蛋白质含量测定操作细则
蛋白质检测安全操作规程
蛋白质检测安全操作规程
一、目的：为规范蛋白质检测操作，确保蛋白质检测人员安全制定此规程。
二、范围：本规程适用于蛋白质检测操作
三、内容：
3.1蛋白质是含氮的有机化合物。
蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，蛋白质含量（含氮量*6.25=蛋白含量）。
有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4
凯氏定氮法反应式为：
2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化剂）
凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中
反应式为:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI 消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子既得蛋。
蛋白质测定 SOP
蛋白质含量的测定1 范围本文件适用于使用分光光度计对食品中蛋白质进行测定2原理食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，在pH 4.8的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。
在波长400 nm下测定吸光度值，与标准系列比较定量，结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。
3试剂和材料除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。
3.1硫酸铜（CuSO4²5H2O）。
10.2硫酸钾（K2SO4）。
3.3硫酸（H2SO4密度为1.84g/L）：优级纯。
3.4氢氧化钠（NaOH）。
3.5对硝基苯酚（C6H5NO3）。
3.6乙酸钠（CH3COONa²3H2O）。
3.7无水乙酸钠（CH3COONa）。
3.8乙酸（CH3COOH）：优级纯。
3.937% 甲醛（HCHO）。
3.10 乙酰丙酮（C5H8O2）。
3.11 氢氧化钠溶液（300 g/L）：称取30 g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100 mL。
3.12 对硝基苯酚指示剂溶液（1 g/L）：称取0.1 g对硝基苯酚指示剂溶于20 mL 95%乙醇中，加水稀释至100 mL。
3.13 乙酸溶液（1 mol/L）：量取5.8 mL乙酸（3.8），加水稀释至100 mL。
3.14 乙酸钠溶液（1 mol/L）：称取41 g无水乙酸钠（3.7）或68 g乙酸钠（3.6），加水溶解后并稀释至500 mL。
3.15 乙酸钠-乙酸缓冲溶液：量取60 mL乙酸钠溶液（3.14）与40 mL乙酸溶液（3.13）混合，该溶液pH4.8。
3.16 显色剂：15 mL 甲醛（3.9）与7.8mL乙酰丙酮（3.10）混合，加水稀释至100 mL，剧烈振摇混匀（室温下放置稳定3d）。
3.17 氨氮标准储备溶液（以氮计）（1.0 g/L）：称取105 ℃干燥2 h的硫酸铵0.4720 g加水溶解后移于100 mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1.0 mg氮。
总蛋白含量测定操作规程
总蛋白含量测定操作规程1 目的确保口蹄疫灭活疫苗总蛋白含量测定（lowry）操作规程2 范围适用于口蹄疫灭活疫苗总蛋白量测定。
3 责任部门QC部相关检验人员4 内容4.1 准备4.1.1 设备酶标仪(全波长)，“M”型96孔板，卡介苗注射器，单通道和多通道移液器，涡旋震荡仪，酶标板振荡器等。
4.1.2 试剂丙酮(分析纯)、无菌去离子水、商品化Lowry法改良试剂盒4.2操作步骤4.2.1 标准系列稀释液制备将商品化试剂盒内标准牛血清白蛋白(2mg/ml母液)，按下表依次稀释。
其多项式≥0.98。
上述表格中，A1-A9为系列稀释的标准牛血清白蛋白溶液，A1至A9蛋白浓度依次增高;B、C、D行中1-6列为检测样品750nm吸光值，B1-B6为6批不同批次疫苗样品，每一列为同一疫苗样品三个重复。
4.2.6.2 绘制标准曲线:将上表中数据复制到EXCELL表格中，y = 411.69+ 220.65x - 3.94234.15%(标准差/平均值*100%)，将每毫升水相抗原中总蛋白含量，除以2折算为每毫升疫苗总蛋白含量，该疫苗的总蛋白含量为138μg/ml。
按照上述方法，可计算其他样品的总蛋白含量。
4.2.6.4 结果判定同一样品不同重复间变异系数应小于5.3%，否则试验不成立，应重做。
4.3 清场4.3.1 将所有试液、指示剂及相关化学试剂放回原处，并填写理化室化学试剂使用记录。
4.3.2 将所有器具内废液倒掉，用自来水冲洗三遍，确保器具内壁无溶液残留，分类放入塑料筐内待进一步清洗。
4.3.3 擦拭桌面，确保桌面整洁。
清洗抹布拧干放回原处待用。
4.3.4 拖洗地面，确保地面整洁。
清洗拖布甩干放回原处待用。
实验一蛋白质含量的测定
〔Ⅱ〕实验部分实验一蛋白质含量测定法本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。
了解各种测定方法的基本原理和优缺点。
蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。
目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。
另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。
其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。
定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。
每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。
在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。
考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：CH2COOH|+ 3H2SO4 →2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)NH22NH3 + H2SO4→(NH4)2SO4(2)(NH4)2SO4 + 2NaOH →2H2O +Na2SO4 + 2NH3(3)反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白170 / 13氮即得。
蛋白质含量测定方法
蛋白质含量测定方法
蛋白质是生物体内重要的营养成分之一，对于食品、生物医药等领域具有重要意义。
因此，准确测定蛋白质含量是很多领域的研究和生产工作中必不可少的一项内容。
在科学研究、食品加工、药物生产等领域，蛋白质含量的准确测定对于保证产品质量、促进科学研究具有重要作用。
一、总蛋白质含量测定方法。
1. 琼脂糖凝胶电泳法。
琼脂糖凝胶电泳法是一种常用的蛋白质含量测定方法，通过电泳技术将蛋白质在凝胶中进行分离，然后根据蛋白质在凝胶中的迁移距离和分子量进行定量测定。
2. 分光光度法。
分光光度法是利用蛋白质特有的吸收光谱特性来进行测定的方法，通过比较样品溶液和空白溶液的吸光度差异来计算蛋白质含量。
3. 比色法。
比色法是利用蛋白质与某种试剂发生显色反应，然后通过比色计或分光光度计测定溶液吸光度的方法来进行蛋白质含量测定。
二、特定蛋白质含量测定方法。
1. 酶联免疫吸附法（ELISA法）。
ELISA法是一种常用的特定蛋白质含量测定方法，通过将待测蛋白质与特异性抗体结合，然后加入酶标记的二抗来进行测定。
2. 荧光素酶标记法。
荧光素酶标记法是利用荧光素酶标记的抗体与待测蛋白质结合，然后通过荧光素底物的反应来进行蛋白质含量的测定方法。
以上介绍的是一些常用的蛋白质含量测定方法，不同的方法适用于不同的实验目的和样品类型。
在进行蛋白质含量测定时，需要根据实际情况选择合适的方法，并且在测定过程中要严格按照操作规程进行，以保证测定结果的准确性和可靠性。
总之，蛋白质含量的准确测定对于各个领域的研究和生产工作都具有重要的意义，希望本文介绍的方法能够对相关工作者有所帮助。
食品中蛋白质的测定作业指导书
食品中蛋白质的测定作业指导书1.范围本标准规定了食品中蛋白质的测定方法。
本标准不适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质的食品测定。
2.原理食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。
3.试剂3.1 硫酸铜（CuSO4·5H2O）。
3.2 硫酸钾（K2SO4）。
3.3 硫酸（H2SO4密度为1.84g/L）。
3.4 硼酸（H3BO3）。
3.5 甲基红指示剂（C15H15N3O2）。
3.6 溴甲酚绿指示剂（C21H14Br4O5S）。
3.7 亚甲基蓝指示剂（C16H18ClN3S·3H2O）。
3.8 氢氧化钠（NaOH）。
3.9 95%乙醇（C2H5OH）。
3.10 硼酸溶液（20 g/L）：称取20 g硼酸，加水溶解后并稀释至1000 mL。
3.11 氢氧化钠溶液（400 g/L）：称取40 g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100 mL。
3.12 硫酸标准滴定溶液（0.0500 mol/L）或盐酸标准滴定溶液（0.0500 mol/L）。
3.13 甲基红乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100 mL。
3.14 亚甲基蓝乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g亚甲基蓝，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100 mL。
3.15 溴甲酚绿乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100 mL。
3.16 混合指示液：2份甲基红乙醇溶液（3.13）与1份亚甲基蓝乙醇溶液（3.14）临用时混合。
也可用1份甲基红乙醇溶液（3.13）与5份溴甲酚绿乙醇溶液（3.15）临用时混合。
3.17 甲基红-溴甲酚绿混合乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g甲基红、0.5g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100 mL。
血清(浆)总蛋白含量测定操作规程
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
4.工作程序4.1.操作说明4.1.1.实验原理：不同物质的折射系数是不同的。
折射率随物质浓度的变化而变化。
使用蛋白折射仪，根据光线通过血清中的折射率可以测得一定的值（即血清总蛋白含量）。
4.1.2.实验所需设备和材料：蛋白折射仪、100ul加样器、吸头、柔软一次性纸。
4.1.3.折射仪的零点调节4.1.3.1.使用高质量的放在密封玻璃管中的蒸馏水（如注射用水）。
把折射仪及蒸馏水置于22℃－25℃的室温中。
然后在折射仪上放上蒸馏水。
4.1.3.2.观察结果：准线应在 1.000处（Urine Specific Gravity Scale）或 1.333处（Refractive Index Scale）如误差达1/2格，则应调准零点。
用小螺丝刀调节零点。
顺时针方向增加读数，逆时针方向减少读数（即降低分界面的位置）。
最后的调节方向应是顺时针方向的。
4.2.实验操作步骤：4.2.1.从标本中（避开红细胞）吸取血清或血浆50ul。
4.2.2.打开覆盖棱镜的盖板。
4.2.3.将血清滴到棱镜于盖板之间的棱镜表面（靠近后部的地方），切勿使吸管接触到棱镜表面。
4.2.4.盖上盖板。
4.2.5.棱镜对准一光亮的窗口或一光源，使观察镜中亮的和暗的有一明显的对比和一清晰的分界面。
4.2.6.旋转目镜，调节并对准焦距，使分界面清晰。
通过亮暗交界线，直接读出总蛋白数值。
4.2.7.记下供血浆者总蛋白值。
4.2.8.翻起盖在棱镜上的盖板，先用软纸或专用纸吸干血清，然后用蒸馏水及软纸或专用纸洗擦盖板与棱镜的表面，如果棱镜表面潮湿会使下一标本检测时不准确。
不要用硬的东西洗擦棱镜表面及盖板，也不要用酒精洗擦。
蛋白质含量测定方法汇总.docx
混匀，37C水浴20分钟，冷却至室温，在分光光度计波长540nm处，用空白管调零，读取各管吸光度值。
1〜5为标准曲线管，测得吸光度后，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。
以测定管的吸光度，在标准曲线上求得蛋白质浓度。
［注意事项］1. 双缩脲试剂中，加入酒石酸钾钠，Cu2+形成稳定的络合铜离子，以防止CUSO∙5H0不稳定形成CU（QH）2沉淀。
酒石酸钾钠与CUSQ ∙5f0之比不低于3 ：1,加入KI作为抗氧化试剂。
2 •双缩脲试剂要封闭贮存，防止吸收空气中的二氧化碳。
3. 本法各种蛋白质的显色程度基本相同，重复性好，几乎不受温度影响，唯一缺点是灵敏度较低。
4 •黄疸血清、严重溶血对本法有明显干扰。
［思考题］1 .双缩脲法测定蛋白质的原理是什么？其它还有什么方法测定蛋白质的含量？2 .请用双缩脲法，设计一个测定蛋白质含量的定量方法（除标准曲线法外）。
三、酚试剂法测定血清蛋白质含量（改良LoWry法）［实验原理］蛋白质分子中所含肽键在碱性条件下与铜络合生成复合物产生紫红色化合物（双缩脲反应），同时使肽链展开，蛋白质中半胱氨酸、络氨酸、色氨酸和组氨酸均能使钨酸、钼酸同时失去1个，2个或者3个氧原子，还原成多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝颜色（最大吸收峰波长为745〜750nm,反应式一）其蓝色深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比，由此可测出样品中蛋白质的含量。
同时蛋白质肽键发生烯醇化反应（反应式二）能使钼离子在pH10时螯合在肽结构中，形成复合物，从而使电子转移到混合酸的显色剂上，大大增加了酚试齐U对蛋白质的敏感性。
反应式一3H 2QPQ?13WQP5MoQP10H QQPQ?14WQP4MoQP10H反应式3H 2QPQ?13WQP5MoQP10HQ3H 2OPO?14WOP4MoOP10HO烯醇化反应烯醇化反应后，可与Ciu+络合，络合后，易于使肽释放电子，使酚试剂还原。
［试剂器材］1 .碱性铜试剂：甲液：称取无水碳酸钠 2.0g ,溶于0.1mol∕L NaOH溶液IOOmI中。
蛋白质测定标准
蛋白质测定标准
蛋白质测定是生物化学和分子生物学中常见的实验操作，用于确定样品中蛋白质的含量。
以下是常见的蛋白质测定标准：Lowry法：Lowry法是最常用的蛋白质定量方法之一，基于蛋白质与某些重铜络合物的相互作用产生的颜色变化。
该方法灵敏度高，适用于含有大量蛋白质的样品。
Bradford法：Bradford法利用考马斯亮蓝G-250与蛋白质之间的相互作用产生的颜色变化来测定蛋白质含量。
与Lowry法相比，Bradford法的操作更简单，但灵敏度略低。
Biuret法：Biuret法利用蛋白质与铜离子形成的络合物产生的紫色来测定蛋白质含量。
该方法比较粗略，适用于快速测定蛋白质含量。
BCA法：BCA（Bicinchoninic Acid）法是一种比较常用的蛋白质定量方法，利用蛋白质与铜离子和BCA试剂的反应产生的紫色螯合物来测定蛋白质含量。
光谱法：光谱法通过测量蛋白质在特定波长下的吸光度来确定其浓度。
UV-Vis分光光度计是常用的测量设备，通常在280 nm波长下进行测量。
荧光法：荧光法利用蛋白质在特定激发波长下发射荧光信号的特性来测定蛋白质含量。
例如，荧光素蛋白（fluorescamine）可与蛋白质中的氨基结合产生荧光，用于蛋白质的定量。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于样品的特性、实验条件以及所需的灵敏度和准确性。
通常，根据实验的具体要求和可用的设备，科学家可以选择最适合其实验目的的蛋白质测定方法。
1。
【VIP专享】食品中蛋白质的含量测定
蛋白质的测定方法测定食品中的蛋白质含量有二种方法，一是凯氏微量法，二是自动定氮分析法。一．凯氏微量法有手工滴定定氮和自动定氮仪定氮，实验者可根据经济条件设备而定。1.原理蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用过量硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。2NH2（CH2）2COOH+13H2SO4 （NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2O（NH4）2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO42.方法 本法参照GB 5009.5 -85适用于各类食品及饲料中蛋白质的测定3.试剂所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。试剂均为分析纯。3.1硫酸铜3.2硫酸钾3.3浓硫酸3.4 2%硼酸溶液（或1%的硼酸）3.5 混合指示剂：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。3.6饱和氢氧化钠：500g氢氧化钠加入500ml水中，搅拌溶解，冷却后放置数日，澄清后使用。3.7 0.01mol/L或0.05mol/L盐酸标准溶液：需标定后使用(配制及标定方法见附录)4.仪器消化炉 凯氏定氮蒸馏装置 万分之一电子天平凯氏定氮蒸馏装置：如图所示 5. 操作步骤5.1样品处理：精密称取0.1~2.0g固体样品或2~5g半固体样品或吸取液体样品5~20ml，放入100ml或500ml凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜，0.3g硫酸钾及3~20ml浓硫酸，放置过夜后小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，取下放冷后用约2～10ml蒸馏水冲洗瓶壁，混匀后继续加热至液体呈蓝绿透明，取下放冷，小心加10~20ml水混匀 ，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白实验。5.2按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃 珠以防暴沸，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。5.3向接收瓶内加入10ml ,1~2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10ml样品消化稀释液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使之流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将3~10ml饱和氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯中，提起玻璃塞使其缓缓流入反应室，立即将玻璃塞盖紧，并加水于小玻璃杯中以防漏气。加紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏2min，移动接收瓶，使冷凝管下端离开液面，然后用少量中性水冲洗冷凝管下端外部，再蒸馏1min取下接收瓶，以0.01或0.05mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。同时吸取10ml试剂空白消化液按5.3操作。6. 计算 X = （V-V0 ）×C× 0.014× B/m ×100× F式中： X 一 样品中蛋白质含量，g／100g； V 一 样品消耗盐酸标准液的体积，ml;V0 - 空白消化液消耗盐酸标准液体积，ml;C 一 盐酸标准液摩尔浓度,mol/L;0. 014一 1mol/L 盐酸标准液1 ml相当氮克数.B 一 定容体积/取液量 m 一 样品的质量，g;F 一 氮换算为蛋白质计算因子。蛋白质的氮素含量不同，故换算因子不同。详见下表。蛋白质计算因子食 物 计算因子蛋，鱼，肉及制品，禽类，玉米，高粱，豆类，水果和蔬菜类 6.25乳及乳制品 6.38大米 5.95小麦面 普通粉 5.70全麦，大麦，燕麦，裸麦,小米，小麦面全麦 5.83 小麦 5.80黄豆 5.71花生 5.46 芝麻，向日葵 ，核桃和榛子 5.30麸皮 6.31
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蛋白质含量测定操作细则
1． 试剂与器材：
1．1标准蛋白溶液（100μg/ml），经事先标定。
1．2酚试剂：
酚试剂贮备液（购买国产或进口）经标准氢氧化钠液滴定，测定酸浓度，用注射用水
稀释至1M，即为酚试剂。
1．3 2%酒石酸钠溶液：称取2克酒石酸钠，加注射用水溶解至100ml。
1．4 1%硫酸铜溶液：称取1克硫酸铜，加注射用水溶解至100ml。
1．5 4%碳酸钠溶液：称取4克碳酸钠，加注射用水溶解至100ml。
1．6 0.8%氢氧化钠溶液：称取0.8克氢氧化钠，加注射用水溶解至100ml。
1．7 碱性铜液（用时现配）
取试剂1. 3、1. 4各0.5ml，试剂1. 5、1. 6各25ml，混匀。
1．8 分光光度计（有650nm波长）
1．9 计算器：CASIO fx－3900 （能计算相关系数）
1．10电子天平
1．11试剂瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、洗耳球、滤纸等
1．12吸管、移液管、中试管、试管架
2．操作：
2．1标准曲线：
精确量取标准蛋白液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分别加入试管中，补加注射
用水至1ml，加碱性铜液5ml，混匀，放置10分钟后，快速加入酚试剂0.5ml，混匀，室
温放置30分钟，于650nm波长比色，测定其OD值，计算相关系数。
2．2样品测定：
精确量取适量样品（蛋白约为50μg）于试管内，补加注射用水至1ml，加碱性铜液
5ml，混匀，放置10分钟后，快速加入酚试剂0.5ml，混匀，室温放置30分钟，于650nm
波长比色，测定其OD值，（显色后，若浑浊，经3000rpm离心后再比色）。
3．结果计算：
3．1坐标法
以蛋白浓度为横坐标，测定的OD值为纵坐标，作一标准曲线，根据样品的OD值从
标准曲线上查出相应的结果（μg），进行计算。
查出的结果×稀释倍数
蛋白含量（μg/ml）=
取样量
查出的结果×稀释倍数
蛋白含量（μg/ml）=
取样量×10×固总
3．2计算器法：
3．2．1按AC键，打开计算器开关。
3．2．2按SHIFT键，再按AC键，取消已保存的标准曲线。
3．2．3依次输入标准曲线各点对应数值：
输入对应浓度值，按[（--- 键，输入OD平均值，按RUN，以此类推……
3．2．4按SHIFT键，按9键，计算相关系数。
3．2．5输入样品OD平均值，按SHIFT键，按——）键，用显示的结果÷样品量，
即为、蛋白含量（μg / ml）。