基因家族生信分析

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生物信息学技术的使用教程与基因分析

生物信息学技术的使用教程与基因分析

生物信息学技术的使用教程与基因分析生物信息学是一门综合性学科,它将计算机科学、数学和生物学相结合,研究生物序列氨基酸序列、DNA序列和RNA序列等大规模数据的分析和解读。

生物信息学技术在基因分析、基因组学、蛋白质组学等领域发挥着重要作用。

本文将介绍生物信息学技术的使用教程和基因分析的基本方法。

一、生物信息学技术的使用教程1. 数据采集与预处理在进行生物信息学分析之前,首先需要采集所需的数据。

数据的来源可以包括公共数据库(如NCBI、EBI等)、实验室测序数据和文献中的相关数据等。

采集到的数据往往需要进行预处理,包括数据清洗、去除低质量序列、低质量碱基等,以保证后续分析的准确性和可靠性。

2. 序列比对与注释序列比对是将所研究的序列与已知的序列进行比较,找出两者之间的相似性和差异性。

常用的比对方法有BLAST、BWA、Bowtie等。

注释则是对比对结果进行解读,给出序列的功能、结构和表达等信息。

注释工具包括NCBI的GenBank、Ensembl、GeneCards等。

3. 基因组组装与注释基因组组装是将高通量测序生成的序列数据进行拼接,恢复出物种的全基因组结构。

基因组注释是对组装得到的基因组序列进行功能注释和结构注释。

组装工具包括SOAPdenovo、Velvet、ABySS等,注释工具包括Glimmer、RepeatMasker、GeneMark、Augustus等。

4. 转录组分析与差异表达基因筛选转录组分析是对一种生物体中所有基因的转录活动进行定性和定量研究。

差异表达基因筛选是找出在不同样品之间表达量差异显著的基因。

常用的转录组分析工具包括Cufflinks、DESeq、edgeR等,差异表达基因筛选工具包括Limma、SAM、DEGseq等。

二、基因分析的方法与应用1. 基因结构预测基因结构预测是预测DNA序列中基因的位置和边界,并预测该基因编码的蛋白质的结构和功能。

常用的工具有Genscan、Augustus、GENSCAN 等。

普通烟草YUCCA基因家族的生物信息学分析

普通烟草YUCCA基因家族的生物信息学分析

櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄参考文献:[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2005.[2]郭 勇,程晓磊.石斛在恶性肿瘤治疗中的作用[J].浙江中西医结合杂志,2007(7):454-455.[3]张沂平,马胜林,朱 远.铁皮枫斗晶对肿瘤患者放化疗辅助治疗的疗效观察[J].中国中西医结合杂志,2000(8):628.[4]杨立昌,乙 引,张宇斌,等.铁皮石斛快速繁殖体系研究[J].北方园艺,2010(22):136-138.[5]张 明,夏鸿西,朱利泉,等.石斛组织培养研究进展[J].中国中药杂志,2000,25(6):323-326.[6]曾万勇,李金华,王 智,等.铁皮石斛无菌萌发及小苗快繁培养条件研究[J].武汉工业学院学报,2012,31(3):10-12,47.[7]李景蕻,张丽华,张 宇.中药材铁皮石斛组培苗不同培养基的筛选与优化[J].基因组学与应用生物学,2018,37(6):2551-2557.[8]张 妍,刘宗欢,杨 超,等.铁皮石斛组培苗快速繁殖的研究[J].安徽农业科学,2015,43(28):77-78.[9]蒋向辉,佘朝文,王善粉,等.不同激素浓度对铁皮石斛高效快繁体系的影响[J].江苏农业科学,2009(6):76-78.王仁汉,宋志美,屈 旭,等.普通烟草YUCCA基因家族的生物信息学分析[J].江苏农业科学,2021,49(3):61-65.doi:10.15889/j.issn.1002-1302.2021.03.010普通烟草YUCCA基因家族的生物信息学分析王仁汉1,宋志美1,2,屈 旭1,刘少云1,2,李毅君1,2(1.青岛中烟种子有限责任公司,山东青岛266000;2.中国农业科学院烟草研究所,山东青岛266000) 摘要:YUC基因家族催化吲哚-3-丙酮酸(IPA)生成生长素(IAA)的过程,进而调控植物生长素的合成。

生物信息学中的基因序列分析与预测

生物信息学中的基因序列分析与预测

生物信息学中的基因序列分析与预测生物信息学是一门综合学科,它将计算机科学、数学和统计学等技术应用于生物学领域。

基因序列分析与预测是生物信息学中的重要研究领域之一,它涉及到对基因序列的分析、注释和预测。

基因序列是生物体内以DNA或RNA形式存在的遗传信息。

通过对基因序列的分析,我们可以了解基因的功能和结构,进而深入研究生物体的生理过程和疾病发生机理。

基因序列的注释则是对基因序列进行功能和结构的解读和标记,在基因组学研究和生物学研究中起到关键作用。

基因序列的预测是通过生物信息学技术对未知基因序列进行功能和结构的预测。

在基因组学研究中,大量基因序列还没有被准确注释,因此基因序列的预测对于深入研究生物体的特征和功能非常重要。

基因序列预测可以通过多种算法和技术来实现,其中最常用的方法包括序列比对、开放阅读框(ORF)预测、蛋白质结构预测等。

序列比对是基因序列分析的基本方法之一,它通过比较待分析序列与已知序列数据库中的序列进行比较,从而找到相似的区域和序列特征。

根据比对结果,可以判断待分析序列与已知序列的亲缘关系、功能和结构等信息。

开放阅读框(ORF)预测是对基因序列中的蛋白编码区域进行预测。

开放阅读框是指在核苷酸序列中没有起始密码子和终止密码子的连续核苷酸序列。

通过使用启动子预测算法和终止密码子识别算法,可以准确地预测基因序列中的开放阅读框,进而推断蛋白编码区域的位置和功能。

蛋白质结构预测是预测待分析基因序列所编码的蛋白质的三维结构。

蛋白质的结构对于其功能和相互作用非常关键,因此准确地预测蛋白质结构对于研究蛋白质的功能和疾病发生机制具有重要意义。

蛋白质结构预测方法主要分为比较模型和折叠模型两种,通过比对已知结构的同源蛋白质,或者通过物理化学规则和算法,可以预测待分析蛋白质的结构。

在生物信息学中,基因序列分析与预测常常是多领域合作的结果,涉及到计算机科学、生物学、数学和统计学等多学科的知识与技术的融合。

随着高通量测序技术的不断发展,我们可以获取到大量的基因序列数据,这为基因序列分析与预测提供了更多的机会和挑战。

胡麻SUC基因家族的鉴定与生物信息学分析

胡麻SUC基因家族的鉴定与生物信息学分析

胡麻SUC基因家族的鉴定与生物信息学分析作者:齐燕妮李闻娟王利民赵玮党照谢亚萍张建平来源:《甘肃农业科技》2019年第08期摘要:利用多个物种的SUC基因蛋白序列在胡麻基因组内进行BlastP分析,通过Pfam确认结构域,获得胡麻SUC基因家族成员,并进行基因结构分析;对蛋白分子量、等电点、信号肽、跨膜结构域、糖基化修饰位点、亚细胞定位、Motif及二级结构进行预测。

结果鉴定得到12个胡麻SUC基因家族成员,大部分成员含有4个以上的外显子,10个以上跨膜结构域,并获4个特征性Motif。

进化树分析显示,胡麻SUC分别属于SUT1、SUT2和SUT4家族。

关键词:胡麻;SUC基因家族;基因结构分析;系统进化分析中图分类号:S565.9; ; ; ;文献标志码:A; ; ; ;文章编号:1001-1463(2019)08-0035-06Abstract:In this study, multiple SUC protein sequences were analyzed in flax genome using BlastP, and the structural domain was confirmed by Pfam. The members of the SUC gene family were obtained. The analysis of gene structure, prediction of protein molecular weight, isoelectric point, signal peptide, transmembrane domain, glycation modification site, subcellular localization, Motif and secondary structure were carried out on the family menbers. The results showed that 12 members of flax SUC gene family were identified, containing 4 characteristic motifs, most of which had more than 4 exons, more than 10 transmembrane domains. The evolutionary tree analysis showed that flax SUC belonged to SUT1, SUT2 and SUT4 families,respectively.Key words:Flax; SUC gene family; Gene structure analysis; Phylogeny analysis胡麻(Linum usitatissimum L.)即油用亚麻,属于亚麻科亚麻属,主要种植在中国、加拿大、印度[1 - 2 ]。

如何使用生物大数据技术分析基因家族

如何使用生物大数据技术分析基因家族

如何使用生物大数据技术分析基因家族基因家族是指具有相似结构和功能的一组基因。

在基因组学研究中,对基因家族的分析是非常重要的,因为它可以揭示基因家族的进化历史、功能特征以及与疾病相关的遗传变异。

生物大数据技术为我们提供了分析基因家族的强大工具,本文将介绍如何使用生物大数据技术来进行基因家族的分析。

首先,我们需要获取基因家族的基因序列。

目前,公共数据库如NCBI、Ensembl等提供了大量的基因序列数据,我们可以通过这些数据库获取我们感兴趣的基因家族的基因序列。

同时,也可以使用基于云计算的生物信息学工具来获取基因序列,如基因组浏览器UCSC Genome Browser等。

一旦获取了基因家族的基因序列,我们可以利用生物大数据技术来进行以下分析。

1. 基因家族的进化分析:生物大数据技术能够帮助我们研究基因家族在进化过程中的演化关系。

通过比较不同物种中的基因家族成员的序列相似性,我们可以构建基因家族的进化树,进而推断基因家族的起源和演化过程。

常用的进化分析工具包括Clustal系列、MAFFT、MUSCLE等。

2. 基因家族的表达分析:生物大数据技术为我们提供了大规模的转录组数据,我们可以利用这些数据来研究基因家族的表达模式。

通过分析转录组数据,我们可以了解基因家族在不同组织、不同发育阶段或不同环境条件下的表达差异。

一些常用的转录组分析工具包括DESeq、edgeR、limma等。

3. 基因家族的功能注释:生物大数据技术提供了大量的功能注释信息,我们可以利用这些信息来研究基因家族的功能特征。

通过比较基因家族成员的功能注释信息,我们可以了解基因家族的功能保守性和功能多样性。

一些常用的功能注释工具包括Gene Ontology (GO)、KEGG等。

4. 基因家族的遗传变异分析:生物大数据技术还可以帮助我们研究基因家族与疾病相关的遗传变异。

通过整合GWAS、eQTL等遗传变异数据,我们可以分析基因家族与疾病之间的关联性。

生物信息学中的基因序列分析方法

生物信息学中的基因序列分析方法

生物信息学中的基因序列分析方法生物信息学是一门集合了生物学、计算机科学和统计学等多学科知识的领域,旨在利用计算机技术和数学方法来研究和理解生物学中的生物信息。

在生物信息学中,基因序列分析是一个重要的研究方向,它涉及到对基因组、转录组和蛋白质组等生物大数据进行分析和解读的技术方法。

基因序列是生物体中的遗传信息媒介,它是由四种不同的碱基(腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶)构成的字符串。

基因序列分析是指通过一系列的计算和分析方法,从基因序列中获取有关基因功能和结构的信息。

在生物信息学中,基因序列分析常用的方法可以归纳为如下几个方面:1. 序列比对序列比对是基因序列分析中的基础步骤,它的目的是找到不同基因序列之间的相似性和差异性。

常见的序列比对方法是通过算法将两个或多个基因序列进行比较,并找出它们之间的相同部分和不同部分。

这些比对结果可以用于研究不同生物种群之间的进化关系、寻找特定基因组中的变异位点等。

2. 基因预测基因预测是根据基因序列的特征和模式,利用计算方法来预测基因的位置和功能。

通过分析基因序列中的启动子、开放阅读框(ORF)、剪接位点等特征,可以预测基因的起始和终止位置,并进一步推断出基因的功能。

基因预测的结果对于研究基因的表达和调控具有重要意义。

3. 基因表达分析基因表达分析是通过研究基因在不同条件下的转录水平来理解基因功能和调控机制的方法。

在基因表达分析中,常用的方法包括RNA测序(RNA-seq)、微阵列技术等。

这些方法可以测量基因在不同组织、不同时间点或不同环境中的表达水平,帮助研究人员了解基因的功能和表达调控网络。

4. 基因功能注释基因功能注释是为了理解基因序列和结构间的功能关系而进行的研究。

在基因功能注释中,研究人员可以通过比对已知的基因序列数据库,如基因组数据库、蛋白质数据库等,来寻找有关基因的注释信息。

这些注释信息可以包括基因的功能、结构、调控元件、进化关系等,帮助研究人员进一步理解基因的生物学功能。

生物信息学中基因组数据分析的方法与工具

生物信息学中基因组数据分析的方法与工具

生物信息学中基因组数据分析的方法与工具随着高通量测序技术的快速发展,生物学研究中生成的基因组数据越来越庞大和复杂。

基因组数据的分析是生物信息学中一个重要的研究领域,涉及到基因组序列、基因调控、蛋白质结构和功能等多个方面的研究。

本文将介绍生物信息学中基因组数据分析的方法与工具。

1.拼接(assembly)分析基因组拼接是将短序列片段按照重叠部分重新组装成长序列的过程。

在这一步骤中,可以使用一些拼接工具,如Velvet、SOAPdenovo和ABySS等。

这些工具能够根据序列之间的重叠信息确定序列的正确顺序,并提供较高的拼接质量。

2.基因预测基因预测是根据拼接后的序列,利用计算方法来预测其中的基因。

这一步骤是基因组数据分析中重要的一步,因为基因的预测能够为后续的功能注释和进一步研究提供基础。

常用的基因预测工具包括Glimmer、GeneMark和Augustus等。

3.基因注释基因注释是对基因的功能进行标注和解释的过程。

在这一步骤中,可以利用一些数据库和工具来标注和注释基因,包括Gene Ontology(GO)、KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)、BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)和InterPro等。

这些工具可以帮助我们了解基因的功能、调控和通路等信息。

4.基因差异表达分析基因差异表达分析是比较不同样本中基因的表达水平,发现差异表达基因以及探究其功能和调控机制的过程。

在这一步骤中,可以利用一些工具来进行差异表达分析,如DESeq2、edgeR和limma等。

这些工具能够根据基因表达量的统计学分析,帮助我们鉴定哪些基因在不同样本之间存在差异表达。

5.功能富集分析功能富集分析是根据差异表达基因进行一系列的生物学功能注释和分析的过程。

在这一步骤中,可以利用一些工具,如DAVID (Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery)、GOseq和GSEA (Gene Set Enrichment Analysis)等来进行功能富集分析。

生物信息学中的基因序列分析教程

生物信息学中的基因序列分析教程

生物信息学中的基因序列分析教程基因序列分析是生物信息学的一个重要分支,它利用计算机和数学的方法来研究和解读基因组中的遗传信息。

一直以来,基因序列分析在生物学研究和生物医学领域中发挥着重要作用。

本文将介绍基因序列分析的主要方法和工具,并提供一些实用的教程,以帮助读者进一步了解和从事基因序列分析的工作。

一、基因序列的获取和处理首先,我们需要获取并处理基因序列数据。

常用的获取基因序列的方法有实验室测序技术和公共数据库的查询和下载。

实验室测序技术主要包括Sanger测序、Illumina测序和第三代测序技术(例如PacBio和ONT)。

公共数据库包括GenBank、EMBL和DDBJ等。

获取到基因序列数据后,我们需要进行一些常见的处理工作,如去除引物序列、修剪低质量的碱基和过滤低质量的序列片段等。

二、基因序列的比对和注释基因序列比对是将我们所研究的基因序列与参考基因组进行比较,以确定它们之间的相似性和差异性。

常用的基因序列比对工具有BLAST、Bowtie和BWA等。

在进行基因序列比对时,我们可以选择全局比对还是局部比对,以及不同的算法和参数来提高比对的准确性和速度。

基因序列注释是对已知基因和未知序列的功能进行预测和注释。

主要的注释工具包括NCBI的基因注释浏览器、Ensembl数据库和GO注释等。

基因注释可以帮助我们了解基因的功能、结构和表达等重要信息,对于进一步研究基因的生物学功能非常有帮助。

三、基因序列的同源性分析基因序列的同源性分析是研究不同物种之间基因序列的相似性和进化关系。

常用的同源性分析工具有ClustalW、MAFFT和MUSCLE等。

同源性分析可以帮助我们寻找相似功能的基因家族,以及预测新基因的功能和进化过程。

四、基因序列的结构预测基因序列的结构预测是确定基因组中编码区和非编码区的边界,以及预测基因的内含子、外显子和启动子等结构元素。

常用的结构预测工具有Glimmer、GENSCAN和Augustus等。

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基因家族生信分析一、什么是基因家族概念:是来源于同一个祖先,有一个基因通过基因重复而产生两个或更多的拷贝而构成的一组基因,他们在结构和功能上具有明显的相似性,编码相似的蛋白质产物。

划分:按功能划分:把一些功能类似的基因聚类,形成一个家族。

按照序列相似程度划分:一般将同源的基因放在一起认为是一个家族。

1.常见基因家族:WRKY基因家族:是植物前十大蛋白质基因家族之一,大量研究表明,WRKY 基因家族的许多成员参与调控植物的生长发育,形态建成与抗病虫。

NBS-LRR抗病基因家族:是植物中最大类抗病基因家族之一。

MADS-BOX基因家族:是植物体内的重要转录因子,它们广泛地调控着植物的生长、发育和生殖等过程。

在植物中参与花器官的发育,开花时间的调节,在果实,根,茎,叶的发育中都起着重要的作用。

热激蛋白70家族(HSP70)是一类在植物中高度保守的分子伴侣蛋白,在细胞中协助蛋白质正确折叠。

二、基因家族分析流程:●利用蛋白保守域结构提取号在Pfam数据库提取其隐马尔科夫模型矩阵文件(*.hmm)●在数据库(Ensemble 、JGI、NVBI)下载你所需要的物种的基因组数据(*.fa,*.gff)●在虚拟机中Bio-Linux中的hummsearch程序,用隐马尔科夫模型矩阵文件在蛋白序列文件中搜索含有该保守结构域的蛋白●将蛋白序列导入MEGA软件构建进化树(可以阐明成员之间系统进化关系,从进化关系上揭示其多样性)●利用MEME搜索蛋白质的保守结构域利用MEME搜索基因家族成员的motif可以揭示基因家族在物种内的多样化及其功能,如果他们都含有相同的motif表明其功能具有相似性,如果部分家族成员含有其他不同的motif,很可能这些成员有其他特异功能,或者可以归分为一个亚族●绘制基因染色体位置图从*.gff文件中抽取我们搜索到的基因位置信息,_v2.0/在线绘制基因染色体位置图通过染色体位置分布,可以了解基因主要分布字哪条染色体上,及是否能形成基因簇(被认为是通过重组与错配促进基因交流)●基因结构分析从gff文件中抽取基因的结构信息,绘制转录本结构图。

●计算串联重复基因的Ka,Ks1.首先将筛选到的基因的cds序列进行多序列对比,筛选identity > 75%,tength大于对比的两条序列中较长的那条的长度的75%,将筛选到的基因分别用clustalw进行比对,比对结果导入KsKs_Calculster计算Ka,Ks、Ka/ks比,计算核苷酸的非同义替代(ka)与核苷酸的同义替代(ks)的平均速率。

2.Ka/ks比值<1表明:通过纯化选择降低了氨基酸变化的速率;比值=1表示中性选择;比值>1,表明这些基因可能已经收到积极选择,有利于适应性遗传,这些受正向选择的基因将作为以后的研究重点。

软件的安装从图片中获得进入NCBI-blast官网复制blast-linux版本的链接在Linux终端1.blast的安装#wget blast链接#tar xvfz 文件名解压缩文件# mv 解压缩文件/root/local/app# mv 解压缩文件blast# vi .bashrc#在最后一行添加export $PATH=/root/local/app/blast/bin:$PATH 并保存退出#source .bashrc 运行#blastp -version 查看是否安装成功。

2.hummer的安装#yum install -y wget //安装wget#wget hmmer源码链接#tar -zxvf hmmer-3.2.1# vi .bashrc#(在最末端添加的语句) PATH=$PATH:~/biosoft/hmmer-#yum install -y gcc#./configure#make#make check#make install#which hmmsearch 查看是否安装成功。

3.perl的安装#wget 源代码链接# tar xvfz perl- 解压缩#cd perl-5.28.1#./configure#make#make install 安装完成。

3.bioperl 的安装#wget -O - | bash#perlbrew install-cpanm#/root/perl5/perlbrew/bin/cpanm Bio::Perl三、具体操作:1.保守域结构分析下载蛋白保守结构域文件、cds、cDNA、gff注释文件和隐马尔科夫矩阵模型。

以拟南芥为例:下载完成后,需要将文件传到Linux系统上进行分析:打开虚拟机输入ip a将虚拟机IP连接到Xshell上,在Xshell上进行操作,将文件通过xftp(同样需要连接IP)传到Linux系统上,然后进行解压。

(一个命令解压多个文件:gunzip*.gz)接下来用hummsearch寻找含有该蛋白保守结构域的蛋白及核酸序列安装hummsearchyum install -y wget //安装wget#wget hmmer源码链接#tar -zxvf hmmer-3.2.1# vi .bashrc#(在最末端添加的语句) PATH=$PATH:~/biosoft/hmmer-#yum install -y gcc#./configure#make#make check#make install#which hmmsearch 查看是否安装成功。

解压文件移动到APP目录下面在app目录下面新建文件夹 mkdir hmmer将hmmer- mmove -v c:/hmmer-3.2.1 c:/hmmer删除安装包打开文字编辑器vi ~/.bashrc在文字编辑器里最后一行添加以上内容安装好wget如果make check出现错误百度用以下方法解决出现complete安装完成#source ~/.bashrc#which hmmsearch至此hmmer安装完成。

虚拟机操作:1.导入下载好的文件;2.hmmsearch --cut_tc –domtblout NB-ARC.txt NB-ARC.hmm Arabidopsis_thaliana.TAIR10可以用editplus打开.txt文件3. perl domain_xulie.pl 结果文件.txt 蛋白序列文件domain.fa 1e-204.clustalw进行多序列比对,得到aln文件和dnd文件。

5.hmmbuild 拟南芥特异的hmm模型文件domain.aln6.hmmsearch –cut_tc –domtblout result.txt newhmm文件蛋白质序列文件7.在Excel中,根据特定的evalue进行筛选,并对第一列进行去重复,得到第一列去重复的id,保存为id.txt8. 用perl脚本根据id提取序列Per get_fa_by_id.pl id.txt 蛋白序列wenjain >结果输出文件可以根据的得到的序列文件进行后续的构建进化树、motif分析等。

2.搜索基因家族成员的MOTIF2.1 需要准备的文件1. 拟南芥NBS基因蛋白质序列2. 蛋白保守结构域的隐马尔科夫模型矩阵文件2.2 MOTIF的搜索使用meme软件命令:meme nbs_pep.fa -protein -oc nbs_motif -nostatus -maxsize 600000 -mor anr -nmotifs 10 -minw 6 -maxw 50搜索结果存放在nbs_motif文件夹中。

文件夹中的eps文件可以用AI打开编辑,可以另存为png或jpg格式,也可打开网页版,也可用tbtools软件打开,下载motif在基因上的位置信息。

3. 绘制基因在染色体上的位置图3.1 需要准备的文件1. 拟南芥NBS基因id2. 拟南芥的注释文件(gff3文件)3. 拟南芥基因组长度4.1在线绘图工具:MapGene2Chrom4.2 samtools faidx 拟南芥. 可得到拟南芥. 该文件包括各个染色体,染色体长度。

4.3 对基因的id文件在Excel中进行分列,去重复处理。

4.4 使用处理过的id文件,对拟南芥的注释文件进行筛选使用perl脚本得到基因在染色体上的位置。

命令:perl get_gene_gff.pl -in1 基因的id文件-in2 拟南芥gff3文件-out 新文件名称4.5 新文件存放的是基因在染色体上的位置4.6在在线文件MapGene2chrom 中,将基因在染色体上的位置信息文件复制到,input1框中,在input2中粘入samtools得到的fai文件。

4.绘制转录本的结构图4.1 需要准备的文件1. 拟南芥NBS基因转录本id(通过家族成员鉴定得到的蛋白id文件)2.拟南芥基因的注释文件(gtf文件)3.在线绘图工具:Gene Structure Display Server 2.0http://4.2 具体方法1. 准备gtf文件:输入命令:gffread gff3注释文件-T -o 输出文件(gtf文件)2.editplus 打开gtf文件,去除”transcript:”3. 使用perl脚本提取拟南芥转录本结构信息:命令:perl get_gtf.pl -in1 拟南芥转录本id文件-in2 gtf文件-out 输出文件(nbs_gtf.txt)4.通过在线绘图工具,进行绘图。

5.筛选出串联重复基因5.1准备文件1.拟南芥NBS基因CDS序列串联重复基因筛选标准【(a)length of alignable sequence covers>75% of longergene,and(b) similarity of aligned regions >75%】参考文献:Extent of gene duplication in the genomes of Drosophila, nematode, and yeast.2.由于筛选时产生的文件较多,因此创建新的目录:mkdir 新目录3.用editplus 打开家族成员的id文件,对转录本id进行处理,使一个基因只拿一个转录本。

4.把id复制到Excel,首先排序处理,然后进行分列,然后以第一列删除重复值。

最后将第一列和第二列进行合并。

将处理好的id导入Linux。

5.使用perl脚本提取cds序列:命令:perl get_fa_by_id.pl id文件拟南芥cds 序列文件> cds.fa6.使用blast软件筛选串联重复基因6.1建立目标序列的数据库:makeblastdb -in cds.fa -dbtype nucl -title cds.fa 6.2 进行多序列比对:blastn -query cds.fa -db cds.fa -evalue 1e-20 -outfmt 9 -out result.txt6.3 用editplus打开6.4 得到cds序列的长度,使用samtools工具建立索引:命令:samtools faidx cds.fa6.5 用perl脚本对result.txt进行筛选,perl KAKS_SHAIXUAN.pl -in1 -in2 result.txt -out cleanresult.txt6.6 用editplus打开,将内容复制到Excel,在id后插入一列用公式:if (A1>B1,A1&B1,B1&A1)。

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