养细胞步骤
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一、细胞换液
1、实验室和超净台紫外线消毒30min
2、开始实验,关闭紫外线,玻璃板不能超过标记的黄线,打开通风设备
3、用酒精棉由里向外消毒实验台,再用酒精棉消毒双手,放入超净台的试剂瓶应先用
酒精棉擦拭在放入超净台中
4、将细胞培养瓶瓶口过火,然后打开再将瓶口和瓶盖过火,如果培养瓶数量过多应将
瓶盖与培养瓶对应以免盖错造成互相感染
5、倒掉培养瓶中的培养液,瓶口应尽量远离废液缸,以免造成污染
6、用移液枪吸取5mlPBS,取枪头需用镊子夹取,镊子用之前过火,只夹取枪头尾部,
然后用手拿出,注意手只能碰枪头尾部的头部,枪头不能接触超净台,用移液枪吸
取PBS时应该将枪头的头部过火,移液枪的枪头不能碰到试剂瓶,进行操作时注意
胳膊不应放到培养瓶上方
7、将PBS注入到培养瓶中,应将移液枪中的液体打到没有细胞的那一面
8、将培养瓶放倒轻轻晃动,洗去培养瓶细胞面的死细胞以及细胞的代谢产物,倒掉PBS
9、换取另一个新的枪头,吸取培养液打入到培养瓶中,将培养瓶与瓶盖过火,盖好,
如果多个培养瓶枪头不碰到瓶壁,则不用更换枪头,否则需要更换枪头
10、放入培养箱中,瓶盖应该拧松,与外界空气想通
注意事项:1、进入超净台的试剂瓶应消毒
2、使用的器械应该进行过火
3、试剂瓶应该过火之后打开,盖上之前也应该过火
4、注意胳膊不能放到培养瓶口的上方
5、倒废液时瓶口远离废液缸
6、拿出的培养瓶应该拧紧,放入培养箱的培养瓶应将瓶盖拧松使之与外界
空气想通
7、所用试剂在使用前应该预热
二、细胞传代
1、将培养瓶拿到超净台中,倒掉培养液
2、加入PBS冲洗坏死的细胞以及细胞代谢产物
3、加入胰酶溶解细胞,加入胰酶后放入培养箱中,一段时间后可用显微镜看到细胞变
圆,从培养瓶上脱落下来,形成一层白膜
4、加入培养液反复吹打,使细胞从培养瓶上脱落,吹打应该尽量减少泡沫的产生,以
免导致细胞的机械性损伤
5、将培养瓶中的液体移到试管中,进行离心
6、离心后出现细胞沉淀,弃掉上层液体,重新加入培养液,然后反复吹打使细胞混匀
7、将混匀的细胞加到培养瓶中,在将细胞以及培养液导入的培养瓶时,移液枪应朝向
细胞不生长的那一面将细胞与培养液导入到培养瓶中