胶质瘤基因治疗的发展和现状PPT课件

胶质瘤基因治疗的发展和现 状
基因治疗的发展：
肿瘤基因治疗的实验研究始于80年代末。随 着分子生物学技术的进步和肿瘤发病机制研 究的深入基因治疗越来越受到重视，用于治 疗肿瘤的基因靶点主要有: 组织相容性抗原, 如HLA - B7 治疗直肠癌; 肿瘤抑制基因,如 P16 治疗肺癌; 细胞因子,如用IL - 2治疗转 移性的乳腺癌等。
同时对以病毒为载体转导自杀基因治疗神经 胶质细胞瘤的研究拉开了胶质瘤基因治疗的 序幕。
基因治疗的发展：
自从1992年,美国NIH批准第1个运用反转录病 毒介导HSV2tk/ GCV 系统治疗脑胶质瘤的临 床方案,全球掀起了肿瘤基因治疗的热潮。
这一时期，一些学者对抑瘤机制和基因的研 究也取得一定的成果。如：自杀基因治疗、 免疫基因治疗、抑癌基因治疗、抑制血管生 成的基因治疗。
基因治疗的发展：
这一时期,随着免疫学的发展和对基因技术研 究的不断加深,一些研究者结合病毒载体,转 导自杀基因等方法在神经胶质瘤的治疗方面 取得不少可喜成就,使基因治疗的作用进一步 为人们所认识。但仍然存在许多问题。
基因治疗的发展：
1、各种各样的胶质瘤基因治疗的策略都有一 定的局限性。如自杀基因治疗中GCV的毒性作 用，血脑屏障的阻碍，各种基因在体内不能 长期稳定表达等等 。
1994年Mullen等把CD基因转染瘤细胞随后给 予5—Fc，从而杀伤肿瘤细胞。
基因治疗的发展：
1996年—2002年上海市神经外科研究所联合 上海长征医院报告25例脑胶质细胞瘤用含单 纯疮疹病毒胸昔激酶基因的逆转录病毒载体 生产细胞(pLTKcSN/VPC)注人和经甲基无环鸟 昔(GCV) 全身给药治疗脑胶质瘤2一5年随访 观察( 失访1 例) 的结果。结果证实脑胶质 瘤基因治疗的近期疗效要优于常规治疗疗效。
基因治疗的发展：
自杀基因 ：将它们转导至哺乳动物的细胞后， 其表达产物将原先对细胞无毒或相对低毒的 物质转变为细胞毒性物质，这种导致细胞 “自杀”的基因称为“自杀基因”。目前研 究最为广泛的是单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶 （HSV-TK)基因以及肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (CD) 。
基因治疗的发展：
1992年,美国NIH小组Culver和Ram等把单纯疱 疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSV-TK)基因导入逆转 录病毒载体让其在“包装细胞”中复制包装， 以产生具有感染性病毒粒子，将其注入胶质 瘤内，再给予GCV，取得了一定效果。
基因治疗的发展：
用逆转录病毒或腺病毒转染血小板因子4 （PF4） cDNA 后, 胶质瘤的内皮细胞DNA 合 成降低40% 以上, 肿瘤血管减少, 生长受到 抑制。
1999年Im 等利用腺病毒载体将血管内皮生长 因子（VEGF） cDNA 分子转染到胶质瘤细胞 中,重组腺病毒载体Ad5CMV2alpha VEGF 携带 野生型VEGF 165 cDNA 反义编码序列,恶性胶 质瘤细胞被其感染后,检测到内源性VEGF mRNA 明显减少,相应的VEGF 蛋白也明显减少。 将Ad5 CMV2alpha VEGF 注入到荷胶质瘤裸鼠 体表的肿瘤中,明显抑制肿瘤的生长。
基因治疗的发展：
1995年Sobol等应用反转录病毒载体将IL-2基 因导入病人自身的胶质瘤细胞，此种培养细 胞在经放射线照射后作为肿瘤疫苗反复接种 于病人自身皮下，此种方案得到RAC （recombinant DNA advisory committee） 的批准，结果病人经过10 次疫苗接种后，4 个月后复查MRI，可观察到肿瘤明显缩小，末 梢血中可查到CD8+T 淋巴细胞。
抑制血管生成的基因治疗:新生血管生成在实 体肿瘤发展中的重要作用已被人们认识, 促 血管生成因素与血管生成抑制物之间的平衡 是新生血管是否形成的决定因素, 向肿瘤细 胞转染血管生成抑制因子基因, 增加其在肿 瘤局部的表达, 有利于使这种平衡向抑制血 管生成的方面倾斜, 达到抑制肿瘤生长的目 的。
基因治疗的发展：
基因治疗的发展：
免疫基因治疗：包括将具有免疫刺激作用的 细胞因子基因如白细胞介素类(IL-2、IL-4、 IL-6、IL-7)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子 (TNF-α )粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)等直接注入肿瘤内或体外转导入TIL或 LAK细胞,通过抗肿瘤活性物质的表达增强其 杀瘤作用。
Bozik等提出将IL-4基因导入自身肿瘤细胞的 治疗方案。
基因治疗的发展：
抑癌基因治疗:原癌基因和抑癌基因都是正常 细胞内存在的基因,它们在细胞的生长、分裂、 分化和增殖中起着重要的作用。抑癌基因亦 称为抗癌基因,是指正常细胞内存在的能抑制 细胞转化和肿瘤发生的一类基因群。目前p53 基因是与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因,不 少研究也证明肿瘤的生成会伴随p53 的缺失。 近几年对于p53的研究也非常热门。
基因治疗的发展：
1994年Fujiqara等用逆转录病毒载体把野生 型和突变型P53基因在体外转染胶质瘤细胞发 现野生型P53能抑制瘤细胞生长 。
1 和p53 基因,对人肝细胞癌裸鼠动物模型 进行基因治疗,结果能明显抑制肿瘤的生长。
基因治疗的发展：
基因治疗的发展：
在此期间，病毒方法是应用最广的基因转移 方法，常用的病毒载体有反转录病毒（RV）、 腺病毒（AV）、腺病毒相关病毒（AVV）、单 纯疱疹病毒（HSV）等
1998 年，日本学者夏日与美国学者合作，将 腺病毒相关病毒AVV包装起来进行脑肿瘤动物 模型基因治疗，获得显著效果AVV表达稳定性 好，病毒无病原性，是当时较为理想的载体
基因治疗的发展：
2、同时各种病毒载体也存在一定的局限性： 逆转录病毒(RV ) 载体: RV 滴度低, 难于纯
化且不稳定, 不能转染处于静息期的肿瘤细 胞群, 有插入突变的可能, 远离瘤床的肿瘤 不能被病毒转染, 有神经毒性等。 腺病毒(AV ) 载体：存在于染色体外, 被转 染的细胞其子代细胞不再表达外源性基因。 腺相关病毒(AAV ) 载体: 每个载体颗粒的整 合效率低, 外源基因插入容量小; 常整合的 人类19 号染色体的重排与人类慢性B 细胞性 白血病相关, 安全性尚需观察。