猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较
猪支原体肺炎疫苗研究进展
猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine ，MPS ）是由猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae ，Mhp ）引起的一种慢性、接触性呼吸道传染病，临床上有独特的咳嗽和喘气症状，又称猪喘气病或猪气喘病［1］。
该病可通过空气传播，不同日龄的猪均易感，但仔猪超过6周龄时才表现明显症状。
感染后导致日增重降低，死亡率的增加、饲养利用率的下降及给药治疗导致的成本增加等，当与引起呼吸道疾病综合征（Porcine Respiratory Disease Complex ，PRDC ）的部分病毒性病原体结合时，猪肺炎支原体也能够导致由特定病毒性病原包括猪繁殖与呼吸综合征（PRRSV ）和猪2型圆环病毒（PCV2）感染引起疾病的发生［2］。
疫苗免疫是猪支原体肺炎的主要防制措施，目前商品化疫苗应用广泛，对防控MPS 起到了积极的作用。
本文将对国内外近年来研发及使用的猪支原体肺炎疫苗进行概述，为将来MPS 疫苗的研究开发提供参考。
1常规疫苗目前使用非常广泛的疫苗主要是灭活疫苗和减毒活疫苗，详见表1。
国内上市的进口猪支原体肺炎灭活苗菌株主要是J 株、P 株、BQ14株、P⁃5722⁃3Ⅰ株和P⁃5722⁃3Ⅱ株。
近年来，国产猪支原体肺炎灭活疫苗的开发迅速，新增了5个不同菌株的灭活疫苗，该类疫苗在我国市场占有率较高，生产企业也较多，主要是DJ⁃166株、HN0613株、NJ 株、CJ 株和SY 株。
除上述猪支原体肺炎灭活疫苗外，目前仍有4个菌株的灭活疫苗处在新兽药注册阶段，分别是广东大华农动物保健品股份有限公司的M1203株，北京中海生物科技有限公司的S 株，广东永顺生物制药股份有限公司的GD0503株和辽宁益康生物股份有限公司的ZY 株。
猪支原体肺炎活疫苗国外无商品化猪支原体肺炎疫苗研究进展穆光慧，刘欢欢，胡美容*（广东永顺生物制药股份有限公司，广东广州511356）摘要：猪肺炎支原体是引起猪支原体肺炎的病原，该病呈世界性流行，死亡率虽然不高，但由于长期性和消耗性的流行，使饲料转化率降低，并引起猪的多种并发病，是造成养猪业经济损失最重要的疾病之一。
猪支原体肺炎的调查与综合防制
该病以咳嗽、呼吸困难、生长缓 慢、肺部病变为特征，是影响养 猪业发展的重要传染病之一。
流行病学特征
01
02
03
传染源
患病猪和带菌猪是该病的 主要传染源，病原体存在 于患病猪的呼吸道及其分 泌物中，经空气传播。
易感动物
猪是该病的唯一自然宿主 ，各种年龄、品种的猪均 可感染。
流行季节
该病一年四季均可发生， 但春秋两季更容易发生， 特别是寒冷、潮湿的环境 下更容易诱发该病。
05
猪支原体肺炎的案例分析
成功防治案例
案例一
某规模化猪场，通过加强生物安全措 施、改善饲养环境、定期监测和及时 治疗，有效控制了猪支原体肺炎的传 播。
案例二
某散养户，采用疫苗接种和药物治疗 相结合的方法，成功预防了猪支原体 肺炎的发生，减少了经济损失。
失败防治案例
案例一
某规模化猪场，由于缺乏有效的生物安全措施和监测手段，猪支原体肺炎疫情持续蔓延，防控效果不 佳。
临床表现与病理变化
临床表现
患病猪主要表现为咳嗽、气喘、食欲 不振、呼吸困难等症状，体温一般正 常。
病理变化
肺部出现实变区，肺门淋巴结肿大， 其他内脏器官一般无明显变化。
02
猪支原体肺炎的调查方法
现场调查
观察猪群症状
通过观察猪群的症状，如 咳嗽、呼吸困难、食欲减 退等，初步判断是否存在 猪支原体肺炎疫情。
血清学检测
采集猪血清样本，进行血清学检测，如抗体检测 、抗原检测等，以了解猪群感染情况。
3
病理学诊断
对病死猪进行剖检，观察肺部病变情况，进行病 理学诊断，以确定病情和病因。
流行病学分析
疫情溯源
通过流行病学分析，追溯疫情的 来源和传播途径，了解疫情的扩 散情况和范围。
猪支原体肺炎的诊断及综合防治
疫病防治ＬＩＶＥＳＴＯＣＫＡＮＤＰＯＵＬＴＲＹＩＮＤＵＳＴＲＹＮｏ．９，２０２３猪支原体肺炎的诊断及综合防治杨华崧吴川市覃巴镇农业技术服务中心，广东吴川５２４５００摘 要 随着养猪业规模化、集约化、产业化的发展，在提高养猪业经济效益的同时，各类传染性疾病的发生率也有所提高。
猪支原体肺炎是其中一种比较常见的传染性疾病，一旦发生，感染率可高达１００％，严重影响养殖效益，是制约养猪业健康发展的重要疾病之一。
为此，通过分析猪支原体肺炎的病原和流行特点，根据临床症状、病理变化、实验室诊断对该病进行诊断，并结合疾病防治经验，总结出相应的综合防治措施，以降低猪支原体肺炎的感染率，保证养殖场的养殖效益，从而推动养猪业的健康稳定发展。
关键词 猪支原体肺炎；流行特点；诊断；综合防治ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８ ０４１４．２０２３．０９．０２４ 引言猪支原体肺炎（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ＭＰＳ）是一种由猪肺炎支原体引起的呼吸道慢性疾病，具有发病率高、死亡率低的特点。
一旦个别猪患病，可能会感染整个养猪场，猪只患病后降低生产性能和饲料转化率，增加养殖成本，造成较大经济损失。
该病是一种免疫抑制性疾病，常与其他病毒、细菌等发生混合感染，一旦发生，较难根治，为该病的诊断和防治工作增加了难度。
气候突变、猪舍环境较差、饲养密度过大、营养不良等都是诱发该病的重要因素。
因此，在猪养殖过程中，养殖人员不仅需要充分掌握该病的病原、流行特点，根据临床症状、病理变化，及时发现该病并采取相应的治疗措施，同时还应采取科学有效的综合防治措施，阻断该病的传播，降低该病给养猪业带来的损失。
病原简介肺炎支原体是猪支原体肺炎的病原体，是由ＤＮＡ、核糖体及细胞器等部分构成，直径大小约０．５μｍ。
由于该病原体没有细胞壁，因此呈现多种大小不等的形态，病原体经革兰氏染色后呈阴性，但着色不佳，需要通过狄奈氏染色法进行鉴别。
211088012_猪圆环支原体二联疫苗临床免疫效果的评估
50猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2023年40卷第3期主题策划F E A T U R E猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2，PCV2）感染可导致种猪繁殖障碍以及生长育肥猪生长缓慢、日增重降低、料重比升高，并发其他疾病，导致死亡率增加等。
猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae ，M.hyo ）遍布世界上绝大部分养猪国家，是猪呼吸道综合征（PRDC ）的原发性病原之一，可造成养猪生产严重的经济损失。
疫苗免疫是控制这两种疾病的最重要手段，PCV2与M.hyo 两种疫苗免疫时间接近，免疫持续期要求类似（越长久越好）。
圆支二联疫苗可以减少注射次数，节省劳力，降低猪的应激，有利于生物安全管理。
本试验对猪圆环支原体二联疫苗免疫的猪群进行跟踪，综合生产数据、实验室检测以及屠宰场评分等评估其安全性和有效性。
1 材料与方法1.1 试验动物及材料选择猪蓝耳病和猪伪狂犬病均为阴性的规模猪场中3周龄健康、体重相近的断奶仔猪240头为试验动物开展试验。
试验用疫苗：A 厂家圆环灭活疫苗，法国诗华猪圆环支原体二联疫苗（诗圆静®，2 mL/ 头份）。
猪圆环支原体二联疫苗临床免疫效果的评估吴丽艳 1，全雪容 1，张冰洁 1，申世川 2，赵永旭 3，戴江河 2，齐小东 2，秦 云 2，张 军 2（1.佳和农牧股份有限公司，湖南 长沙 410016；2.法国诗华动物保健公司，北京 100102；3.诗华SSIU ，浙江 杭州 310018）作者简介：吴丽艳（1981—），女，佳和农牧股份有限公司，中级兽医师，硕士，主要从事养猪生产模式优化和生产操作以及丹系母猪饲养管理研究，E-mail ：***************1.2 试验设计与分组将240头断奶仔猪，随机分为2个组，每组120头。
对照组在3周龄肌注A 疫苗1头份；试验组在3周龄肌注2 mL 诗圆静®（圆支二联疫苗）。
猪支原体肺炎活疫苗与灭活苗比较分析
猪支原体肺炎活疫苗与灭活苗比较分析作者：王留来源：《兽医导刊》 2015年第5期王留/ 河南商丘职业技术学院动物工程系猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引起的一种慢性呼吸道传染病, 又称猪气喘病和猪地方流行性肺炎, 广泛流行于世界各养猪国家和地区, 是一种顽固性慢性传染病。
临床表现咳嗽和气喘，患病动物体温、食欲变化不明显，剖检可见肺脏心叶、中间叶和尖叶有融合性支气管炎，呈现肉样或肝样病变。
国内猪支原体肺炎的发病率为30% ～ 50%，而感染率高达85% 以上。
猪支原体肺炎的预防、控制和净化须采取早期诊断、及时隔离、抗生素治疗或淘汰病猪、疫苗接种、全进全出、严格消毒等综合性措施，其中疫苗预防起着关键性作用。
大量研究已经证实了支原体疫苗带来的经济效益，使用肺炎支原体疫苗可以降低肺炎发生率和与肺炎支原体感染有关的经济损失，在感染严重的猪场其效益和成本的比例可以达到5 ∶ 1。
目前国内应用的猪肺炎支原体疫苗包括弱毒活疫苗和灭活苗，活疫苗由于胸腔注射途径难于掌握，副反应较大，因此推广受到限制，而灭活疫苗特别是新型佐剂和双重佐剂的疫苗在田间显示出对猪支原体肺炎较为理想的控制效果。
现仅从以下几个方面对猪肺炎支原体弱毒活疫苗和灭活苗的优缺点进行比较分析，以期为猪肺炎支原体疫苗的临床选用提供参考。
（一）弱毒活疫苗和灭活苗特征1. 弱毒活疫苗。
在国内, 弱毒活疫苗主要有猪肺炎支原体兔化弱毒苗和168 株无细胞培养弱毒苗,它们分别由北京兽药监察所和江苏农科院畜牧兽医研究所研制成功。
猪肺炎支原体弱毒活疫苗采用胸腔和肺部注射的免疫途径不易为一般用户接受, 因而在推广应用上受到一定限制。
猪肺炎支原体兔化弱毒苗于1989 年由北京兽药监察所研制成功，该疫苗采用济南强毒株在乳兔山连续传代致弱后获得兔化弱毒株，经配苗冻干后制成兔化弱毒苗。
经临床试用证明，该毒株制成的疫苗安全有效，能使80% 的免疫猪在强度攻击后肺部组织不出现任何病变，而对照组全部发病。
猪支原体肺炎的诊断和防治体会
猪支原体肺炎的诊断和防治体会
猪支原体是一种常见的猪病原微生物，会造成猪呼吸系统疾病，如猪支原体肺炎。
本
文将介绍猪支原体肺炎的诊断与防治体会。
首先，猪支原体肺炎的临床症状主要包括咳嗽、呼吸困难、流涕、眼部发炎、发热等。
但这些症状并不一定都出现，因此需要通过实验室检测来确定确诊。
目前，常用的病原学检测方法有病理解剖、病理组织学检查、病原体分离、PCR检测、免疫学检测等。
综合诊断的方法可以更加准确地确诊猪支原体肺炎。
除了临床症状和实验
室检测，还需要充分了解该猪群的饲养环境、饲料情况、疫苗生产及接种情况等，因为这
些都与猪支原体肺炎的发生和传播有关。
针对猪支原体肺炎的防治措施主要有以下几个方面。
首先是加强生物安全管理。
定期清洗养殖场环境，保持合适的温湿度和通风条件，增
强猪的免疫力，避免交叉感染等。
其次是加强管理，实行严格的动物检疫制度，防范疫情的扩散。
此外，还要加强饲料和水源的质量管理，选择抗体力强、免疫效果好的疫苗进行接种，提高猪的免疫力。
如果出现疫情，需要及时隔离患病猪，对于病死猪体要进行妥善处理。
总之，猪支原体肺炎对于养殖业来说是一个很大的危害，应该从生物安全、治疗方案
和管理等方面进行综合的防控措施，减少病害的发生。
猪支原体肺炎的诊断及防制
猪支原体肺炎的诊断及防制作者：段茜,石国林,陈张华,等来源：《湖北畜牧兽医》 2019年第1期段茜,石国林,陈张华,李福泉(内江职业技术学院,四川内江 641000)摘要:猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪支气管肺炎的主要病原,严重危害着养猪事业的发展。
对猪支原体肺炎的病原学特征、诊断、疫苗及综合防制等进行了介绍,以期避免或减少该病发生,保障养猪业健康发展。
关键词:猪肺炎支原体;诊断;防制中图分类号:S858.28文献标识码:B文章编号:1007-273X(2019)01-0021-02猪支原体肺炎又称猪霉形体肺炎,是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,MHP)引起的一种以感染猪表现咳嗽、喘气、生长不良等症状为特征的接触性、慢性传染病。
猪支原体肺炎多为地方流行性,世界各地均有发生,对养猪业的健康发展造成了严重的影响。
由于猪感染MhP后,其呼吸道纤毛的清除能力被损坏,致病微生物很容易定植和侵袭;同时MhP的感染会降低巨噬细胞的吞噬力,损害机体免疫功能,从而使MhP持续存在,导致二次感染,引起猪呼吸系统疾病综合征的发生,增大了当前猪病诊断、预防控制的难度[1]。
MhP一旦感染猪群,传播速度快,如不及时采取措施很难将其根除,被喻为全球养猪业的“隐形杀手”。
1 病原学特征MhP属柔膜体纲支原体目支原体科支原体属,呈高度多形性,如环状、球状、点状等。
革兰氏染色阴性,但不易着色;姬姆萨染色或瑞氏染色为淡紫色,着色良好。
MhP对外界环境的抵抗力较弱,存活不超过24 h。
由于缺乏细胞壁,MhP的耐药性广泛,对青霉素、链霉素和磺胺类等药物均不敏感。
2 诊断2.1 病原分离培养鉴定分离培养常用于检测和鉴定大多数细菌性微生物,而分离培养被认为是检测MhP的“金标准”。
由于MhP的培养需要特殊的培养基且生长十分缓慢,通常需要4~8周的生长才能被检测到,在分离培养过程中也容易被其他支原体或细菌覆盖生长,因此要成功分离培养MhP比较困难。
国家三类新兽药——猪支原体肺炎灭活疫苗(DJ-166株)
ｌ Ｏ ｌ ０ ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ １ １ １
四、 免疫原性试验
将Ｄ Ｊ － １ ６ ６ 株培养物免疫健康易感 猪后 ２ ８ ｄ 攻毒 ， 攻毒后 ２ ８ ｄ 剖杀 ， 结果见表 ２ 。
表 ２ 猪肺 炎支 原体 Ｄ Ｊ 一 １ ６ ６ 株 免疫原性 试验结果
组别
攻毒 毒株 猪编号
０ Ｏ ２ ４ ５
菌落与支原 体特异性抗体反应 ，与标 记抗体结合 后 ，
荧光显微镜下观察呈现 明亮的黄绿色荧光 。
新 药 动 态
部 申请三类新兽药 ， 证 书 为（ ２ ０ １ ５ ） 新兽药证字 ５ ８ 号。
三、 活菌 滴度 测 定
二、 生 物 学特 性
猪肺炎支原体 ｒ ） ｊ 一 １ ６ ６ 株在 制备 的无细胞 培养基 中活
动态 的 括 试 息 作 新 原 纸 用 ， 兽 料 ） 着 用 本 ， 重 途 药 栏 为 和 介 及 、 目 广 企 成 绍 临 主 大 业 床 品 药 要 读 物 应 内 药 是 者 部 的 用 、 及 提 研 特 效 疫 时 供 制 苗 点 果 报 最 的 及 、 道 新 作 各 国 的 产 种 用 兽 家 品 检 机 批 药 （ 理 测 准 信 包 、
４ ． 间接 菌落表面免疫荧光剂试验
段， 经过基 因测序 后 ， 初步确定为猪肺炎支原体。然后有经 多重 Ｐ Ｃ Ｉ Ｌ （ 猪鼻 支原体 、 猪絮状 支原体和猪 肺炎支原 体 ） 、 培养 特性 、 生化 特性和血 清学 特性鉴 定 ， 证 明为猪肺 炎支 原体 ， 纯净 。菌株 在人工合成培养基传 ８代稳 定后 ， 经过 ３ 次克隆纯化后制备得到该株猪肺炎支原体。并 向中国农业
２
ｌ ２
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目录猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录2猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表11附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表13附录6 抗体检测记录表14附录7 淋巴细胞增殖试验结果16附录8 血象分析17附录9 T淋巴细胞分类计数18附录10 黏膜抗体检测记录表19附录11攻毒记录单20附录12特殊情况记录表21附录13 攻毒后临床症状观察记录表22附录14日增重记录24附录15 攻毒后肺部剖检记录26附录16攻毒后剖检记录28附录17 攻毒后肺部病理损伤记录30附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测32猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺内注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、吉林正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由江苏省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
B.猪支原体肺炎活疫苗（168株），由南京天邦生物科技有限公司提供，规格为50头份/瓶，批号为139078-1。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
C.猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株），由吉林正业生物科技有限公司提供，规格为4头份/瓶，批号为2014002。
有效期：___D.猪支原体肺炎灭活疫苗（P-5722-3株，Suvaxyn RespiFend MH），由上海硕腾（辉瑞）提供，规格为50头份/瓶，批号为1302777A。
有效期：15/11/16_2.1.1.2 试剂A．猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株）稀释液,批号：2014002；有效期：20170115 B．猪支原体肺炎雾化活疫苗稀释液C．猪支原体肺炎肌注活疫苗佐剂G-1-12.1.2动物选择猪肺炎支原体抗体、抗原均阴性的5-10日龄仔猪，54头.饲养地点：江苏省农科院兽医所饲养员：_徐飞扬，陈才__仔猪免疫状况：未打气喘病疫苗。
2.1.3 动物饲料仔猪料:2.1.4 设备气雾免疫设备、滴鼻头、20（10、5、2）ml注射器、耳标、耳号钳、冰盒、相机、解剖器械、离心管。
2.1.5攻毒用强毒猪肺炎支原体强毒JS株组织强毒，来自本所，批号20130625，-20℃保存，有效期至：2014/06/25。
2.2方法2.2.1动物分组说明G1:-猪支原体肺炎活疫苗168株肺内免疫组。
每头猪肺内注射免疫1头份（1ml）即1×107 CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。
免疫一次，一免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G2: -猪支原体肺炎活疫苗AN306株肺内免疫组。
每头猪肺内注射免疫1ml，即1×107CCU的猪支原体肺炎活疫苗AN306株。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G3: -猪支原体肺炎活疫苗168株气雾免疫组。
每头猪气雾免疫5×107CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G4:-猪支原体肺炎活疫苗168株肌注免疫组。
每头猪肌肉注射免疫5×107 CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。
首免后两周二免，一免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G5: -猪支原体肺炎灭活疫苗肌注免疫组。
每头猪肌肉注射免疫1头份(2ml)猪支原体肺炎灭活疫苗。
首后2周，加强免疫一次，首免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G6:-猪支原体肺炎乳兔活疫苗胸腔免疫组。
每头猪胸腔注射免疫1头份（5ml）猪支原体肺炎乳兔活疫苗。
免疫一次，一免后6周攻毒，攻毒后28天剖杀。
G7: -猪支原体肺炎乳兔活疫苗滴鼻免疫组。
每头猪滴鼻免疫？头份猪支原体肺炎乳兔活疫苗。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G8: -健康对照组（不免疫，不攻毒）。
不接种疫苗。
不攻毒，其它组攻毒后28天剖杀。
G9: 攻毒对照组（不免疫，只攻毒）。
不免疫疫苗，只攻毒，攻毒后28天剖杀。
2.2.2动物分组与试验操作概表2.2.3免疫G1—猪支原体肺炎活疫苗168株肺内免疫组用灭菌生理盐水50ml溶解168活疫苗冻干粉1瓶，使活疫苗终浓度为1×107 CCU/ml，1头份/ml。
每头猪肺内免疫1ml，即1×107 CCU/头。
G2—猪支原体肺炎活疫苗AN306株肺内免疫组用灭菌生理盐水溶解AN306活疫苗冻干粉，使活疫苗终浓度为1×107CCU/ml。
每头猪肺内免疫1ml，即1×107 CCU/头。
G3: -猪支原体肺炎活疫苗168株气雾免疫组。
将1瓶168株活疫苗用5ml无菌猪支原体肺炎雾化活疫苗稀释液溶解稀释成1×108CCU/ml浓度，取5ml疫苗溶液倒入喷雾器，对保温箱中的6头仔猪进行气雾免疫（0.2MPa，约10min）。
G4:-猪支原体肺炎活疫苗168株肌注免疫组。
将1瓶168株活疫苗用25ml佐剂G-1-1溶液稀释成2×107CCU/ml浓度，每头仔猪颈部肌肉注射免疫2.5ml，注射时分左右侧肌肉共2个注射点。
首免后14天二免，方法同上。
G5: -猪支原体肺炎灭活疫苗肌注免疫组。
按猪支原体肺炎灭活疫苗说明书，每头猪肌肉注射免疫1头份猪支原体肺炎灭活疫苗。
G6:-猪支原体肺炎乳兔活疫苗胸腔免疫组。
按猪支原体肺炎乳兔活疫苗说明书，每头猪胸腔免疫1头份猪支原体肺炎活疫苗。
G7: -猪支原体肺炎乳兔活疫苗滴鼻免疫组。
每头猪滴鼻免疫？头份猪支原体肺炎乳兔活疫苗。
免疫一次，6周后攻毒，攻毒后28天剖杀。
G8—健康对照不免疫G9—攻毒对照不免疫2.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录免疫后观察并记录可能出现的临床症状，填写附录3。
尤其要记录如下重要的症状：咳嗽、呼吸困难、俯卧、呕吐、食欲不振、震颤、死亡等2.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测除攻毒对照组外，其余各组于免疫前、免疫后2、4、6周取3头猪各采血1ml（两次免疫组于首免前、首免后3、4、6周采血），分离血清，用自制P46-ELISA试剂盒检测I gG抗体。
对于阳性者继续用分型试剂盒检测IgG亚类。
2.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测除攻毒对照组外，其余各组于首免后2、4、6周取3头猪各采集抗凝血5ml（两次免疫组于免疫后3、4、6周采血），其中1ml用于血液生化检测；1ml用流式细胞仪检测CD4+T细胞、CD8+T细胞含量、CD4+CD8+双阳性细胞、CD4+/CD8+比率；另外3ml用于淋巴细胞增殖试验和IFN-γ检测2.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测除攻毒对照组外，其余各组于免疫前、首免后7、14、21、28、35、42天采集鼻拭子样品，检测吸呼道特异性sIgA抗体。
2.2.8攻毒将每瓶猪肺炎支原体组织强毒用50ml生理盐水稀释，气管途径接种试验组试验猪，每头5ml。
2.2.9攻毒后临床症状观察所有猪在攻毒后按附录2要求观察临床症状2.2.10日增重计算各组分别选定3头猪，不采集血样，分别于首免当天、攻毒当天和剖杀当天称重，计算日增重。
2.2.11攻毒后肉眼病变剖检所有仔猪在攻毒后的第28天进行宰杀，记录肺病变，用28分法统计确定肺病变程度，并记算攻毒保护率（见附录1）。
2.2.12攻毒后病理损伤观察剖杀后，采集所有猪左尖叶，福尔马列林溶液固定后，切片观察病理损伤。
2.2.13攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测剖杀后，每头猪用50ml生理盐水采集肺泡灌洗液，用定量PCR方法检测猪肺炎支原体抗原。
附录1 攻毒保护率计算攻毒保护率的统计与评判：试验猪扑杀后，分别记录左尖叶、左心叶、左膈叶、右尖叶、右心叶、右膈叶、副叶病变百分比率，将0～25%记为1；26～50%记为2；51～75%记为3；76～100%记为4，统计每个试验猪病肺病变指数（最高为28）。
试验猪病变指数大于10判为发病，小于4为健康（排除猪肺炎支原体感染），根据肺病变指数，按以下公式计算试验猪攻毒保护指数。
试验猪攻毒保护指数＝（攻毒不免疫对照组肺病变指数平均值－试验猪肺病变指数）/（攻毒不免疫对照组肺病变指数平均值－不攻毒不免疫对照组肺病变指数平均值）％试验猪攻毒保护指数小于60％为无保护，大于或等于60％为有保护，再按以下公式计算试验猪攻毒保护率。
试验猪攻毒保护率＝有保护试验猪数/试验猪数试验在阳性对照组全部发病、阴性对照组至少全部健康时有效。
附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准评判参数0 1 2 10 最高分咳嗽无有严重 2呼吸困难无有严重 2呕吐无有严重 2俯卧无有严重(躺卧) 2食欲不振无有 1震颤无有 1死亡无有10 注射后第1日(D1)直肠温1.0℃以下 1.0℃～1.5℃ 1.5℃以上 2度高出范围注射后第2日(D2)直肠温1.0℃以下 1.0℃～1.5℃ 1.5℃以上 2度高出范围注射后第3日直肠温度较0.5℃以下0.5～1.0℃ 1.0℃以上 2对照组高出范围累计总分28猪安检试验中，每头试验猪症状全部累计，总分不大于2判为安全，累计总分大于5判为不安全，累计总分2～5，可重检1次，重检累计总分不大于2安全。
附录3动物分组记录表猪场：农科院附录4动物免疫记录表操作人: 复核人：附录5免疫后异常临床症状观察记录表组：猪数：日期：标记：附录6 抗体检测记录表附录7 淋巴细胞增殖试验结果附录8 血象分析附录9 T淋巴细胞分类计数附录10 黏膜抗体检测记录表附录11攻毒记录单攻毒株: 批号：来源：稀释液：批号：来源：动物攻毒操作人：复核人：附录12特殊情况记录表－如有特殊情况，比如转群，疾病，用药，换料等影响动物的事件。
填写“附录12: 特殊情况记录”注：试验负责人员（SGQ, LMJ）应定期现场核查饲养情况，以及攻毒后的临床症状等，并在临床观察以及饲养记录上签字及日期。
及时将原始数据传递至JAAS，便于沟通。
附录13攻毒后临床症状观察记录表附录14日增重记录附录15攻毒后肺部剖检记录附录16攻毒后剖检记录日期：操作人：复核人：附录17攻毒后肺部病理损伤记录附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测。