中国美利奴羊_新疆型_及其杂交后代群体遗传多态性研究

新疆农业科学2012，49（1）：113－121Xinjiang Agricultural SciencesDOI：CNKI：65－1097/S．20120131．2226．018网络出版时间：2012－1－3122：26：26网络出版地址：http：//www．cnki．net/kcms/detail/65．1097．S．20120131．2226．018．html中国美利奴羊（新疆型）及其杂交后代群体遗传多态性研究秦崇凯1，杨菊清2，王琼1，耿明1，古丽尼沙·吐拉甫1，刘武军1（1．新疆农业大学动物科学学院，乌鲁木齐830052；2．新疆伊犁美利奴科技有限公司，新疆伊宁835000）摘要：【目的】研究4个微卫星标记在3个绵羊群体中的遗传多态性，以期找到与生长性状相关的遗传标记，为标记辅助选择育种提供理论依据。

【方法】采用微卫星标记技术研究4个微卫星标记在3个绵羊群体（中国美利奴羊、中国美利奴羊与德国美利奴羊的杂交后代、中国美利奴羊与萨福克羊的杂交后代）中的遗传多态性，利用Popgene（Version1．32）软件计算等位基因频率（P）、基因杂合度（H）、有效等位基因数（Ne）；用PIC－CALC软件计算多态信息含量（PIC）。

【结果】4个微卫星标记在3个绵羊群体中共检测到26个等位基因，平均每个标记检测到6．5个等位基因，平均有效等位基因数（Ne）分别为4．3848、5．4520、5．0068，平均杂合度（H）分别为0．7713、0．8122、0．7996，平均多态信息含量（PIC）分别为0．7422、0．7853、0．7706。

【结论】4个微卫星标记在3个绵羊群体中均表现为高度多态，可以用作绵羊遗传多样性的评估，可望作为生长性状选择的遗传标记。

关键词：中国美利奴羊（新疆型）；微卫星标记；遗传多态性中图分类号：S826.2文献标识码：A文章编号：1001－4330（2012）01－0113－09Research on the Genetic Polymorphism of ChineseMerino（Xinjiang Type）and its Crossbred PopulationQIN Chong－kai1，YANG Ju－qing2，WANG Qiong1，GENG Ming1，Gulinisha·Tulafu1，LIU Wu－jun1（1．College of Animal Science，Xinjiang Agricultural University，Urumqi830052China；2．Xinjiang Merino Scientific and Technological Co Ltd，Yining Xinjiang835000，China）Abstract：【Objective】To research on the genetic polymorphism about four microsatellite markers in three sheep population in order to find out genetic marker associated with growth traits and provide certain theory basis for marker assisted breeding．【Method】In the three sheep population（Chinese Merino，crossbred population of a Chinese Merino and a German Merino，crossbred population of a Chinese Merino and a Suffolk），the genetic diversity of four microsatellite markers is studied by using microsatellite marker technology．Gene frequencies（P），gene heterozygosity（H），effective number of alleles（Ne）are calculated by Popgene software（Version1．32），and polymorphism information content（PIC）is calculated by PIC－CALC software．【Result】The results showed that in the three sheep population，there are26alleles in four microsatellite markers，and on average there are6．5alleles for every microsatellite marker．Average effective收稿日期：2011－11－23基金项目：新疆维吾尔自治区高新技术研究发展计划项目（201111115）作者简介：秦崇凯（1986－），男，重庆人，硕士研究生，研究方向为动物遗传育种，（E－mail）skylovetanyan@126．com通讯作者：刘武军（1966－），女，新疆人，教授，博士，硕士生导师，研究方向为反刍动物生产、动物遗传育种与繁殖，（E－mail）lwj_ws@ 163．com新疆农业科学49卷number of alleles （Ne ）respectively is 4．3848，5．4520，5．0068；average gene heterozygosity （H ）respectively is 0．7713，0．8122，0．7996；average polymorphism information content （PIC ）respectively is 0．7422，0．7853，0．7706．【Conclusion 】It is shown that the four microsatellite markers belong to high polymorphism in the three sheep population belong on high polymorphism and they can be used as an assessment with sheep ’s genetic diversity and regarded as genetic marker of growthtraits choice．Key words ：Chinese Merino （Xinjiang ）；microsatellite markers ；genetic polymorphism0引言【研究意义】家畜大多数经济性状都属于数量性状，数量性状受多基因控制，且往往组织在有限数目的基因簇内，每一基因簇占据一定染色体区域，称之为数量性状基因座［1］（quantitative trait locus ，QTL ）。

许多研究表明，一个数量性状的QTL 并不很多，但存在主效基因，这些QTL 的一个或两个主效基因就能反映一个数量性状表型变异的10% 50%以上［2］。

因此，可以通过微卫星标记来选择和定位数量性状基因座进行辅助选择育种，这样可以大大提高生产性状的选择效率，加快品种的改良和新品种的培育速度。

研究旨在通过对4个微卫星标记在3个绵羊群体中的遗传多态性进行分析，为寻找与生长性状相关的遗传标记、加快绵羊经济性状的遗传进展和提高选择效率提供理论依据。

【前人研究进展】目前，随着微卫星标记的应用及QTL 研究所需技术的不断完善，研究者利用微卫星标记对家畜的生产性状开展了研究。

曹阳等［3］对微卫星标记与肉羊部分肉用性能的相关性进行了研究，结果表明：微卫星标记MCM218的基因型151/161对屠宰率存在一定的负面影响，基因型147/161对净肉率存在一定的正效应；孙业良等［4］研究了微卫星标记与肉用品系中国美利奴羊体重的相关性，结果表明：10个微卫星座位都呈高度多态，可作为有效的遗传标记用于绵羊品种之间遗传多样性和生产性能的相关性分析；微卫星标记OARJMP8的基因型131/145和微卫星标记OARHH35的基因型123/155对体重存在正相关性；赵玉民等［5］研究了草原红牛及其杂种牛微卫星标记与生产性能的关系，结果表明：微卫星标记TGLA44的等位基因E （221bp ）对体重有正面影响，微卫星标记BM1824的等位基因A （179bp ）对十字部高性状有正效应，等位基因C （179bp ）对胸深性状有正效应。

【本研究切入点】目前，国内外对绵、山羊的微卫星标记研究报道较多，但对中国美利奴羊（新疆型）的报道较少，中国美利奴羊与德国美利奴羊、中国美利奴羊与萨福克羊的杂交后代的研究还未见报道。

【拟解决的关键问题】研究4个微卫星标记在3个绵羊群体中的遗传多态性，为寻找与生长性状相关的遗传标记提供前期基础。

1材料与方法1．1材料1．1．1样本采集在新疆伊犁美利奴公司羊场，选取中国美利奴羊（新疆型）（ZM ）、中国美利奴羊（新疆型）与德国美利奴羊的杂交后代（ZD ）、中国美利奴羊（新疆型）与萨福克羊的杂交后代（ZS ）各50只，颈静脉采血5mL /只，柠檬酸钠抗凝，于－20ħ冰箱保存备用。

1．1．2试剂2ˑTaq PCR Green Mixture 、N ，N ，N ，N＇－四甲基乙二胺（TEMED ）、Tris 饱和酚、Marker 、三羟甲基氨基甲烷（Tris ·Cl ）、乙二氨四乙酸二钠（EDTA －Na 2）、N ，N＇－亚甲双丙烯酰胺（Bis ）、过硫酸铵、硝酸银、琼脂糖、溴化乙锭（EB ）、无水乙醇、丙烯酰胺、氯仿异戊醇（24ʒ1）、6ˑLoading Buffer 缓冲液。

1．1．3仪器设备电泳仪、水平及垂直电泳槽、PCR 仪及凝胶成像系统。

1．1．4微卫星标记的选择·411·1期秦崇凯等：中国美利奴羊（新疆型）及其杂交后代群体遗传多态性研究根据微卫星选择标准，并参考前人研究结果［6 9］，在Genbank 中查找绵、山羊的微卫星标记，筛选出与绵、山羊生产性能相关的4个微卫星标记（MAF70、BM1824、OARHH35、OARJMP8）。

1．2方法1．2．1基因组DNA 提取采用常规酚－氯仿抽提法［10］提取基因组DNA ，将提取的基因组DNA 溶于TE 液中，置37ħ直至DNA 完全溶解，0．8%琼脂糖凝胶电泳检测其质量，符合要求的，于－20ħ冰箱保存备用。