EISA原理方法操作及注意事项PPT课件

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ELISA基本原理和方法课件

ELISA基本原理和方法课件

ELISA应用领域和案例
医学领域
• 肿瘤标志物检测 • 感染病及免疫状态检测
食品领域
环境领域
• 动物和植物源性污染物检测 • 农药残留等检测
• 有毒物质或污染物检测 • 水质和空气质量检测
ELISA常见问题
Q:为什么ELISA的专一性很高?
A:ELISA利用特异性抗体来检测特定的生物分子, 因此具有高度的专一性和灵敏度。
数据处理
数据处理需要使用软件进行标准 曲线拟合和未知样品度计算, 以获得可靠的实验结果。
ELISA优缺点与发展方向
1 优点
灵敏度高、特异性强、多 样性和可靠性好、适用范 围广。
2 缺点
容易受到技术和环境因素 的影响,需要严格操作和 质量控制。
3 发展方向
ELISA在新型技术、新型仪 器和新型试剂的推广应用 方面有很大的发展潜力, 如基于CRISPR-Cas9技术的 特异性检测方法。
Q:ELISA的数据分析是什么?
A:ELISA的数据分析是标准曲线的绘制和未知样 品浓度的计算,其中包括线性回归、拐点法、 ABA法等。
Q:ELISA与其他免疫分析方法的比较?
A:ELISA具有广泛的应用范围、快速的检测时间、 低成本和高灵敏度等优点,但同时也存在一些 限制和缺点。
Q:ELISA试剂盒的选择?
2
检测过程
检测过程需要选择合适的ELISA试剂盒和标准曲线,以获得准确的测定结果。
3
数据处理
数据处理包括标准曲线的绘制和未知样品浓度的计算,需要注意统计学方法和误 差分析。
ELISA检测过程详解
前处理
前处理步骤包括样品的收集、稀 释、净化等,需要遵循标准化的 程序和实验操作规范。

ELISA实验 ppt课件

ELISA实验 ppt课件

1.4 免疫测定在临床检验中的应用
由于各种抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制备 特异性的抗血清或单克隆抗体,利用此抗体作为试剂就可 检测标本中相应的抗原,因此免疫测定的应用范围极广。
2 ELISA的类型
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方 法中有三个必要的试剂: (1)固相的抗原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent ); (2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate); (3)酶反应的底物。
4 对照设定
阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)是检验试验有效性的控制品,同时也作为判断结果 的对照。
阳性对照品的基本组成应尽量与检测标本的组成相一致,多以含 蛋白保护剂的缓冲液为基质。
加入的量应与试剂的敏感度相称; 在测定中得到的吸光值与受检标本吸光值比较,可以估计标本物 质的量。
1.1.2 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之 间。化学结构和空间构型互补关系,具有高度的特异性。
测定某一特定的物质,而不需先分离待检物。
1.1.3 最适比例
1.1.4 敏感性
化学比色法的敏感度为mg/ml水平 酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml 免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿 标记的免疫敏感度可提高数千倍,达ng/ml水平 例如,HBsAg,其敏感度可达0.1ng/ml。
ELISA的试剂准备A
固相载体 聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能,抗体或蛋 白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。
聚氯乙烯。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高,但 空白值也略高。

ELISA检测技术培训课件

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偶然误差
由于某些不可预测的因素引起 的误差,如温度、湿度等环境 变化。
偏差分析
对实验数据进行统计分析,评 估误差的大小和来源,以便采 取相应的措施提高实验的准确
性和可靠性。
06 elisa检测技术实验案例 分析
案例一
总结词
ELISA检测技术可用于病毒检测,通过对病毒抗原或抗体的检测,为病毒感染的 诊断和治疗提供有力支持。
详细描述
ELISA检测技术可用于食品中农药残留、兽药残留、毒素等有 害物质的检测。该技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便 、快速等优点,为食品安全监管提供了有力的技术支持。
案例三
总结词
ELISA检测技术可用于生物药物研发,通过对药物与靶点相互作用的研究,为新药研发提供重要依据 。
详细描述
ELISA检测技术可用于研究药物与生物靶点的相互作用,如蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-小分子 相互作用等。通过对药物作用机制的研究,为新药的研发提供理论支持和实践依据。同时,ELISA技 术还可用于药物的筛选和药效评价等研究工作。
空白对照设置
设置空白对照,用于校准 实验结果。
孵育与洗涤
孵育
将酶标板置于恒温孵育箱中,按 照试剂盒要求进行孵育。
洗涤
孵育完成后,进行洗涤操作,去 除未结合的物质。
读板与数据分析
读板
使用酶标仪读取酶标板的吸光度值。
数据分析
根据试剂盒提供的标准曲线,对数据进行拟合分析,得出待测样本的浓度或活 性。
03 elisa检测技术实验材料
感谢您的观看
THANKS
t检验和方差分析
03
对实验组和对照组的数据进行t检验或方差分析,以评估实验组
和对照组之间的差异。

《实验四ELISA》PPT课件

《实验四ELISA》PPT课件
• HBcAg存在于Dane颗粒核心结构表面,为内壳 成分,其外被HBsAg覆盖,不易在血循环中检出, 但能刺激机体产生抗-HBc,抗-HBc IgM的存在 提示HBV处于复制状态;
• HBeAg游离于血中,其消长与病毒体消长及 DNA多聚酶消长基本一致,故HBeAg为HBV复 制及具有强感染性的一个指标;
断试剂盒。 预包被微孔条(用纯化的单抗-HBs或纯化
HBsAg包被) 酶结合物(多克隆抗-HBs-HRP或HBsAg-
HRP ) 阳性对照 阴性对照 洗涤液(浓缩液,用前以蒸馏水稀释25倍) 显色剂A、B(一般为四甲基联苯胺和H2O2 ) 终止液(2 mol/L H2SO4)。 2.微量加样器,吸水纸等。
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实验步骤
• 每4人一组,每组有检测HBsAg和检测 HBsAb的反应条各一条, 每条含6个反应孔。
•每组有2种试剂盒(黄色测HBsAg,粉 红色测HBsAb),黄色试剂盒用黄色反 应条,粉红色试剂盒用红色反应条。
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3、 检测方法
每孔加待检血清50ul, 每次实验各做1个阴性 对照和阳性对照;本实验空白对照孔不设, 前面讲台上有空白的反应条,可以作为空 白对照。
(7)孔内污染杂物;
(8)酶标仪滤光片不正确;
(9)血清标本未完全凝固即加入,反应孔 内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞,易出 现假阳性反应等。
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• 3.白板
(阳性对照不显色) (1)漏加酶结合物;
(2)洗板液配制中出现问题,如量筒不干 净,含酶抑制物(如叠氮钠)等。
(3)漏加显色剂A或B;
4.洗涤时各孔均须加满,防止孔口内有游离 酶未能洗净。
5.待测标本不可用NaN3防腐。所有样品都 应按传染源处理。

elisa检测技术 ppt课件 共25页

elisa检测技术 ppt课件 共25页
优点: 1. 特异性高、准确性好; 2. 实验操作简便,用时短。
缺点: 1. 应用范围较小,生产难度大。 ——需制备各种酶标抗原或抗体。
间接法ELISA
间接法ELISA是将酶标记在二抗上,当抗体(一抗)和包被 在酶标板的抗原结合形成抗原-抗体复合物后,再以酶标二抗和 复合物结合,通过测定酶反应产物的颜色可以(间接)反映一抗 和抗原的结合情况,进而计算出抗原或抗体的量(见后图)。
洗涤3次,拍干
加底物溶液 (空孔除外)
避光 37℃, 10-30min
加终止液 (空孔除外)
加酶标抗体 (空孔除外)
上机检测、结果判定 (空孔调零)
双抗夹心法检测血清IL-2含量
设计加板次序 (空孔、阴、阳、标准)
加板 (阴、阳、标准、样)
37℃, 30min 洗涤3次, 拍干
加酶标抗体 (空孔除外)
酶标板
ELISA常用酶类
辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
上式中,DH2为供氢体,H2O2为受氢体。
常用底物:
1. 邻苯二胺(OPD),产物为橙红色(492nm检测); 2. 四甲基联苯胺(TMB),产物为蓝色,酸性条件下变为
谢谢!
xiexie!
ELISA试剂盒的组成
完整的ELISA试剂盒通常包含以下各组分: (1)已包被抗原或抗体的固相载体(俗称酶标板); (2)酶标记的抗原或抗体(酶标记物); (3)酶的底物; (4)参考标准品(定量试剂盒)及其稀释液; (5)酶标记物及样本的稀释液; (6)洗涤液(通常为浓缩液,用前按比例稀释); (7)反应终止液; (8)封口膜若干、说明书一份。

《ELISA检测技术》课件

《ELISA检测技术》课件

总结词
通过间接利用酶标记的抗抗体与待测 样本中的抗原反应。
详细描述
间接ELISA是在固相载体上包被已知 抗原,然后加入酶标记的抗抗体与待 测样本中的抗原反应,再加入底物显 色,达到检测抗原的目的。
夹心ELISA
总结词
通过酶标记的二抗将待测样本中的抗原夹在固相载体和酶标记的抗体之间。
详细描述
夹心ELISA是在固相载体上包被特异性抗体,然后加入待测样本与酶标记的二抗 反应,形成固相抗体-抗原-酶标记抗体的复合物,再加入底物显色,达到检测 抗原的目的。
《elisa检测技术》ppt 课件
目录
• ELISA检测技术概述 • ELISA检测技术的分类 • ELISA检测技术实验步骤 • ELISA检测技术的影响因素 • ELISA检测技术的优缺点 • ELISA检测技术的应用实例
01
ELISA检测技术概述
ELISA检测技术的定义
要点一
酶联免疫吸附分析(EnzymeLinked Immu…
一种基于抗原-抗体反应的检测技术,通过酶标记的方法将 免疫反应与化学信号放大,实现对目标分子的定量或定性 分析。
要点二
特点
灵敏度高、特异性强、操作简便、适用于大量样本检测。
ELISA检测技术的原理
抗原或抗体与固相载体表 面的抗原或抗体结合,形 成固相复合物;
加入酶标记的抗原或抗体 ,与固相复合物结合;
基因表达研究
通过ELISA检测技术可以检测基因表达产物的含量和活性,了解基因表达的规律和调控机制。
THANKS
感谢观看
显色
01
02
03
显色
加入显色底物,使抗原抗 体复合物呈现颜色反应。
显色底物

酶联免疫吸附实验ppt课件

作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通 过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。 3、若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后 重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。 4、试剂盒灵敏度:最小可测人TNF-a达4pg/ml。
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第四.五部分: 注意事项(1)
1、手工洗板时,甩尽孔内液体,每孔加洗涤 液350μl,静止30秒后甩尽液体,在厚迭吸 水纸上拍干,洗4次。
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工作液 100ul/孔,封住板孔, 37℃孵育60分钟。
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第四.三部分: 实验方法和步骤
9、洗板4次。 10 、除空白孔外,加入1:100稀释的酶结合
工作液(100 ul/孔).封住板孔, 37℃孵育30分 钟. 11 、洗板4次. 12、各孔加入显色剂100 ul/孔,避光37℃孵育 10-20分钟。 13、各孔加入终止液100ul/孔,混匀后即刻测 A450值(5分钟内)。15ຫໍສະໝຸດ 第四.三部分: 实验方法和步骤
5、从密封袋中取出所需板条,其它板条密封放回 4℃
6、除空白孔外,分别将不同浓度标准品/标本100ul/ 孔加入板条的相应孔中,标准品和标本应作双复 孔或三复孔。用封板胶纸封住反应孔,37℃孵育 90分钟。
7、洗板4次。 8、除空白孔外,加入1:100稀释的生物素化抗体(2a)
• 2、将浓缩洗涤液(4)用双蒸水稀释(1:20)。未 用完的放回4℃。
• 3、标准品:以标准品/标本稀释液(1b)1.0ml复溶冻 干标准品(1a), 静置15分钟后混匀,按说明稀释至 所需浓度,再进行倍比稀释至所需浓度。未用完 的复溶标准品放入-20℃保存, 稀释的标准品不应 重复使用。
• 4、可根据实际情况,将标本做适当倍数稀释(可 做预实验,以确定稀释倍数)。

ELISA检测技术培训课件


CHAPTER 02
elisa检测技术的基本原理
酶的特性与作用
01
02
03
酶的催化作用
酶是一种生物催化剂,具 有高效、专一和可调节的 催化特性,能够加速化学 反应的速率。
酶的稳定性
酶在适宜的条件下具有较 好的稳定性,能够在实验 过程中保持活性,确保反 应的顺利进行。
酶的特异性
酶对底物具有选择性,能 够催化特定化学反应,有 利于实验结果的准确性和 可靠性。
实验前的准备
实验环境
确保实验室清洁、无尘,并保 持恒温、恒湿。
实验器材
准备所需的实验器材,如酶标 板、吸管、移液器等,并进行 清洗和消毒。
试剂准备
根据实验需求,配制所需的缓 冲液、酶、底物等试剂,并确 保其质量和浓度符合要求。
样本处理
对采集的样本进行预处理,如 离心、稀释等,以便后续实验
操作。
加样与孵育
elisa检测技术的发展历程
1971年,Engvall和Perlmann 发表了有关酶联免疫吸附试验的 开创性文章,标志着ELISA技术
的诞生。
1977年,第一个商品化的ELISA 试剂盒问世,用于检测血清中的
HBsAg。
随着技术的不断发展和改进, ELISA技术在灵敏度、特异性、 操作简便性和应用范围等方面得
elisa检测技术培训课 件
汇报人:可编辑 2023-12-25
目录
• elisa检测技术概述 • elisa检测技术的基本原理 • elisa检测技术的操作流程 • elisa检测技术的注意事项与常见问题 • elisa检测技术的优化与发展趋势
CHAPTER 01
elisa检测技术概述
elisa检测技术的定义

ELISA介绍 PPT课件

ELISA 知识简介
原理
类型 试剂 准备
对照 标本 结果
1. ELISA的原理 2. ELISA的类型 3. 试剂准备:免疫吸附剂
结合物 酶底物的准备 4. 对照设定 5. 标本的采取和保存 6. 结果判断
原理
类型
试剂 准备
ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay),是 在1971年建立的一种测定方法,称为酶联免疫吸附测定.
原理 2.2.4 竞争法测抗体
类型
试剂 准备
对照 标本 结果
当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化 抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体 和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越 多,结合在固相上的酶标抗体越少,因此阳性反应呈色浅于 阴性反应。
原理 2.2.5 竞争法测抗原
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 可设计出各种不同类型的检测方法。
双抗体夹心法 测抗原
双抗原夹心法 测抗体
间接法
测抗体
竞争法
测抗体、测抗原
捕获包被法 测抗体
原理 2.2.1 双抗体夹心法测抗原
类型
试剂 准备
对照 标本 结果
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原(二价或二价 以上),例如HBsAg、HBeAg、AFP等。只要获得针对受检 抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合 物而建立此法。但不适用于测定半抗原及小分子单价抗 原,因其不能形成两位点夹心。
结果 的酶标记抗原为其缺点。
原理
类型 试剂 准备
对照 标本
2.2.6 捕获包被法测IgM抗体
IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法ELISA一般仅适用 于检测总抗体或IgG抗体。如果抗原包被的间接法直接测定IgM抗体, 因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体,后者将竞争结合固相 抗原而使一部分IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作 为二抗,间接测定IgM抗体,必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处 理,以除去IgG的干扰。在临床检测中测定IgM抗体时多采用捕获包 被法,用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM (其中 包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM),然后加入抗 原,此抗原仅与特异性IgM 相结合。

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THANK YOU
感谢各位观看

废弃物处理
按照实验室规定正确处理实验 废弃物。
03
ELISA检测技术实验结果分析
实验结果解读
总结词
正确解读实验结果是ELISA检测技术的关键,需要掌握实验原 理、熟悉实验步骤,并对实验结果进行科学分析。
详细描述
实验结果解读需要基于对ELISA检测技术的深入理解,熟悉实 验原理、操作步骤和试剂性能。在解读结果时,应关注数据 的趋势、变化规律和异常值,结合专业知识进行综合分析, 避免误判或遗漏。
elisa检测技术培训课件
汇报人:可编辑 2023-12-27
目录
• ELISA检测技术简介 • ELISA检测技术实验操作流程 • ELISA检测技术实验结果分析 • ELISA检测技术实验注意事项与安全须知 • ELISA检测技术实验案例分享
01
ELISA检测技术简介
ELISA检测技术的定义
试剂处理
遵循试剂处理规定,避免直接接触试 剂,以防皮肤和眼睛刺激。
废物处理
正确处理实验废物,防止对环境造成 污染。
紧急处理
熟悉实验室紧急处理程序,如发生意 外,应立即采取适当的急救措施并寻 求医疗援助。
05
ELISA检测技术实验案例分享
案例一:抗原抗体检测
灵敏度高、特异性好
利用酶标记的抗体或抗原与相应的抗原或抗体结合,通过显色反应对微量抗原或抗体进行定量检测,具有较高的灵敏度和特 异性,适用于传染病、自身免疫病、肿瘤等多种疾病的诊断和监测。
在食品安全检测中,ELISA可 以用于检测农药残留、兽药残
留和食品添加剂等。
此外,ELISA还可以用于环境 监测、生物制品纯度检测等方
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