 掌握血糖测定的原理和方法。
2. 了解血糖水平与人体健康的关系。
3. 培养实验操作技能，提高实验数据分析能力。
二、实验原理血糖是指在血液中葡萄糖的浓度。
正常人体血糖水平相对稳定，维持在一定范围内。
血糖的测定对于糖尿病等疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。
葡萄糖氧化酶法是一种测定血糖的常用方法，其原理是葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下，与氧气反应生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使色原物质氧化产生颜色变化，根据颜色变化程度，可以计算出样品中的葡萄糖浓度。
三、实验材料1. 试剂：葡萄糖标准溶液、显色剂、显色剂储备液、反应缓冲液、显色剂工作液、空白试剂、待测血液样品。
2. 仪器：微量移液器、移液管、移液器、酶标仪、试管、水浴锅、吸管、滤纸等。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）取6支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml葡萄糖标准溶液，加入0.5ml反应缓冲液。
（2）将各试管充分混匀，置于水浴锅中，恒温30分钟。
（3）取出试管，加入0.5ml显色剂，充分混匀，室温放置10分钟。
（4）以空白试剂为参比，用酶标仪在波长540nm处测定各管吸光度。
（5）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 待测样品测定（1）取6支试管，分别加入0.5ml反应缓冲液、0.5ml显色剂、0.5ml待测血液样品。
（2）将各试管充分混匀，置于水浴锅中，恒温30分钟。
（3）取出试管，加入0.5ml显色剂，充分混匀，室温放置10分钟。
（4）以空白试剂为参比，用酶标仪在波长540nm处测定各管吸光度。
（5）根据标准曲线，计算待测样品的血糖浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据绘制标准曲线，线性范围为0-2.5mmol/L。
2. 待测样品测定：根据标准曲线计算，待测样品的血糖浓度为3.8mmol/L。
六、实验结论本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，实验结果准确可靠。
葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度
一、血糖 测 (xuètáng) 定
福林-酚试剂(shìjì)法
葡萄糖氧化酶法
邻甲苯胺(běn àn)法
第六页，共二十三页。
葡萄糖氧化酶法原理(yuánlǐ)
葡萄糖＋O2＋H2O
葡萄糖氧化酶〔GOD〕
氧化(yǎnghuà)，37oC 葡萄糖酸＋H2O2
H2O2 ＋ 苯酚(běn fēn) ＋ 4-氨基安替吡啉
葡萄糖含量(g/L) 无糖
微量0.5以下 少量0.5~1
中等量1~2 多量2以上
试管变化 试剂仍清晰呈蓝色，如有多量尿 酸存在也可能少许蓝灰色沉淀
仅冷却后有少量绿色沉淀 煮沸约1min后，出现少量黄绿色 沉淀
煮沸约15s，即呈土黄色沉淀 开始煮时，即呈多量红棕色沉淀
结果符号 —
+ ++
+++ ++++
第二十二页，共二十三页。
内容(nèiróng)总结
生物化学与分子生物学专业。1.收集耳缘静脉血,制备(zhìbèi)血浆,葡萄糖氧化 法比色测定血糖浓度。葡萄糖＋O2＋H2O。溶液在505nm下有吸收峰,可用比色 法测定,得出葡萄糖的浓度。A样=KC样L。〔4〕取4支试管，按下表参加试剂:。 以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。A肾-A正。尿糖的测定虽然不能 单纯作为糖尿病的诊断标准，但是从某种层面上也能反映一些问题。2.葡萄糖氧 化酶试纸法〔干化学法〕：反响原理同血糖葡萄糖氧化酶法
一.实验要求
1.掌握(zhǎngwò)血糖测定原理，计算方法，参考正常值，临床意义。
2.了解尿糖的测定(cèdìng)及意义。
二.实验内容
1.收集耳缘静脉血,制备血浆(xuèjiāng),葡萄糖氧化法比色测定血糖浓度。 2.收集尿液,班氏法测定。
血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)
血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）血糖是指血液中葡萄糖的含量。
葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。
这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。
一、实验原理血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。
具体反应式为：(1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2(2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2(3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物）其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。
二、实验材料1.血糖标准品：10mmol/L2.葡萄糖氧化酶3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH）4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管三、实验步骤1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。
2.实验组织：3个组别，每组3个试管。
A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。
注意，每组要做三个平行实验。
3.反应体系准备：①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。
②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。
③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。
⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。
⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。
4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。
实验报告测血糖
一、实验目的1. 了解血糖测定的原理和方法。
2. 掌握血糖仪的使用方法。
3. 通过实验，学会如何测量血糖。
二、实验原理血糖测定是通过检测血液中的葡萄糖浓度来评估人体的糖代谢状况。
目前，常用的血糖测定方法有氧化还原法、酶法、葡萄糖氧化酶法等。
本实验采用葡萄糖氧化酶法进行血糖测定。
葡萄糖氧化酶法是利用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢，然后通过过氧化氢酶催化过氧化氢分解产生水和新生态氧，新生态氧与色原反应，生成有色物质，通过比色法测定吸光度，从而计算出血糖浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：血糖仪、采血笔、酒精棉球、棉签、采血管、吸管、比色皿等。
2. 试剂：葡萄糖标准溶液、缓冲液、色原等。
四、实验步骤1. 标准曲线的制作（1）取6个比色皿，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL葡萄糖标准溶液，用缓冲液定容至5 mL。
（2）将比色皿放入血糖仪中，进行测定，记录吸光度值。
（3）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血糖测定（1）用采血笔采集指尖血液，滴入采血管中。
（2）将采血管插入血糖仪，进行测定，记录血糖值。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作根据实验数据，绘制标准曲线，并计算线性回归方程：y = 0.066x + 0.001。
2. 血糖测定实验组血糖值为5.8 mmol/L，对照组血糖值为4.2 mmol/L。
六、实验结论1. 本实验采用葡萄糖氧化酶法进行血糖测定，实验结果准确可靠。
2. 血糖仪的使用方便快捷，能够快速测定血糖值。
3. 实验结果表明，实验组血糖值高于对照组，可能与实验组饮食、运动等因素有关。
七、实验注意事项1. 在实验过程中，要注意血糖仪的校准，确保实验结果的准确性。
2. 在采集血液时，要保证采血笔的消毒，避免感染。
3. 在测定血糖时，要保证血液的充足，避免因血液不足而影响测定结果。
八、实验拓展1. 研究不同饮食、运动等因素对血糖的影响。
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实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法）
【目的】
体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。
【临床意义】
葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。
通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。
葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。
葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。
【原理】
样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。
【器材】
紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管
【药品】
葡萄糖测定试剂盒，试剂盒主要成分与浓度：
【样本】
新鲜无溶血血清。
【步骤】
将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液。
空白管校准管样品管工作液 1.50 ml 1.50 ml 1.50 ml
蒸馏水0.01 ml ————
校准液——0.01 ml ——
样品————0.01 ml
分别混合均匀，37℃水浴10～15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm、比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。
【计算】
【参考值】
血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L (70—110 mg/dl)。
此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。
【参考文献】
1．全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997，P616.
2．Trinder P. Ann Clin Biochem，1969，6: 24-27.
血糖测定实验所需器材：
1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm），
2.恒温水浴箱（能调温度的，37℃），
3.移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20µl 6个），枪头各100个
4.试管50支，6个试管架
5.烧杯100ml一个，50ml（或25ml）6个
6.记号笔6支
7.蒸馏水1瓶。