猪支原体肺炎灭活疫苗
猪支原体肺炎及其防治
猪支原体肺炎及其防治虽然目前已入夏，但由于天气变化导致猪支原体肺炎多发。
本病一直被认为是对养猪业造成重大经济损失最常发生、流行最广最难净化的重要疫病之一。
本病虽为老病，但近年来由于经常和PRRS、圆环病毒等其它病原混合感染，造成重大的经济损失而突显出了其重要性。
一、发病特点带菌猪是本病的主要传染源，病原体是经气雾或与病猪的呼吸道分泌物直接接触传播的，其经母猪传给仔猪使本病在猪群中持久存在，其严重程度常因管理水平、季节、通风条件、猪的密度以及其它环境因素改变而有很大差异。
最早可能发生于2～3周龄(地方品种有9日龄的)的仔猪，但一般传播缓慢，在6～10周龄感染较普遍，许多猪直到3～6月龄时才出现明显症状。
易感猪与带菌猪接触后，发病的潜伏期大的为十天或更长时间，并且所有自然发生的病例均为混合感染，包括支原体、细菌、病毒及寄生虫等。
近两年，由于猪圆环病毒引起的断奶后多系统衰竭综合征和间质性坏死性肺炎以及猪繁殖与呼吸综合征与喘气病的互作使猪只免疫功能受损，易导致猪瘟免疫失败，链球菌、弓形体病等感染率升高，多种因素的互作已对当前的养猪业提出了严重挑战。
二、临床症状该病的潜伏期一般7～14天，主要症状为咳嗽和气喘。
外观表现为生长发育迟缓，消瘦，被毛粗糙。
急性型：首次传入本病，各种年龄的猪都易感，发病率可达100%。
伴有特征性发热或不发热的急性呼吸。
10日龄的新生仔猪也可感染。
伴有特征性发热或不发热的急性呼吸。
急性型的本病持续时间通常约3个月，然后转为较常见的慢性型。
慢性型：发病猪喂食时或运动时发生咳嗽，严重的猪会发生连续痉挛性咳嗽。
一般体温正常，食欲正常，但生长速度比健康猪慢，通过改善饲养环境，提高饲料营养水平，增加通风透气会逐渐康复。
近年来常与蓝耳病、圆环病毒病、猪瘟、猪流感、伪狂犬病、猪肺疫、传染性胸膜肺炎、副伤寒等混合感染，使病情加重。
三、防治措施1.自繁自养，加强饲养管理，做好防病工作。
发现可疑病例要隔离检查。
育肥猪接种Hyogen 疫苗后对猪肺炎支原体的免疫持续时间
292016年33卷第3期 SWINE INDUSTRY SCIENCE 猪业科学海外文摘OVERSEAS ABSTRACTS育肥猪接种Hyogen ®疫苗后对猪肺炎支原体的免疫持续时间病毒复制子粒子表达猪蓝耳病毒蛋白质引起免疫反应猪行业引入电子医疗记录系统猪支原体性肺炎（Mycoplasma hyopneumoniae，M.hyo）是一种主要的猪的传染病,其主要症状为持续干咳，影响猪只生长速度，降低其生产性能，该研究的目的是检测接种Hyogen ®后的6个月，该疫苗对猪支原体性肺炎的功效和免疫持续时间。
材料和方法 试验对象为40头3周龄的猪只且为猪肺炎支原体血清反应阴性，随机被分为2组，每组20头，试验组：猪只3周龄时接种疫苗Hyogen ® 2 mL，对照组：猪只3周龄时被注射2 mL PBS（磷酸缓冲液即疫苗稀释液）。
在疫苗接种后181 d，以每头猪用M.hyo 的L1 系2x108 CCU 的剂量对试验组与对照组进行人工感染，且第2天重复上述感染。
观察28 d 后，对猪只实行安乐死，随后收集试验参数：观察期死亡数、临床症状、肺损伤得分（根据欧洲药典：2448）、体液免疫应答与细胞免疫（主要指IFNγ）。
采用组织学（苏木精-曙红染色）和M.hyo 特异实时PCR 来检测肺部样本中的猪肺炎支原体。
结果 在对照组中有一猪只在感染后25 d 死亡，病理检查后确定该猪死因仅是由感染猪肺炎支原体引起；根据欧洲药典对感染后28 d 的肺损伤进行评估和得分：试验组肺损伤评分的加权均值显著降低。
采用组织学检测和实时PCR 确定观察到的病变是因M.hyo。
细胞免疫：在接种疫苗76 d 后，测定猪肺炎支原体特异的IFNγ分泌细胞的数量，结果显示试验组中的IFNγ分泌细胞数量显著高于对照组。
结论 由于试验组的肺损伤评分显著低于对照组，故接种Hyogen ®疫苗能为育肥期猪只提供免疫保护。
猪支原体肺炎防治措施
猪支原体肺炎的防治措施猪支原体性肺炎是由猪肺炎支原体引起的一种慢性肺炎，又称猪地方流行性肺炎。
1病原及流行病学1)猪肺炎支原体为该病病原，猪肺炎支原体的初代培养物生长缓慢，经330d，培养物才产生轻微的浑浊，培养基变酸，颜色发生变化。
猪支原体菌株不同，毒力也存在差异。
2)该病可在猪群中水平传播和垂直传播。
现已证实该病也可以通过空气传播。
患猪及隐性带菌猪是该病的主要传染源。
在许多猪群中猪支原体肺炎是从母猪传染给仔猪。
该病的发生无明显季节性，但在寒冷、多雨、潮湿或气候骤变时，发病率上升。
不同年龄、品种的猪均易感。
在我国，地方猪种明显较引人品种易感，一旦发生该病，若不采取有力的措施，则很难根除。
长期以来，该病一直被认为是造成养猪业重大经济损失最常发生、流行最广、最难净化的重要疫病之一。
该病虽为老病，但近年来由于经常与PRRS、PCV2等其他病混合感染，是造成猪呼吸道综合征的重要病原，造成重大经济损失而突显其重要性。
经济损失主要表现为日增重降低 2.8%~44.1%。
病死率增加、饲养效率降低及猪群用药成本增加等。
2临床症状主要表现为咳嗽和喘气，在新疫区其症状表现得比较明显，大多为急性型，表现发病率高、传播快，急性型以怀孕母猪、小猪多见，患猪精神沉郁，呼吸加快，每分钟达60～120次，呈腹式、犬坐式呼吸，严重时张口呼吸。
早晚咳嗽加重，时而听到痉挛性咳嗽，甚至出现呕吐。
成年猪和饲养管理条件好的猪场常呈隐性感染或不表现症状。
表现为慢性亚临床症状的猪被称为无症状带菌猪，它们作为病原储存库与发病猪同样危险，一般体温、食欲和精神正常.病程较长并且可以将病原传播到成年猪群，慢性型以架子猪、育肥猪和后备猪常见。
随着不良因素的影响，出现症状明显加剧。
3病理变化病变主要在肺、肺门淋巴结和纵膈淋巴结。
肺表现病变的发生过程大多数是从心叶开始，开始多为点状或小片状，进而逐渐融合成大片病灶。
呈淡灰红色或灰红色，俗称肉变，与周围界限分明，病程延长后，病变颜色加深，呈淡紫红或灰白色，半透明程度减轻，坚韧度增加，两侧肺的尖叶、心叶和中间及部分膈叶呈对称性的胰样实变，俗称胰变或虾肉样变。
猪支原体肺炎详解
猪支原体肺炎详解猪支原体肺炎,又称猪气喘病、猪地方流行性肺炎、猪霉形体肺炎。
猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引起猪的一种慢性呼吸道传染病。
主要症状为咳嗽和气喘，病变的特征是融合性支气管肺炎。
一、疾病概述猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引起的一种慢性、接触性、呼吸道传染病，又称猪地方流行性肺炎，我国俗称猪气喘病，主要临诊症状是咳嗽和气喘。
剖检变化为肺的尖叶、心叶和膈叶(主叶)的对称性实变。
病多呈慢性经过，常有其他病菌继发感染。
据我国部分省市规模化养猪场血清学检验，阳性率30%～50%。
本病广泛分布于世界各地，在我国许多地区的猪场都有发生。
由于带菌病猪的存在和分布面较广，除直接发生死亡外，病猪生长发育缓慢，生长率降低15%左右，饲料利用率降低20%，造成饲料和人力的浪费。
有的成为僵猪或继发感染死亡。
所造成的经济损失很大，是危害养猪业发展的重要疫病之一。
二、病原学猪肺炎支原体对外界自然环境及理化学因素的抵抗力不强，病原体随病猪咳嗽、喘气排出体外，污染猪舍墙壁、地面、用具，其生存时间一般不超过36h;日光、干燥及常用的消毒药液，都可在较短时间杀灭病原。
病肺组织中的病原体在-15℃可保存45天，在 1～4℃存活7天。
在甘油中O℃可保存8个月，在-30℃可保存20个月仍有感染力。
冻干的培养物在4℃可存活4年。
一般常用的化学消毒药剂均能达到消毒目的。
对青霉素、链霉素和磺胺不敏感。
在人工感染时，用金霉素、土霉素、卡那霉素、林肯霉素、泰乐菌素等广谱抗生素，可阻止肺炎病变发展。
猪肺炎支原体可用猪肺埋块、猪肾和猪睾丸细胞进行继代培养。
将该菌人工接种乳兔连续传代至600代后，可使其毒力减弱，回归猪体对猪的致病力减弱，并仍能保持使猪体产生较好的免疫原性。
三、流行病学病猪和隐性感染猪是本病的主要传染源。
病菌存在于病猪的呼吸器官内，随咳嗽、气喘和喷嚏排出，形成飞沫浮游于空气中被健康猪吸人，经呼吸道传染。
本病的自然病例仅见于猪，不同年龄、性别、品种和用途的猪均可感染。
猪支原体肺炎活疫苗与猪伪狂犬活疫苗混合喷鼻试验
猪支原体肺炎活疫苗与猪伪狂犬活疫苗混合喷鼻试验李相钊（齐鲁动物保健品有限公司，山东 济南 250100）猪支原体肺炎是一种顽固性慢性疾病，抗支原体药物治疗可以抑制，但不能根除它，目前最好的办法是免疫预防[1-3]。
J.Maes 等对猪支原体肺炎疫苗免疫接种猪和对照组进行成本效率分析表明，接种猪肺炎支原体疫苗具有诱人的经济价值，每头育肥猪可节约 1.3欧元 [4-5]。
接种猪肺炎支原体疫苗还对猪的生长性能、饲料转化率、成活率、淘汰率及治疗费用等方面均有积极作用 。
近年来，猪支原体肺炎活疫苗的研制已取得了巨大进展，具有较好的保护效率。
但在探索猪支原体活疫苗免疫的方法也需要进行更多研究，本试验旨在探索简化猪场免疫程序的思路进行。
1 材料与方法1.1 试验猪场山东潍坊昌乐某规模化猪场，基础母猪5 000头。
1.2 试验背景1）该公司肥猪伪狂犬活疫苗、猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）免疫程序：猪伪狂犬活疫苗免疫程序：3日龄喷鼻1头份海博莱伪狂犬疫苗、50日龄肌注1头份海博莱疫苗。
猪支原体肺炎疫苗免疫程序：进口疫苗两针型3日龄、21日肌内注射，每次1头份/头。
2）齐鲁猪支原体肺炎活疫苗（RM48摘 要：简化免疫程序，方便养猪生产，是众多养猪人的需求，通过设计猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗相互影响试验、混合使用对于伪狂犬免疫的影响试验、混合使用对于猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）的免疫影响试验、猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与灭活疫苗临床效果对比试验等4个试验，试验结果表明：猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）与伪狂犬活疫苗是可以混合喷鼻使用的；猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）比猪支原体肺炎灭活疫苗产品的临床应用效果更明显。
对于简化免疫程序推进，提供有力的数据支持。
关键词：猪支原体肺炎活疫苗；伪狂犬活疫苗；混合喷鼻；试验基金项目：山东省生猪产业技术体系创新团队项目（SDAIT-08-20）株）批号1604001、齐鲁伪狂犬活疫苗批号1606006-1、海博莱伪狂犬活疫苗批号2J06-1、进口两针型猪支原体肺炎批号160783A。
4种猪肺炎支原体疫苗免疫仔猪后抗体水平的变化规律
引发猪呼吸道疾病综合 征 ， 给养猪 业带来 巨大损 失 。海南
省气候潮湿 ， 雨季偏多 ， 猪支原体肺炎更易发生 ， 且许 多猪场
胶灭活疫苗组 ） 、 Ｂ组 （ 喜 宜 丰猪支 原体 灭 活疫苗 组 ） 、 Ｃ组 （ 富道猪支原体肺 炎灭活疫 苗组 ） 、 Ｄ组 （ 瑞 倍士 一旺猪支原
一
１ ８ ６一
江苏农业科学
２ ０ １ ３ 年第 ４ ｌ 卷第 ５ 期
张 艳， 刘海隆 ， 曹宗喜， 等． ４种猪肺炎支原体疫苗免疫仔猪后抗体水平 的变化规律［ Ｊ ］ ．江苏农 业科学 ， ２ ０ １ ３ ， ４ １ （ ５ ） ： １ ８ ６ — １ ８ ８
４ 种猪肺炎支原体疫苗免疫仔猪后抗体水平的变化规律
浪 费， 甚至诱发猪死亡 ， 还易导致继续发生其他病原 的感染 ，
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 试 验 用 动 物及 分组
选取 ２ ０ 头 同期产仔的健康母猪（ 每胎母猪必须有 ６头 以
上 的仔猪） ， 分别从 每头母猪所产 的体 重相近 的健康仔 猪 中
随机选取 ５头大小均一的仔猪分配给 Ａ组 （ 山东猪喘气病蜂
ｎ ｅ ｕ ｍ ｏ ｎ ｉ ａ ｏ ｆ ｓ ｗ ｉ ｎ ｅ ， Ｍ Ｐ Ｓ ） ， 别
称猪喘气病 ， 是 由猪肺炎支原体引起 的一 种接触性慢性 呼吸 道传染病。猪支原体肺炎是全球养猪业公认的最难净化的猪 病” 】 ， 可 引起猪生 长发育不 良， 造成 大量饲料 和人力资 源的
仔猪血清 中猪肺炎支原体 的抗体水平 。结 果表 明 ， 不 同疫苗 免疫接 种试验猪 后产生 的抗体水 平存 在差异 。２ ０日龄 时， 试验组 与对照组抗体水平间差异不显著 ， 且各试验组抗 体的 阳性率不 高 ， Ａ组抗体 的阳性率为 ０ ； ５ ０ 日龄 时， 试验 组抗体 阳性率和抗体水平 明显升高 ， 试验 组的抗体水平极显 著高于对 照组 （ Ｐ＜ ０ ． Ｏ １ ） ， 但各 试验组 间差异不显著 ， 同 时 Ａ组的抗体 阳性率显著低于其他试验组（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ； ８ ０日龄时 ， 除 Ａ组的抗体 阳性率保 持不 变外 ， 各试 验组的抗体 阳性率和抗体水平均有所下降 ， 但抗体水平仍极显著高 于对 照组 （ Ｐ＜ Ｏ ． Ｏ １ ） ， 抗体 阳性率 显著高于对照 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， Ｄ 组 的抗体水平和抗体阳性率均高于其他试验组 ， 但试 验组 间的抗体水平 差异不显著 ； １ ４ ０日龄时 ， 试验组 的抗体阳性 率和抗体水平显著升高 ， 试验组 的抗体水平均极显 著高于对照组 （ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ， Ｄ组 的抗体 阳性率 和抗 体水平高于其他
猪支原体肺炎控制方案
猪支原体肺炎控制方案【概述】猪支原体肺炎又称猪喘气病，是由猪肺炎支原体引起的一种慢性呼吸道病。
患病猪在临床上主要表现为咳嗽和气喘，生长迟缓，饲料转化率低，体温一般正常。
解剖时以肺部病变为主，尤以两肺的心叶、中间叶和尖叶出现肉变为特征。
发病率高，死亡率低，造成养猪业经济损失的主要疾病之一。
病原病原体为猪肺炎支原体，革兰氏阴性。
对外界环境的抵抗力不强，在室温条件下36 小时即失去致病力。
一般消毒药都可迅速将其杀死。
用培养物涂片作瑞氏染色检查，在高倍显微镜下可见到球状、环状、杆状、点状及丝状的菌体形态。
流行病学猪肺炎支原体带菌猪是本病主要传染源。
乳猪和断奶猪一般比成年猪敏感，土种猪发病率和死亡率较高。
新疫区多因引进带菌猪引起此病群发，可母婴垂直传染，症状消失或药物治疗但未完全康复的猪体内仍然带菌。
病原经呼吸道的飞沫直接传播的。
病猪咳嗽或气喘时将病原体通过呼吸道排出体外，健康猪吸入病原体而感染。
本病一年四季均可发生，以冬春寒冷季节多发。
病理学肺脏心叶、尖叶的背侧及中间叶和膈叶的前缘部分，常见到紫红色或灰色的肉变区。
病变开始多为点状或小片状，进而融合成大片病变。
切割时有肉感，平滑而致密，象鲜嫩的肌肉一样。
气管中通常有卡他性分泌物，肺门淋巴结与纵膈淋巴结肿大。
症状主要为咳嗽和喘气，在新疫区其症状表现得比较明显，大多为急性，发病率高传播快。
病猪精神沉郁，呼吸加快，呈腹式、犬坐式呼吸，严重时张口呼吸，气喘嘘嘘。
在早晚咳嗽加重。
成年猪和饲养管理条件好的猪场常呈隐性感染或不表现出症状。
诊断血清学诊断方法有间接血凝试验、补体结合试验及酶联免疫吸附试验。
【治疗】用泰乐菌素、四环素、土霉素、卡那霉素、金霉素及喹诺酮类药对猪肺炎支原体均有较好的治疗作用。
泰乐菌素按5毫克/公斤体重肌注，每天2次，连续用药7天，对人工感染诱发的猪支原体肺炎的治愈率达63.6%，并可提高猪体增重；以含200毫克/公斤泰乐菌素的饲料给猪连饲10天，也可取得较好的治疗效果。
猪支原体肺炎的临床症状和防治
62猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2023年40卷第10期猪场兽医VETERINARY引言猪支原体肺炎是一种由猪支原体引起的猪传染病，主要影响肺部，导致猪生长缓慢和生产性能下降。
猪支原体肺炎在全球范围内的猪场都很常见，给养猪业带来了严重的经济损失。
病原体以飞沫形式传播，易在密集的饲养环境中传染。
临床症状包括咳嗽、呼吸急促与困难、生长缓慢等。
猪支原体肺炎的诊断主要依靠临床症状、实验室检测和病理解剖。
预防和治疗猪支原体肺炎的策略包括环境管理、营养与饲料管理、免疫接种和生物安全措施等。
本文旨在对猪支原体肺炎的临床症状、诊断方法和防治策略进行梳理，以期为养猪业提供有益的参考信息，提高猪支原体肺炎的防控水平，降低其对养猪业的负面影响。
1 猪支原体肺炎病原介绍猪支原体肺炎是由一种称为猪支原体的细菌引起的。
猪支原体是一类无细胞壁、形态可变的细菌，属于支原体科和支原体属。
猪支原体的基因组大小约为0.9～1.0 Mbp ，编码约700～800个蛋白质。
由于猪支原体缺乏许多合成代谢途径，它们在营养需求上相对较高，需要从寄生的生物体中获取生长所需的营养物质。
猪支原体主要依赖于黏附在宿主呼吸道上皮细胞表面的特殊受体进行营养物质的摄取。
猪支原体具有很强的抗免疫能力。
它们猪支原体肺炎的临床症状和防治万美芬（石阡县农业农村局，贵州 铜仁 555100）作者简介：万美芬，女，贵州凤冈人，汉族，专科，助理兽医师，主要从事兽医工作能够抵抗宿主的免疫系统攻击，主要通过两种途径：一是通过表面抗原变异，逃避宿主免疫系统的识别；二是通过抑制宿主炎症反应和免疫反应的发生，降低免疫效应。
2 猪支原体肺炎的流行病学猪支原体肺炎是一种全球范围内广泛分布的猪病，给养猪业带来巨大经济损失。
流行病学研究表明，猪支原体肺炎在不同国家和地区的猪场中具有较高的感染率。
在欧洲、北美、亚洲等地，猪支原体肺炎的感染率普遍较高。
根据相关报道，欧洲各国的感染率介于30%至90%之间。
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猪支原体肺炎灭活疫苗（P-5722-3株）
本品系用猪肺炎支原体P-5722-3株（NL1042株）接种适宜培养基培养，收获培养物，经BEI灭活后，与矿物油佐剂混合乳化制成。
用于预防猪支原体肺炎。
[处方]
[制法]
[性状]乳白色乳剂。
[鉴别]
[检查]
[含量测定]
[功能与主治]/[作用与用途]
[用法与用量]/[用法与判定]
[注意事项]
[规格]（1）50头份（100ml）/瓶（2）250头份（500ml）/瓶（3）500头份（1000ml）/瓶
[贮藏]2～8℃保存，有效期为24个月。
[制剂]
附注：猪支原体肺炎灭活疫苗效力检验方法采用固相ELISA法测定疫苗中所含抗原的相对效力单位。
1 材料1.1 设备1.1.1 96孔微量反应板1.1.
2 酶联读数仪1.1.
3 超声波裂解器1.1.
4 离心机 1.1.
5 14×89mm离心管 1.1.
6 25×89mm离心管 1.1.
7 加样器及配套吸头 1.1.
8 酶联洗板机 1.1.
9 温箱 1.1.10 pH计 1.1.11 混合器
1.1.12 试剂贮存管1.1.13 微量板震荡器1.1.14 RELPOT软件包（3.1或更新版本）1.1.15 吸水纸 1.2 缓冲液 1.
2.1 0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）氯化钠8.0g 氯化钾0.2g 磷酸二氢钾0.2g 磷酸氢二钠 1.15g 纯水加至 1 L 将各种盐按比例溶解于水中，调至pH 7.2 0.1。
在室温下保存，如不打开，可使用6个月，打开后，可使用3个月。
1.2.2 PBS-吐温20 （PBST）取0.5ml 吐温20，加到1L PBS中。
在室温下保存，如不打开，可使用6个月，打开后，可使用3个月。
1.2.3 1% PV A/PBS 取10g聚乙烯醇（PV A，88%水解物），加到1L PBS中，稍加热，使其溶解。
滤过。
在室温下保存，可使用3个月。
1.3 试剂 1.3.1 猪肺炎支原体单克隆抗体Norden杂交瘤1-2'腹水单抗。
在-10～-25℃下保存。
经Western Blot试验证实，该单抗识别猪肺炎支原体上的40kD蛋白质。
1.3.2 参考疫苗1.3.3 阴性对照品含5% Amphigen的生理盐水乳剂。
在-65℃下保存。
1.3.4 阳性对照品 1.3.5 酶结合物通过亲和层析方法纯化的羊抗鼠IgG（H+L）过氧化物酶结合物，每瓶1.0mg。
冻干的酶结合物在2～8℃下保存，使用时，用1% PV A/PBS稀释至终浓度为0.5mg/ml。
稀释后的酶结合物在-10～-25℃下可保存1年。
1.3.6 底物ABTS。
2 待检疫苗、参考疫苗、阳性对照品、阴性对照品的处理
2.1 将各种样品（待检疫苗、参考疫苗、阳性对照品和阴性对照品）至少14ml在65℃以下冷冻至少24小时。
2.2 将待检疫苗、参考疫苗、阳性对照品和阴性对照品在37 2℃下融化20分钟。
2.3 将上述样品分别分成2等份（各7ml），分别加入离心管中，超声处理55～65秒（脉冲，50%功率循环，输出功率=4），并用循环水进行冷却。
2.4 将上述每种超声处理过的样品混合，分别倒入超速离心管中（每种样品约12.0～12.5ml），在2～8℃下以30000r/min离心6小时。
2.5 离
心后，小心弃去油层和上清液，用Kimwipe对离心管进行干燥，直到除去离心管内壁上残留的油层。
分别将待检疫苗、参考疫苗、阳性对照品和阴性对照品的离心沉淀物溶解在1.2ml PBS中，用封口膜封口，置2～8℃过夜。
2.6 次日，通过振动和反复吹吸使猪肺炎支原体细胞沉淀物充分溶解。
3 抗原包被3.1 抗原稀释 3.1.1 参考疫苗抗原进行2倍系列稀释，直至1:128。
3.1.2 待检疫苗抗原和阳性对照品稀释到参考疫苗工作曲线范围内。
3.1.3 阴性对照品稀释至1:16（取62.5ul阴性对照品样品加到937.5ul PBS中）。
3.1.4 空白对照PBS。
3.2 包被取一96孔板，每份抗原一式3孔，每孔加100ul。
加盖，置37 2℃60～65分钟。
用PBS手动洗涤一次。
4 封闭每孔中各加入1% PV A/PBS 250ul，加盖，置37 2℃30～35分钟，倒去液体，拍干。
5 加入指示抗体用1% PVA/PBS将腹水单抗稀释成1:1000，每孔加100ul，加盖，置37 2℃60～65分钟。
用PBST洗板3次。
6 加入酶标抗体用1% PV A/PBS 将羊抗鼠IgG（H+L）过氧化物酶结合物稀释成1:4500，每孔加入刚稀释好的酶标抗体溶液100ul，加盖，置37 2℃60～65分钟。
用PBST洗板3次。
7 加入底物每孔中加入新制备的ABTS 100ul，加盖，置室温下30分钟。
振荡反应板后，在酶联读数仪上读取波长405nm下的OD值。
8 数据处理用RELPOT软件包（3.1或更新版本）进行数据处理。
8.1 将"最小OD值"设置为0.05，将"最小斜度"设置为0.15，将超出这些范围的数据自动剔除。
8.2 将每孔OD值减去空白孔OD值的平均值。
8.3 输入参考疫苗校正后的OD值和稀释度。
8.4 输入阳性对照品和待检疫苗校正后的OD值和稀释度。
8.5 将输入的数据进行处理，并打印结果。
8.6 根据打印结果中的最高数值选择阳性对照品和待检疫苗的最高RP值。
9 结果判定每批疫苗出厂时的RP值应
不低于6.33，在整个有效期内的RP值应不低于5.06。
9.1 "无结果"是指：缺乏有效的参考疫苗或其他样品的线（在有效的参考疫苗或样品线中，每个参考疫苗应至少有3个点，每个阳性对照品或待检疫苗应至少有3个点）；阴性对照品的OD 值大于参考疫苗的最小OD值；根据有效的平行线得到的对照样品的效力，超出了2个标准差范围。
如发生上述情况，可以重检至多2次。
如在某批产品的检验过程中，由于相同原因出现3次"无结果"，则应停止对该批疫苗的检验，直到查清原因并使问题得到解决为止。
在问题得到解决后，可对该批产品进行重检。
9.2 "结果可疑"是指：可以获得有效的参考疫苗线和待检疫苗线，但二者不平行。
由于不能确定产品的效力是否合格，因此该批产品不能出厂。
如果第1次检验结果为"结果可疑"，可以重检3次。
根据表1中的重检情况确定产品的效力检验结果。
若不重检，则判该批疫苗不合格。
9.3 "不合格"是指：在第1次检验中产生了有效的平行线，但疫苗效力低于最低标准。
至少应进行2次重检，但不超过3次。
根据表2中的重检情况确定产品的效力检验结果。
若不重检，则判该批疫苗不合格。
《进口兽药质量标准》。