功效成分检测方法
高效液相色谱法在几种中药制剂有效成分含量测定中的方法分析
世界最新医学信息文摘 2019年 第19卷 第74期119投稿邮箱：zuixinyixue@·药物研究·高效液相色谱法在几种中药制剂有效成分含量测定中的方法分析白少静，徐晓阳，武晓媛，李晶晶（神威药业集团有限公司，河北 石家庄 051430）0 引言中药制剂是当前临床常见的一种药物制剂，且不良反应较少，治疗效果好，但是制作过程十分繁琐复杂，一旦制剂成分和剂量控制偏差，极易严重降低制剂质量，因此需要选择一种准确的质量检测方法，合理评估中药制剂的质量、成分，保证中药制剂有效性和安全性，如下主要介绍高效液相色谱法在几种中药制剂中的测定。
1 在羚羊清肺散4种有效成分含量测定中的应用羚羊清肺散是一种具有化痰息风、凉血解毒、清热泻火等功效的中药制剂，当前，许多文献报报告仅对其显微特征进行研究，未深入分析其有效成分含量[1]，因此需要采用高效液相色谱法中的双波长HPLC 法测定羚羊清肺散中的甘草苷（镇痛、改善肝功能、抗菌、抗溃疡、抗肿瘤）、芍药苷（调节免疫、抑制肿瘤、抗伤害性疼痛、保护神经）、栀子苷（保肝利胆、抗氧化、抗炎、抗菌）、绿原酸（利胆降糖、抗氧化、抗病毒、抗菌、增强免疫）等四种有效成分含量，即采集羚羊清肺散中的上述四种有效成分，采用双波长HPLC 法进行线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、回收率试验、样品含量测定，同时优化了色谱条件与样品提取条件，结果显示，双波长HPLC 法具有重复性好、准确性高、操作简便、快速等特点，能为羚羊清肺散多项指标质量控制提供科学的参考和指导。
2 在疏风散热胶囊4种有效成分含量测定中的应用疏风散热胶囊中含有12味药材，发挥着疏风散热、清热解毒的药效，其中主要包括牛蒡苷、甘草苷、栀子苷、绿原酸等四种有效成分，多适用于咽喉疼痛、咳嗽口干、发热头痛、风热感冒等症状，为了强化控制该产品质量，需采用HPLC 法测定疏风散热胶囊上述四种有效成分，即采集疏风散热胶囊中的牛蒡苷、甘草苷、栀子苷、绿原酸等四种有效成分，应用HPLC 法进行线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加标回收率试验、样品含量测定，同时考察了样本提取时间、温度、料液比等对提取率的影响，经过波长切换与梯度洗脱，实验结果表明，HPLC 法中的响应曲面法优选4种成分，分析结果合理，数据模型可靠，且预测结果与实际值相比，偏差较小，且方法回收率较高、准确，可给予疏风散热胶囊后续研究准确的参考和指导。
皮肤护理产品的功效与安全性评价方法研究综述
皮肤护理产品的功效与安全性评价方法研究综述随着人们对皮肤健康意识的提升，皮肤护理产品在市场上的需求越来越大。
然而，随之而来的是市场上涌现出了大量品牌和产品，消费者很难辨别其功效和安全性。
因此，对于皮肤护理产品的功效和安全性进行评价研究就显得尤为重要。
本文将对皮肤护理产品的功效与安全性评价方法进行综述，以帮助消费者做出明智的选择。
一、功效评价方法1. 临床试验临床试验是评价皮肤护理产品功效的一种主要方法。
通过对被试者进行长期观察和记录，可以评估产品在改善皮肤质量、提供抗衰老、抗炎症等方面的效果。
常见的临床试验指标包括皮肤水分含量、弹性、色素沉着、皱纹减少等。
2. 体外实验体外实验是通过模拟皮肤外界环境，评估产品对皮肤的影响。
常用的体外实验方法包括活性成分的渗透性测试、角质层屏障功能的评估、抗氧化活性的检测等。
这些实验可以帮助我们了解产品对皮肤屏障的保护程度，以及抗氧化能力等。
3. 生物学检测生物学检测是通过评估皮肤细胞及其组分的生物学变化来评估产品的功效。
通过观察皮肤细胞的生长、分化和代谢状况，可以判断产品对细胞的活力、自愈能力等的影响。
生物学检测能够提供更准确的评估结果，但其费用相对较高。
二、安全性评价方法1. 皮肤测试皮肤测试是评估皮肤护理产品安全性的重要手段之一。
常用的皮肤测试包括皮肤刺激性和过敏性测试。
通过将产品在人体皮肤上涂抹或接触，观察皮肤的反应以判断产品是否会引起刺激或过敏反应。
2. 细菌学测试细菌学测试是评估产品防腐能力和抑制细菌生长的关键方法。
常用的细菌学测试包括抑菌圈试验、最小抑菌浓度试验等。
通过这些测试可以判断产品对常见细菌的杀菌效果，并评估其抗菌能力。
3. 毒性学测试毒性学测试是评估产品对人体其他器官和系统的影响的重要方法。
常用的毒性学测试包括眼刺激、皮肤吸收性、口服毒性等。
通过这些测试可以评估产品对人体的潜在风险，避免不良反应的发生。
总结：为了确保皮肤护理产品的功效和安全性，可通过临床试验、体外实验和生物学检测等方法评价产品的功效；而通过皮肤测试、细菌学测试和毒性学测试等方法来评估产品的安全性。
中药大黄的成分检测方法研究
中药大黄的成分检测方法研究中药大黄不仅仅是中药材同时也可作为食材，在使用的过程中为了保证药品的纯度在对其进行检测时可利用现代科技技术。
本次研究的目的则是分析中药大黄的几种检测方法。
标签：中药；大黄；检测方法；成分在中药中大黄是常见且常用的一种药材，应用范围较广，大黄具有斜热通肠、凉血解毒、祛瘀等功效[1]。
大黄的应用价值比较高，分布在四川、甘肅等地区，然而大黄的种类比较多，但是能用的却比较少。
1 HPLC检测法流动相为甲醇-1.0%冰醋酸，在430 nm下进行检测，在图谱中有23个共有峰，针对12个来自不同产地及不同时间段收集样本来说其相似度>90%，在检测中药大黄成分时具有专属性指纹图谱的优势。
利用微乳电动毛细管色谱法对来源不同掌叶大黄监理指纹图谱，采用没有经过图层的石英毛细管柱，以SDS、正丁醇、硼砂溶液与正辛烷作为缓冲液，再添加由乙腈组成的O/W型微乳体系，将分离电压及检测波长分别设置为18 kV及280 nm。
在检测完成之后通过聚类分析及相似度对其进行分析，然后将研究的掌叶大黄分为道地药材、一般药材及次品[2]。
在确定大黄指纹图谱共有的模式之后，利用HPLC法对掌叶大黄不同炮制品水提取物的指纹图谱，再根据灰关联度分析的方法对止血谱效的关系进行分析。
大黄经炮制后鞣质类成分及蒽醌类成分的含量变化对大黄止血效果有着重要的影响作用。
当以流动相为乙腈-水-1%冰醋酸时，在254 nm之下可有效的反应出了大黄中含有的化学成分指纹图谱，因此可确定大黄指纹图谱最佳进样量时61.35 ug。
2 薄层扫描色谱法利用超临界流体萃取薄层色谱扫描方法对大黄中所含大黄素进行测定，超临界流体萃取技术具有提取物纯净的优势，可以直接分析点样。
使用薄层层析方法分离大黄中游离型及结合型蒽醌类，然后再利用薄层扫描的方法对其含量进行测测定。
在硅胶G层上使用正己烷-乙酸乙酷-甲酸对生大黄、熟大黄及配方颗粒中的大黄素进行测定，同时使用双波长薄层扫描仪进行测定。
保健食品安全性评价及功效成分检测
2
急性毒性实验：
LD50；联合急性毒性；一次最大耐受实验。
遗传毒性实验：
体内与体外相结合。体细胞和生殖细胞相结合。 Ames实验；骨髓细胞微核实验 （染色体畸变实验）。 精子畸形实验或睾丸染色体畸变分析
30天喂养实验： 传统致畸实验：
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3
亚慢性毒性实验：
90天喂养实验、繁殖实验、代谢实验
以LD50或30天喂养实验的最大未观察到有害剂量设计剂量组， 如任何一组有致畸作用，则放弃该受试物为保健食品。如发现 胚胎毒性，应进一步繁殖实验。
5）90天喂养，繁殖实验
国内外部分地域有食用历史的
最大未观察到有害剂量>人体推荐剂量的100倍，可结合其他实 验结果作出安全性评价
最小观察到有害剂量<人体推荐量100倍，或观察到毒性的最小 剂量组在饲料中的比例<10%，且剂量<100倍人体剂量，应放 弃该受试物为保健食品
13
5.受试物（样品）的处理
1）介质的选择 2）摄入量较大的受试物 3）袋泡茶类 4）膨胀系数高的样品 5）含乙醇的样品 6）含营养素的样品 7）益生菌2020/7/16
传统食品（包括药食同源种类）为原料，用水以外溶剂提 取生产的，使用剂量为常规剂量的。
C)需要进行第1、2阶段毒理学实验的
1)传统食品（包括药食同源种类）为原料，使用传统工艺 （如用水提取）生产的，使用剂量超过常规剂量的
2)传统食品（包括药食同源种类）为原料，用水以外溶剂提 取生产的，使用剂量超过常规剂量的。（必要时加做传统 致畸实验和第三阶段毒性实验）
慢性毒性实验：包括致癌实验
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2.实验原则
根据原料的种类和使用剂量来确定
茶叶中老白茶酮检测方法
茶叶中老白茶酮检测方法1.引言1.1 概述茶叶中的老白茶酮是茶叶中一种重要的活性成分，具有广泛的药用和保健价值。
老白茶酮具有抗氧化、抗菌、抗炎等多种功效，对人体健康有着重要的积极影响。
因此，对茶叶中老白茶酮的检测方法的研究和改进是很有必要的。
然而，目前已有的老白茶酮检测方法存在一些问题和不足之处。
传统的检测方法比较复杂，耗时耗力，且存在一定的误差。
这些方法通常需要使用昂贵的仪器设备，限制了其在实际应用中的推广和应用。
因此，寻找一种更加简单、快速、准确的老白茶酮检测方法是非常有必要的。
本文旨在总结已有的老白茶酮检测方法的优点和不足，并提出一种改进的老白茶酮检测方法。
通过研究和分析不同的老白茶酮提取和分析技术，探讨其在茶叶中的含量分析和测定中的应用前景。
同时，本文还将尝试利用新的仪器设备和分析方法，提高老白茶酮检测的准确性和效率。
通过本文的研究和探讨，将不仅有助于进一步认识老白茶酮在茶叶中的重要性，也将为茶叶生产和加工提供科学依据和技术指导。
最终，将推动老白茶酮检测方法的改进和应用，促进茶叶行业的发展，提升茶叶产品的质量和市场竞争力。
1.2文章结构1.2 文章结构本文主要介绍了茶叶中老白茶酮检测方法。
下面将对全文的结构进行详细说明：引言部分（Section 1）：该部分主要包括概述、文章结构和目的。
首先将简要介绍老白茶酮及其在茶叶中的重要性和应用价值，引发读者对老白茶酮检测方法的关注。
然后，说明本文的整体结构，以及各个章节的主要内容。
最后，明确本文的目的，即提出改进的老白茶酮检测方法。
正文部分（Section 2）：该部分分为两个小节，分别介绍了老白茶酮的意义和应用，以及已有的老白茶酮检测方法。
首先，在2.1小节中，详细阐述老白茶酮在茶叶中的重要性和广泛应用的领域，包括其对人体健康的益处和茶叶品质的影响。
然后，在2.2小节中，对已有的老白茶酮检测方法进行综述，包括传统的分析方法和近年来发展起来的先进技术。
保健食品功效成分及卫生指标检验规范
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膳食补充剂:维生素（A B1 B2 B6 B12 C D E 叶酸 烟酸 泛酸 肌醇）
元素（Ca Fe Zn Mn Mg Se I Cl K Na P ）
脂肪酸: DHA EPA DPA 角鲨烯 亚麻酸
皂甙类:
黄酮类:
附表1：下列类型的产品、或下列原料为主的产品指标检测项目表 产品类型 1 固体 检测项目 水分、灰分
2
3 4 5 6
口服液
海产品 鱼油类 茶叶 红曲
可溶性固形物、ｐＨ
镉(多氯联本) 酸价、过氧化值（降血脂类产品需 检测胆固醇） 有机氯农药残留（六六六、滴滴涕） .桔青霉素
7
中药材
汞、六六六、滴滴涕
2
2.3
基本要求
凡使用有机溶剂提取物为原料的产品，其 使用的有机溶剂要符合 GB2760 附录 D 食品工业用 加工助剂推荐名单要求(101种)。
保健食品应具有与产品配方和申报的保健 功能相适应的功效成分或特征成分，申报时须检 测配方中主要原料所含的功效成分或特征成分。 附表 2 所列原料为主的产品须检测表中规定的项 目。
红景天类 芦荟类 大蒜类 螺旋藻类
红景天甙 芦荟甙 大蒜素 蛋白质、胡萝卜素、维生 素B1、维生素B2 茶多酚
9
茶叶类
10
11 12 13
魔芋类
纤维素类 磷 脂 类 （原料） 红曲类
膳食纤维
膳食纤维 丙酮不溶物、乙醚不溶 物等 洛伐它丁
14
15
植物油类
动物油类
脂肪酸、维生素E
脂肪酸
16 17
初乳类 鹿血类
2 基本要求
保健食品的检测
二、卫生指标检测
卫生指标：理化卫生指标；重金属；农药残留；霉菌或其他天然毒素。根据产品 形态，按照卫生部《保健食品通用卫生要求》进行规定；根据所用的主要原料，按 照该原料的相应标准进行规定。
饮液
铅（以 Pb 计） 砷（以 As 计） 汞（以 Hg 计）
表 2 理化指标
固体饮料 1
胶囊 2
≤ 0.5
≤ 0.5（≤ 0.2）
≤0.3
≤ 0.3（≤ 1.0）
－
－（≤ 0.3 ）
≤ 1.5（≤ 2.0） ≤ 1.0 －（≤ 0.3 ）
食品添加剂 其他污染物
按 GB2760 执行 以原料或产品按有关食品卫生标准执行
表 3 下列类型的产品、或以下列原料为主的产品指标检1 固体
水分、灰分
2 口服液
可溶性固形物、pH
3 海产品
镉
4 鱼油类
酸价、过氧化值（降血脂类产品需检测胆固醇
有机氯农药残留（六六六、滴滴滴）
5 茶叶
黄曲霉毒素 B1、桔青霉素
6 红曲
汞、六六六、滴滴滴
7 中药材
展青霉素
8 苹果、山楂
甭解时限
9 片剂和胶囊
违禁药物
10 抗疲劳、减肥和改善生长发育
的产品
三、微生物指标检测
需检测特征成分
产品中标识的营养素（维生素、矿物质） 皂甙 多糖 腺苷 红景天甙 芦荟甙 大蒜素 蛋白质、胡萝卜素、维生素 B1、维生素 B2 茶多酚 膳食纤维 膳食纤维 丙酮不溶物、乙醇不溶物等 洛伐它丁 脂肪酸、维生素 E 脂肪酸 免疫球蛋白 蛋白质、氨基酸 锰、蛋白质 蚓激酶、蛋白质 蛋白质、氨基酸 角鲨烯 10-羟基癸烯酸 总黄酮 脱乙酰度 蛋白质、氨基酸 褪黑素 产品原料（褪黑素）需提供原料纯度 证明并检测
保健食品中吡啶甲酸铬的测定
保健食品中吡啶甲酸铬的测定1 范围本方法规定了保健食品中吡啶甲酸铬含量的测定方法。
本方法适用于吡啶甲酸铬作为功效成分添加于片剂、胶囊等试样类型中含量的测定。
本方法的最低检出量10.0mg/kg。
本方法的最佳线性范围：2.00～100μg/mL。
2 原理将粉碎的胶囊或片剂试样使用甲醇：水＝1：1进行提取和稀释，根据高压液相色谱紫外检测外标法定性定量检测。
3 试剂（1）甲醇:优级纯。
（2）磷酸氢二钾、磷酸二氢钾:分析纯。
（3）吡啶甲酸铬标准溶液:准确称量吡啶甲酸铬标准品0.0100g，加入甲醇：水＝1：1并定容至100.0mL，如有少量残渣，可使用超声波加速溶解。
此溶液每mL含100μg吡啶甲酸铬。
4 仪器设备（1）高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV）。
（2）超声波清洗器。
（3）离心机。
5 分析步骤（1）试样处理：取20粒片剂或胶囊试样进行粉碎或混匀，准确称取一定量试样于刻度试管中，加入甲醇：水＝1：1并定容至20.0mL，超声提取5min后以3000rpm/min离心3min。
经0.45μm滤膜过滤后，备用。
（2）液相色谱参考条件色谱柱：C18柱 4.6×250mm。
柱温：室温。
紫外检测器：检测波长254nm。
流动相：0.125mol/L磷酸盐缓冲溶液：乙腈＝425：75。
流速：0.5mL/min。
进样量：10μL。
色谱分析：量取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
（3）色谱图（略）（4）标准曲线指备配制浓度为0.0、2.00、5.00、10.0、50.0、100μg/mL吡啶甲酸铬标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。
（5）分析结果表示计算公式：h1×C×VX=——————h2×m×1000式中：X－试样中吡啶甲酸铬的含量，mg/g；h1－试样峰高或峰面积；C－标准溶液浓度，μg/mL；V－试样定容体积，mL；h2－标准溶液峰高或峰面积；m－试样量，g。
国家局关于征求保健食品中大蒜素的测定等15个保健食品功效成分或标志性成分检测方法意见的函
附件：一、保健食品中大蒜素的测定1 范围本方法适用于以大蒜及其制品为原料的保健食品中大蒜素（三硫二丙烯，C6H10S3）的含量测定。
本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0mL时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。
本方法最佳线性范围： 0.320mg/mL～3.00 mg/mL。
2 原理：根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外标法定量。
3 试剂除特殊说明，所用试剂均为分析纯。
3.1 无水乙醇3.2 正己烷3.3标准溶液：称取0.1000g标准品，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。
此溶液可在冰箱中保存七天。
取该溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。
4 仪器4.1气相色谱仪：附氢火焰（FID）检测器4.2数据处理机或积分仪4.3分析天平：万分之一4.4超声清洗机4.5离心机：3000r/min5分析方法5.1试样提取5.1.1固体试样：称取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），加无水乙醇适量，密塞，超声70min，取出冷却，加正己烷定容（调节大蒜素含量约为1mg/mL），振摇，静置分层后，取上层溶液进样。
5.1.2液体试样吸取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），置于分液漏斗中，加5mL 正己烷振摇提取1min ，静置（或离心）分层后，取上层溶液进样。
5.2 气相色谱参考条件5.2.1 色谱柱：HP-5(30m×0.25mm)5.2.2 柱箱温度：100℃（3min ）min)10(℃200℃150℃/min 20℃/min 10−−−→−−−−→−5.2.3 进样口温度：220℃ 5.2.4 检测器温度：250℃ 5.2.5 载气：氮气（1mL/min ）5.2.6 氢气：40mL/min ；空气：400mL/min 5.2.7 进样量：1μL5.3 定性分析：在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。
灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定
《灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定》一、引言在当今社会，随着人们对健康和养生意识的提高，灵芝及其相关产品受到了广泛的关注和青睐。
作为一种珍贵的中草药，灵芝被传统中医视为“仙草”、“灵药”，被认为具有多种保健功能。
而其中的β-葡聚糖成分更是备受瞩目，被认为是灵芝功效的重要成分之一。
对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定变得至关重要。
二、β-葡聚糖的定义和作用1. β-葡聚糖是一种多糖类聚合物，由多个葡萄糖分子通过β-1,3-葡聚糖键和β-1,6-葡聚糖键连接而成。
它存在于许多植物和真菌细胞壁中，包括灵芝。
2. 研究表明，β-葡聚糖具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗病毒等作用，是灵芝保健功效的重要保障。
三、灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定方法1. 具体测定方法包括但不限于高效液相色谱法、紫外光谱法、红外光谱法、核磁共振方法等。
这些方法各有优劣，需要根据实际情况进行选择。
2. 综合考虑测定方法的准确性、灵敏度、稳定性、成本等因素，高效液相色谱法被认为是目前测定β-葡聚糖的最佳方法。
四、灵芝产品中β-葡聚糖的含量标准1. 根据《灵芝孢子粉》（GB/T 21835-2008）标准可以得知，β-葡聚糖的含量是灵芝产品质量的重要指标之一。
通常，β-葡聚糖含量越高，产品的保健功效也越明显。
2. 目前，市场上灵芝产品的β-葡聚糖含量参差不齐，对其进行准确测定有助于消费者选择高品质的产品。
五、结语通过对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定方法和含量标准的了解，我们可以更好地认识灵芝产品，选择高质量的产品，并更好地享受灵芝的保健功效。
在未来的研究中，还需要不断完善测定方法，并建立更为科学的含量标准，以推动灵芝产品行业的健康发展。
个人观点：作为一名研究者，我认为对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定是非常重要的。
只有通过科学的手段对其进行准确测定，才能更好地保障消费者权益，促进行业良性竞争，推动灵芝产品的健康发展。
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粗多糖测定方法第一法本方法参照《保健食品功效成分检测方法》（王光亚、白鸿主编）中“粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法”的方法测定。
1.主要仪器（1）离心机：4000r/min（2）离心管：50ml（3）分光光度计（4）水浴锅（5）漩涡混合器2.试剂实验用水为双蒸水，所用试剂为分析纯级。
（1）无水乙醇（2）80%（V/V）乙醇溶液（3）葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的分析葡萄糖0.5000g加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（0.1mg/ml）。
（4）5%苯酚溶液（W/V）：称取精制苯酚5.0g,加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置于冰箱中可保存一个月。
（5）浓硫酸（比重1.84）。
（6）0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）：31.5ml（0.2mol/L）磷酸氢二钠与68.5ml（0.2mol/L）磷酸二氢钠混合。
3.测定步骤（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品1.0~2.0g，置于100ml容量瓶中，加水80ml左右，于沸水浴中加热1小时，冷却至室温后补加水至刻度（V1）。
取50ml上述提取液置于100ml具塞锥形瓶中，加1ml 10%淀粉酶液和0.5ml 0.2M磷酸盐缓冲液，加塞，置55℃~60℃酶解1小时，再加约为样品体积1%的葡萄糖苷酶于60℃以下再水解1小时候取出（用碘液检验是否水解完全，如不完全可延长水解时间至酶解液加碘液不变蓝色为止），于电炉上小心加热至沸腾做灭酶处理，冷却至室温，定容至100ml，过滤，取滤液沉淀粗多糖。
（2）沉淀粗多糖：准确吸取上述滤液5.0ml（V2），置于50ml离心管中，加入无水乙醇20ml，混匀，与4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min 离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。
残渣用水溶解并定容至10~25ml（V3）（根据糖浓度而定），供测定用。
（3）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml（相当于葡萄糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0，06mg、0.08mg、0.10mg）置于25ml比色管中，补加水至2.0ml，加入5%苯酚溶液1.0ml，在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10ml，在旋涡混合器上小心混匀，置沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
（4）样品测定：准确吸取样品测定液适量（V4）（含糖0.02~0.08mg）置于25ml比色管中，补加水至2.0ml，然后按（3）法测定吸光度值。
从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算样品中粗多糖含量。
4.结果计算m1×V1×V3X= ×0.9×100m2×V2×V4式中X——样品中粗多糖含量[mg/100g(ml)]；m1——样品测定液中葡萄糖的质量（mg）；m2——样品质量（g或ml）；V1——样品提取液总体积（ml）；V2——沉淀粗多糖所用样品提取液体积（ml）；V3——粗多糖溶液体积（ml）；V4——测定用样品液体积（ml）；0.9——葡萄糖换算为粗多糖的系数。
第二法按《保健食品功效成分检测方法》（王光亚、白鸿主编）中“葡聚糖的分光光度测定法”的方法测定。
本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量10000以上的水溶性粗多糖的测定。
本法最低检出限为5.0mg/L。
5.方法提要食品中相对分子质量大于1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
6.主要仪器1）分光光度计2）离心机（3000r/min）3）旋涡混合器7.试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
1）乙醇溶液（80%）：200ml水中加入无水乙醇80ml，混匀。
2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L。
加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
3）铜试剂储备液：称取3.0g五水硫酸铜，30.0g枸橼酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50ml，加水50ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g 并使其溶解。
临用新配。
5）洗涤剂：取水50ml，加入10ml铜试剂溶液、50ml氢氧化钠溶液，混匀。
6）硫酸溶液（10%）：取100ml浓硫酸加入到800ml左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存一个月。
8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5×105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1ml含10.0mg葡聚糖。
9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1ml含葡聚糖0.10mg。
8.测定步骤8.1样品处理8.1.1样品提取：称取混合均匀的固体样品2.0g,置于100ml容量瓶中，加水80ml左右，于沸水浴上加热2小时、冷却至室温后补加水至刻度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。
8.1.2沉淀粗多糖：准确吸取样品提取中终滤液5.0ml或液体样品5.0ml，置于50ml离心管中，加入无水乙醇20ml，混匀5min后，以3000r/min离心5min，弃去上清液。
残渣用80%(体积分数）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作3-4次。
残渣用水溶解并定容至5.0ml，混匀后供沉淀葡聚糖。
8.1.3沉淀葡聚糖：准确吸取沉淀粗多糖后的终溶液2ml，置于20ml离心管中，加入100g/l 氢氧化钠溶液2.0ml、铜试剂溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min,弃去上清液。
残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10%（体积分数）硫酸溶液2.0ml溶解并转移至50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
此溶液为样品测定液。
8.2标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0ml、0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.0ml（相当于葡聚糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg），分别置于25ml比色管中，准确补充水至2.0ml，加入50g/L苯酚溶液1.0ml，在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10.0ml，于旋涡混合器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
以葡聚糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
8.3样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL，置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量。
同时做样品空白试验。
9.结果计算(m1-m2)×V1×V3×V5X=m3×V2×V4×V6式中X——样品中粗多糖含量（以葡聚糖计）（mg/g）m1——样品测定液中葡聚糖的质量（mg）m2——样品空白液中葡聚糖的质量（mg）m3——样品质量（g）V1——样品提取液总体积（ml）V2——沉淀粗多糖所用样品提取液体积（ml）V3——粗多糖溶液体积（ml）V4——沉淀葡聚糖所以粗多糖溶液体积（ml）V5——样品测定液总体积（ml）V6——测定用样品测定溶液体积（ml）10.准确度与精密度在不同食品中进行不同浓度的加标回收实验，回收率为87.8%~110.87%，不同实验室对同一样品进行10次测定结果的相对标准偏差为5.8%。
11.注意事项本方法测定的水溶性多糖含有10个以上单糖残基。
在测定过程中应避免糖和其他碳水化合物的污染，因为苯酚—硫酸与糖和碳水化合物起反应。
某些保健食品中功效成分为醇溶性多糖，可参照本方法进行测定，但样品预处理时将乙醇改为丙酮即可。
洗涤粗多糖沉淀时，一定要将离心管壁上玷污的其他糖分和碳水化合物用80%乙醇洗净，否则结果偏高。
此法适用于测定高分子量的糖类物质（>10000Da）。
低聚木糖的测定1.试剂（1）4mol/L硫酸：98%硫酸用水稀释而成，并标定校准浓度；（2）40%氢氧化钠：取40.0g氢氧化钠，加入100ml水溶解即可；（3）无水乙醇（AR）；（4）乙腈（色普级）；（5）0.45μm水相过滤膜。
2.仪器及色谱条件（1）仪器高压液相系统（515高压泵、7725进样阀、柱温箱、2414示差折光检测器、色谱工作站），真空泵或电吹风。
（2）色谱条件色谱柱：Waters Carbohydrate High Performance 4μm 4.6×250mm Cartridge流动相：乙腈：水=75：25（V/V）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；示差检测器温度：35℃。
进样量：20.0μl3.样品处理（1）取约1.0g样品于50.0ml小烧杯中，加10.0ml水溶解样品，并转入50.0ml容量瓶中，再加水5.0ml洗涤烧杯并全部转入容量瓶中，最后用无水乙醇定容至刻度，摇匀离心（4000r/min，10min），取上清液15.0ml于小烧杯中用电吹风（不大于50℃）吹赶尽乙醇，用水溶解定容至15.0ml。
（该溶液为样品水解前上机测定溶液M1）（2）取10.0ml于水解管中，加入4mol/L硫酸1.80ml，摇匀，于100℃水解2小时，冷却；用40%氢氧化钠中和（pH值5-7），加水定容至25.0ml的容量瓶中，摇匀，取上清液2.0ml，用无水乙醇定容至10.0ml刻度摇匀离心，取上清液8.0ml于小烧杯中，电吹风吹干；加水溶解，定容2.0ml，用0.45μm水相膜过滤。
（该溶液为样品水解后上机测定溶液M2）。
4.上机测定样品的体积：V1（ml）=50mlV2（ml）=156.25ml5.计算标准样品：取纯度为99.5%木糖75.0mg于25.0ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，制成3.0mg/ml木糖标准品溶液，备用。