小麦TaYAB2基因的过量表达造成转基因拟南芥叶片近轴面特征趋向远轴面
TUB4对拟南芥生长发育的影响和TAO1基因新功能分析
TUB4对拟南芥生长发育的影响和TAO1基因新功能分析TUB4对拟南芥生长发育的影响和TAO1基因新功能分析拟南芥（Arabidopsis thaliana）作为模式植物，在生物学研究中被广泛应用。
它具有短的生命周期、易于培养和遗传变异丰富等特点，是理解植物生长发育的重要工具。
植物细胞的合成主要依赖于微管系统。
微管由微管蛋白组成，其中TUB4是微管的主要组成部分。
TUB4在拟南芥的生长和发育中起着重要的作用。
TUB4的缺失会导致植物发育异常，根系生长受限，叶片变小且畸形。
这表明TUB4对于拟南芥的正常生长发育至关重要。
为了进一步研究TUB4在拟南芥中的作用机制，科学家们注释了与TUB4相互作用的基因，其中TAO1（Tubulin Associated Protein of Arabidopsis thaliana）是一个引人注目的基因。
TAO1在TUB4缺失的拟南芥中表达量显著增加，这提示TAO1可能在TUB4调控的生长发育中发挥了重要的作用。
为了进一步验证TAO1在拟南芥生长发育中的作用，科学家们利用基因编辑技术敲除了TAO1基因。
敲除TAO1后，拟南芥株高矮，叶片畸形且茎干变细。
此外，敲除TAO1还会导致拟南芥的生长迟缓，开花时间延迟。
通过对过表达TAO1的转基因拟南芥进行互补实验，科学家们发现过表达TAO1可以恢复拟南芥的正常生长和发育，进一步证明了TAO1在TUB4调控的生长发育中的重要性。
进一步的功能分析显示，TAO1参与多个生物过程。
TAO1调控拟南芥细胞的整合和分化过程，影响细胞形态的建立和维持。
另外，TAO1还调控了植物根系的生长和分枝，与根毛的生长和逆境响应密切相关。
此外，TAO1还参与了激素信号传导途径，影响植物开花时间和果实发育。
这些结果表明TAO1在拟南芥生长发育中具有多个功能，其中许多功能与TUB4密切相关。
综上所述，TUB4对拟南芥的生长发育起着重要的作用，而TAO1是TUB4调控的关键基因之一。
AHA1转基因拟南芥的抗铝性生理解析
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拟南芥转基因
拟南芥转基因
拟南芥是一种模式植物，多年来围绕拟南芥的相关研究很多，尤其是对于拟南芥转基因研究非常热门，相关的论文也有很多。
原因主要有以下几个方面：
1 拟南芥是一种模式植物，基因组小，克隆其基因比较简单。
2 种植方便，条件易得。
3 拟南芥是自花传粉植物，这样既很容易进行遗传分析。
4 方法简单，不同于传统的植物转基因，不需要植物组织培养阶段，对于实验操作的要求不是很高。
当前拟南芥转基因所使用的方法主要是农杆菌介导的转化（载体法），区别主要是转化的方法不同，有抽真空，花序浸染和喷雾法使用最为广泛。
农杆菌介导转化的基本流程
农杆菌（目标载体）液的制备→拟南芥种植→花期（侵染）→共培养→收种→验证
农杆菌制备
1)从—80℃冰箱中取出lml农杆菌。
2)LB培养基中添加50mg/L的卡那霉素(Kan)和100mg/L的利福平(Rif)。
3)把lml农杆菌加入到含有Kan和Rif抗生素的LB培养基中，28℃振荡10h。
4）拟南芥转基因浸润液采用的是1/2MS，加蔗糖50g/L, PH值调至5．7,。
然后在15p 压力下蒸汽灭菌15min，灭菌结束，冷却后保存于4°C，以待转基因使用。
转化
抽真空/花序浸染/喷雾法
其中抽真空法转化效率最高，但是步骤麻烦，而且要将拟南芥倒置浸染到菌液中，操作不方便。
喷雾法相比来说简便易行，而且进行重复浸染，可以提高转化效率。
验证
1.种子筛选，将收到的种子种植于含有筛选剂（卡那霉素/潮霉素等）的培养基上，筛选出抗性幼苗。
2.PCR, 提取拟南芥基因组，进行PCR扩增，核酸电泳观察有无目的基因。
拟南芥莲座叶统计方法
拟南芥莲座叶统计方法拟南芥（学名：Arabidopsis thaliana）是一种常见的模式植物，广泛用于遗传和生物学研究。
其中，叶片是植物最常见的器官之一，它的大小、形态以及数量等特征对于植物的生长和发育起着重要的调节作用。
因此，对拟南芥叶片的统计方法进行研究，有助于我们更好地理解植物叶片发育的机制。
拟南芥的叶片形态多样，有圆形、卵形、椭圆形等多种形状。
其中，叶脉是叶片最具特征的部分，是叶片组织中承担输送水分和养分的主要部位。
因此，叶脉的统计方法是研究拟南芥叶片形态的重要手段之一叶片形态的统计方法可以分为直接测量法和间接测量法。
直接测量法是基于实际测量叶片形态特征的方法，例如测量叶片的长度、宽度和面积等。
间接测量法则是通过测量其他与叶片形态相关的指标来推断叶片形态特征的方法，例如叶片的叶绿素含量等。
直接测量法可以通过使用数码相机拍摄叶片照片，然后使用图像处理软件，如ImageJ或Photoshop等软件，测量叶片的长度、宽度和面积等。
这些软件通常提供了一些测量工具，例如线段工具、多边形工具和圆形工具，可以方便地进行叶片测量。
通过测量多个样本的叶片形态特征，可以得到叶片大小、形状和数量等统计数据。
间接测量法可以通过测量叶绿素含量来推断叶片形态特征。
叶绿素是植物中最常见的绿色色素，它对光合作用起着重要的作用。
通常可以使用叶绿素仪或光谱仪等设备来直接测量叶绿素的含量。
叶绿素含量与叶片的发育状态和形态特征有密切关系，通过测量叶绿素含量可以推断叶片的大小和形状等信息。
除了形态统计方法外，还可以利用遗传学方法来研究叶片的发育和形态。
通过建立突变体库，可以筛选出叶片发育异常的突变体，并通过遗传分析来确定其对应的基因。
这些突变体可以提供有关叶片发育和形态调控机制的重要线索。
总结起来，拟南芥叶片的形态统计方法可以通过直接测量叶片的大小、形状和数量等特征，或者通过测量叶绿素含量来间接推断叶片的形态特征。
这些方法可以为我们更深入地了解拟南芥叶片发育的调控机制提供重要的数据和线索。
作物科学研究进展智慧树知到答案2024年中国农业大学三亚研究院
作物科学研究进展中国农业大学三亚研究院智慧树知到答案2024年第一章测试1.由于物种分化产生的同源基因称为（）。
A:直系同源基因 B:部分同源基因 C:旁系同源基因答案:B2.直系同源基因是由于物种分化产生的，旁系同源基因是由于基因复制产生的。
（）A:对 B:错答案:A3.下面哪几个方面反映了小麦基因组复杂的基因结构（）。
A:小麦不同品种的基因组序列发表 B:染色体上的大片段缺失频繁 C:小麦基因组中局部区间的基因串联重复现象严重 D:不同的染色体间容易发生易位现象答案:BCD4.GWAS基于____，它是由基因组上的DNA序列变异所引起的不同基因型之间的不平衡（）。
A:基因组连锁不平衡 B:基因组编辑 C:人口遗传学 D:表观遗传学答案:A5.常用的作图群体包括（）A:BC3F2 群体 B:F2 群体 C:MAGIC D:RILs答案:ABCD6.GWAS中的“Manhattan plot”是（）A:可以直观展示关联位点在基因组上的分布情况 B:每一个点代表一个变异 C:通常用来筛选显著关联位点 D:用来展示基因型与表型之间的关联情况答案:ABCD7.常见的基因芯片有表达谱芯片、SNP芯片、miRNA芯片等，可以用来检测基因的表达谱、基因突变或多态性分析、miRNA表达谱等（）A:对 B:错答案:A8.下列哪个杂种优势的度量用于描述组合的生产价值（）。
A:超高亲优势 B:中亲优势 C:超低亲优势 D:对照优势答案:D9.有关系统性限制因子的说法正确的有（）。
A:不同背景下重复被鉴定为加性的因子是系统性被限制因子 B:不同背景下重复被鉴定为显性的因子是系统性限制因子 C:不同背景下重复被鉴定为显性的因子是系统性被限制因子 D:不同背景下重复被鉴定为加性的因子是系统性限制因子答案:CD10.杂种所有性状都会比其双亲具有优势。
（）A:对 B:错答案:B11.杂种比纯合亲本具有对环境更强的敏感性。
（）A:对 B:错答案:A第二章测试1.我国现作物育种阶段处于（）。
2024年全国中学生生物学联赛四川省赛区初赛试题及答案解析
１０．在有丝分裂中期，若出现单附着染色体（染色体的着丝粒只与一侧的纺锤丝相连，如下 图所示）细胞将延缓后期的起始，直至该染色体与另一极的纺锤丝相连，并正确排列在赤道 板上。此过程受位于前期和错误排列的中期染色体上的ＭＡＤ？蛋白的监控，正确排列的中 期染色体上没有ＭＡＤ？蛋白。用玻璃微针勾住单附着染色体，模拟施加来自对极的正常拉 力时，细胞会进入分裂后期。下列说法正确的是（ ）
掉ＴｄＲ，重新更换培养液，第二次加入 ＴｄＲ培养一段时间，可使所有细胞都处于Ｇ？／Ｓ交界
处，完成同步化。已知其细胞周期的Ｇ？期、Ｓ期、Ｇ２期、Ｍ期分别为８ｈ，６ｈ，５ｈ、１ｈ。下
列说法错误的是（ ）
Ａ．开始培养时，处于Ｇ？期的细胞约占１／４
Ｂ．第１次加入ＴｄＲ 处理１４ｈ，可使所有细胞都处于Ｇ？／Ｓ交界处或Ｓ期
Ｃ．有些植物的叶片生有茸毛，会增强植物的蒸腾作用，有利于植物对无机盐的运输
Ｄ．在流动空气中，为了减少蒸腾作用，有些植物可能会调节叶片的方向与日光平行
６．高等生物的细胞周期依次为ＤＮＡ合成前期（Ｇ？期）、ＤＮＡ合成期（Ｓ期）、ＤＮＡ合成后
期（Ｇ？期）、分裂期（Ｍ期）。利用人工诱导可以使处于不同分裂时期的细胞处于细胞周期
强度，然后将长势一致的棉花植株随机均分为 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四组，通过不同遮光处理一周 后，测得结果如下表所示。下列分析正确的是（ ）
处理
光照强度（μｍｏｌ／ｍ２－ｓ） 叶绿素含量（ＳＰＡＤ） 净光合作用（ｍｇ．ｇ－１）
无遮光处理（Ａ组）
１２９２．７
４０． ９
２５． ４
红色透光膜（Ｂ组）
４１０．３
４０． ０
ＭＡＰＫＫＫ
植物生理学试题集与题解
第七章细胞信号转导三、名词解释1.信号转导：主要研究植物感受、传导环境刺激的分子途径及其在植物发育过程中调控基因的表达和生理生化反应。
2.受体：受体是存在于细胞表面或亚细胞组分中的天然分子，可特异地识别并结合化学信号物质——配体，并在细胞内放大、传递信号，启动一系列生化反应，最终导致特定的细胞反应。
四、是非题（对的打“√”，错的打“×”）(True or false)1、土壤干旱时，植物根尖合成ABA引起保卫细胞内的胞质钙离子等一系列信号转导，其中ABA是第二信使。
（）2、植物细胞中不具有G 蛋白连接受体。
（）3、G 蛋白具有放大信号作用。
（）4、受刺激后胞质的钙离子浓度会出现短暂的、明显的下降。
（）5、少数植物具有双信使系统。
（）6、钙调素是一种不耐热的球蛋白。
（）7、蛋白质的可逆磷酸化是生物体内一种普遍的翻译后修饰方式。
（）8、植物细胞壁中的CaM促进细胞增殖、花粉管萌发和细胞长壁。
（）1、×2、×3、√4、×5、√6、×7、√8、√六、填空题(Put the best word in the blanks)1、信号传导的过程包括___信号分子与细胞表面受体结合___、__跨膜信号转换_____、____胞内信号转导网络的信号传递______和生理生化变化等 4 个步骤。
2、__信号____是信息的物质体现形式和物理过程。
3、土壤干旱时，植物根尖合成ABA，引起保卫细胞内的胞质钙离子等一系列信号转导，其中_干旱__是信号转导过程的初级信使。
4、膜信号转换通过______细胞表面受体______与____配体_____结合实现。
5、蛋白由__a _、__B __、__r _三种亚基组成。
6、白质磷酸化与脱磷酸化分别由________蛋白激酶____和_____蛋白磷酸酶______催化完成。
7、据胞外结构区的不同，将类受体蛋白激酶分为3 类：1）_ S 受体激酶___,2)___ 富含亮氨酸受体激酶___，3）___类表皮生长因子受体激酶_____。
拟南芥
拟南芥（Arabidopsis thaliana），是一种广泛分布于亚洲、欧洲以及北非地区的小型开花植物。
从分类地位上讲，它属于十字花科(Brassicaceae) 鼠耳芥属(Arabidopsis)。
作为近年来最为广泛应用的模式植物，拟南芥在分子遗传学、植物学以及农业科学的研究中发挥了重要的作用，被称为植物中的果蝇，是目前公认的五大模式生物之一。
拟南芥基因组测序已于2000年由国际合作完成，也是第一种完成全基因组测序和分析的植物。
拟南芥是二年生草本植物，高7～40厘米。
基生叶有柄呈莲座状，叶片倒卵形或匙形；茎生叶较小，无柄，披针形或线形。
叶片表面覆盖有单细胞表皮毛。
总状花序顶生，花朵直径约3mm，花瓣4片，白色，匙形。
长角果线形，长0.5～2厘米，每个含20～30粒种子。
根分为主根和侧根，可容土壤细菌共生。
春型拟南芥萌发后3周左右就可开花，能在6周内完成一个世代。
严格自花传粉（图1）。
拟南芥生活史与一般的开花植物无异：减速分裂形成的大小孢子分别形成雌雄配子体，即胚囊和花粉。
胚囊经过双受精的过程，受精卵与受精极核分别发育成胚和胚乳。
2拟南芥研究的主要策略在拟南芥研究中，使用最多的是遗传学研究策略，包括正向遗传学和反向遗传学。
正向遗传学遵循的是从突变体表型分析到基因功能认识的思维方式，它首先关注的是具有某种缺陷的突变体。
譬如，如果要研究与植物抗旱机理有关的基因调控过程，可以先用化学、物理或者生物的方法将野生型拟南芥诱变，然后在干旱胁迫的条件下进行突变体的筛选。
如果在诱变群体后代中出现了对干旱条件反应不同于野生型的个体(例如比野生型更加抗旱或者不抗旱的植物)，这种个体就是突变体。
这种植物对干旱的不同反应可能就是因为突变体中某一个基因遭破坏后所造成，而这个基因必定与植物的抗旱机制有关。
在得到了这样的一个突变体之后，可以对其中的突变基因进行定位和克隆。
在获得了基因序列后，可以更深入地了解这个基因的功能，并分析它是以何种形式影响了植物的抗旱途径以及与抗旱途径中其他相关基因的关系。
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小麦TaYAB2基因的过量表达造成转基因拟南芥叶片近轴面特征趋向远轴面赵翔宇;谢洪涛;陈祥彬;王帅帅;张宪省【摘要】叶片极性的建立在叶片形态建成过程中有重要作用.探讨小麦叶片发育的调控机制不仅可以丰富植株形态建成的基础知识,也可以为小麦株型的设计提供理论依据.本研究从小麦中分离出一个YABBY基因家族成员TaYAB2,对其序列特征、表达模式及功能进行了分析.该基因编码的蛋白在N端含有C2C2锌指结构域, C端含有YABBY结构域,与拟南芥中AtYAB2和水稻中OsYAB2同源关系较近.RT-PCR结果显示,该基因在大部分组织器官中广泛表达.进一步的原位杂交分析证实TaYAB2基因的转录产物在小麦苗端、幼叶、侧芽、幼穗等组织器官中高水平积累.在拟南芥中过量表达该基因能够引起转基因拟南芥叶片近轴面特征趋向远轴面.与对照相比,转基因植株中远轴面特征决定基因FIL/YAB1、YAB3、KAN1的表达均呈不同程度的上调,表明TaYAB2基因可能通过调节远轴面特征决定基因FIL/YAB1、YAB3、KAN1等调控叶片近-远轴极性.本研究结果有助于揭示YABBY类基因在小麦侧生器官近-远轴极性建立中的分子机制.%10.3724/SP.J.1006.2012.02042【期刊名称】《作物学报》【年(卷),期】2012(000)011【总页数】10页(P2042-2051)【关键词】近-远轴极性;叶片发育;TaYAB2;小麦;转基因【作者】赵翔宇;谢洪涛;陈祥彬;王帅帅;张宪省【作者单位】山东农业大学生命科学学院/山东省作物生物学重点实验室/作物生物学国家重点实验室, 山东泰安 271018;山东农业大学生命科学学院/山东省作物生物学重点实验室/作物生物学国家重点实验室, 山东泰安 271018;山东农业大学生命科学学院/山东省作物生物学重点实验室/作物生物学国家重点实验室, 山东泰安271018;山东农业大学生命科学学院/山东省作物生物学重点实验室/作物生物学国家重点实验室, 山东泰安 271018;山东农业大学生命科学学院/山东省作物生物学重点实验室/作物生物学国家重点实验室, 山东泰安 271018【正文语种】中文叶是植物的重要营养器官之一, 是植株形态建成的重要组成部分, 对植株生长发育有着重要的意义[1]。
在植物发育生物学研究中, 极性建立过程是器官形态建成中的一个核心问题。
为了研究叶片极性建成的机制, 根据叶原基与茎尖分生组织(shoot apical meristem, SAM)的相对位置关系, 科学家定义了叶在空间三维轴向上的极性, 包括基-顶轴(proximaldistal axis)、中-侧轴(medial-lateral axis)和近-远轴(adaxial-abaxial axis)[2-4]。
叶片近-远轴极性的正确建立是叶其他 2个轴向极性建立的前提和后续形态建成的基础[5-7]。
利用模式植物特别是拟南芥(Arabidopsis thaliana L.), 已发现多个转录因子在叶片近-远轴极性建成过程中具有重要作用。
其中, 促进叶片近轴面特征建成的转录因子基因包括ASYMMETRIC LEAVES 1(AS1)、AS2以及HD-ZIP III家族的REVOLUTA (REV)、PHABULOSA (PHB)和 PHAVOLUTA (PHV)[8-10], 而KANADI (KAN)和 YABBY (YAB)转录因子家族成员及生长素响应因子(auxin response factor, ARF)家族的ETT/ARF3和ARF4促进叶片远轴面特征的建成[11-15]。
YAB基因家族是一类植物特有的基因家族,其成员具有C2C2锌指结构域及YABBY结构域, 在YABBY区域的氨基酸残基具有很大的保守性, 而在锌指结构域与 YABBY结构域之外的区域几乎不具有序列同源性, 不同的成员具有不同的表达特异性[11,16-17]。
研究表明, YABBY蛋白定位于细胞核内[17-19]。
在拟南芥基因组中有6个YABBY基因家族成员, 分别是 FILAMENTOUS FLOWER(FIL/YABBY1)、CRABS CLAW (CRC)、INNER NO OUTER (INO)、YABBY2 (YAB2)、YAB3 和 YAB5 [11,16-17,20-21]。
FIL/YAB1、YAB2和YAB3在叶片的远轴面表达, fil yab3双突变体的叶很狭窄且远轴面的表皮细胞会有近轴面特征的表皮细胞镶嵌, FIL和YAB3过量表达的植株会产生远轴面化的叶片[11], 表明FIL和YAB3促进叶片远轴面特征建成。
YABBY基因还调控叶片的扩展。
fil yab2 yab3 yab5的四突变体尽管还具有部分近-远轴极性的分化, 但叶片边缘细胞缺失, 叶片不能扩展而成为辐射对称的器官[22]。
尽管拟南芥YABBY基因与远轴面的特征建成相关, 但在单子叶植物玉米中却在叶片近轴面表达[23]。
水稻中8个YABBY 基因被先后克隆并研究了其表达模式[24]。
尽管 OsYAB1是DROOPING LEAF (DL)拟南芥YAB2和CRC的同源基因, 但是它们在侧生器官中呈非极性模式表达[19,25],并且在水稻中异位表达OsYAB1或DL都没有引起近-远轴极性的变化。
最近研究发现, DL基因促进水稻主脉的形成[26]。
这表明YABBY基因的表达和功能在物种间可能并不完全保守, 在单、双子叶植物间发生了分歧。
小麦是一种重要的禾本科作物, 其叶片形态不同于拟南芥, 探讨其叶片发育的调控机理不仅可以丰富植株形态建成的基础知识, 也可以为小麦株型的设计提供理论依据。
目前, 在小麦中克隆到调控叶片极性建成的基因有 TaYAB1和 TaCRC [27-28]。
TaYAB1基因在拟南芥中异位表达影响了叶片近-远轴极性的建成, 使叶片近轴面特征趋向远轴面[28]。
为更进一步理解小麦叶片极性建成的机制, 我们克隆了小麦中另一个YABBY基因家族成员TaYAB2 (Triticum aestivum YABBY2)。
该基因在拟南芥中过量表达也造成叶片极性的变化, 使叶片近轴面特征趋向远轴面。
这些结果为深入理解小麦叶片发育提供了新的资料。
1 材料与方法1.1 植物材料小麦(Triticum aestivum L.)品种小偃6号在光照培养箱[(22±1)℃, 16 h光/8 h暗]中萌发生长或者种植于山东农业大学实验网室。
拟南芥(A. thaliana L.)生态型为Columbia (Col)。
种子经75% (V/V)乙醇消毒5 min, 2.6% (V/V)NaClO消毒10 min, 播种于GM培养基(1/2 MS无机盐, 1%蔗糖, pH 5.7)。
4℃暗处理3 d后移至长日照(23℃, 16 h光/8 h暗)条件下萌发5～7 d, 然后将幼苗移到蛭石中, 在相同长日照条件下生长。
1.2 TaYAB2基因的克隆及载体构建取小麦幼叶为材料, 利用Trizol试剂(Invitrogen)提取总RNA, 反转录合成cDNA。
以此为模板, 利用特异引物 TaYAB2-CF (5′-CTTCTTTCGTCTTCCTC ATCCTCT-3′)和 TaYAB2-CR (5′-GCAATCAACTGGG TAAAAAATGTA-3′)扩增TaYAB2基因的全长cDNA序列。
扩增条件为94℃预变性3 min; 94℃变性1 min,56℃退火1 min, 72℃延伸1 min, 35个循环; 最后72℃后延伸 10 min。
将 TaYAB2基因的全长 cDNA克隆到克隆载体pMD-18T Vector (TaKaRa)中, 由生工生物工程(上海)有限公司测序正确后, 经Xba I和Sal I酶切后正向插入表达载体pBI121中35S启动子下游, 获得正义的35S::TaYAB2表达载体。
1.3 TaYAB2基因的表达模式分析1.3.1 RT-PCR 取小麦幼根、茎、幼叶、旗叶、茎尖和幼穗, 提取总 RNA, 反转录合成 cDNA。
用TaYAB2基因的半定量特异引物进行 RT-PCR扩增,检测其在小麦不同组织内的表达。
扩增引物为TaYAB2-F1: 5′-CTTCTTTCGTCTTCCTCATC-3′和TaYAB2-R1: 5′-CCTTCGTATCTCCTCCTTA-3′。
扩增条件为94℃预变性3 min; 94℃变性1 min, 56℃退火1 m in, 72℃延伸1 min, 30个循环; 最后72℃后延伸10 min。
内参基因 TaActin的引物为 TaActin-F:5′-ATCATCCTGTGTTGCTGAC-3′和 TaActin-R: 5′-A TGGTAGAACCTCCACTGAG-3′。
扩增条件为94℃预变性3 min; 94℃变性1 min, 58℃退火1 min, 72℃延伸1 min, 28个循环; 最后72℃后延伸10 min。
1.3.2 mRNA原位杂交参照 Zhao等[29]报道的方法, 分别取萌发后 4周的小麦幼苗苗端、侧芽及幼穗, 用新鲜FAA固定液(50%乙醇∶10%冰醋酸∶5%甲醛)固定, 4℃过夜; 经脱水、透明后将材料包埋于石蜡(Sigma-Aldrich)中, 接着用切片机(American Opitcal 820 Rotary, 美国)切片(8 μm 厚), 并粘到载玻片上(Poly-Prep Slides, Sigma-Aldrich)。
选取 TaYAB2基因cDNA的3′端非编码区(300 bp)为模板, 利用探针合成试剂盒 DIG RNA labeling kit (Boehringer Mannheim)转录合成 TaYAB2基因的原位杂交 RNA探针。
令植物切片在含有200 ng mL−1探针的杂交液中42℃杂交过夜。
利用DIG nucleic acid detection kit(Boehringer Mannheim)检测信号。
用Olympus BH-2型显微镜观察照相。
1.4 TaYAB2基因异源转化拟南芥及鉴定以35S::TaYAB2表达载体质粒转化根癌农杆菌GV3101, 拟南芥花絮浸染法遗传转化拟南芥(Col)[30]。
将转化后收获的种子在含有50 mg L−1卡那霉素(kanamycin)的抗性琼脂糖平板上筛选抗性苗, 并将其移植于蛭石中生长。
利用基因组提取试剂盒(Qiagen)提取抗性植株叶片的基因组DNA, 用TaYAB2-CF 和TaYAB2-CR引物进行PCR鉴定。
用Trizol法提取鉴定出阳性植株的总RNA, 反转录为cDNA, 用半定量RT-PCR法检测 TaYAB2基因在不同拟南芥转基因株系中的表达水平。