不同产地的知母中芒果苷和多糖的含量测定

不同产地的知母中芒果苷和多糖的含
量测定
【摘要】目的考察不同产地知母中芒果苷、多糖的含量。

方法采用HPLC 法测定不同产地知母中芒果苷的含量；采用硫酸蒽酮法测定不同产地知母中多糖的含量，色谱柱迪马C18柱250 mm×4.6 mm。

流动相为甲醇-3％醋酸溶液
（45:55），流速为1.0 ml・min-1，柱温为室温。

结果河北、安徽、广东知母中芒果苷的含量为0.50%～1.18％，回收率为101.54％，RSD为2.33%(n= 6)；芒果苷的线性范围为1.29～7.74 μg (r=0.999 5)；河北、安徽、广东知母中的多糖含量为0.52%～1.91%，回收率为99.15％，RSD为1.94%(n = 6)。

结论各产地知母中芒果苷及多糖含量间变异较大；以河北知母中芒果苷最高，以广东知母多糖含量最高。

【关键词】知母；芒果苷；多糖；高效液相色谱
知母是百合科Liliaceae植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎，具有清热泻火、生津润燥的功效，用于治疗外感热病、高热烦渴、肺热燥咳、骨蒸潮热、内热消渴、肠燥便秘［1］。

知母的主要有效成分为知母皂苷及多糖，具有免疫活性、抗菌活性，有抗氧化、抗糖尿病、抗肿瘤作用，对血脂质有抑制效应，有护肝、抗肥胖效应，在骨吸收方面有重要的抑制效应等［2］。

知母虽为单一品种，但分布较广，各地产药材之间品质差异较大。

本文采用了高效液相法及比色法检测比较了3个产地知母中芒果苷及多糖的含量，为更好地控制知母的质量提供了依据。

1 仪器与材料
1.1 仪器岛津CBM-10A VP plus液相仪，岛津AUY120分析天平，RE－2000旋转蒸发器（上海亚生化仪器厂），HHS精密恒温水浴锅（江苏金坛市医疗仪器厂），unic uv-2100紫外分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）。

1.2 材料芒果苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号
110704��200509）；香兰素（国药集团化学试剂有限公司，批号20050718）；甲醇（色谱纯，德国Merck公司）；乙醇、氯仿、丙酮、高氯酸（分析纯，天津大茂化学试剂厂），不同产地的知母药材购自广州清平市场，经广州中医药大学中药鉴定教研室徐鸿华教授鉴定为百合科知母。

2 方法与结果
2.1 HPLC法测定各产地知母中芒果苷的含量
2.1.1 色谱条件色谱柱为迪马C18柱250 mm×4.6 mm。

流动相为甲醇－3％醋酸溶液（45∶55），流速为1.0 ml·min-1；柱温为室温。

2.1.2 溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取芒果苷4.3 mg于10 ml量瓶中，加甲醇溶解制成0.43 mg/ml的溶液。

供试品溶液的制备：分别称取河北安国、安徽、广东知母粉末（过3号筛）各2.00 g，于25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，超声30 min，放冷，用甲醇补足失重，摇匀，0.45 μm滤膜滤过。

2.1.3 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液6.0，9.0，12.0，15.0，18.0 μl，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以芒果苷的含量为横坐标，色谱峰面积的自然对数为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝2E+06X＋
3E+06 ，r=0.999 5。

结果表明，芒果苷对照品在1.29～7.74 μg内呈良好的线性关系（见图1～2）。

2.1.4 精密度实验精密吸取对照品溶液15 μl，重复进样5次，测定峰面积平均值为16 567 992，RSD为1.59％，表明仪器精密度良好。

2.1.5 稳定性实验取广东知母溶液，分别于0， 24， 48 h测定，进样
5μl，结果显示，0， 24，48 h 测定，广东知母中芒果苷的峰面积平均值8171278，RSD为2.72％，表明本品48 h内具有良好的稳定性。

2.1.6 重复性实验取同一批次的广东知母6份，分别独立按供试品溶液制备方法制成样品溶液，在上述色谱条件下测定，测得的平均含量为2.59 mg，RSD 为2.82%。

表明方法重复性良好。

2.1.7 准确度实验取本品粉末（过4号筛）0.50 g，精密称定一定量的对照品，按供试品溶液制备方法制成样品溶液，精密吸取5 μl，在上述色谱条件下测定6次，计算回收率。

结果显示平均回收率为101.54％，RSD为为2.33%，表明芒果苷回收率良好。

图1 芒果苷对照品溶液HPLC图（略）
图2 河北知母药材溶液HPLC图（略）
2.1.8 样品含量测定取各个产地的知母药材3份，精密称定2.00 g，按供试品溶液制备的方法处理，在上述色谱条件下测定。

结果见表1。

结果显示，测得河北安国知母中芒果苷的含量最高，达1.18％，安徽知母与广东知母中芒果苷含量相当，分别为0.50％，0.64％。

2.2 硫酸－蒽酮法测定各产地知母中多糖含量
2.2.1 溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖对照品适量，加蒸馏水溶解，配制成0.2 mg/ml的溶液。

供试品溶液的制备：分别称取河北安国、安徽，广东知母粉末（过4号筛）各2 g，精密称定，置具塞圆底烧瓶中，加乙醇20 ml，90℃水浴回流3次，40 min/次，滤过，药渣晾干，加蒸馏水30 ml，90℃水浴回流3次，2 h/次，合并滤液，旋转蒸发仪浓缩至20 ml，加4倍量乙醇醇沉，离心，沉淀用蒸馏水复溶，sewage 法除蛋白，除蛋白液加4倍量乙醇醇沉，离心，60℃真空干燥得多糖。

称取一定量的多糖，用蒸馏水定容至10 ml，即得。

表1 不同产地知母中芒果苷含量测定结果（略）
2.2.2 线性关系考察精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5，6 ml，分别置于10 ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，再分别从中吸取1.0 ml置具塞试管中，加0.2%蒽酮试剂5 ml，立即摇匀，冷却至室温，显色10 min。

以蒸馏水为空白对照，620 nm处测定吸收，葡萄糖含量为横坐标，吸收度为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程Y=5.928 6X-0.049， r=0.999 4。

结果显示，葡萄糖对照品在0.02～0.12 mg内线性关系良好。

2.2.3 精密度实验取浓度为0.06 mg/ml的对照品溶液，重复测定5次，吸收度平均值为0.30，RSD为0.64％，表明仪器精密度良好。

2.2.4 稳定性实验取样品安徽知母多糖溶液，分别于0， 24 h， 48 h测定，吸收度平均值为0.31，RSD为0.16％，表明本品48 h内具有良好的稳定性。

2.2.5 重复性实验取同一批次的安徽药材6份，按供试品溶液制备方法制成样品测定，测得吸收度平均值为0.31，RSD为0.70%。

表明本法具有良好的重复性。

2.2.6 准确度实验称取安徽知母粉末1 g，加入一定量的对照品，供试品溶液制备方法制成样品。

测得平均回收率为99.15%，RSD为1.94％。

2.2.7 样品含量测定取各个产地的知母药材3份，精密称定2 g，按供试品溶液制备方法制成样品，依法测定，并采用换算因子换算成多糖含量。

结果见表2。

结果表明，广东知母中多糖的含量最高，达1.91％，安徽知母次之，而河北知母中含糖量较低，仅为0.52％。

表2 不同产地知母中多糖含量测定结果（略）
3 讨论
知母根茎中含甾体皂苷约为6％，有知母皂苷A1，A2，A3，A4，B1，B2等。

芒果苷的含量约为1%。

本实验以芒果苷为对照，测得的芒果苷仅河北的超过1％，结合前次实验中测得的知母皂苷及皂苷元的含量，论证了河北知母为道地药材。

多糖广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂。

它能提高机体免疫系统的功能，而对正常细胞没有毒副作用，在抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等药物研究中，多糖类药物的研制已成为当今世界新药的发展方向之一［3］。

不同产地的多糖含量存在显著差异，以广东知母中多糖的含量最高。

【参考文献】
［1］国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：148．
［2］杨丽蓉. 知母化学成分及药理作用的研究进展［J］.国外医学・中医中药分册，2002，24（4）：207.
［3］邓小云，丁登峰，戴美红，等.植物多糖药理作用研究［J］.中医药导报，2006，12（9）：86.。