现代分子生物学技术.ppt
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《分子生物学》课件——一代测序技术
一代测序技术
发展历程
第二代测序使用最为广泛。以 Roche公司的454技术， Illumina公司的Solexa， HiSeq技术为代表
一代测序技术
01 基本介绍
02 一代测序技术的方法
01 基本介绍
基本介绍——第一代测序的发明人
Fred Sanger及其同事
在1997年发明了利用DNA聚合酶和 双脱氧链终止测定DNA核苷酸序列的方法。
第一代DNA测序技术的核心技术是什么?
感谢观看
实验步骤
取待测DNA片段
将标记完的样品，分成四份
１．G反应，"硫酸二甲酯"
２．G+A反应 "甲酸"
３．T+C反应 "肼"
４．C反应 在NaCl存在时，只有C与肼反应，得到一 系列C末端的片段
一代测序技术的方法
形成大小不一的DNA链 电泳分离DNA链 根据同位素标记自显影后读出序列
Maxam-Gilbert化学降解测序法的弊端
基本介绍——第一代测序的发明人
第一代测序技术
概念：传统的链终止法，化学降解法，以及 在它们的基础上的各种DNA测序技术。
02 一代测序技术的方法
一代测序技术的方法
Maxam-Gilbert 化学降解测序法
０１ 对DNA片段5’或3’末端进行放射性标记。 ０２ 采用特异性化学试剂修饰和裂解特定的碱基位点。
一代测序技术的方法
Sanger双脱氧链终止测序法原理
原理：是以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，在寡 核苷酸引物的引导下依据碱基互补配对原则。 在此对引物进行了事先标记，可以实现4个测序 反应在同一反应管中进行。可以利用自显影技术。
发展历程
第二代测序使用最为广泛。以 Roche公司的454技术， Illumina公司的Solexa， HiSeq技术为代表
一代测序技术
01 基本介绍
02 一代测序技术的方法
01 基本介绍
基本介绍——第一代测序的发明人
Fred Sanger及其同事
在1997年发明了利用DNA聚合酶和 双脱氧链终止测定DNA核苷酸序列的方法。
第一代DNA测序技术的核心技术是什么?
感谢观看
实验步骤
取待测DNA片段
将标记完的样品，分成四份
１．G反应，"硫酸二甲酯"
２．G+A反应 "甲酸"
３．T+C反应 "肼"
４．C反应 在NaCl存在时，只有C与肼反应，得到一 系列C末端的片段
一代测序技术的方法
形成大小不一的DNA链 电泳分离DNA链 根据同位素标记自显影后读出序列
Maxam-Gilbert化学降解测序法的弊端
基本介绍——第一代测序的发明人
第一代测序技术
概念：传统的链终止法，化学降解法，以及 在它们的基础上的各种DNA测序技术。
02 一代测序技术的方法
一代测序技术的方法
Maxam-Gilbert 化学降解测序法
０１ 对DNA片段5’或3’末端进行放射性标记。 ０２ 采用特异性化学试剂修饰和裂解特定的碱基位点。
一代测序技术的方法
Sanger双脱氧链终止测序法原理
原理：是以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，在寡 核苷酸引物的引导下依据碱基互补配对原则。 在此对引物进行了事先标记，可以实现4个测序 反应在同一反应管中进行。可以利用自显影技术。
现代分子生物学第八章PPT课件
• β一珠蛋自基因簇位于11号染色体短臂上.占 50-60kb。（图8-7）
.
16
不同发育阶段血红蛋白亚型
.
17
• 胚胎期类α-珠蛋自，最先以ξ 2型出现。以 后逐渐被ξ 1型所取代。
• 在胎儿期有两类等分子数β型链。因此，胚
胎型血红蛋白中含有两个ξ 2 型α链和两个ξ 2
型β链。新生儿出生后,98%的血红蛋白中含 有两个仪α2单位和两个β亚单位，2%的血红 蛋白含两个α2单位和两个β亚单位。在每个 基因家族中，基因排列的顺序就是它们在 发育阶段的表达顺序（图8-8）。
.
26
8.2真核基因表达的转录水平调控
真核细胞与原核细胞在基因转录、翻泽及 DNA的空间结构方面存在如下差异: • 1. 在真核细胞中，一条成熟的mRNA链只能 翻译一条多肤链，原核生物中常见的多基 因操纵子形式在真核细胞中比较少见. • 2.真核细胞的DNA与组蛋白和大量非组蛋白 结合.只有一小部分DNA是裸露的。 • 3.高等真核细胞DNA中大部分不转录；大部 分真核细胞还存在不被翻译的内含子 • 4.真核生物能够有序地. 根据生长发育阶段的27
.
30
• 顺式作用原件是指启动子和基因的调节序 列。主要包括启动子、增强子、
沉默子等。
• 反式作用因子是指能够结合在顺式作用元 件上调控基因表达的蛋自质或者RNA。
• RNA聚合酶是催化基因转录最主要的酶。
.
31
.
32
.
33
.
34
.
35
.
36
.
37
8.2.2增强子及其对转录的影响
• 增强子是指能使与它连锁的基因转录频率明显增加的DNA 序列，最早发现于SV40 早期基因的上游，有两个长72 bp 的正向重复序列。
.
16
不同发育阶段血红蛋白亚型
.
17
• 胚胎期类α-珠蛋自，最先以ξ 2型出现。以 后逐渐被ξ 1型所取代。
• 在胎儿期有两类等分子数β型链。因此，胚
胎型血红蛋白中含有两个ξ 2 型α链和两个ξ 2
型β链。新生儿出生后,98%的血红蛋白中含 有两个仪α2单位和两个β亚单位，2%的血红 蛋白含两个α2单位和两个β亚单位。在每个 基因家族中，基因排列的顺序就是它们在 发育阶段的表达顺序（图8-8）。
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26
8.2真核基因表达的转录水平调控
真核细胞与原核细胞在基因转录、翻泽及 DNA的空间结构方面存在如下差异: • 1. 在真核细胞中，一条成熟的mRNA链只能 翻译一条多肤链，原核生物中常见的多基 因操纵子形式在真核细胞中比较少见. • 2.真核细胞的DNA与组蛋白和大量非组蛋白 结合.只有一小部分DNA是裸露的。 • 3.高等真核细胞DNA中大部分不转录；大部 分真核细胞还存在不被翻译的内含子 • 4.真核生物能够有序地. 根据生长发育阶段的27
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30
• 顺式作用原件是指启动子和基因的调节序 列。主要包括启动子、增强子、
沉默子等。
• 反式作用因子是指能够结合在顺式作用元 件上调控基因表达的蛋自质或者RNA。
• RNA聚合酶是催化基因转录最主要的酶。
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8.2.2增强子及其对转录的影响
• 增强子是指能使与它连锁的基因转录频率明显增加的DNA 序列，最早发现于SV40 早期基因的上游，有两个长72 bp 的正向重复序列。
分子生物学实验技术ppt课件
质粒转化大肠杆菌的过程
感受态
非定向克隆 +
或
定向克隆
克隆的片段只能按
+ 特定方向连接基因组DNA的构建基因组DNA的类型
质粒（﹤10kb)噬菌体质经双向电泳之后，用蛋白质水解酶裂解成肽段，可 用于质谱分析。通过电离源将蛋白质分子转化为气相离子， 然后用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比 值（M/Z值）的蛋白离子分离开，经过离子检测器收集分离 的离子，确定离子的M/Z值，分析鉴定未知蛋白质。
两种离子发生方法： 基质辅助激光解吸附/离子化（MALDI)、电喷雾离子化 （ESI)
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是将编码目的蛋白的基 因与编码噬菌体表面蛋白的基因融合后， 以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面的一 种技术。
将不同蛋白的cDNA插入噬菌体载体进 行表达，得到表达不同蛋白的一定规模的 噬菌体展示库 。
将“诱饵”蛋白固定化，基于“诱饵”蛋白与 “猎物”蛋白之间的相互作用，可将展示库 中与固定化的“诱饵”蛋白有相互作用的“猎 物”蛋白分离纯化出来，再对“猎物”蛋白进 行质谱鉴定。
四、蛋白组学研究
蛋白质分离 蛋白质分析 蛋白质相互作用的研究方法： 酵母双杂交技术，噬菌体展示技术，表
面等离子共振技术，荧光共振能量转移 技术，蛋白质微阵列芯片技术，免疫共 沉淀技术，pull-down技术
蛋白质分离
最常用的蛋白质分离技术是20世纪70年代发明的双 向电泳（2-DE），是根据蛋白质的等电点不同在pH 梯度介质中进行第一次分离，即等点聚焦（IEF)，然 后根据蛋白质分子量的不同进行第二次分离，即 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
重叠延伸PCR原理
重叠延伸PCR技术由于使用了具有互补末端的引物， 使PCR 产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过 重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。可 简单迅速的将两个DNA片段连在一起，用于嵌合基因的构 建
分子生物学技术及其应用(共36张PPT)
3’
ATGCGGTACCAT
5’ 测序模板
5’
TA
5’
TACGCCA
第一套反应
5’
TACGCCATGGTA
TA C TACGC
第二套反应
TACGCC
TACG TACGCCATG
第三套反应
TACGCCATGG
T TACGCCAT TACGCCATGGT
第四套反应
A CGT
A
TACGCCATGGTA
T
②促进 突变基因对Bip基因表达的促进作用降低，进而影响了感光细胞中
的蛋白质折叠
11.（1）mRNA 核糖体 （见右图）
干扰人类其他基因的表达
（2）CO2（1分） 选择透过（1分） 种的肠癌细胞没有排斥反应
无胸腺，失去特异性免疫，对接
（3）反义脱氧核苷酸链 瘤体重量 （更加）接近100%
1. 5对 1、2、4
2.AD
3.⑴正常启动子P左侧序列未知 BglII和DNA连接
MscI C和B
⑷卡那霉素
X-Gluc 正常启动子P驱动gus基因仅在幼根及根毛中
特异性表达，而缺失体中gus基因在根、叶和花粉均表达
M、Q
4.（1）1、2、3 第3和第2枝段的PbmRNA 依次出现
由第1枝段依次向2、3枝段运输
（2）逆转录 mRNA
TACGCCATGGT
G TACGCCATGG
G
TACGCCATG
T
TACGCCAT
A
TACGCCA
C TACGCC
C TACGC G TACG
C TAC A TA TT
2.自动化测序 双脱氧链终止法荧光标记原理
ddATP-绿色荧光 ddTTP-红色荧光 ddCTP-蓝色荧光 ddGTP-橙色荧光
现代分子生物学第四章ppt课件
密码子与反密码子的相互作用
tRNA的反密码子在核 糖体内是经过碱基的反 向 配 对 与 mRNA 上 的 密 码子相互作用的。
Codon 5’ A C G 3’ Anticodon 3’ U G C 5’ is usually written as codon ACG/anticodon CGU, ACG and CGU
遗传密码： mRNA上每3个核苷酸翻译成多肽链上 的一个氨基酸，这3个核苷酸就称为一 个密码子〔三联子密码〕。
4. 1. 1 三联子密码及其破译
由于mRNA中只需4种核苷酸，蛋白质中有20 种氨基酸：
以一种核苷酸代表一种氨基酸是不能够的。
假设以两种核苷酸作为一个氨基酸的密码〔二 联子〕，能代表42=16种氨基酸。
假设以3个核苷酸代表一个氨基酸，有43=64种 密码子，满足了编码20种氨基酸的需求。
从遗传学的角度证明三联子密码的想象 是正确的
Crick等人发现T4噬菌体rII位点上两个基因的 正确表达与它能否侵染大肠杆菌有关，用吖啶 类试剂〔诱导核苷酸插入或从DNA链上丧失〕 处置使T4噬菌体DNA发生移码突变 〔frameshift mutation〕，噬菌体就丧失感染 才干。
mRNA上的密码子与tRNA上 的反密码子配对表示图
a. 密码子与tRNA反密码 子臂上相应序列配对
b. 当反密码子第一位是I时， 密码子第三位可以是A、U或C。
tRNA上的反密码子与mRNA上密码子的配对与“摆动〞分析
1．3'〕X-Y-C 〔5'〕
酪氨酸
3
缬氨酸
密码子个数 6 2 1 2 4 6 4 1 2 4
除了Arg以外，编码某一特定氨基酸的密码子个数 与该氨基酸在蛋白质中的出现频率相吻合
最新分子生物学技术新进展课件PPT
➢ 大脑后动脉颞支缺血累及边缘系统的颞叶海马、海马 旁回和穹隆所致
临床表现
③ 双眼视力障碍发作 双侧大脑后动脉距状支缺血导致
枕叶视皮层受累，引起暂时性皮质盲
辅助检查
➢ CT或MRI检查大多正常，部分病例(发作时间 ＞60min者)于弥散加权MRI可见片状缺血灶
➢ CTA、MRA及DSA可见血管狭窄、动脉粥样硬 化斑
（五）基因突变分析 PCR与其他技术的结合可以大大提高基因突变检 测的敏感性 。
三、几种重要的PCR衍生技术
（一）逆转录PCR技术 逆转录PCR(reverse transcription PCR，RT-PCR)是将 RNA的逆转录反应和PCR反应联合应用的一种技术， 是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序 列的RNA进行定性及半定量分析的最有效方法。
➢ TCD可发现颅内动脉狭窄，并可进行血流状 况评估和微栓子监测
➢ 血常规和生化检查是必要的 ➢ 神经心理学检查可能发现轻微的脑功能损害
诊断及鉴别诊断
1.TIA的诊断
➢ 大多数TIA患者就诊时临床症状已消失，诊断主 要依靠病史
➢ 中老年患者突然出现局灶性脑功能损害症状，符 合颈动脉或椎-基底动脉系统及其分支缺血表现， 并在短时间内症状完全恢复(多不超过1小时)， 应高度怀疑为TIA
1.DNA序列分析 用于基因突变类型已经明确的遗传病的诊断及产 前诊断 ，例如血友病、囊性纤维变性、杭延顿氏 舞蹈症、抗胰酶缺乏症等均可检测。
2.PCR技术 • 快速检出样品中的痕量病原微生物，例如乙
型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎，爱滋病等。 • 微量DNA 样品中的基因及基因变异分析。 • 用于个体识别、亲缘关系鉴定、器官移植术
➢ PWI/DWI、CTP和SPECT有助TIA的诊断
临床表现
③ 双眼视力障碍发作 双侧大脑后动脉距状支缺血导致
枕叶视皮层受累，引起暂时性皮质盲
辅助检查
➢ CT或MRI检查大多正常，部分病例(发作时间 ＞60min者)于弥散加权MRI可见片状缺血灶
➢ CTA、MRA及DSA可见血管狭窄、动脉粥样硬 化斑
（五）基因突变分析 PCR与其他技术的结合可以大大提高基因突变检 测的敏感性 。
三、几种重要的PCR衍生技术
（一）逆转录PCR技术 逆转录PCR(reverse transcription PCR，RT-PCR)是将 RNA的逆转录反应和PCR反应联合应用的一种技术， 是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序 列的RNA进行定性及半定量分析的最有效方法。
➢ TCD可发现颅内动脉狭窄，并可进行血流状 况评估和微栓子监测
➢ 血常规和生化检查是必要的 ➢ 神经心理学检查可能发现轻微的脑功能损害
诊断及鉴别诊断
1.TIA的诊断
➢ 大多数TIA患者就诊时临床症状已消失，诊断主 要依靠病史
➢ 中老年患者突然出现局灶性脑功能损害症状，符 合颈动脉或椎-基底动脉系统及其分支缺血表现， 并在短时间内症状完全恢复(多不超过1小时)， 应高度怀疑为TIA
1.DNA序列分析 用于基因突变类型已经明确的遗传病的诊断及产 前诊断 ，例如血友病、囊性纤维变性、杭延顿氏 舞蹈症、抗胰酶缺乏症等均可检测。
2.PCR技术 • 快速检出样品中的痕量病原微生物，例如乙
型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎，爱滋病等。 • 微量DNA 样品中的基因及基因变异分析。 • 用于个体识别、亲缘关系鉴定、器官移植术
➢ PWI/DWI、CTP和SPECT有助TIA的诊断
分子生物学技术在肿瘤检测及治疗中的应用ppt课件
• 肿瘤基因表达研究
实时荧光定量RT-PCR方法能检测各种组 织细胞中基因的表达丰度，从而分析基因的 表达调控、监控mRNA的表达模式、检测组 织中少量存在的基因、跟踪细胞群体中的克 隆型、定量分析基因在不同组织中的转录水 平。
eg：检测黑色素瘤中的细胞因子白细胞 介素-10（IL-10）、转化生长因子β1、β2 （TGF-β1、β2）和γ干扰素（IFN-γ）的基因 表达情况。
5%BC%8F%E5%8F%8D%E5%BA%94 • 4.Application of Real-time Fluorescene Quantitative RT-PCR Technology to Cancer
Research 1671-170X(2013)01-0069-03
11
谢谢观看~
12
C目录 ONTENTS
肿瘤的防治历史
01
P3
PCR技术简介及其衍
02 生技术
P4~6
反转录·聚合酶链式扩
03 增 RT-PCR
P7
单管荧光定量PCR技
04 术
P8
实时荧光定量PCR技
05 术的优越性
P9
实时荧光定量PCR技
06 术应用于肿瘤
P10
2
肿瘤防治历史
• 半个世纪多以来，随着医学技术的发展，人类已经基本上控制了以往主要威胁人类健康的传 染病，而肿瘤、心血管等疾病逐渐成为人类健康的主要疾病，其中肿瘤的治疗尤为困难。传 统的肿瘤治疗主要以外科手术为主，后期发展的化疗、放疗成为治疗肿瘤的主要方法。但在 临床的实际应用上这些方法均有其局限性，疗效也不尽如人意。
6
单管荧光定量PCR技术
• 单管荧光定量PCR（Fluorogenic Quantitative PCR, FQ-PCR）技术是融合 了PCR技术与DNA探针杂交技术的优点， 实验的整个过程只在加样时打开1次反应管， 在PCR的每个循环中可以直接监测到荧光 信号的变化，根据PCR反应酶动力学特点 分析软件会自动对DNA进行定量，因此也 有人称FQ-PCR为实时荧光定量PCR （Real-time Fluorogenic Quantitative PCR）。
分子生物学ppt课件完整版
肿瘤标志物
寻找和验证肿瘤特异性标志物，用于肿瘤的早期诊断、预后评估和 个性化治疗。
肿瘤免疫治疗
利用分子生物学技术，研究和开发肿瘤免疫治疗策略，如CAR-T细胞 疗法等。
免疫学中的分子生物学应用
免疫相关基因
研究免疫相关基因的突变、表达和调控，揭示免疫应答和免疫疾 病的分子机制。
疫苗研发
利用分子生物学技术，研究和开发新型疫苗，如mRNA疫苗、 DNA疫苗等。
03
DNA修复机制
当DNA受到损伤时，细胞会启动修复机制对损伤进行修复。常见的修
复方式包括直接修复、切除修复和重组修复等。这些修复机制能够确保
遗传信息的稳定性和准确性。
03
RNA的结构与功能
RNA的分子组成
核糖核苷酸
RNA的基本组成单位是核 糖核苷酸，由磷酸、核糖 和碱基组成。
碱基
RNA中的碱基主要有腺嘌 呤（A）、鸟嘌呤（G）、 胞嘧啶（C）和尿嘧啶（U ）。
基因诊断与治疗
基因诊断
通过检测特定基因或基因突变来 预测或诊断疾病，如遗传性疾病
、癌症等。
基因治疗
通过修改或替换病变基因来治疗 疾病，如基因编辑技术CRISPR-
Cas9等。
个性化医疗
基于患者的基因组信息，制定个 性化的治疗方案，提高治疗效果
和减少副作用。
肿瘤分子生物学研究
肿瘤基因
研究肿瘤相关基因的突变、表达和调控，揭示肿瘤发生和发展的分 子机制。
分子生物学ppt课 件完整版
目 录
• 分子生物学概述 • DNA的结构与功能 • RNA的结构与功能 • 基因的表达与调控 • 分子生物学技术与方法 • 分子生物学在医学领域的应用
01
分子生物学概述
寻找和验证肿瘤特异性标志物，用于肿瘤的早期诊断、预后评估和 个性化治疗。
肿瘤免疫治疗
利用分子生物学技术，研究和开发肿瘤免疫治疗策略，如CAR-T细胞 疗法等。
免疫学中的分子生物学应用
免疫相关基因
研究免疫相关基因的突变、表达和调控，揭示免疫应答和免疫疾 病的分子机制。
疫苗研发
利用分子生物学技术，研究和开发新型疫苗，如mRNA疫苗、 DNA疫苗等。
03
DNA修复机制
当DNA受到损伤时，细胞会启动修复机制对损伤进行修复。常见的修
复方式包括直接修复、切除修复和重组修复等。这些修复机制能够确保
遗传信息的稳定性和准确性。
03
RNA的结构与功能
RNA的分子组成
核糖核苷酸
RNA的基本组成单位是核 糖核苷酸，由磷酸、核糖 和碱基组成。
碱基
RNA中的碱基主要有腺嘌 呤（A）、鸟嘌呤（G）、 胞嘧啶（C）和尿嘧啶（U ）。
基因诊断与治疗
基因诊断
通过检测特定基因或基因突变来 预测或诊断疾病，如遗传性疾病
、癌症等。
基因治疗
通过修改或替换病变基因来治疗 疾病，如基因编辑技术CRISPR-
Cas9等。
个性化医疗
基于患者的基因组信息，制定个 性化的治疗方案，提高治疗效果
和减少副作用。
肿瘤分子生物学研究
肿瘤基因
研究肿瘤相关基因的突变、表达和调控，揭示肿瘤发生和发展的分 子机制。
分子生物学ppt课 件完整版
目 录
• 分子生物学概述 • DNA的结构与功能 • RNA的结构与功能 • 基因的表达与调控 • 分子生物学技术与方法 • 分子生物学在医学领域的应用
01
分子生物学概述
医学分子生物学PPT课件
高通量测序技术则可以对整个 基因组进行测序，提供更加全 面和准确的基因信息，是目前 最先进的基因诊断技术之一。
基因诊断技术在临床中应用案例分析
01
基因诊断技术在临床中应用广泛，如用于遗传性疾病的诊断、病原体 检测、药物基因组学等。
02
例如，对于遗传性疾病的诊断，基因诊断技术可以检测出患者是否携 带某种遗传病的致病基因，为疾病的早期预防和治疗提供依据。
03
在病原体检测方面，基因诊断技术可以快速、准确地检测出病原体的 种类和数量，有助于临床医生及时采取有效的治疗措施。
04
药物基因组学则是利用基因诊断技术，分析个体对药物的代谢和反应 差异，为个体化用药提供指导。
07
基因治疗策略安全性问题 探讨
基因治疗策略概述
基因治疗定义
通过修改或操纵人类或其 他生物的遗传物质以达到 治疗疾病的目的。
06
基因诊断技术原理临床应 用
基因诊断技术原理简介
基因诊断是利用分子生物学技术 ，检测和分析基因的结构和功能 异常，从而对疾病进行诊断和预
测。
基因诊断技术基于DNA或RNA 水平的变化，包括基因突变、基 因缺失、基因插入、基因重排等
。
通过检测这些变化，可以确定个 体是否携带某种疾病的易感基因 或已经患病，为临床诊断和治疗
提供依据。
基因诊断技术方法分类
基因诊断技术主要包括核酸检 测技术、基因芯片技术、高通
量测序技术等。
核酸检测技术是最常用的基因 诊断方法之一，包括聚合酶链 式反应（PCR）、实时荧光定 量PCR等，可用于检测病原体
、基因突变等。
基因芯片技术是一种高通量的 基因检测技术，可以同时检测 多个基因的变化，适用于大规 模筛查和基因表达谱分析。
基因诊断技术在临床中应用案例分析
01
基因诊断技术在临床中应用广泛，如用于遗传性疾病的诊断、病原体 检测、药物基因组学等。
02
例如，对于遗传性疾病的诊断，基因诊断技术可以检测出患者是否携 带某种遗传病的致病基因，为疾病的早期预防和治疗提供依据。
03
在病原体检测方面，基因诊断技术可以快速、准确地检测出病原体的 种类和数量，有助于临床医生及时采取有效的治疗措施。
04
药物基因组学则是利用基因诊断技术，分析个体对药物的代谢和反应 差异，为个体化用药提供指导。
07
基因治疗策略安全性问题 探讨
基因治疗策略概述
基因治疗定义
通过修改或操纵人类或其 他生物的遗传物质以达到 治疗疾病的目的。
06
基因诊断技术原理临床应 用
基因诊断技术原理简介
基因诊断是利用分子生物学技术 ，检测和分析基因的结构和功能 异常，从而对疾病进行诊断和预
测。
基因诊断技术基于DNA或RNA 水平的变化，包括基因突变、基 因缺失、基因插入、基因重排等
。
通过检测这些变化，可以确定个 体是否携带某种疾病的易感基因 或已经患病，为临床诊断和治疗
提供依据。
基因诊断技术方法分类
基因诊断技术主要包括核酸检 测技术、基因芯片技术、高通
量测序技术等。
核酸检测技术是最常用的基因 诊断方法之一，包括聚合酶链 式反应（PCR）、实时荧光定 量PCR等，可用于检测病原体
、基因突变等。
基因芯片技术是一种高通量的 基因检测技术，可以同时检测 多个基因的变化，适用于大规 模筛查和基因表达谱分析。
病理学研究中常用的分子生物学基本技术及其应用 ppt课件
ppt课件 36
• 2. 液相杂交 （solution hybridization ）
• • • • • • • • • 所参加反应的两条核酸链都游离在溶液中 (1)吸附杂交方法 HAP（羟基磷灰石）吸附杂交方法(DNA:DNA) 亲和吸附杂交方法 (DNA:RNA) 生物素标记DNA探针 酰化亲和素包被固相支持物 用特异性抗DNA-RNA杂交物的酶标单克隆抗 体与固相支持物上的杂交物反应 酶显色
基因扩增或在转录水平上研究基因表达
ppt课件
24
• 原位杂交的探针 单链DNA • 双链DNA • RNA 探针
• 基本方法 (RNA 杂交为例) • A.杂交前准备
• 固定 尽快予以冷冻/固定 • 培养细胞、新鲜组织、石蜡包埋组织均可进行原位杂交 • 通常石蜡包埋信号低于冰冻切片
ppt课件
25
• 玻片处理 • 增强组织通透性和探针穿透性 • 稀释的酸去垢剂（detergent）或清洗剂Triton X 100 • 某些消化酶 • 应掌握其用量及孵育时间
ppt课件 34
ppt课件
35
• 应用
• • • • 临床应用 应用非常广泛 研究应用 肿瘤中染色体异常 基因图谱绘制 确定基因在染色体上的顺序
• (6)其它杂交方法 • A. 差异杂交（differential hybridization ）
• B. cDNA 微 点 阵 杂 交 （ cDNA microarray hybridization ） • C. 寡核苷酸微点阵杂交 （oligonucleotide microarray hybridization ） •
ppt课件 8
•
• 同一物质在不同时期的形态变化 •
• (4) 蛋白质
• 2. 液相杂交 （solution hybridization ）
• • • • • • • • • 所参加反应的两条核酸链都游离在溶液中 (1)吸附杂交方法 HAP（羟基磷灰石）吸附杂交方法(DNA:DNA) 亲和吸附杂交方法 (DNA:RNA) 生物素标记DNA探针 酰化亲和素包被固相支持物 用特异性抗DNA-RNA杂交物的酶标单克隆抗 体与固相支持物上的杂交物反应 酶显色
基因扩增或在转录水平上研究基因表达
ppt课件
24
• 原位杂交的探针 单链DNA • 双链DNA • RNA 探针
• 基本方法 (RNA 杂交为例) • A.杂交前准备
• 固定 尽快予以冷冻/固定 • 培养细胞、新鲜组织、石蜡包埋组织均可进行原位杂交 • 通常石蜡包埋信号低于冰冻切片
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• 玻片处理 • 增强组织通透性和探针穿透性 • 稀释的酸去垢剂（detergent）或清洗剂Triton X 100 • 某些消化酶 • 应掌握其用量及孵育时间
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• 应用
• • • • 临床应用 应用非常广泛 研究应用 肿瘤中染色体异常 基因图谱绘制 确定基因在染色体上的顺序
• (6)其它杂交方法 • A. 差异杂交（differential hybridization ）
• B. cDNA 微 点 阵 杂 交 （ cDNA microarray hybridization ） • C. 寡核苷酸微点阵杂交 （oligonucleotide microarray hybridization ） •
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•
• 同一物质在不同时期的形态变化 •
• (4) 蛋白质