HPLC法测定芒果苷苷元的油水分配系数
HPLC法测定知母药材及其相关制剂中芒果苷和新芒果苷的含量
ｌ ｅｒ ｅ ｅｎ２４ ４ ．０ ・ ｌ （ｒ＝ ．９ ）０９ ３ ．０ ・ ｌ （ ０９ ９１ ， ｓｅｔ ｅ ． ｏ ｃ ｓ ｎ ｍ ｓ ｉ ａ ｔ ｅ ．５— ９０ ｍ ｎ ｂｗ ０ ９９３ ，．９～ ７ ６ｇ ｍ ｒ＝ ．９ ） ｒ ｐｃ ｖｌ Ｃ ｎｌ ｉ ｅ ｉ ｙ ｕｏ
ｉｓＰｒ ｐａ ａ ｉｎ ｂｙ ＨＰＬＣ ｔ ｅ ｒ ｔｏ
ＡＩＷ ｉ ｎ． ｈ ｎ ￣ Ｚ ＨＡＩＨｏ ｇ Ｌｉ ｎ － ①② Ｓ ＵＮ ｉｎ． ①② Ｌ ｅ①② Ｙ ａ —ｉ ｇ ② ＣＨＥＮ Ｗ ａ Ｓ ｅ ｇ Ｌ ａ Ｎａ Ｕ Ｘｉｏ Ｊｎ ①
，
，
，
，
（ Ｄ ｐｒ ｅｔ ｆ ｈｒ ｃｇ ｏｙ Ｓ ｈｏ ｏ ｈ ｒ ａｙ Ｓ ａｇ ａ ２ ０ ３ Ｃ ｉａ ① ｅ ａｔ ｎ ａ ｍ ｏ Ｐ ｍａｏｎ ｓ ，ｃ ｏｌ ｆ ａ ｃ ， ｈｎ ｈｉ ０ ４ ３ ｈｎ ） Ｐ ｍ
现代 中药研究 中心
上海
２０ ３ ； 第 二军医 ０４３③
药 学 部 上海
摘
要： 目的 建立一种高效液相色谱方法测定知母药材及其制剂 中芒果苷和新芒果苷 的含量 。方法
Ｄａ ｏｓＴ 。 ｉ ｎｉ Ｍ Ｃ ｍ ｌ 色谱
芒果苷 和新 芒果
Hale Waihona Puke 柱 （５ ｍｍｘ ． ｒ ５ ２０ ４ ６ ｍ， ａ ｍ） 流动相 ： ； 乙腈一 甲酸 （２ ８ ： ． ） 流速 ：．ｍｌｍｎ 检测波长 ：１ｎ 水一 １ ：８ １７ ； ０ ８ ／ ｉ； ３７ ｍ。结果
远志地上部位芒果苷和总皂苷含量测定研究
远志地上部位芒果苷和总皂苷含量测定研究作者：魏巍刘雅晴田盛吴雪梅王海波来源：《中国民族民间医药·上半月》2020年第10期【摘要】目的：建立远志地上部位的芒果苷和总皂苷含量测定方法，为远志非药用资源开发提供支持。
方法：采用HPLC液相色谱法、比色法分别对远志地上部位芒果苷及总皂苷进行含量测定。
结果：远志地上部位样品总皂苷含量范围是0.30～0.75 mg/g，芒果苷含量范围是8.48～9.19 mg/g。
结论：HPLC液相色谱法、比色法测定远志地上部位中的芒果苷和总皂苷含量的方法简单、可靠。
【关键词】远志;总皂苷;芒果苷【中图分类号】R284.1【文献标志码】A【文章编号】1007-8517（2020）19-0039-04Abstract：Objective To establish a method for the determination of Mangigerin and Total saponins in the above ground part of Radix Polygalae to provide support for the development of non-medicinal resources in Radix Polygalae. Methods The contents of mangiferin and total saponins were determined by HPLC and colorimetric method respectively.Results The total saponins content ranged from 0.30 to 0.75 mg/g， and the range of Mangiferin content was 8.48 to 9.19 mg/g.Conclusion The method determination of Mangiferin and total saponins in Radix Polygalae by HPLC and colorimetric method is simple and reliable.Keywords：Radix Polygalae;Total Saponins;Mangiferin中药远志最早记载于《神农本草经》，列为上品，并被视为养命要药，其性温，味苦、辛，具有安神益智、祛痰、消肿的功效。
RP_HPLC法测定芒果皮中芒果苷
215 精密度试验:取木犀草素272O2葡萄糖苷和蒙花苷混合对照品溶液,在上述色谱条件下,重复进样6次,峰面积的R SD分别为018%与015%。
216 稳定性试验:取样品溶液,于室温下放置,分别在0、2、4、8、16、24h进样,结果表明,木犀草素272O2葡萄糖苷和蒙花苷在24h内稳定,峰面积的R SD分别为210%,013%。
217 重现性试验:精密量取同一样品6份,依“214”项下的方法操作,在上述色谱条件下分析测定。
木犀草素272O2葡萄糖苷平均质量分数0125%,R SD为210%;蒙花苷平均质量分数为1164%,R SD为112%。
218 回收率试验:精密称取适量野菊花药材9份,分别精密加入一定量的对照品,按“214”项下的方法操作,在上述色谱条件下进行分析测定,结果木犀草素2 72O2葡萄糖苷平均回收率为9816%,R SD为118%;蒙花苷平均回收率为9914%,R SD为117%。
219 样品测定:按“214”项下的方法操作,测定9批野菊花中木犀草素272O2葡萄糖苷和蒙花苷质量分数,结果见表1。
3 讨论311 本实验采用了超声提取法考察了水、20%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、95%乙醇的提取效率,结果表明60%乙醇提取效率最高;又以60%乙醇作为提取溶剂比较了回流提取与超声提取两种提取方法,发现回流提取效率大大高于超声提取。
在此基础上,考察了回流提取的次数对实验结果的影响,结果表明回流提取一次即可将药材中木犀草素272O2葡萄表1 木犀草素-7-O-葡萄糖苷和蒙花苷测定结果(n=3) Table1 D eter m i nation of luteoli n-7-O-glycosideand li nar i n(n=3)产 地木犀草素272O2葡萄糖苷 %蒙花苷 %浙江嘉兴01171141安徽亳州01202163陕西 01241131辽宁 01261163四川 01170139山东 01320137山西 01140136河北 01180119河南 01251164糖苷和蒙花苷基本提取完全。
分配系数的测定
分配系数的测定
1 实验目的：通过实验掌握药物在互不相容的两液相中的分配系数测定方法
2 实验原理：温度，压力一定时，在两种彼此接触而又互不相溶的溶剂之间，溶
质可按一定比例分别溶解。
当分配达到平衡时，两种溶液平衡浓度的比值是一个常数。
分配系数：代表药物在油相和水相中的比例。
是药物制剂中设计处方，开发新药以及临床应用时的重要参数之一。
P＝ C油相 =油相中药物的质量浓度
C水相水相中药物的质量浓度
3 实验内容
（1）试液的配制
精密称取供试品样品12.5mg，置100ml容量瓶溶解定容。
计算精确百分含量。
（2）标准曲线的绘制
精密称取供试品标准品0.015g，置100ml容量瓶中溶解定容，再分取 1.0，
2.0,
3.0,
4.0,
5.0,ml配制成50ml溶液，），蒸馏水为空白，在218nm波长处测其吸收度，将吸收度对浓度回归得标准曲线回归方程。
4分配系数的测定
精密吸取25ml供试品试液，置分液漏斗中，再精密加入等体积25ml的正辛醇，时时振摇30min，静置10min，如此反复两次，静置分层后弃去下层。
精密吸取上层溶液2.5ml配成25ml溶液（稀释10倍）。
取10ml溶液+2ml硫酸铁铵，218nm处测A，代入方程计算浓度，乘以稀释倍数，即得萃取后的C水，计算P值。
5实验结果及数据处理
标准曲线室温
样品编号 1 2 3 4 5 空白浓度（mg/ml）0
吸光度A 0
求出标准曲线回归方程
计算分配系数P=C氯/C水。
RP-HPLC法测定光石韦中芒果苷的含量
RP-HPLC法测定光石韦中芒果苷的含量目的建立光石韦中芒果苷的含量测定方法。
方法采用RP-HPLC法，色谱柱为Agilent TC-C18柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87），流速为1.0 mL/min，检测波长为318 nm。
结果芒果苷在0～2.136 μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为104.24%，RSD ＝0.86%（n ＝6）。
结论本方法灵敏、准确，可作为光石韦的质量控制标准。
[Abstract] Objective To establish a determination method of Mangiferin in Folium pyrrosiae calvatae. Methods RP-HPLC was used with Agilent TC-C18 (4.6 mm×250.0 mm, 5 μm) as analytical column. The mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid (13∶87). The flow rate was 1.0 mL/min, and the detective wavelength was at 318 nm. Results The calibration curve was linear in the range of 0-2.136 μg for Mangiferin. The average recovery was 104.24% with RSD ＝0.86% (n ＝6). Conclusion The method is accurate and reliable, which can be applied to quality control of Folium pyrrosiae calvatae.[Key words] Folium pyrrosiae calvatae; Mangiferin; Determination; RP-HPLC光石韦收载于《广西中药材标准》1990年版，为水龙骨科石韦属植物光石韦Pyrrosia clavata（Bak.）Ching的干燥叶，功效利尿通淋，清热止血，用于热淋、血淋、石淋、小便不通、淋沥涩痛、吐血、衄血、尿血、崩漏、肺热咳喘[1]。
HPLC波长切换法测定银花芒果片中芒果苷、橙皮苷含量
HPLC波长切换法测定银花芒果片中芒果苷、橙皮苷含量目的建立HPLC波长切换法测定银花芒果片中芒果苷、橙皮苷含量的方法。
方法采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 ?m）色谱柱，流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温30 ℃，波长切换时间序列采样（0～20 min为258 nm，20～50 min为283 nm）。
结果芒果苷进样量在0.042～0.761 ?g 范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为99.86%，RSD=1.5%（n=9）；橙皮苷进样量在0.076～1.361 ?g范围内线性关系良好（r=0.999 8），平均回收率为99.91%，RSD=0.7%（n=9）。
结论本方法简便、快捷、准确，可用于该制剂的质量控制。
Abstract：Objective To establish an HPLC method of wavelength switching simultaneous determination for the contents of mangiferin and hesperidin in Yinhua Mangguo Tablets. Methods Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 （4.6 mm×150 mm，5 ?m）column was used. The mobile phase was methanol-water containing 0.2% phosphoric acid with gradient elution mode at the flow rate of 1.0 mL/min；the detection wavelength was 258 nm （0–20 min）for mangiferin，283 nm （20–50 min）for hesperidin. Results Mangiferin had a good linearity in the range of 0.042–0.761 ?g，and the average recovery was 99.86%，with RSD of 1.5% （n=9）. Hesperidin had a good linearity in the range of 0.076–1.361 ?g，and the average recovery was 99.91%，with RSD of 0.7% （n=9）. Conclusion The method is simple，accurate and reproducible，which can be used to the quality control of Yinhua Mangguo Tablets.Key words：Yinhua Mangguo Tablets；mangiferin；hesperidin；wavelength switching银花芒果片是由芒果叶、陈皮、蒲公英、桔梗、金银花、百部、甘草等制成的中药成方制剂，有疏风清热、止咳化痰的功效，临床用于外感风热所致的咽痛、喉痒、咳嗽、上呼吸道感染、急性支气管炎等症，收载于《国家中成药标准汇编内科肺系（二）分册》。
HPLC法测定不同产地知母中芒果苷的含量
样品含量
( mg) 0. 3922 0. 3999 0. 3860 0. 3914 0. 3830 0. 3906
加入量 测得量 回收率
(m g) 0. 3080 0. 3080 0. 3841 0. 3841 0. 4602 0. 4602
(m g) 0. 6917 0. 7045 0. 7604 0. 7647 0. 8458 0. 8303
产地 河北省平山县 河北省蔚县 河北省易县 内蒙古自治区牛家营子 内蒙古兴安盟扎旗 山西省芹池镇 陕西省蒲城县 安徽省亳州市
百分含量 (% ) 0. 66 0. 05 0. 14 1. 60 0. 75 1. 93 0. 35 1. 16
3讨 论
从实验结果来看, 本文所选用的几个产地的知
母均含一定量的芒果苷, 但各产地间的含量差异较 大, 知母传统产地河北几个县的芒果苷的含量并不
注: 与模型对照组对比, * P < 0. 05, * * P < 0. 01; 与微低组对比, # P < 0. 05, ## P < 0. 01。
3讨 论
量效关系。圣愈超微粉颗粒高剂量组和阳性对照组
脂质代谢紊乱可导致动脉粥样硬化的发生, 动 比较, 组间无显著性差异。对血清 H DL-C 含量各组
此结果显示, 知母的品质应重新制定标准, 由于各产
地间芒果苷的含量差异较大, 提示知母药材流通时
须注明产地, 以便更好的控制质量。 本实验采用反相高效液相法 测定芒果苷的含
量, 该方法快速、准确、重现性好, 其中芒果苷与其他
成分能进行较好地分离。
参考文献: [ 1]中华人民共和国药 典委 员会. 中 华人 民共 和国 药典 (一
HPLC-CAD同时测定知母中芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量
·108·t PLQt PLQ %低分子量尿激酶（low molecular mass urokinase） 2.高分子量尿激酶high molecular mass urokinase） 3.未知高分子量物质（unknown high molecular mass substance） 空白溶液（A）和供试品溶液（B）的十二烷基硫酸钠毛细管电 CE-SDS of blank solution （A） and sample solution（B） 线性关系考察取尿激酶适量，分别加水溶解并逐步稀释制成质量浓度分别约为0.2、1.0、2.0、4.0与10 mg·mL-1的溶液，再各取100 μL，分别按“2.2.1.3”项下的方法制备质量浓度约为0.1、0.5、1.0、2.0与5.2 mg·mL-1的系列浓度供试品溶液。
按“2.2.4”项下的电泳条件分别进样测定，以尿激酶质量浓度C（mg·mL-1）为横坐标，高分子量、低分子量尿激酶校正峰面积A为纵坐标，进行线性回归方程，得高分子量、低分子量尿激酶的回归方程分别为：=6 244.843C+2 350.110 r=0.990 9940.378C+170.390 r=0.993 3结果表明，尿激酶的质量浓度在0.1~5.2 mL-1范围内，均与高分子量、低分子量尿激酶校正峰面积呈良好的线性关系。
检测下限和定量下限精密吸取质量浓度为0.05 mg·mL-1的供试品适量，用水逐级稀释，按“2.2.4”项下的色泳条件进样测定，分别按高分子量、低分子量尿激酶=3时测得的尿激酶量作为检测下限，S/N=10时测得的尿激酶量作为定量下限，结果高分子量、低分子量尿激酶的检测下限分别为2.5 μg·mL-1与51.8 mL-1，定量下限分别为7.5 μg·mL-1与155.4Journal of Pharmaceutical AnalysisChinese·110··112·。
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HPLC法测定芒果苷苷元的油水分配系数
摘要采用摇瓶-高效液相法，选择正辛醇-水体系测定芒果苷苷元的油水分
配系数。
用HPLC法测定芒果苷苷元的油水分配系数，方便，简单，准确，对研
究芒果苷苷元在胃肠道的吸收，具有重要的参考意义。
关键词芒果苷苷元；油水分配系数；高效液相法
引言:芒果苷，英文名Norathyriol，系四羟基吡酮的碳糖苷、属双苯吡酮类
化合物，现代药理和临床研究证明，芒果苷具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降尿酸[1]等作用。
芒果苷在肠道细菌的作用下，脱糖代谢为芒果苷苷元，芒果苷苷元在
胃肠道吸收进入血液而发挥药理作用。
芒果苷苷元（Norathyriol）化学名称为：1，3，6，7- 四羟基双苯吡酮。
本文将测定芒果苷苷元的基本理化性质油水分配
系数，为研究芒果苷苷元在胃肠道的吸收和进一步的研究提供参考。
1实验部分
1.1 仪器与试药
仪器：电子天平，pH计，日本岛津20A高效液相色谱仪，低速自动平衡离心机，恒温振荡仪，
药品：芒果苷苷元（批号：20131210 含量98.73% 昆明制药集团股份有限公
司药物研究院制备），
试剂：磷酸二氢，氢氧化钠，磷酸，甲醇，正辛醇，磷酸（色谱纯），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），超纯水。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件
采用Kromasil C18 150×4.6mm，5μm色谱柱，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液（10:30:60）为流动相，检测波长为253nm，进样量为10μL，流速为1.0ml/min。
1.2.2 线性关系的考察
精密称取100.88mg芒果苷苷元对照品，置100ml量瓶中，用甲醇
溶解并定容，制得1.0mg/ml的对照品储备液。
精密量取适量的对照品储备液，
用甲醇稀释成浓度为0.01，0.02，0.05，0.075，0.10，0.15，0.25mg/ml的对
照品溶液，照“1.2.1”项色谱条件测定。
以峰面积为纵坐标、对照品浓度为横
坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=7.133×107x+7.558×104(r=0.99993)。
结论：在浓度10μg/ml-250μg/ml的范围内，线性关系良好。
1.2.3 精密度的考察
取浓度为0.1mg/ml 的芒果苷苷元对照品溶液，按“1.2.1”项下色
谱条件连续进样6次，计算RSD值，芒果苷苷元的平均峰面积的RSD值为0.87%，说明仪器的精密度良好。
1.2.4 不同pH值供试品的制备
取不同体积的0.1mol/L的磷酸二氢钾和0.2mol/L的氢氧化钠，
配制成一系列pH值为2.55，3.48，4.48，5.49，6.49，7.49，8.55的缓冲溶液，然后将不同pH值的缓冲溶液和正辛醇按1:1的比例混匀，37±1℃恒温震荡饱和
24小时，用分液漏斗萃取，所得上层溶液为不同pH值的缓冲溶液饱和的正辛醇，下层溶液为正辛醇饱和过的不同pH值的缓冲溶液。
1.2.5 供试品溶液的制备
称取芒果苷苷元10.75mg，用甲醇溶于100ml容量瓶中并用甲醇稀释定容，
制成储备液。
用移液管分别从储备液中移取5ml到10ml容量瓶中，分别用正辛
醇饱和过的不同的pH值的缓冲液稀释并定容，得到不同pH值的芒果苷元供试液。
精确称取芒果苷苷元对照品10.44mg用甲醇溶于100ml容量瓶中，稀释并定容，
制成对照液。
1.2.6 油水分配系数的测定
取不同pH值供试液和对照品10μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，用外标法精确计算各个芒果苷苷元供试液浓度（Cw）。
然后精密量取已配制好的供试溶液5ml置于具塞锥形瓶中，再分别加入被不同pH的磷酸盐缓冲溶液饱和过的正辛醇各5ml，放入恒温振荡仪中，温度保持(37 ±1)℃，振摇4 h直至平衡，以4000 r/min转速离心10 min，取下层水相清液，用0. 45μm微孔滤膜过滤，取10μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，用外标法精确计算芒果苷在不同pH值缓冲液浓度（Cw’）。
两者之差为芒果苷苷元在正辛醇中的浓度，即在油相中药物的浓度。
根据下式计算芒果苷苷元的油水分配系数。
Po/w=Co/Cw
式中为Co为油相中药物的浓度；Cw为水相中药物的浓度。
其中油相中药物的浓度又等于初始水相中药物的浓度（Cw）与水相中药物的浓度(Cw’)测定后的差值。
然后根据数据计算出log Po /w的数值（如表1），以pH 值为横坐标，以 log Po /w的数值为纵坐标，拟合曲线，得到芒果苷苷元的pH-Po/w的曲线图（如图1）。
由图可以看出，芒果苷苷元在酸性条件下分配系数较大，在
pH2.55-5.49，芒果苷苷元的logPo/w值约为2.00，随着pH值得增大，芒果苷苷元的logPo/w值大幅度减小，在pH值5.49-8.55时，logPo/w值从2.00下降到0.15。
表1 芒果苷元在正辛醇-不同pH值缓冲溶液中的油水分配系数
编号
pH
值
Cw Cw
’
Co Po/
w
log
Po/w
1 2.
55
0.0
5099
0.0
0051
0.0
5048
99.
891
2.0
2
3.
0.00.00.0109 2.0
48512600465080.5584
3 4.
48
0.0
5084
0.0
0050
0.0
5034
100
.120
2.0
4 5.
49
0.0
5088
0.0
0052
0.0
5036
96.
238
1.9
8
5 6.
48
0.0
5092
0.0
0119
0.0
4969
41.
815
0.6
2
67.
49
0.5
072
0.0
0595
0.0
4477
7.5
26
0.8
8
78.
55
0.0
4996
0.0
2084
0.0
2913
1.3
98
0.1
5
图1 芒果苷元pH-logPo/w
2 讨论
本实验用正辛醇作为模拟生物相的有机相，采用正辛醇－水体系[2]。
实验前先用纯水饱和正辛醇，避免实验过程中伴随正辛醇与水的分配过程。
研究表明，药物透皮吸收的最佳Log P为2～3[3]。
本实验测定芒果苷苷元的
油水分配系数，且随pH值的变化，logP的变化较大，在偏酸性的条件下，
pH2.55-5.49，logP约等于2.00，随着pH值得增大，芒果苷苷元的logP值大幅
度减小，在pH值5.49-8.55时，logP值从2.00下降到0.15。
人体胃肠道的pH梯度为：胃中pH1-2,小肠中pH5-8，十二指肠pH5-6，结肠
中pH7-8。
结合本实验，芒果苷苷元在偏酸性环境（如胃）的油水分配系数比偏
碱性环境（如小肠部位）大，因此在酸性条件下细胞的通透性比碱性条件下差，
可以推测出芒果苷苷元的吸收部位主要在小肠部位。
本实验测定芒果苷苷元在不同pH缓冲液中正辛醇-水分配系数，方便，简单，准确，对研究芒果苷苷元在胃肠道吸收，具有重要的参考意义。
参考文献
[1] 牛艳芬，高丽辉，刘旭，等. 芒果苷对氧嗪酸钾所致慢性高尿酸血症
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生出版社，2006:345-346.
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系[J].安徽农业科学, Journal of Anhu iA gr.i S c.i 2010，38( 22)：11985- 11986.。