生物技术概论课后习题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1.简述一下内切酶和连接酶的作用机制。
内切酶：
类型I、III：都有甲基化，依赖于ATP，限制内切酶活性。III 型酶在识别部位进行切割，很容易从底物上解离。I型酶是随机切割，识别部位不等于切割部位，能产生不同的末端。则I型和III型不同，很难形成稳定的切割末端。
类型II的特点：识别部位等于切割部位。①在DNA分子双链特异性识别部位切割产生特定的DNA序列。②两个单链断裂部位在DNA分子上的分布通常不是彼此相对的。③断裂的结果形成的DNA片段往往具有互补的单链延伸末端。
连接酶：
能够催化双链DNA片段紧靠在一起的3‘—OH 末端于5’—P末端之间形成磷酸二脂键，使两末端连接。连接方法：①用DNA连接酶连接具有互补的黏性末端片
段。②用T
4DNA
连接酶将平末端片段连接。③平末端片段加上衔接头或人工合成的连杆使之成为黏性末端后用DNA连接酶连接。
2.比较基因工程中常用的DNA聚合酶的催化活性有什么不同？
修饰酶：
⑴DNA聚合
酶：①大肠杆菌
DNA聚合酶Ⅰ（特
点：a 5‘→3‘聚
合酶活性b 5’→
3‘外切酶活性c
3’→5‘外切酶
活性）②大肠杆
菌DNA聚合酶大
片段（a 5’→3
‘聚合酶活性 b
3’→5‘外切酶
活性）③T
4
噬菌
体DNA聚合酶④
T
7
DNA聚合酶（催
化合成的DNA链
比其他的长）⑤
耐热DNA聚合酶
（75—80℃，耐
高温，用于PCR
中）⑥逆转录DNA
聚合酶（依赖于
RNA的DNA聚合
酶）⑦末端转移
DNA聚合酶（将平
末端修饰为黏性
末端）⑵T
4
噬菌
体多核苷酸聚合
酶⑶S
1
核酸酶（降
解双链DNA,单链
RNA）⑷Bal3核酸
酶（具有高度的、
特异的脱氧核苷
酸内切酶活性）
⑸碱性磷酸酶
（细菌碱性BE
（DAP）去除5‘端
磷酸，提高重组
效率）
3.基因工程中常
用载体，具有哪
些性质?
(1)能在宿主细
胞中进行独立和
稳定的DNA自我
复制。（2）易于
从宿主细胞中分
离并进行纯化。
（3）在其DNA序
列中具有适当的
限制性DNA内切
酶位点（最好是
单一的识别位
点）。（4）具有能
够观察的表型特
征。
4. 质粒载体的
类型以及质粒
DNA复制类型，他
们之间的关系？
细菌质粒载体：
⑴生物特性：①
定义：存在于细
胞质中的一种独
立于染色体外，
自主复制的遗传
成分，游离，在
特定条件下，可
逆整合到染色体
内②类型：接合
型（是必需遗传
信息，还带有一
套控制细菌细胞
配对和转移基
因。分子量大，
低拷贝，严密
型。）和非接合型
（是必需遗传信
息，丧失了自我
转移能力。分子
量小，高拷贝，
松弛型。）。⑵
其条件：具有复
制起点；带有可
选择的标记；含
有若干限制酶单
一的识别位点；
分子量小；拷贝
数较高。转移能
力与分子量大小
以及DNA复制类
型有关。
质粒DNA复制类
型：一个质粒就
叫拷贝数。（1）
底拷贝数质粒：
DNA复制是属于
严紧复制控制
的。（2）高拷贝
数质粒：DNA复制
是属于松弛性复
制控制的。
5. 简述质粒、柯
斯质粒和入噬菌
体等的特性
入噬菌体的特
性：定义：把专
门感染了细菌的
病毒称为噬菌体
载体，由DNA和
蛋白质组成。（1）
溶源：若噬菌体
侵入宿主细胞后
并不裂解宿主细
胞，而是把自身
DNA整合到宿主
细胞DNA中，并
随着宿主细胞分
裂而增殖。（2）
裂解：若噬菌体
侵入宿主细胞后
可以利用宿主细
胞的酶以及底物
合成新的噬菌
体，然后破裂细
胞释放出子代噬
菌体并再次感染
其它宿主。
柯斯质粒的特
性：①含有质粒
的复制起点和药
物抗性基因。②
含有入噬菌体的
cos基因位点。③
分子量较小，但
是具有高容量的
克隆能力。④具
有于质粒同源序
列的质粒进行重
组的能力。
6. 基因重组的
定义
利用限制性内切
酶和其它一些酶
类，切割和修饰
载体DNA和目的
基因，将两者连
接起来，使目的
基因插入语可以
自我复制的载体
内，再转入受体
细胞，以期这种
外源性目的基因
在受体细胞内得
到正确表达。
7. 载体DNA与外
源基因链接的方
法有哪几种？
（1）黏性末端连
接法：DNA连接
酶，辅助因子
NAD+提供能量。
（2）平末端连接
法：①同聚物加
尾法：利用末端
脱氧核苷酸转移
酶，不直接使用
T4DNA连接酶，连
接效率低。②衔
接物连接法：用
化学方法合成
的，由10~12个
核苷酸组成，具
有1个或数个限